细菌的分离与鉴定详解
细菌的分离鉴定与鉴定技术分析
细菌的分离鉴定与鉴定技术分析细菌是我们日常生活和工作中经常接触到的微生物。
它们的分离鉴定对于人们的健康和疾病治疗有重要的影响。
在医学、食品、化工、农业等领域中，细菌的分离鉴定技术也是非常重要的。
本文将从细菌的分离鉴定入手，介绍其基本原理、方法和现代鉴定技术。
一、细菌的分离鉴定基本原理细菌的分离鉴定是指在混合的细菌样品中，通过某些方法将不同的菌种分离出来，并对分离的细菌进行鉴定和分类。
分离鉴定是细菌学的基本方法，也是研究细菌生物学及其与人类和环境的关系的前提和基础。
细菌分离所需的基本条件是菌落形态的不同、生长条件的不同或者对特定的生物学染色有不同的反应，主要包括如下几种方法：1、分离鉴定法：将混合菌液接种于特制的培养基上，通过不同营养要求、不同生理代谢等方面的差异，使不同种类的细菌单独生长成为单菌株，最后进行分离鉴定。
2、生化鉴定法：利用微生物不同的代谢方式及对化学试剂的不同反应，来分析鉴定特定的菌种。
其优点是快速方便，可进行大规模筛查，但不同种类之间有重叠，不同试剂对同一品种的反应也不一定相同。
3、分子鉴定法：在细菌体内提取其DNA或RNA，然后使用特定的技术获得序列信息，利用基因序列的高度保守性和可变性进行分类鉴定,其优点是快速、准确性高，适用于复杂菌种的分类和鉴定。
二、细菌的分离鉴定方法（一）菌落计数法菌落计数法是一种直接观察菌落数的方法，常用于对食品、环境和水样的微生物污染和细菌总数的测定。
具体实验过程如下：1、准备适当的菌落计数培养基和其他必要的实验设备。
2、将待测试的样品适当稀释到指定的浓度，通常要将样品稀释至合适的浓度才能保证菌落数的精确计算。
3、接种适量的样品在培养基上，将其培养在恰当的温度、湿度和 pH 下。
4、放置一定的时间后，菌落会不断地生长、分裂以形成许多菌落。
5、用放大镜、突显灯或者过色的方法观察菌落的数量，计算出待测试样品的总菌落数目。
（二）生化鉴定法常见的生化鉴定法有氧气需求量法、革兰染色法、荧光凝集法、十字试验法等。
细菌的接种分离与鉴定
Mac生长试验阳性 肠链球菌属
靛基质-
Mac生长试验阴性
α溶血Optochin S为肺链 R为甲链
β溶血 杆菌肽S为A群链 CAMP试验+为B群链
-b鉴定思路
乳糖-
OX+双糖- 非发酵菌科
鞭毛染色-为黄杆菌属莫拉菌属
h2o2+
OX –双糖+ 肠杆菌科
端鞭毛为假单胞 一根鞭毛为绿脓 周鞭毛为产碱杆菌
灭菌接种环
02
第二区划线
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灭菌接种环
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第三区划线
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灭菌接种环
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添加标题
密集划线法 此法用于纸片药敏实验培养
添加标题
密集划线法
添加标题
用于药敏实验
细菌在固体培养基中生长表现：
大小 （ mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落） 形状 （圆形、不规则形） 边缘 （整齐、锯齿状） 表面性状（光滑、粗糙、） 隆起度（扁平、隆起、中凸） 颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 硬度（干燥、湿润、粘液） 溶血（在血培养基上的表现）
添加标题
细菌分离培养
添加标题
选择适合细菌生长的条件和温度
添加标题
按无菌操作 选择适合细菌生长的培养基 接种量少
+C鉴定思路
乳糖-
触酶+ 微球菌科
O/F试验氧化型 微球菌属
h2o2+
触酶- 链球菌科
血浆凝固酶-
新生霉素敏感试验S 表皮葡萄球菌
O/F试验发酵型 葡萄球菌属
血浆凝固酶+ 金黄色葡萄球菌
动物检验检疫学实验一动物病原细菌的分离与鉴定
动物检验检疫学实验一动物病原细菌的分离与鉴定预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制实验一动物病原细菌的分离与鉴定一、实验目的了解动物病原细菌的分离、鉴定的常规程序与基本方法二、实验原理初步分离鉴定：利用细菌在特定的选择培养基上的生长特性，观察细菌培养特征；确定细菌的血清型、毒力因子：血清学检测或PCR检测技术大肠杆菌的培养特征：37℃,培养24h,各种培养基生长特征：普通营养琼脂平板：白色圆形，隆起，中等大小麦康凯琼脂：红色、圆形、隆起、光滑、湿润、边缘整齐、中等大小糖铁琼脂斜面培养基：底层变黄，产酸产气伊红美蓝培养基：黑色、金属光泽革兰氏染色：革兰氏阴性、分散或成对排列、两端钝圆的短杆菌血清学鉴定：玻片凝集实验：颗粒性抗原与相应抗体结合出现凝集沉淀。
大肠杆菌中，为了避免K抗原对O抗原凝集的抑制作用，利用O抗原的耐热性高于K抗原，实验前进行、高压或煮沸处理。
三、实验材料1）材料：可疑病料，需提前三天提供小鼠2）菌株：致病性大肠杆菌菌株3）试剂：营养肉汤、营养琼脂、CT-SMAC琼脂、TSI琼脂、伊红美蓝琼脂培养基、IMViC、大肠杆菌O157标准血清、生理盐水、吉姆萨染色液、酒精或棉球。
4）仪器：显微镜、37℃恒温培养箱、酒精灯、接种棒、剪刀、镊子、载玻片、记号笔、口罩、手套。
四、操作步骤1.分离培养第一天：1.）处死小鼠，无菌解剖2.）观察各脏器是否出现肉眼病理变化；3.）无菌采集内脏病料，通过无菌操作划线接种于普通琼脂平板、改良山梨醇麦康凯（CT-MAC)琼脂平板各一块，37℃培养24h；4.）同时无菌挑取一小块病料，直接涂片，吉姆萨染色，油镜观察组织中的细菌特征；第二天5.）挑取CT-SMAC典型单个菌落分别接种于TSI琼脂斜面、伊红美蓝琼脂和营养肉汤，37℃培养24h。
挑取普通培养基上的菌落进行糖类发酵和IMViC生化实验。
糖（醇）类发酵实验：接种两只葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基，麦芽糖发酵培养基，一支接种，一支对照；接好后置于37℃温箱中培养24h。
细菌的分离、培养和鉴定
鱼的解剖结构：
2）无菌操作
无菌操作是指在环境中一切有生命活动的微生物的 营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。微生物 研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作 对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。 无菌操作是对微生物学工作者最基本的要求，必须 经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情 况下，头脑中都应该有这个概念。 无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的采集、 器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事 先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌或煮沸 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 塞、培养基等则要高压灭菌。
3）细菌分离
► 工具：接种环（接种前后都要严格过火灭菌） ► 接种环境：无菌操作台 ► 接种方法：平板划线
* 以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底,拇指和食指打开上盖，使 盖与底成30º 角，以便划线。 * 右手握接种环，先灭菌铂丝部分，待丝烧红后，再于火焰上灭菌金属棒部 分。把接种环上的病料涂在培养基一侧，一般作5-8次划线。将环上的多余细 菌材料烧掉后，从第1次划线引出第2次划线；再从第2次划线引出第3次划线， 如此反复3-4次划线后，即可把整个平板表面划满，注意每一次划线只能与上 一次划线重叠，这样就可在最后的1-2次划线上出现多量的单个菌落，以便进 行纯培养。
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。 PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成 比较经典的核酸检测技术, 目前这两者已经 得到了较大范围的推广和应用
细菌分离鉴定
细菌分离鉴定第一篇：细菌分离鉴定细菌分离鉴定目的要求：熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法，细菌分离鉴定。
实验内容：一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定(一)标本采集1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
(二)分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→ 涂片、染色、镜检↑ 挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓ 药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检(三)常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
材料(1)标本：脓拭子(2)培养基：血琼脂平板(3)兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片方法脓汁→ 革兰染色→ 镜检↓ ↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)，鉴定材料《细菌分离鉴定》。
细菌分子毒素的分离与鉴定
细菌分子毒素的分离与鉴定细菌分子毒素是一种细胞外分泌物质，可以对人体组织产生严重的毒性反应。
它们通常由细菌分泌，具有不同的化学特性和毒性。
因此，对细菌分子毒素的分离和鉴定非常重要，可以帮助医生快速诊断疾病，在治疗上提供帮助和支持。
一、细菌分子毒素的分离细菌分子毒素分离的关键是选择合适的分离方法。
目前常用的分离方法有免疫技术、纯化技术、毒素类别筛选等。
1.免疫技术：免疫技术是最常见的细菌毒素分离方法之一。
通过对抗体与抗原结合来检测和识别毒素。
典型方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、质谱分析、圆二色性分析等。
这些技术可以有效地确定细菌的毒性特性，并允许我们建立一些诊断标准。
2.纯化技术：另一种分离方法是借助纯化技术。
这种技术可以通过一系列的化学反应と离心技术消除其他分子，干净、纯净的毒素物质与来自同一菌株的其他细菌有所区别。
流动相分离技术、薄层色谱法、分子过滤法、高效液相色谱法等方法都是分离细菌毒素的有效手段。
3.毒素类别筛选：以感染性病原体产毒为例，常用的毒素类别筛选技术包括多种荧光素酰基转移酶(AdoMet)酶亚型、激酶亚型、转移酶亚型等等。
这些技术可以有效地区分细菌的毒性成分，为量化毒素、提取毒素、设计合理的治疗方案提供了指导。
二、细菌分子毒素的鉴定细菌分子毒素的鉴定主要依赖于技术和工具的提升。
目前，现代分子生物学、生物化学技术以及对疫苗、保健食品、抗菌剂和消毒剂的各种试验技术都在极大地增强了细菌毒素的诊断意义。
1.多种技术综合应用：对于分离出的细菌毒素，鉴定其种类、形态以及某些特定的测量指标都是非常重要的。
因此，多种技术的综合应用更有可能提高检测准确性和灵敏度，包括纯化、酶联免疫吸附测定、微量融合聚合酶链反应等。
2.充分利用酶与免疫学反应关系：细菌分子毒素能够在体外产生很多异质之处。
利用这些异质性，我们可以建立对细菌毒素的严谨鉴定方案，同时利用这些异质性模型来验证鉴定方案的准确性、速度和优越性。
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定实验目的：（1）了解细菌的分离培养方法和染色技术。
（2）掌握未知细菌的分离与鉴定方法。
（3）使用基本的鉴定技术确定未知菌株的种属。
实验原理：细菌的分离和鉴定是微生物学领域中的研究重点之一，它是一项极其重要的技术，可以用于从环境中分离出未知细菌，或者为疾病的诊断和治疗提供依据。
分离和鉴定的基本步骤包括准备标本、分离、纯化、染色、形态学特征观察、生理生化特征鉴定等。
（2）菌落计数菌落计数是一种比较简单、实用的微生物数量统计方法。
其基本原理是在相应培养基中培养所需数量的细菌，将其种在匀质培养基表面上，等待一定时间后，通过肉眼观察和计数器计数，得出单位体积菌落数的统计数据。
（3）清洁措施实验室的卫生和清洁非常重要，工作区域要每日进行消毒。
要使用消毒剂擦拭实验台面和灭菌设备，保持实验环境的清洁卫生。
实验步骤：1. 标本处理：将未知标本放入对应的生长基内，摇晃并在恒温箱内培养48小时，使菌落生长到适当的大小。
2. 细菌分离：采用计数板分别涂抹标本样品，摇晃平板均匀扩散，培养48小时。
3. 排除细菌：对分离出的单个菌落进行传代培养，过渡培养10天，如果单个菌落都是一种细菌，即为纯菌。
4. 细菌染色：染色是确定未知菌株种类的重要步骤。
首先进行革兰氏染色以区分细菌的细胞壁特征。
5. 形态学特征观察：观察页面。
6. 生理生化鉴定：(1)对产酸细菌进行发酵测试，对氧化细菌进行氧化测试。
(2)对氧化酶进行试验。
(3)对盐耐性进行测试。
(4)对温度和气氛的适应性进行测试。
实验结果：通过上述步骤，我们成功地分离出未知细菌，对其进行染色、形态学特征观察和生理生化鉴定，最终确定了它的种属为大肠杆菌。
通过实验，我们掌握了未知细菌的分离和鉴定方法，成功地确定了未知细菌的种属，这对于深入研究细菌的生物学及其应用具有重要意义。
同时，本实验也提醒我们实验室的消毒及环境卫生的重要性。
细菌的分离培样及鉴定
革兰染色法： * 原理：机理仍不清楚，一般认为与细菌细胞壁的结构和化 学成分有关。 • 革兰阴性菌细胞壁含有较多的脂类，当以95%酒精脱色时 ，脂类被溶去，使细胞壁孔隙变大，尽管酒精处理能使肽 聚糖孔隙变小，但因为肽聚糖含量较小，细胞壁收缩有限 ，故能让结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被酒精洗脱出 细胞壁之外，而被后来红色的复染剂染成红色。 • 革兰阳性菌细胞壁所含脂类少，肽聚糖多，酒精脱色时， 细胞壁孔隙缩小到不易让结晶紫与碘形成的紫色染料复合 物洗出细胞壁外，而被染成紫色。
注意事项
A 制作抹片固定时温度不能过高，温度过高会使细胞壁中蛋 白变性，染色中染液的渗出会有影响； B 革兰染色法中，酒精浓度不能过高，也不能过低。此外， 酒精脱色时间不宜过长，不要超过30s； C 瑞氏染色法中，由于染料中有沉淀，所以要避免沉淀附着 在抹片上影响镜检观察； D 染色水洗，水尽量用蒸馏水，水的流速不要过大，防止将 细菌洗脱。
*穿刺培养：半固体移植采用穿刺法接种，方法基本与纯培 养接种相同，差别在用接种针挑取单菌落，垂直刺入培养 基内。
注意事项：
A 接种环（针）火焰烧灼灭菌后要稍冷却后再挑取菌落； B 打开平皿，接种过程保持无菌状态，尽量靠近酒精灯燃心 ； C 接种后，培养小管或平板要置于适宜条件，利于细菌生长 ； D 穿刺培养，接种针要直刺直出，不要反复戳刺； E 芽孢菌耐杀灭，培养芽孢菌的实验室最好单独使用，否则 要彻底灭菌。
三、细菌生化试验
生理生化鉴定管的选择原则并非越多越好,应选择一组能鉴定 到种或属的关键性鉴定管 猪霍乱沙门菌和猪伤寒沙门菌:关键项目包括:阿拉伯糖、海 藻糖、卫矛醇、肌醇、硫化氢 鸡沙门菌、雏沙门菌、肠炎沙门菌：关键项目包括：卫矛醇 、麦芽糖、鸟氨酸脱羧、赖氨酸脱羧、动力
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分散成单个微生物
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
一、用固体培养基（营养琼脂平板） 分离纯种
平板分离法：将单个微生物分离和固定在固 体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物 体经过生长、繁殖均可形成单个菌落
纯化细菌
微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分
肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、
葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
微生物纯种分离
• 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
• 在适宜条件下培养纯种获得的培养物 （群体）
菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落(colony)。
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、 光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种 细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。 不同种或同种在不同的培养条件下，菌落 特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴 定有一定意义。
（一）、微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
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1大格=25中格 16 ×25 =400小格
3.计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= 100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数
(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= 80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数
不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶
CO(NH2)2 +H2O
NH3 + CO2
原理：培养基的氮源为尿素，只有能
合成脲酶的微生物才能分解尿素，以 尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由
于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长 发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养 基就能够选择出分解尿素的微生物。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌 种逐步稀释分散到培养基的表面。
2.稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂 布到琼脂固体培养基的表面进行培养。
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细 胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
➢不能区分死菌与活菌； ➢不适于对运动细菌的计数
计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个
槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半， 其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格， 中央的一大格作为计数用，称为计数室。
血球计数板计数室有两种刻度
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*#
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*
1大格=16中格 25×16=400小格
稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平 板操作。
（二）、纯种平板分离的不同方法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤中分离纯微生物
1、涂布平板法（spread plate method)
涂布平板法 稀释倒平板法
2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pour plate method)
3、平板划线法（streak plate method）
分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
连续划线法操作图
连续划线法适用范围： 适用于浓度较小的样品
二、选择培养分离
原理
• 创造适于目的微生物生长条件 • 促使目的微生物快速生长呈优势菌 • 抑制非目的微生物生长 • 从混杂微生物中分离目的微生物
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属
于哪类培养基？
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
1、显微镜直接计数：利用血
球计数板，在显微镜下计算一定容积里样 品中微生物的数量
缺点
第二节 分离特定的微生物并测定 其数量
• 用固体培养基分离、培养
微
• 用液体培养基分离、培养
生 物
• 单孢子分离
分
• 选择培养分离
离 方
• 二元培养物分离、培养
法
要分离微生物，必须根据它的特点，包括营养、生 理、生长条件等，采用选择培养的方法，经过一定 时间的培养后，使这种微生物在群落中的数量不断 增加，在通过平板稀释法等进行纯培养分离
血球计数板的使用以计数酵母菌例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小 方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加 盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻 片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取, 捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.