实验一 薄层层析板的制备

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实验一 薄层板的制备

实验一  薄层板的制备

实验一薄层板的制备、活度测定及应用1. 目的要求1.1 掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法1.2 掌握吸附剂活度测定的原理及方法1.3应用薄层层析法检测以中草药化学成分2.实验原理2.1薄层层析是一种微量、快速的层析方法。

它不仅可以用于纯物质的鉴定,也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。

还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

根据分离的原理不同,薄层层析可以分为两类:用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析;用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层,属于分配薄层层析。

薄层层析中以吸附簿层为多用,吸附薄层中常用的吸附剂为氧化销和硅胶。

2.2 吸附簿层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同,及展开剂对它们的解吸附能力的小同,使各成分达到分离。

吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。

吸附强度决定于吸附剂的吸附能力,还受被吸附成分的性质影响,更与展开剂的性质有关。

2.3分配簿层层析的原理是,用极性溶剂吸附在同体支持剂上所形成的混合物,铺成簿层(或装柱),然后活化、点样(或上样),再用极性较弱的展开剂(或洗脱剂)进行展开。

在展开过程中,各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配。

由于各成分在两相间的分配系数不同,因而可以达到相互分离的目的。

2. 4由于化合物的极性不同,吸附能力不相同,在展开剂上移动,进行不同程度的解析,根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值(Rf):化合物的吸附能力与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较强,因此Rf值较小。

在给定的条件下(吸附剂、展开剂、板层厚度等),化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的,即Rf 值是化合物的物理常数,其大小只与化合物本身的结构有关,因此可以根据Rf值鉴别化合物2.5薄层层析可适用小量样品(几到几十微克甚至0.01g)的分离:也可用于多达500mg样品的分离,是近代有机化学中用于定性、定量的一种重要手段。

氨基酸的薄层层析

氨基酸的薄层层析

氨基酸的薄层层析一、实验目的1.掌握薄层层析法的一般原理。

2.掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。

3.掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。

二、实验原理1.薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。

当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。

(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)硅胶吸附薄层层析吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶硅胶:表达式为SiO2-XH2O。

层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(一Si —OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。

硅胶吸附薄层层析的特点:①硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关。

②硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离。

③硅胶的活化温度通常为105℃ —110℃,不能过高。

但是实际操作时为70℃,活化1h 2.氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛,与此同时,还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。

3.记录结果,计算Rf值混合氨基酸被分离后,在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率一Rf值(rate of flow)来表示。

层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。

由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据 Rf值来鉴定被分离的物质。

三、材料与方法:材料:(一)分析样品:氨基酸混合液(二)试剂:吸附剂:硅胶粘合剂: 0.5%的羧甲基纤维素钠、氨基酸的异丙醇溶液、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸。

薄层层析硅胶板制备流程图

薄层层析硅胶板制备流程图

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薄层层析实验报告

薄层层析实验报告

一、实验目的1. 掌握薄层层析的基本原理和操作方法。

2. 了解薄层层析在有机化合物分离和鉴定中的应用。

3. 通过实验,学会如何根据Rf值对化合物进行鉴定。

二、实验原理薄层层析是一种常用的色谱分离技术,其基本原理是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的相互作用力差异,通过展开剂在固定相上的流动,使各组分在薄层板上发生不同的迁移,从而达到分离的目的。

Rf值(比移值)是衡量化合物在薄层板上迁移距离与展开剂迁移距离的比值,用于鉴定化合物。

三、实验仪器与药品1. 仪器:薄层层析板、点样器、层析缸、展开剂、显色剂、烘箱、天平等。

2. 药品:待分离的混合物、硅胶、溶剂、显色剂等。

四、实验步骤1. 薄层层析板的制备(1)称取适量硅胶,加入适量的水,搅拌均匀,待石膏开始固化时,再加入少许水,调成匀浆。

(2)将匀浆均匀地涂布在薄层板上,轻轻敲打使其平整。

(3)将涂布好的薄层板放入烘箱中,105℃烘烤活化0.5小时。

2. 点样(1)在薄层板下端2.0cm处,用铅笔轻轻划一条起始线,并在点样处用铅笔作一标记为原点。

(2)用点样器蘸取待分离的混合物,点于原点上,注意点样量不宜过多。

3. 展开剂的选择与准备(1)根据待分离化合物的性质选择合适的展开剂。

(2)将展开剂倒入层析缸中,液面略低于薄层板下端。

4. 展开与显色(1)将点好样的薄层板放入层析缸中,密封。

(2)待展开剂上升至薄层板上端后,取出薄层板,晾干。

(3)用显色剂对薄层板进行显色,观察各化合物的斑点。

5. 结果分析(1)记录各化合物的Rf值。

(2)根据Rf值对化合物进行鉴定。

五、实验结果与分析1. 实验结果根据实验数据,得到以下化合物的Rf值:- 化合物A:Rf = 0.5- 化合物B:Rf = 0.7- 化合物C:Rf = 0.92. 结果分析根据Rf值,可以初步判断各化合物的性质。

在本实验中,化合物A、B、C的Rf值依次增大,说明它们在薄层板上的迁移速度依次变快,可能为不同极性的化合物。

实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查

实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查

实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查实验二 TLC法进行药物中特殊杂质的检查一、目的要求1、掌握阿司匹林片、盐酸哌唑嗪中特殊杂质检查的基本原理和方法。

2、掌握薄层色谱在药物杂质检查中的应用。

3、掌握薄层色谱法的基本操作。

二、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查取本品0.1克,加乙醇1mL溶解后,加冷水适量使成50mL,立即加新制的稀硫酸铁铵溶液(取盐酸溶液(9→100mL)1mL,加硫酸铁铵指示液2mL后,再加水适量使成100mL)1mL,摇匀,30秒钟内,如显色。

与对照液(精密称取水杨酸0.1克,加水溶解后,加冰醋酸1mL,摇匀,再加水使成1000mL,摇匀。

精密量取1mL,加乙醇1mL,水48mL,与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1mL,摇匀)比较。

不得更深(0.1%)。

三、盐酸哌唑嗪中有关物质检查 1.薄层板的制备取硅胶GF254硅胶4g,加水约12mL,(1份固定相和3份水)在研钵中按同一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为 0.2~0.3mm),取下涂好薄层的玻璃板,置水平台上于室温下晾干后,在110℃活化 30 分钟,即置有干燥剂的干燥箱中备用。

使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。

2.盐酸哌唑嗪中有关物质检查取本品,加三氯甲烷-甲醇-二乙胺(10�U10�U1)溶液制成每1mL中含5.0mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,加同一溶液稀释成每1mL中含50μg的溶液,作为对照溶液。

照薄层色谱法(附录V B)试验,吸取上述两种溶液各10μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以乙酸乙酯-二乙胺(95�U5)为展开剂;展开,晾干,置紫外灯(254nm)下检视。

供试品溶液如显杂质斑点,与对照溶液的主斑点比较,不得更深。

四、注意事项1.点样采用微量注射器进行,在距薄层板底边2.5cm处开始点样,应少量多次点于同一原点处,原点面积应尽量小。

薄层层析实验报告

薄层层析实验报告

薄层层析实验报告篇一:薄层色谱法实验报告有机化学第二课堂实验报告一,基本信息姓名:年级:XX级专业层次:队别:日期:XX年5月23日实验室:有机化学实验室二二、实验报告正文实验题目:薄层板的制作及薄层色谱的应用实验目的掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

实验原理1.有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同,当展开剂流经吸附剂时,有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程,吸附力弱的组分随流动相迅速向前,而吸附力弱的组分则滞后,由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。

物质被分离后在图谱上的位置,常用比移值Rf表示。

Rf?原点至层析斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离实验仪器与药品实验仪器:硅胶层析板两块,卧式层析槽一个,点样用毛细管,紫外荧光灯,铅笔暖风机、载玻片、钢勺、镊子等药品:碱性湖蓝与荧光黄混合样品、咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品二氯乙烷层析液、95%的乙醇溶液,硅胶粉、5%的羧甲基纤维素钠(CMC)的水溶液等仪器装置图“浸有层析板的层析槽”图1-层析缸(广口瓶),2-薄层板,4-层析液实验步骤(1)薄层板的制备:(本文来自: 小草范文网:薄层层析实验报告)取3g 硅胶G粉于研钵中,加相当于8ml左右的用5%的羧甲基纤维素钠(CMC)的水溶液,用力研磨1-2分钟,至成糊状后立即倒在准备好的薄层板中心线上,快速左右倾斜,使糊状物均匀地分布在整个板面上,厚度约为0.25mm,然后平放于平的桌面上干燥15分钟,再放入100℃的烘箱内活化2小时,取出放入干燥器内保存备用。

(2)点样。

在层析板下端1.0cm处,(用铅笔轻化一起始线,并在点样出用铅笔作一记号为原点。

)取拉好的毛细点样管,分别蘸取咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品,点于原点上(注意点样用的毛细管不能混用,毛细管不能将薄层板表面弄破,样品斑点直径在1到2mm为宜!斑点间距稍大一点。

点样次数5到7次)另取一块薄层板,点碱性湖蓝与荧光黄混合样品。

生化薄层层析实验报告(3篇)

生化薄层层析实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 理解薄层层析(TLC)的基本原理及其在生物化学研究中的应用。

2. 掌握薄层层析实验的操作步骤,包括样品制备、点样、层析、显色等。

3. 学会使用比移值(Rf值)进行样品的定性和定量分析。

二、实验原理薄层层析是一种利用固体吸附剂(如硅胶、氧化铝等)对混合物中各组分进行分离的技术。

在TLC实验中,样品被点在薄层板上,然后置于展开剂中。

由于样品中各组分的极性不同,它们在展开剂中的迁移速度也不同,从而实现分离。

三、实验仪器与药品1. 仪器:薄层板、点样器、层析缸、显色剂、烘箱、显微镜等。

2. 药品:硅胶、氧化铝、展开剂、显色剂、待分离的混合物等。

四、实验步骤1. 样品制备:将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中,制成适当浓度的溶液。

2. 点样:用点样器将样品溶液点在薄层板的一端,点样点应尽量小而圆。

3. 层析:将点有样品的薄层板置于层析缸中,加入适量展开剂,使展开剂液面略高于点样线。

待展开剂到达薄层板另一端时,取出薄层板,晾干。

4. 显色:根据样品的性质选择合适的显色剂,将显色剂喷洒在薄层板上,或将薄层板置于加热的显色剂中。

5. 观察与分析:观察薄层板上出现的色斑,测量色斑与点样线的距离,计算比移值(Rf值)。

五、实验结果与分析1. 样品分离:根据薄层板上出现的色斑数量和位置,可以初步判断样品中各组分的种类。

2. 比移值(Rf值):比移值是样品中某一组分在展开剂中的迁移距离与展开剂前沿距离的比值。

通过比较不同组分的Rf值,可以进一步判断它们的相对极性。

3. 定量分析:通过测量样品中某一组分的峰面积或颜色深度,可以对其进行定量分析。

六、实验讨论1. 展开剂的选择对样品的分离效果有很大影响。

应根据样品的性质选择合适的展开剂。

2. 点样点的形状和大小对分离效果也有一定影响。

点样点应尽量小而圆。

3. 显色剂的选择对样品的鉴定和定量分析也很重要。

七、实验结论通过本次实验,我们掌握了薄层层析的基本原理和操作步骤,学会了使用比移值进行样品的定性和定量分析。

薄层色谱法实验报告

薄层色谱法实验报告

1. 掌握薄层色谱的基本原理。

2. 熟悉薄层色谱的操作步骤。

3. 学会利用薄层色谱法分离和鉴定有机化合物。

二、实验原理薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,简称TLC)是一种用于分离和鉴定混合物中各组分的层析技术。

其原理基于混合物中各组分在固定相(吸附剂)和流动相(展开剂)中的分配系数不同。

当混合物在薄层板上展开时,各组分会在板上形成不同的斑点,从而实现分离。

在薄层色谱中,固定相通常为吸附剂,如硅胶、氧化铝或纤维素。

展开剂则是一种液体或气体,用于携带混合物在固定相上移动。

当展开剂流过固定相时,混合物中的各组分会发生吸附、解吸和再分配的过程,导致不同组分在固定相上的移动速度不同,从而实现分离。

三、实验仪器与药品1. 仪器:- 薄层板(硅胶板)- 展开剂(正己烷、乙酸乙酯、甲醇)- 层析缸- 毛细管- 点样器- 显色剂(如紫外灯、碘蒸气)2. 药品:- 有机混合物样品(如苯、甲苯、乙苯等)- 吸附剂(硅胶)- 溶剂(正己烷、乙酸乙酯、甲醇)1. 薄层板的制备:- 称取适量的硅胶,加入适量的水,搅拌均匀。

- 将混合物均匀涂布在玻璃板上,厚度约为0.2-0.3mm。

- 将涂布好的玻璃板在105℃下烘烤1小时,取出备用。

2. 点样:- 用毛细管吸取少量样品,在薄层板下端约2cm处轻轻点样。

- 点样后,用铅笔在点样位置画一个圈作为原点。

3. 展开剂的选择与制备:- 根据待分离混合物的极性,选择合适的展开剂。

- 将展开剂倒入层析缸中,液面高度约为1-2cm。

4. 展开与显色:- 将薄层板放入层析缸中,盖好盖子。

- 待展开剂上升到薄层板顶部时,取出薄层板,晾干。

- 用紫外灯或碘蒸气对薄层板进行显色,观察各组分在薄层板上的位置。

5. 结果分析:- 计算各组分在薄层板上的比移值(Rf值)。

- 比较不同样品的Rf值,鉴定各组分。

五、实验结果与分析1. 薄层色谱图:- 从薄层色谱图上可以看出,混合物中的各组分在薄层板上形成了不同的斑点,实现了分离。

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实验一薄层层析板的制备一、实验目的制备薄层层析板,使叶绿素在层析板上分离显色。

二、实验原理薄层层析,常用 TLC(Chromatography)表示,又称薄层色谱,属于液-固吸附色谱。

是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。

一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01 μ g )的分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条线,则可分离多达 500mg 的样品。

因此又可用来精制样品。

故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。

薄层吸附色谱的吸附剂最常用的是氧化铝、硅胶、硅藻土、聚酰胺和纤维素。

其颗粒大小,一般要求直径为10~40μm。

硅胶是无定形多孔性物质,略具酸性,适用于酸性物质的分离和分析。

薄层色谱用的硅胶分为:“硅胶H ”—不含粘合剂;“硅胶G ”—含煅石膏粘合剂;“硅胶HF 254 ”—含荧光物质,可用于波长为 254nm 紫外光下观察荧光;“硅胶GF 254 ”—既含煅石膏又含荧光剂等类型。

粘合剂除上述的煅石膏(半水合硫酸钙: 2CaSO4 · H2O )外,还可用淀粉、羧甲基纤维素钠。

三、实验材料、器具1、试剂硅胶、4‰的CMC溶液(羧甲基纤维素钠)2、实验用具:药匙、研钵、载玻片、量筒、玻棒四、实验步骤1、载玻片要求平滑清洁,没有划痕,在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤,再用水冲洗干净。

(干净的标准:水不是呈股流下,而是呈瀑布状态流下。

)2、与硅胶混合:CMC-Na溶液与硅胶的比例为3:1(3ml:1g)。

取CMC-Na溶液倒入研钵中,然后加入硅胶,在研钵中研磨,按一个方向研磨,自下而上,然后自上而下,以赶尽气泡为佳。

3、铺板:将载玻片置于平台上,用药匙舀取糊状硅胶,均匀地铺在载玻片表面。

铺板时,可以顺着板中间倒,也可以顺着某个边缘倒,也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上,倒时也要注意不要引入小气泡。

尤其是载板的四个角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。

后轻颠几下薄层板即可。

颠好的板,表面看上去要光滑平整,没有气孔。

薄层板铺好后一定要放置在平的台面上,否则难保证板面硅胶的厚度均匀。

(3g硅胶大约可铺7.5×2.5cm载玻片5-6块)4、晾干:置水平台上于室温下晾干。

5、活化:将晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min,然后取出,放入干燥器中,备用。

活化硅胶有利于提高硅胶的吸附性能,同时排除硅胶内部已吸收的水分及其他气体。

通过活化硅胶,主要改变了硅胶内部的微孔结构,使其孔径的大小及微孔结构的排列得到进一步的改善。

但是这样硅胶的吸附变大,可能会使样品分离困难。

下面先介绍一下配置方法:1. CMC-Na溶液的配置:一般其浓度为0.3~0.5%,根据自己经验而定(我习惯用0.4%的)。

具体方法如下:先将预用的水加热至60~70℃,然后加入CMC-Na,边加边搅拌,使之溶解,即得。

2. 与硅胶混合:CMC-Na溶液与硅胶的比例为3:1。

具体方法如下:先将CMC-Na 溶液倒入自动搅拌器或研钵中,然后加入硅胶,搅匀即可。

若是在研钵中研磨,按一个方向研磨,自下而上,然后自上而下,以赶尽气泡为佳。

3. 铺板:手动或机械。

手动铺出的板的薄厚与所加的混合后的硅胶量有关,而机械铺出的板的薄厚与机械所选用的钢板有关,可根据需要来定。

但此过程中最关键的是板子边缘铺得好坏,手动铺板一定要将玻璃板边缘硅胶涂匀(我习惯用两头掂法,即板下方的中间垫一物体,两头悬空,两手均匀掂动)。

而机械铺板要注意板与板之间平整性,或者由高到低排列。

4. 晾干:自然晾干。

5. 活化:将晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min,取出,放入干燥器中,备用。

这是实验室和检验室薄层层析板常用的制备方法之一,供大家参考!层析英文名称:chromatography定义1:基于不同物质在流动相和固定相之间的分配系数不同而将混合组分分离的技术。

当流动相(液体或气体)流经固定相(多孔的固体或覆盖在固体支持物上的液体)时,各组分沿固定相移动的速度不同而分离。

能用于微量样品的分析和大量样品的纯化制备。

定义2:利用某种类型的固定介质,根据混合物分子的电荷大小和分子量不同等性质,在流动相和固定相之间进行分离的一种生物化学技术。

层析(chromatography)是“色层分析”的简称。

利用各组分物理性质的不同,将多组分混合物进行分离及测定的方法。

有吸附层析、分配层析两种。

一般用于有机化合物、金属离子、氨基酸等的分析。

层析利用物质在固定相与流动相之间不同的分配比例,达到分离目的的技术。

层析对生物大分子如蛋白质和核酸等复杂的有机物的混合物的分离分析有极高的分辨力在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相,把液体(与上述液体不相混合的)或气体作为移动相的系统中,使试料混合物中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动,利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差,将它们彼此分离开的定性与定量分析方法,称为层析,亦称色谱法。

根据移动相种类的不同,分为液体层析、气体层析二种。

用作固定相的有矽胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等,或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体,也可使用其他物质。

将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析(column chromatogra-phy),在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析(thin-layer chromatography),后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析,即在固定相的一端,点上微量试料,在密闭容器中,使移动相(液体)从此端渗入,移动接近另一端。

通过这种展开操作,各成分呈斑点状移动到各自的位置上,再根据Rf值的测定进行鉴定。

当斑点不易为肉眼观察时,可利用适当的显色剂,或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。

也可采用在第一种移动相展开后再用另一移动相进行展开(这时的展开方向应与原方向垂直),使各成分分离完全的双相层析(two-dimensional chromatography)。

分离后,将斑点位置的固定相切取下来,把其中含有来自试料的物质提取进行定量分析。

但为制备与定量,柱层析则更为适宜。

在柱层析中,移动相从加入试料的一端展开到达另一端后,继续展开使各成分和移动相一起向柱外分别溶出,这就是广泛使用的所谓洗提层析(elution chromatograph y)。

层析根据固定相与溶质(试料)间亲和力的差异分为吸附型、分配型、离子交换型(离子交换层析)等三种类型。

但这并不是很严格的,有时常见到其中间类型。

此外,近来也应用亲和层析,即将与基质类似的化合物(通常为共价键)结合到固定相上,再利用其特异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。

按层析的机理划分:吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。

吸附层析:利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异,达到分离鉴定的目的。

分配层析:利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同,使之分离。

离子交换层析:利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。

凝胶层析:利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。

◆按流动相与固定相的不同划分:气相层析、液相层析。

这两大类层析是以流动相不同来划分的。

如同时区分流动相和固定相,划分为:气固层析、气液层析、液固层析和液液层析等。

◆按操作形式划分:柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层析等。

柱层析:将固定相装于柱内,使样品沿一个方向移动而达到分离。

纸层析:用滤纸做液体的载体,点样后,用流动相展开,以达到分离鉴定的目的。

薄层层析:将适当粒度的吸附剂铺成薄层,以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。

以上划分无严格界限,有些名称相互交叉,如亲和层析应属于一种特殊的吸附层析,纸层析是一种分配层析,柱层析可做各种层析。

基本原理层析须在两相系统间进行。

一相是固定相,需支持物,是固体或液体。

另一相为流动相,是液体或气体。

当流动相流经固定相时,被分离物质在两相间的分配,由平衡状态到失去平衡到又恢复平衡,即不断经历吸附和解吸的过程。

随着流动相不断向前流动,被分离物质间出现向前移动的速率差异,由开始的单一区带逐渐分离出许多区带,这个过程叫展层。

系数K是物质在两相中的浓度比。

K值大,则在固定相中吸附牢,K值小吸附差。

各物质间的K值差别大,则易被分离。

不同类型层析的K值含义不同,可视为吸附平衡常数,分配常数或离子交换常数等。

研究层析现象而发展的塔板理论,与有机化学实验中的分馏法原理有些相似。

被分馏的有机溶剂在分馏柱内的填充物上形成许多热交换层,从而把低沸点溶剂先分馏出来,达到纯化的目的。

在层析时用理论塔板数n 来衡量层析效能。

tR为物质在层析柱上的保留时间,W为洗脱下来的物质峰形的宽度。

n 值愈大表示层析柱的效能愈高。

如用理论塔板高度H表示,则包含了层析柱长度的因子。

式中L为层析柱的柱长。

H值越大,则柱效越低。

此外影响层析分离效果的还有涡流扩散、纵向扩散和传质阻抗等因素。

因此选择层析固定相支持物的粒度、均匀度等物理性能,流动相的层析系统和温度等都是做好层析的关键几种常用的层析◆吸附层析吸附剂的吸附力强弱,是由能否有效地接受或供给电子,或提供和接受活泼氢来决定。

被吸附物的化学结构如与吸附剂有相似的电子特性,吸附就更牢固。

常用吸附剂的吸附力的强弱顺序为:活性炭、氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙、磷酸钙、石膏、纤维素、淀粉和糖等。

以活性炭的吸附力最强。

吸附剂在使用前须先用加热脱水等方法活化。

大多数吸附剂遇水即钝化,因此吸附层析大多用于能溶于有机溶剂的有机化合物的分离,较少用于无机化合物。

洗脱溶剂的解析能力的强弱顺序是:醋酸、水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醚、氯仿、苯、四氯化碳和己烷等。

为了能得到较好的分离效果,常用两种或数种不同强度的溶剂按一定比例混合,得到合适洗脱能力的溶剂系统,以获得最佳分离效果。

◆分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。

一般是水相和有机溶剂相。

常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等,这些亲水物质能储留相当量的水。

被分离物质在两相中都能溶解,但分配比率不同,展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。

◆离子交换层析支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。

带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧甲基(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。

带阴离子基团的,如DEAE—(二乙基胺乙基)和QAE—(四级胺乙基)等为阴离子交换剂。

离子交换层析只适用于能在水中解离的化合物,包括有机物和无机物。

对于蛋白质、核酸、氨基酸及核苷酸的分离分析有极好的分辨力。

离子交换基团在水溶液中解离后,能吸引水中被分离物的离子,各种物质在离子交换剂上的离子浓度与周围溶液的离子浓度保持平衡状态,各种离子有不同的交换常数,K值愈高,被吸附愈牢。

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