实验七革兰氏染色法doc资料
实验七革兰氏染色法
实验四革兰氏染色法
一、目的要求
了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。
三、器材
大肠杆菌，枯草芽孢杆菌；
革兰氏染色液，载玻片，显微镜等。
四、操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染用番红液染1—2分钟，水洗。
（5）镜检干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
五、实验报告
1．结果
在你所作的革兰氏染色制片中，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌各染成何色？它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌？
2．思考题
（1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键一步是什么？
（2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？
附录：显微镜油镜的使用
1、用低倍镜对光。
2、低倍镜观察（寻找观察目标）。
3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。
4、油镜观察：高倍镜观察后----上升镜微--油镜转至正下方在载玻片上加一小滴香柏油
--小心地下降镜微使镜头浸在油里----用粗螺旋将镜微缓慢上升，寻找目标（物象）--
--用螺旋调节，使物象清晰----观察记录。
5、观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油
迹，最后再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。
6、将显微镜各部分还原，放回箱中。
思考：油镜完毕后，镜头应如何处理?
实验二+细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察 1. 目的要求 （1）学习细菌涂片、染色的基本技术及无菌操作技术。 （2）掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征。 （3）了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 2. 基本原理 （1）简单染色法 用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观 察。 常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细 菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 （2）革兰氏染色法 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为 两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类
物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现 红色。 革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革 兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或 附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。 脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱 色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不 同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 3. 材料及器材 (1) 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 (2) 革兰氏染色液，载玻片，显微镜等 4. 方法与步骤 Ⅰ涂片取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌 操作分别从培养14～16h的枯草芽孢杆菌和培养24h的大肠杆菌的斜面上挑取少量菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。 载玻片要洁净无油迹；滴蒸馏水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚。 Ⅱ干燥室温自然干燥。 Ⅲ固定固定时通过火焰2～3次即可。此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
2019年成本会计实训实验报告(分批法)
成本会计实训实验报告（分批法） 成本会计实训实验报告(分批法) 一、实验目的 通过本次实训，了解分批法的特点及其适用范围，理解产品成本计算的基本原理，熟悉分批法各种费用归集和分配的方法及相应的账务处理，熟悉掌握分批法的成本核算程序掌握分批法的一般程序和方法及其具体运用。通过分批法的成本计算原理与实务相结合，培养我们对成本计算基本方法的理解和实际操作能力。 二、实验要求 根据模拟单位的实验资料，以分批法的成本计算方法独立完成其6月份所发生的费用在完工产品和月末在产品的分配，全面熟悉分批法在成本计算中的业务流程，掌握成本核算的操作技能。 注意:本次实验为了保证答案的唯一性，分配率能够除尽的可保留五位小数，其余按四舍五入原则保留两位小数，由此产生的尾差一律计入表格中最后一个承担者。 三、主要仪器设备、试剂或材料 原始凭证、记账凭证、汇总表、分配表、明细表、计算单、草稿纸、计算器、签字笔、铅笔、计算机、EXCEL软件等。 四、实验方法与步骤 分批法是以产品的批别作为成本计算对象，开设成本明细账，来计算产品成本的一种方法。分批法主要适用于小批、单件生产的企业，管理上不要求分步骤计算成本的多步骤生产，如重型机械、船舶、精密仪器等。此外，新产品的实验或试制、专业修理不断变化款式的高档时装生产等也可以采用分批法计算成本。 与其他成本计算方法相比，分批法的特点主要表现在:产品成本计算对象就是产品的批别，以产品生产周期为成本计算期进行成本计算，一般 涉及在完工产品和月末在产品之间分批分配费用的问题。 (1)按照产品批次划分成本项目设置成本计算单及成本明细账。 (2)进行生产费用的审核、归集和分配，归集审核无误的生产费用，编制各种分配表，对于各种产品耗用的直接费用，可以直接计入有关成本计算单的对应成本项目，对于生产几种产品共同耗用的间接费用和其他间接费用，归集后按照一定的标准分配计入有关成本计算单的对应成本项目。 (3)按照一定的方法计算完工产品和期末在产品成本。 五、实验数据记录、处理及结果分析 按照产品批别(或生产指令号)开设生产成本明细账，并分别按成本项目设置转行或专栏，用以归集该批产品生产过程中所发生的各项费用;归集和分配生产费用;计算完工产品成本。 1、根据原始凭证和其他资料进行各项要素费用的分配
革兰氏染色的实验原理
革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）
◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。
成本实验报告模板
成本实验报告模板
德州学院实验报告 课程名称：成本会计学 实验项目数： 3 实验报告份数： 3 学生姓名： 学生学号： 专业班级： 指导教师： 实验室名称：经管系机房2011 年5 月30 日
德州学院实验报告 课程名称：成本会计学实验类型：课程实验 实验项目名称：品种法计算产品成本指导老师： 学生姓名：专业：会计学学号 实验地点：经管系机房实验日期：2011 年 6 月22 日实验报告内容 1、实验目的和要求 （1）实验目的： 通过成本会计学的课程实验，更加熟练地掌握产品成本计算的品种法，利用课程软件，初步将手工操作与计算机操作相结合，一方面巩固 了成本会计学的基础知识，另外一方面增加对会计学课程软件的感性认 识，为今后学习会计电算化打下坚实基础。 （2）实验要求： 实验开始前，认真阅读实验企业背景资料，了解该企业生产流程、账簿设置及各环节应采用的成本核算方法等信息，以便在实验过程中保 持思路清晰；按时上下课，保持实验室内卫生，遵守实验课堂纪律，维 护设备安全；学习主动自觉，结合前面所学专业知识，将其合理运用到 课程实验中。 2、实验内容和原理 （1）实验内容： 本课程实验的内容是产品成本核算品种法，实验分两部分进行，第
一部分是平时练习，占6学时，第二部分是综合测试，占2学时，操作内容以编制原始凭证、编制记账凭证和登记账簿为主。 （2）主要原理： 在科力机械有限公司中，设有铸造车间、加工一车间、加工二车间和装配车间四个基本生产车间，大量生产8888产品。该产品先由铸造车间生产出6666、7777铸件，分别交给加工一、二车间加工成8888A 半成品、8888B半成品，而后两种半成品交到装配车间生产出8888产成品。其中，6666和7777铸件通过半成品库收发，故而铸造车间内部采用品种法核算，铸造车间和加工车间之间采用按实际成本结转的逐步结转分步法，加工车间和装配车间之间采用平行结转分步法。此外，车间内设两个辅助生产车间和轧锻设备车间，分别采用顺序分配法及分批法进行有关核算。 3、主要仪器设备 电脑、SQL数据库、多媒体成本会计教学系统软件。 4、实验步骤 （1）平时练习： 点击桌面上的“成本会计多媒体教学系统网络版”图标→点击“进入”→进入“引导学习”或者“自我检测”→阅读“模拟企业资料”以便了解模拟企业具体生产背景→返回上一级菜单→进入“车间方法成本核算”→点击“品种法”，进行练习。 品种法具体步骤： 要素费用的归集和分配、辅助生产成本的归集和分配、制造费用的
微生物的革兰氏染色实验报告
微生物的革兰氏染色 一、实验目的： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法； 2、了解革兰氏染色的原理； 3、巩固显微镜的使用。 二、实验原理： 革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分： 1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片； 2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物； 3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色； 4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。 成分占细胞壁干重的% 革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（50~90）含量很低（~10） 磷壁酸含量较高（<50）无 类脂质一般无（<2）含量较高（~20） 蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较： 1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。 2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。 三、实验步骤： 1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。 2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。 3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。 4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗 5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。 6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干 7、镜检并拍照。 四、注意事项： 1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论： 1、结果： 高倍镜下观察的菌体图像：
细菌放线菌的观察与革兰氏染色实验报告
实验一：细菌、放线菌的形态 观察与革兰氏染色 姓名:陈虹邑 学号：200911233012 系别：生物科学与生物技术 班级：周二第一组 试验日期：2011年9月13日 同组成员：邢悦婷呼波
一、实验目的及意义 1、巩固油镜的使用; 2、掌握细菌形态观察的基本方法； 3、了解细菌的基本形态和结构。 4、了解革兰氏染色的原理； 5、初步掌握细菌涂片的方法； 6、掌握革兰氏染色的方法； 7、掌握放线菌的涂片方法； 8、观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。 二、实验材料与方法 【实验材料】 菌种：溶血链球菌(Strptococcus haemolyticus),螺菌(Spirillum sp.) ,巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium), 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis), 普通变形菌(Proteus vulgaris), 丙酮丁酸梭菌(Clostridium acetotylicum), 褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)等细菌永久装片，放线菌5406，金黄色葡萄球菌 （staphulococcus aureus），大肠杆菌（E. coli） 试剂：香柏油、无菌水、结晶紫、番红或沙黄、95%酒精、碘液 仪器及用具：显微镜、擦镜纸、吸水纸、小滴管，接种环、载玻片、盖玻片、酒精灯 【实验方法】 细菌的观察 1、在载玻片上滴一小滴水，用接种环，采用无菌操作，将细菌挑起，涂到载玻片 上，盖上盖玻片。 2、用显微镜对细菌进行活体观察。观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话， 再用油镜观察。 3、观察细菌的永久装片，观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话，再用油 镜观察，找到细菌的各种结构。
分批法与简化分批法的比较 (成本会计)
浅议分批法的操作程序及其两种方法的比较 《成本会计》课内实验报告1 分批法简介 1.1 分批法概念 分批法是按照产品批别归集生产费用、计算产品成本的一种方法。在小批单件生产的企业中，企业的生产活动基本是根据定货单位的订单签发工作号来组织生产的，按产品批别计算产品成本，往往与按定单计算产品成本相一致，因而分批法也叫订单法。 1.2 适用范围 它适用于单件、小批生产类型的企业，主要包括： 1．单件、小批生产的重型机械、船舶、精密工具、仪器等制造企业。 2．不断更新产品种类的时装等制造企业。 3．新产品的试制、机器设备的修理作业以及辅助工具的工具、器具、模具的制造等，亦可采用分批法计算成本。 1.3 成本计算对象 分批法的成本计算对象是产品的批别。由于在单件小批生产类型的企业中，生产多是根据购货单位的定单组织的，因此，分批法也称定单法。但严格说来，按批别组织生产，并不一定就是按定单组织生产，还要结合企业自身的生产负荷能力，来合理组织安排产品生产的批量与批次。比如说： 1．如果一张定单中要求生产好几种产品，为了便于考核分析各种产品的成本计划执行情况，加强生产管理，就要将该定单按照产品的品种划分成几个批别组织生产。 2．如果一张定单中只要求生产一种产品，但数量极大，超过企业的生产负荷能力，或者购货单位要求分批交货的，也可将该定单分为几个批别组织生产。 3．如果一张定单中只要求生产一种产品，但该产品属于价值高、生产洲际长的大型复杂产品（如万吨轮），也可将该定单按产品的零部件分为几个批别组织生产。 4．如果在同一时期接到的几张定单要求生产的都是同一种产品，为了更经济合理地组织生产，也可将这几张定单合为一批组织生产。 1.4 成本计算期
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
成本会计实验报告doc
成本会计实验报告 篇一：成本会计实训心得 5000字 成本会计实训心得 1. 实训目的 成本会计是一门实践性很强的学科，不通过实际训练与模拟，很难提高实际分析与解决问题的能力。因此，我们不仅需要掌握成本会计核算的理论与方法，更需要在实践中学会针对特定的企业环境进行准确的成本核算与客观理性的成本分析，为企业管理者提供更加有效的成本信息。为了更好的了解会计在实际工作中的工作内容，以便于实际与理论相结合，也更能够适应社会的要求，我们开设了成本会计实训课程。这次实训，通过实际案例模拟各种类型企业的经营环境，把品种法、分批法、分步法所用的各种费用分配表和明细账结合起来，不仅掌握了三种成本核算基本方法的特点，还进一步理解了产品成本计算的基本原理；同时熟练掌握了品种法、分批法、分步法核算的会计处理，提高并加快了我们的动手能力，做到理论联系实际，增强感性认识，全面地理解制造企业中成本核算的整个流程；培养了我们认真细致、一丝不苟、严谨客观的工作作风和理论联系实践的学习态度；缩短我们从学校到单位、从学生角色到会计人员角色的适应期与调整期。
2. 实训内容 实训教程主要是针对《成本会计学》中的各种成本核算方法而编写的综合训练，我们主要从中选取了品种法、分批法、分步法三种核算方法。 品种法是产品成本计算方法中最基本的方法，它是以产品品种作为成本核算对象来汇集生产费用，并计算产品成本的一种方法，其计算程序体现着产品成本计算的一般程序。品种法主要适用与大量大批单步骤生产的企业，如发电、采掘企业；同时也适用于管理上不要求分步骤计算产品成本的大量、大批多步骤生产的企业，如糖果、饼干等生产企业。品种法的主要特点是：⑴以产品的品种作为成本计算对象。 ⑵按产品品种设置成本明细账并按成本项目归集生产费用。 ⑶成本计算按月定期进行，成本计算期与会计报告期一致，而与产品的生产周期不一致。⑷采用品种法的企业月末一般没有在产品，或有很少在产品，一般可忽略不计算月末在产品成本。如果企业有月末在产品，可采用较简便的方法，将生产成本在完工产品与月末在产品之间进行分配。 分批法是按照产品的批别或订单计算产品的一种方法。它是以产品的批别或订单作为成本计算对象，归集产品的生产费用，计算各批或各订单产品的生产总成本和单位成本。分批法一般适用于单件、小批生产的企业和车间，如造船、
试验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色
实验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色普通光学显微镜的使用 一、实验目的 以染色玻片及活菌为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。 二、显微镜油镜使用的原理 1 普通光学显微镜的基本构造 （1）光学部分: 接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。它使检视物放大, 造成物象。（2）机械部分: 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。2 显微镜的放大倍数和分辨率（1）放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 （2）显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 λ：可见光的波长（平均0.55μm） n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 a：镜口角（即入射角）。3 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、实验材料 1 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、盖玻片、接种环、酒精灯等。 2 细菌三种形态的玻片染色标本。 3 培养12-18h的枯草芽孢杆菌。四、实验方法与步骤 1 染色细菌玻片的油镜观查 （1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光亮度。 （3）低倍镜观察：先粗调再微调至物象清晰。
（4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。 （5）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 （6）绘出所观察到的细菌形态图像。 （7）、换片：另换新片观察，必须从（3）步开始操作。 （8）、用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去油镜头上的香柏油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 2 活菌制片观察 取一张干净的载玻片，在其中央滴上一滴干净的蒸馏水，取培养12-18h的枯草芽孢杆菌一小环，在水滴上反复涂抹至菌体充分分散，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余的水分，按照油镜的使用步骤，观察草芽孢杆菌形态，边观察边绘图。 五、实验报告 油镜使用的原理 六、思考题 1 油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 2 使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 3 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 七、实验注意事项 1 不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2 镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。 3 观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4 观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5 拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6 显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 1 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色方法及革兰氏染色。 2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验原理 1 简单染色的原理
分批法实验资料
分批法实验资料 启业制衣厂属于来单加工服装企业，按生产定单生产服装。该企业设有三个流水线车间：裁剪车间、缝制车间、整理车间。裁剪车间的生产任务是将布料按照服装样板进行裁剪，然后将裁剪好的布料送到缝制车间进行下一步加工；缝制车间的生产任务是将裁剪好的布料进行缝制，在缝制过程中添加一些辅助材料，将布料做成成衣，然后将成衣送到整理车间进行整理；整理车间的生产任务是对成衣进行整理、熨烫、定型、包装等工序处理，经检验合格 图2—1 生产工艺流程 该企业还设置一个辅助车间：机修车间。机修车间为全厂提供修理服务。 该企业产品成本核算采用分批法。产品成本核算要求如下： 1．该企业设置“基本生产成本”二级明细账，按材料费用、工资及福利费、燃料动力费、制造费用等成本项目设置专栏；产品成本中原材料费用在生产开始时一次投入，产品所需的辅助材料、包装材料随着生产进行逐步投入，原材料、辅助材料及包装材料费用直接计入各批产品成本；工资及福利费、燃料动力费、制造费用按生产工时比例进行分配。 2．产品成本计算单按产品订单批号分别设置，月末不进行完工产品和在产品分配，月末如果有完工产品，按计划成本结转。一批产品全部完工后，计算该批产品完工产品总成本和单位成本。 3．机修车间为全厂提供修理服务，该车间发生的各项费用直接通过“辅助生产成本——机修车间”账户核算，月末按其提供的劳务量比例将费用直接分配给各受益车间和部门。 启业制衣厂有关成本资料如下： （一）200×年10月期初资料 1.休闲外套（生产批号050801） 200×年8月20日根据生产订单投产3 000套，8月份没有完工产品，9月份生产完工产品1 000套，每套按计划单位生产成本150元结转（明细资料见表2—1），10月初有在生品2 000套，在产品成本资料见表2—2。 2.牛仔裤（生产批号050901） 200×年9月接到外贸出口定单生产牛仔裤4 000件，9月25日根据生产定单本月先投产1 000件，9月份全部未完工。10月初有在产品1 000件，在产品成本资料见表2—24。 3.计划单位生产成本（见表2—1） 表2—1 计划单位生产成本
实验二 革兰氏染色法
实验二革兰氏染色法 【实验目的】 1.学习并初步掌握革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3.巩固显微镜油镜的使用方法。 【实验仪器、材料】 1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。 2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。 3.仪器及其他物品： 显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。 【实验内容】 革兰氏染色法 一、染色标本制备 1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记） 2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高) 3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常
用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 二、染色 l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。 2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。 3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。 4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。 三、镜检 待染色片充分干燥后，用油镜观察。 【实验结果】 葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌； 大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。 注：绘图展示染色结果 【结果分析、讨论（结论与评价）】 注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。
分批法成本实训实验报告1
一、实验目的：通过本次实训，了解分批法的特点，熟悉分批法的基本原理和一般程序，掌握简化的分批法的成本计算流程。 二、实验要求： （1）根据货币资金支出情况资料，编制银行存款付款凭证汇总表。 （2）根据各部门用水、用电资料，编制外购动力费用分配表，并编制记账凭证。（3）根据领料凭证，汇总编制领料凭证汇总表。 （4）根据领料凭证汇总表及其他相关资料，编制材料费用分配表，并编制记账凭证。 （5）根据工资结算汇总表及其他相关资料，编制人工费用分配表，并编制记账凭证。 （6）根据固定资产折旧资料，编制固定资产折旧费用计算表和分配表，并编制记账凭证。 （7）根据前述各项分配表，登记辅助生产成本明细账和制造费用明细账。（8）根据辅助生产成本明细账和其他相关资料，编制辅助生产费用分配表，并编制记账凭证。 （9）根据辅助生产费用分配表，登记辅助生产成本明细账和制造费用明细账，编制产品成本计算单。 （10）根据上述资料，计算各批次产品的完工成品成本和月末在产品成本，编制产品成本计算单。 （11）根据产品成本计算单，编制产成品成本汇总表，并编制记账凭证。 三、仪器设备、试剂或材料： 课本、计算器、黑色笔、草稿纸 四、实验方法与步骤 按照产品批别（或生产指令号）开设生产成本明细账，并分别按成本项目设置转行或专栏，用以归集该批产品生产过程中所发生的各项费用；归集和分配生产费用；计算完工产品成本。 五、实验数据记录、处理及结果分析
1、银行存款付款凭证汇总表 2、外购动力分配法
电费分配率=52200/87000=0.6 水费分配率=44400/22200=2 3、材料费用分配表 分配率=3400/20000=0.17 4、人工费用分配表（表略） 生产工人工资计算：
成本会计实训材料.docx
成本会计实训材料 品种法 企业基本情况及有关资料 某工业企业设有一个基本生产车间，大量生产甲、乙两种产品；另设供水、机修两个辅助生产车间为全厂提供产品和劳务。辅助生产费用采用的是计划成本分配法。辅助生产不单独核算制造费用。月末在产品完工程度均为50% ，原材料均为生产开始时一次投入。该企业× ×年 9 月份成本有关资料如下（工资以外的职工薪酬本例仅列出福利费，且比例假定为工资总额的 14%，其余略）： 1．产量资料 ××年 9 月单位：件 产品名称月初在产品本月投入本月完工产品月末在产品 甲产品50700450300 乙产品70580650 2．月初在产品成本 ××年 9 月单位：元 产品名称直接材料直接人工制造费用 甲产品10 000 4 080 6 186 乙产品9 1757 030 3 034 3．本月发生生产费用 本月材料费用表××年 9 月单位：元 领料用途直接领用 A 共同耗用B B 材料定额耗材料材料 材料合计 用（千克） 甲产品40 000 1 000乙产品50 000 1 100小计90 00021 000111 000 基本生产车间一般耗用 5 000 5 000 机修车间14 00014 000 供水车间 6 000 6 000 合计115 00021 000136 000 本月职工薪酬费用表××年 9 月单位：元 人员类别应付职工薪酬应付职工薪酬（工资）（福利费） 产品生产工人17 000 2 380机修车间10 000 1 400供水车间8 000 1 120基本生产车间一般耗用7 000980合计42 000 5 880
折旧费用表××年 9 月单位：元 车间名称金额 基本生产车间10 000 机修车间 4 000 供水车间 6 000 合计20 000 其他费用表××年 9 月单位：元 费用项目 车间名称低值易耗品摊销办公费电费保险费其他合计 基本生产车 1 600500 2 800 2 2004007 500 间 机修车间800200 1 000500500 3 000 供水车间500400 1 800 1 200600 4 500 合计 2 900 1 100 5 600 3 900 1 50015 000 4．工时记录：甲产品 4 000 小时，乙产品 4 500 小时。 5．辅助生产产品及劳务供应量） 机修车间（小时）供水车间（吨）计划单位成本 受益单位 供水车间100—0.9 元 /吨 机修车间— 1 00010 元 /小时 基本生产车 3 10029 000 间 合计 3 20030 000 计划成本与实际成本的差额全部计入管理费用。 6．有关费用分配方法： （1）甲、乙产品共同耗用的材料费用按定额耗用量比例分配。 （2）生产工人工资按甲、乙产品生产工时比例分配。 （3）制造费用按甲、乙两产品生产工时比例分配。根 据上述资料，按照品种法计算程序计算产品成本。 简化分批法： 4 月份生产情况如下：（ 1）月初在产品成本： 101 批号，直接材料 3750 元； 102 批号，直接材料 2200 元； 103 批号，直接材料 1600 元。月初直接人工 172 5 元，制造费用 2350 元。 （2）月初在产品耗用累计工时： 101 批号 1800 小时； 102 批号 590 小时； 103 批号 960 小时。（ 3）本月的生产情况，发生的工时和直接材料如下表所示： 产品批号批量投产完工日本月发生本月发生 名称（件）日期期工时直接材料 甲10110 2 月 4 月450250 乙1025 3 月 4 月810300
革兰氏染色实验
革兰氏染色实验 革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。(这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明)。 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。 阳性紫色，阴性红色 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌： 革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要的病原菌。
革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆 菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎 双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克 雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢 疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜 血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍 乱弧菌、阴沟肠杆菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中 占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐药，产生“新德里金 属酶”（NDM-1）的绝大多数细菌都是革兰氏阴性菌（主要是大肠 杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌）。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。 细胞形态和结构 细胞的基本结构包括细胞壁和原生质体两部分。原生质体位于细胞壁内，包括细胞膜（细胞质膜）、细胞质、核质和内含物。另外细胞还含有有些特殊结构，主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4种。 1.细胞壁
2021年革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色 欧阳光明（2021.03.07） 一．实验流程： 1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。 4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。 7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液
无紫色，立即水洗。 9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。 二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。 备注： 1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。 2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种：金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂：草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚：乙醇=7:3），香柏油。 3、器材：废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片：取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干：让涂片自然晾干。 3．固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰（通常2~3次）固定（具体温度以不烫手为宜）。 4．染色：将固定过的涂片加复红染色1~2min 5．水洗：用水洗去涂片上的染色液。 6．干燥：将吸过地涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 7．镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上滴加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌形态。 （二）革兰氏染色
实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色
实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。 革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。 2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载 玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。 6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。 7.用滤纸吸干，油镜镜检。 五、注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。 六、实验内容 1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色 2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。 七、实验报告
实验6 细菌的革兰氏染色
实验6 细菌的革兰氏染色 一、实验目的和内容 目的：初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。 内容：1．制作细菌染色装片。 2．进行革兰氏染色法操作。 二、实验材料和用具 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌菌液，待测菌菌液1～2种。 革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。 三、操作步骤 (一)制片 1．涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。 2．干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。 3．固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 (二)染色 l．初染于制片上滴加结晶紫染液，染lmin后，用水洗去剩余染料。 2．媒染滴加卢戈氏碘液，lmin后水洗。 3．脱色滴加95%乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至lmin)，水洗。 4．复染滴加石炭酸复红液复染lmin，水洗。 5．滤纸吸干，油镜镜检。 (三)结果 革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。 (四)检测未知菌 用以上方法对未知菌进行革兰氏染色，并绘图、记录染色结果。 四、注意事项 1. 涂片务求均匀，切忌过厚。 2．在染色过程中，不可使染液干涸。 3．脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌；脱色不够，则会使阴性菌被染成阳性菌。 4．老龄菌因体内核酸减少，会便阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。 五、实验报告 (一)绘图 1．大肠杆菌革兰氏染色视野图。 2．金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌革兰氏染色视野图。 (二)记录革兰氏染色法法步骤，并进行结果分析。 (三)未知菌的检测结果。 六、问题和思考 1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意什么? 2．什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么? 3．试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。