过碘酸雪夫反应实验培训课件
过碘酸-雪夫反应
过碘酸-雪夫反应01.过碘酸-雪夫反应的结果判读阳性结果为胞质内出现红色颗粒、块状或呈弥漫状红色。
①(-)胞质无色，无颗粒。
②(+)胞质淡红色或有少量红色颗粒，通常<10个颗粒。
③(++)胞质红色或有10个以上红色颗粒。
④(+++)胞质呈暗红色或有粗大红色颗粒，可出现红色块状。
⑤(++++)胞质呈紫红色或有粗大红色块状。
02.过碘酸-雪夫反应正常血细胞的染色反应1)粒细胞系统：原粒胞浆光镜下无颗粒。
所以POX阴性。
考察喜欢出这类题，哪个最强或最弱。
嗜酸阳性反应的程度强。
酸梅主要两点;粒系相关的酶;随着细胞成熟，阳性反应增强。
2)红细胞系统：幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。
3)单核细胞系统：分化差的原始单核细胞呈阴性，其他单核细胞呈阳性。
绝大多数阳性，呈细颗粒状。
有时在胞质的边缘处阳性反应颗粒较粗大。
4)淋巴细胞：大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可呈(+)反应。
5)巨核细胞和血小板：巨核细胞为阳性反应，阳性反应物质为红色颗粒状，有时为红色块状。
血小板为阳性反应，阳性反应物质为细颗粒状，有时为红色小块状。
6)其他细胞：浆细胞一般为阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。
巨噬细胞可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。
03.过碘酸-雪夫反应的临床意义根据反应的阳性程度及阳性特点可进行红细胞系统、白细胞系统等疾病的辅助诊断及鉴别诊断，其阳性特点意义更大。
1.白血病类型鉴别急性粒细胞白血病原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，阳性以弥漫性为主;急性淋巴细胞白血病原幼淋巴细胞多呈块状阳性反应，也有少数呈阴性反应;急性单核细胞白血病原幼单核细胞呈阳性反应，其颗粒细小，弥散分布。
2.淋巴系统增生疾病鉴别淋巴系统恶性增生如恶性淋巴瘤、霍奇金病、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病时，其淋巴细胞阳性反应均有明显增高，呈粗颗粒状或块状。
传单时淋巴细胞的PAS轻度增高，而其他病毒感染时常在正常范围。
临床血液学检验：4实验四 POXandPAS-2017
实验一
过氧化物酶染色（）
红过系碘、酸-粒雪夫系反、应巨（核PA系S）正常形态
请问：
以上都是什么细胞？
实验一
化学染色
红系、粒系、巨核系正常形态
细胞化学染色Cytochemical Staining
实质是原位显示细胞结构成分，对各种化学成 分作定位、定性及半定量分析的方法。
用于急性白血病鉴别，血液病辅助诊断、鉴别 诊断、疗效观察和预后判断及发病机制探讨。
– POX存在于粒细胞、部分单核细胞胞浆内。
二氨基联苯胺法（DAB ）
国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐法
组成
主要成份
联苯胺液（A） H2O2液（B） 瑞姬氏染液（C）
联苯胺 H2O2 瑞姬氏染料
磷酸盐缓冲液（D） 磷酸盐
• 细胞内的过氧化物酶能将无色的二氨基联苯胺的氢原子转 移给H2O2 ，释放新生氧，使前者变为有色染料（棕黄色或 蓝黑色）沉积在细胞质酶所在部位。
（+）
（-）
（+）
沉淀颗粒特点
细颗粒状或均匀红色 粗颗粒状或块状 细颗粒状
颗粒状或块状
临床意义
1、鉴别白细胞疾病的性质（白血病细胞） 淋巴系统恶性增生时多呈强阳性---ALL、CLL、淋巴瘤（红色颗粒或块状） 急性粒细胞白血病阳性为：细颗粒，弥散状分布。 急性单核细胞白血病阳性为：细颗粒，胞质边缘颗粒较粗大。 急性巨核细胞白血病阳性为：粗颗粒状、小块状或弥散分布。
作业
• POX与PAS化学染色的原理、正常细胞特点与临床 意义。
• 记录本次课中POX和PAS的细胞染色结果。
新鲜涂片
2、鉴别红系增生的性质（有核红细胞） • 红血病、红白血病、MDS为强阳性 • 地中海贫血、IDA 、巨幼细胞性贫血、HA 、AA 阴性
特殊染色：阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色实验案例
特殊染色：阿利新蓝-过碘酸-雪夫（AB-PAS）染色实验案例1、临床应用用于胃标本组织切片的胃粘膜上皮肠化生分类、糖原和粘液物质形态观察前的染色。
主要应用于胃粘膜上皮化生分类。
在胃粘膜活检时，判别肠化生的类型较之受累程度可能更为重要。
在判别完全或不完全性肠化生时，一般的HE染色即可辩认，但判别是大肠型或小肠型，必须采用AB、PAS及HID粘液的组化染色。
阿利新蓝染色液（PH2.5）用于显示酸性粘液物质，主要应用于粘液性疾病的鉴别诊断。
PAS过碘酸雪夫氏染色液用于糖原和黏液物质染色，主要应用于鉴别细胞内的空泡状变性及心肌病变和心血管方面的疾病，还可用于鉴别观察缺血缺氧早期心肌坏死或梗死区的糖原和糖原累积疾病，糖尿病器官，某些肿瘤的（如：肝细胞瘤、胆管瘤、横纹肌等）诊断及研究。
主要用于糖元、中性粘液的染色。
2、适用范围适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、树脂切片等染色3、原理方法阿利新蓝-过碘酸雪夫氏套染法3、PAS染色液A试剂（高碘酸） B试剂（Schiff氏试剂）4、染色方法切片脱蜡水洗后：1）AB染色液（阿利新蓝染色液PH2.5）染色5～10分钟，水洗；2）PAS染色液A试剂（高碘酸）染色5分钟，蒸馏水洗；3）PAS染色液B试剂（Schiff氏试剂）染色5～10分钟，水洗；4）脱水、透明、封固、镜检。
结果参考：硫酸化粘液呈黑色，酸性粘液呈兰色，中性粘液呈红色。
5、AB染色液（阿利新蓝染色液PH2.5）做酸性粘液物质染色时操作说明染色方法：切片脱蜡水洗后：1）阿利新蓝染色液染色5～10分钟，水洗至无染料脱落；2）脱水、透明、封固、镜检。
结果参考：酸性粘液物质呈蓝色。
6、PAS染色液（过碘酸雪夫氏染色液）做糖元、中性粘液染色时操作说明染色方法：切片脱蜡水洗后：1）高碘酸染色5分钟，蒸馏水洗；2）Schiff氏试剂染色5～10分钟，水洗；3）脱水、透明、封固、镜检。
结果参考：糖元、中性粘液物质呈红色。
实验四 过碘酸-雪夫反应32页PPT
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
实验四 过碘酸-雪夫反应
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 清晰变 模糊的 全过程 ，心会 在你泪 水落下 的那一 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
血液学检验糖原染色2.2.4 过碘酸-雪夫反应(PSA)
2、对疾病诊断的意义
白血病类型的鉴别：
急性粒细胞白血病：原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应，以弥
散性为主；
急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞多呈粗颗粒、块状阳性
反应；
急性单核细胞白血病原、幼单核细胞呈阳性反应，其颗粒细
小，弥散分布，细胞边缘常可见少量粗大的阳性颗粒。
ALL
鉴别幼红细胞增生的性质
红血病和红白血病时，异常幼红细胞可呈阳性反应。 巨幼红细胞性贫血时巨幼红细胞为阴性反应。
鉴别戈谢细胞、尼曼-皮克细胞
戈谢细胞 强阳性 尼曼-皮克细胞 弱阳性
糖原染色(过碘酸-雪夫反应)
原理
多糖中乙二醇基 经过碘酸氧化成二醛基与无色品红结合， 形成紫红色化合物。沉积于含糖原的胞浆中。 结果 ：胞浆中出现弥散状，颗粒状，块状红色为阳性。
无红色颗粒为阴性
临床意义
1、正常血细胞的染色反应 粒系：原粒细胞糖原含量很低，随着细胞的分化成熟，糖原含
量逐增加，至成熟阶段糖原含量十分丰富。 淋巴细胞：糖原常凝聚成颗粒或块状。 巨核细胞－血小板系统：PAS反应呈粗大的紫色颗粒或团块。 正常红系：阴性。
过碘酸-雪夫反应
过碘酸-雪夫反应一、正常血细胞的染色反应1、粒细胞系统分化差的原粒细胞阴性，分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的成熟，阳性反应程度逐渐增强，阳性呈细颗粒、均匀红色；嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性，而颗粒之间的胞质不着色。
2、红细胞系统幼红细胞及红细胞均呈阴性。
3、单核细胞系统分化差的原单细胞呈阴性，其他阳性，绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。
4、淋巴细胞系统大多数淋巴细胞系统的细胞呈阴性，少数淋巴细胞呈阳性（阳性率常小于0.20），阳性呈粗颗粒状或块状。
5、巨核细胞系统巨核细胞系统的细胞（包括血小板）呈阳性，阳性呈颗粒状或块状。
6、其他细胞浆细胞一般呈阴性，少数呈阳性，呈细颗粒状；巨噬细胞可阳性，呈细颗粒状。
二、临床意义1、红细胞系统疾病红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（呈均匀红色或块状），有时幼红细胞阳性反应强且阳性率高，甚至红细胞也呈阳性。
在某些红系良性疾病，如缺铁性贫血、地中海贫血中幼红细胞也可呈阳性，有时阳性率也较高；巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等中幼红细胞常呈阴性，有时个别细胞可呈阳性。
2、白细胞系统疾病主要用于辅助鉴别急性白血病的细胞类型等作用，因为不同细胞类型的急性白血病其阳性反应可不同。
急性淋巴细胞白血病时原淋及幼淋巴细胞的阳性率升高，呈粗颗粒状或块状；急性粒细胞白血病时少数原粒细胞呈阳性，阳性呈细颗粒状或均匀红色；急性单核细胞白血病时原单及幼单细胞可呈阳性，阳性呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。
慢性淋巴细胞白血病时淋巴细胞的阳性率增加，呈粗颗粒状或块状；恶性淋巴瘤时淋巴瘤细胞阳性率高、阳性强，呈块状或粗颗粒状。
3、其他细胞戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性；巨核细胞强阳性，Reed-Sternberg细胞阴性或弱阳性；骨髓转移性腺癌呈强阳性。
血细胞化学染色
血细胞化学染色要点1：过氧化酶染色（POX）（1）原理血细胞内的过氧化酶分解H2O2，释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞质内。
（2）结果判断阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。
①（－），无颗粒。
②（±），颗粒细小、弥散分布。
③（＋），颗粒较粗、局灶分布。
④（＋＋），颗粒粗大、密集、分布较广，占胞质的1/2～2/3。
⑤（＋＋＋），颗粒粗大、成团块，几乎布满胞质。
⑥（＋＋＋＋），颗粒成团块状，充满胞质，并覆盖胞核。
（3）正常血细胞的染色反应1）粒细胞系统：原始粒细胞大多呈阴性反应，有的可出现少量蓝黑色颗粒。
自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。
中性分叶核粒细胞为强阳性反应，嗜酸性粒细胞阳性反应的程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光性，嗜碱性粒细胞呈阴性反应。
2）单核细胞系统：原始单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应，阳性颗粒少而细小，弥散分布，有的也可呈阴性反应。
3）其他细胞：淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。
有的吞噬细胞可呈阳性反应。
过氧化酶染色（POX）模式图（4）临床意义1）帮助鉴别急性白血病的类型：①急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可呈阳性反应，阳性颗粒一般较多，较粗大，常呈局限性分布；急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞均呈阴性反应；急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞呈阴性反应，有时虽少数可呈弱阳性反应，但阳性颗粒少而细小，常弥散分布。
②小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，如果小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反应，可确定为小型原始粒细胞。
③急性早幼粒细胞白血病有时须与急性单核细胞白血病鉴别，如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性反应，应确定为急性早幼粒细胞白血病。
④急性单核细胞白血病有时须与组织细胞白血病或恶性组织细胞病鉴别，异常组织细胞的过氧化物酶呈阴性反应，而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。
过碘酸-雪夫(PAS)染色
过碘酸-雪夫（PAS）染色实验原理胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodicacid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。
该反应称为过碘酸-雪夫(PAS)阳性反应，以前也称为糖原染色。
实验方法材料：1.高碘酸氧化液：HIO4·2H2O1g,蒸馏水加至100ml。
此液溶解后保存于冰箱中待用。
2.Schiff试剂：将1g碱性品红溶于200ml煮沸的蒸馏水中。
摇荡5分钟，冷却至600C左右，过滤，并向滤液中入1mol/LHCl20ml，混匀。
冷至 250C时，加2g偏重亚硫酸钠（或钾）（Na2S2O5）。
将此液置带塞的棕色玻璃瓶中，放暗处24小时。
加1g活性碳，摇动1分钟，滤纸过滤。
保存于冰箱中。
3.亚硫酸液100g/L偏重亚硫酸钠6ml1mol/L盐酸5ml蒸馏水100ml每次用前新鲜配置。
4.20g/L甲绿甲绿2g蒸馏水加至100ml5.淀粉酶嚼石蜡刺激分泌唾液离心取上清液，内含淀粉酶，将麦芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.0）100ml中。
方法：1.固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干；2.如涂片需要消化，可加唾液或麦芽糖淀酶，置室温消化60min，然后用蒸馏水冲洗；3.10g/L高碘酸氧化15～20min,蒸馏水冲洗，待干；4.置雪夫染液中室温染色30～60min；5.用亚硫酸溶液冲洗3次后，再用自来水冲洗2～3min，待干；6.20g/L甲绿复染10～20min；7.水洗，待干，镜检。
实验结果计算（1）中性粒细胞糖原含量参考标准：（-）胞质无颗粒（+）胞质呈淡红色，无颗粒（++）胞质呈红色，有少量颗粒（+++）胞质呈暗红色，颗粒较密（++++）胞质呈紫红色，颗粒极密（2）淋巴细胞系：大多数淋巴细胞呈阴性反应，少数为（+）的阳性反应。
过碘酸雪夫反应MAYER胭脂红染色体会
实验室生物安全工作 是医疗安全工作 的重要组成部分 ， 也 直 接影 响医疗环境 的安全 和社 会 的稳 定。作为 基层 医院检验
科， 只要领 导重 视 ， 硬件设施不 断改进 ， 生物安全 管理制度不断
完善 ， 检验操作规程 不断规范 ， 生物 安全 知识 培训逐步到位 ， 一 定能使生物安全工作迈上新台阶。
２ ． ８ 做 好废弃物 消毒处理工作 ，检验科应 由专人负 责实 验室废 弃标本 、 培养基 和被污染 物品 的消毒灭菌 工作 ， 使用后
的一次性 用品进行 消毒处理 ， 患者 的体液 、 实验 室产生 的废液
［ ３ ］ 王述莲 ． 检验科医源性感染 的预防与管理叨． 中华医院感染学杂志 ，
胭脂红和氧化铝加 入蒸 馏水 内， 混合后加热 （ 微热） 煮沸溶解 至
２ ． ２ ＭＡ Ｙ Ｅ Ｒ胭 脂红染色反应
呈蓝色 ， 其他组织无色或淡绿色。
３ 体会
染液渐渐鲜红色变成深紫色时为止 ， 待冷却后加人 ５ Ｏ ％ 酒精液 ５ ０ ｍ Ｌ ， 过滤后贮存于 ４ ℃冰箱内备用。③ 苦味酸醋酸水溶 液： 苦 味酸饱和水溶液（ １ ． ２ ％） ９ ５ ｍ Ｌ ， 冰醋酸 ５ ｍ Ｌ 。④术适用证 的一种 ， 其病理 改变 主要特点是肺
泡及细支气管 内有 嗜酸 Ｐ Ａ Ｓ强 阳性物质填充 ， 成分 为糖蛋 白和
磷脂 。胸部 Ｃ Ｔ 对Ｐ Ａ Ｐ的诊断有一定 帮助 ， 过碘 酸雪夫反应 阳 性， 为确诊提供了有力依据。 为此我科应 临床要求开展了过碘酸
发生 。
［ １ 】 王菊英 ， 雷静月， 陈丽萍． 检验科医院感染危险因素的管理与预防叨．
中华医院感染学杂志 ， ２ ０ ０ ７ ， １ ７ （ ６ ） ： ７ １ ０ － ７ １ １ ． ［ ２ ］ 林岩 ， 徐 凤琴 ， 陈丽容 ， 等， 医务 人员职业 暴露 的危险 因素分析及 对策［ Ｊ ］ 冲 华医 院感染学杂志 ， ２ ０ ０ ７ ， １ ７ （ ８ ） ： ９ ８ ５ — ９ ８ ７ ．
过碘酸雪夫反应PPT课件
临床意义
1.红细胞系统疾病： 红血病、红白血病、骨髓增生 异常综合征中有核红细胞呈阳性。 缺铁性贫血、地中海贫血、巨 幼细胞性贫血、再障有核红细胞呈 阴性。
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2.白细胞系统疾病：
主要用于辅助鉴别急性白血病的细胞类 型。 急性巨核细胞白血病：部分巨核细胞呈 阳性，呈粗颗粒状、小块状、或弥散分布。 急性粒细胞白血病:部分原始粒细胞呈 阳性，呈细颗粒状或弥散分布
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原理： 氯乙酸AS-D 萘酚
氯乙酸AS-D 萘酚酯酶
AS-D萘酚 不溶性 沉淀
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监牢紫 酱GBC
正常血细胞染色
• 粒细胞系统
分化差的原始粒细胞阴性，分化好的原 始粒细胞至成熟粒细胞呈阳性。 嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性，嗜碱性 粒细胞呈阳性。
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单核细胞系统:绝大多数为阴性，仅个别 单核细胞系统细胞呈弱阳性。
其他细胞：如淋巴细胞、浆细胞、巨核 细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性， 肥大细胞阳性。
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临床意义
主要用于辅助鉴别诊断急性白血病细胞 的类型，是急性白血病的常规细胞化学染 色。
1.急性粒细胞白血病时原始粒细胞呈阴 性或阳性，所以染色结果为阴性者不能排 除急粒的可能。
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2.急性早幼粒细胞白血病早幼粒细胞呈 强阳性。 3.急性单核细胞白血病时原始单核细胞 及幼稚单核细胞几乎均呈阴性，个别弱阳 性。 4.急性粒-单核细胞白血病时原始粒细胞 及早幼粒细胞呈阳性，原始单核细胞及幼 稚单核细胞呈阴性。
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5.急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞 白血病均呈阴性
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应用评价
NAS-DCE是粒细胞的特异酯酶，它是 急性白血病形态分型时常规做的细胞化学 染色，尤其有助于POX染色阳性的急粒急 单的鉴别。 该实验敏感性较POX低，如有一定数量 白血病细胞NAS-DCE染色呈阳性，可以肯 定其中粒系成分的存在，阴性则不能排除 有粒系成分的可能。
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(3) 阳性率和阳性积分：根据不同情况的需要，观察同一 类细胞100个，求出阳性率的百分比，将百分率与分级 数的积相加，其总和即为积分。
过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
过碘酸雪夫反应实验
20[Leabharlann 验步骤]1．取新鲜血片自然干燥后放入95％乙醇液固定10min，用流水冲洗，待干。
2．取基质液，预温至37℃，将血片置入，继续温育4～6h。
3．滴加20g／L硝酸钴，作用5 min，蒸馏水冲洗。
4．滴加20g／L硫化铵，作用5 min，蒸馏水冲洗。
5．用20g／L甲绿水溶液复染2～3 min或用10g／L伊红复染3～5 min。
过碘酸雪夫反应实验
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② 淋巴细胞分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内呈弥散淡红或有少数细颗粒 (< 9个)。 (++) 胞浆内呈弥散较深的红色或有多数细颗粒 (>10个)。 (+++) 胞浆内有较粗颗粒或少数小块状。 (++++) 胞浆内呈多数粗颗粒并有大块红色物质。
③ 幼红细胞的分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内有少数分散细小颗粒或浅红色弥漫物质。 (++) 胞浆内有1～10个中等颗粒或弥漫的红色。 (+++) 胞浆内有11～20个较粗颗粒或呈深红色。 (++++) 胞浆颗粒较多，20个以上，并且粗，致密且呈紫红色。
• 3. 滴加等量的稀过氧化氢液，混匀，染4～8min。
• 4. 勿倾去染液，直接用水冲洗。 • 5.干燥后再用瑞氏染液复染。
6.结果 在细胞的胞浆中出现蓝色或蓝黑色颗粒为阳性反应。
• 阳性反应强度的判断：
• 阴性：无颗粒。 • 弱阳性：颗粒小，分布稀疏。 • 阳性：颗粒略粗，分布较密集。 • 强阳性：颗粒粗大。
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实验五 过氧化物酶 (POX) 染色
[目的要求]
• 1． 掌握本实验的原理和临床意义。 • 2． 熟悉本实验的操作方法及注意事项。
[实验原理] 细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧化氢
分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺 氧化为联苯胺蓝，它是一种不稳定的中间产物， 再与亚硝基铁氰化钠结合进而生成蓝黑色化合 物沉淀于酶的所在部位。
5. 光学显微镜、香柏油、乙醚和擦镜纸。 • 6. 染色架、洗耳球、接水盘及吸水纸。
过碘酸雪夫反应实验
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• [实验步骤] • 1.取0.3％ 联苯胺乙醇溶液 1ml，360g／L亚硝基铁氰化钠饱
和液10µl，混匀。
• 2. 于新鲜干燥血涂片或骨髓片上滴加上述混合液0.5ml，使盖满整 个血膜，作用1～2min。
过碘酸雪夫反应实验
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实验四 过碘酸-雪夫反应 (糖原染色)
[目的要求] 1．掌握本实验的原理和临床意义。 2．熟悉本实验的操作方法及注意事项。 [实验原理]
糖原中的1，2-乙二醇基经高碘酸氧化后产生醛基，此醛基进而 与雪夫 (Schiff) 液作用，使无色品红变为红色的化合物，定位于 胞浆中。
[实验器材和试剂] 1．10g／L高碘酸液 2．雪夫 (Schiff) 染液 3．亚硫酸液 4．20g／L甲绿 5．染色架、洗耳球、接水盘及吸水纸。 6．光学显微镜、香柏油、乙醚和擦镜纸。
核染成绿色。阴性反应，胞浆无色。
• (2) 反应强度判断标准： • ① 中性粒细胞的分级标准： • (－) 胞浆无红色颗粒。 • (+) 胞浆内呈淡红色有极少颗粒。 • (++) 胞浆呈红色，厚而不透明，或有较少颗粒。 • (+++) 胞浆呈深红色，颗粒紧密，但尚有空隙。 • (++++) 胞浆呈深紫红色，颗粒紧密，无空隙。
过碘酸雪夫反应实验
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[实验器材和试剂]
1. 0.3％ 联苯胺乙醇溶液 联苯胺 88％ 乙醇
0.3 g 加至100 ml
2. 360g／L亚硝基铁氰化钠饱和液
• 3. 稀过氧化氢液（新鲜配制）
• 3％ 过氧化氢 • 蒸馏水
0.3 ml 25 ml
•
• 4. 瑞氏染液、PH 6.4～6.8磷酸盐缓冲液。
过碘酸雪夫反应实验
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④ 巨核细胞的分级标准： (－) 细胞内没有糖原，但细胞浆内有弥散性着色，此系其它多糖类
物质。 (+) 含少量糖原，即含数小块或一大块糖原，糖原常定位于近核膜
处。 (++) 胞浆内含有中等糖原，即含许多小块或少数大块糖原，约占
胞质的1/3。 (+++) 胞浆内含有大量糖原，呈大块状，其总面积约占胞浆面积的
过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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实验六 碱性磷酸酶 （NAP） 染色
[目的要求] 1． 掌握本实验的原理和临床意义。 2． 熟悉本实验的操作方法及注意事项。
[实验原理] 中性粒细胞胞质内的碱性磷酸酶在PH 9.6的碱性条件下能水解
磷酸萘酚，生成萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀 定位于胞浆中的酶活性处。
过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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过碘酸雪夫反应实验
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[实验步骤]
• 1．新鲜血片或骨髓片用95％乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干。 • 2．10g／L高碘酸氧化15～20min，蒸馏水冲洗，待干。 • 3．置雪夫试液室温染色30～60min。 • 4．用亚硫酸溶液冲洗3次后，以自来水冲洗2～3min，待干。 • 5．20g／L甲绿复染10～20min。 • 6．水洗，待干，镜检。 • 7．结果 • (1) 阳性反应：在细胞浆内染红色，呈弥漫状、颗粒或块状。胞
过碘酸雪夫反应实验
• 细胞化学染色的步骤： • 1. 固定：将细胞的生前结构和化学物质保存下来。 • 2. 显示：通过一系列化学反应形成稳定的有色沉淀。 • 3. 复染：使各种细胞都显示出来以便于观察。
• 细胞化学染色的实用价值
• 一、协助白血病的诊断 • 1.急性白血病细胞类型的鉴别。 • 检查顺序：POX PAS NAE+NaF NCE • 2.协助慢性白血病的诊断。NAP PAS • 二、协助贫血的诊断 • 1.缺铁性贫血：铁染色 • 2.再障：NAP • 3.铁粒幼细胞性贫血：铁染色 • 三、鉴别某些容易混淆的细胞以协助诊断 • 四、协助鉴别良性与恶性的淋巴细胞疾病 • 五、协助两种感染的鉴别