痢疾杆菌分离与鉴定培训
细菌性痢疾医学
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依据抗原结构不同，分为A、B、C、D四群，即痢疾、福氏、鲍氏及宋内志痢疾杆菌，以及43个血清型。
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【病原学 】
痢疾杆菌对外界环境有一定抵抗力，D群＞B群＞A群。
日光照射30’ 、加热至60℃10’或100℃1分钟杀灭。对酸及一般消毒剂均很敏感。在蔬菜、瓜果及被污染物品上可存活1～2周，但在阴暗、潮湿、冰冻条件下能生长数周，在粪便中存活时间的长短同气温、粪便中杂菌等有关。
3
常规检测：
实验室检查
病原学检查
培养：检出痢疾杆菌即可确疹。应取早期、新鲜、勿与尿液混合、含粘脓血的粪便或肠试，多次送检，可提高检出阳性率。
快速病原学检查：采用免疫的方法检测细菌或抗原具有早期、快速的优点，对菌痢的早期诊断有一定帮助，但由于粪便中抗原成分复杂，易出现假阳性。
实验室检查
STEP3
STEP2
急性中毒型 混合型
混合型：此型最凶险，病死率极高。以上两型同时或先后存在，是最为严重的一种临床类型，病死率极高（90%以上）。该型实质上包括循环系统、呼吸系统及中枢神经系统等多脏器功能损害与衰竭（MOF）。
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病情反复发作或迁延不愈超过2个月以上者称作慢性菌痢。 原因：1.人体因素：营养不良、胃肠道慢性疾病、肠道分泌IgA减少导致的机体抵抗力下降
休克型（周围循环衰竭型）：较常见，以感染性休克为主要表现：①面色苍白，皮肤发花，口唇或甲紫绀；四肢湿冷，②血压下降，脉压差变小＜20mmHg。③脉搏细数，心率快心音弱。④尿少或无尿。⑤出现意识障碍。
急性中毒型 脑型
脑型（呼吸衰竭型）：以中枢神经系统为主要临床表现，由于脑血管痉挛导致脑缺氧、脑水肿甚至脑疝。
细菌性痢疾 （ bacillary dysentery） 潘延凤
痢疾杆菌的生物危害评估
痢疾杆菌的生物危害评估概述细菌性痢疾(简称菌痢)是由志贺氏菌引起的一种急性肠道传染病，主要临床表现为全身中毒症状、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便、黏液便等。
全球每年志贺氏菌感染人次估计为1.65亿。
发达国家发病率约为1.8-6.5/10万。
我国目前菌痢的发病率仍显著高于发达国家，2003年的监测数据显示菌痢全国发病率39.4／10万。
细菌性痢疾在我省分布极为广泛，历年来其发病率居各种法定传染病前列。
1979年发病率最高达到1601.10/10万，1983年后发病率逐年下降。
2002、2003年发病率分别为40.16/10万、47.07/10万。
病死率从1951年以来明显下降，到1967年以后一直稳定在0.19%以下，2002、2003年病死率分别为0.08%、0.12%。
我省细菌性痢疾发病以农民、学生和散居儿童为主。
1.病原微生物1.1 分类与生物学特性志贺菌属（Shigella）又称痢疾杆菌，为革兰氏染色阴性的兼性厌氧菌，无鞭毛及荚膜，不形成芽胞，无鞭毛、不具动力。
在普通培养基中生长良好，分解葡萄糖，产酸不产气。
大多数志贺菌不分解乳糖，但宋内志贺菌能迟缓发酵乳糖。
根据生化反应与抗原结构的不同，志贺菌分为4群。
A群为志贺氏菌群，有12个血清型；B群为福氏菌群，有16个血清型；C群为鲍氏菌群，有18个血清型；D型为宋内氏菌群，仅有1个血清型。
各群痢疾杆菌在菌体裂解时均释放出内毒素，但产生外毒素的能力各种群差异很大，其中以志贺氏痢疾杆菌产生外毒素的能力最强，故临床症状较为严重。
1.2病原微生物的来源痢疾杆菌主要随病人及带菌者的粪便排出体外，污染食物、水、生活用品或手,经消化道使人感染。
痢疾杆菌亦可通过苍蝇污染食物而传播。
1.3病原微生物在外界的抵抗力志贺氏菌的最适宜的生长温度为37℃，不耐热及干燥，阳光直射即有杀灭作用，加热60℃10分钟即死亡；但耐寒能力强，在阴暗潮湿及冰冻环境下能生存数周，在蔬菜、瓜果、腌菜中能生存1～2周。
;伤寒杆菌;痢疾杆菌
[结果]
大肠杆菌为阳性 伤寒杆菌为阴性
阴性
阳性
2.甲基红试验
葡萄糖 丙酮酸
大量混合酸
乙酰甲基甲醇（中性）
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红 大肠杆菌pH＞5.4甲基红源自剂培养基橘黄色产气杆菌
[方法]
在大肠杆菌和产气杆菌培养物中滴加甲基红指示剂 数滴，立即观察结果。
阳性
阴性
[结果]
甲
基
红 试
验
红色为阳性，+
大肠杆菌：— 产气杆菌：+
无红色为阴性，-
4. 枸橼酸盐利用试验
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH上升
溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
产气杆菌
[结果]
深蓝色为阳性+
绿色为阴性-
枸 橼 酸 利 用 试 验
大肠杆菌：— 产气杆菌：+
（三）硫化氢产生试验
[原理]
某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨 酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的 铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。
底0.5cm处，原路退出。 接种环挑取单个菌落，自斜面底部向上划一直线，然后
再从斜面底部向上轻轻来回作蜿蜒划线。 培养18-24小时，观察结果并分析。
注意：1. 应在菌落稀疏部位挑取单个菌落。 2. 穿刺和斜面接种原则上应为同一个菌落。 3. 不同的小组可以选择不同颜色的菌落来接种。
双糖铁培养基上各菌的生长特点
3.内毒素的检测（2人/组，2支鲎试剂，共38支鲎试剂/室）
实验三
一、内毒素的检测 二、药敏试验 三、肠道杆菌的鉴定
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
细菌性痢疾实训总结报告
一、引言细菌性痢疾（Bacillary dysentery）是一种常见的肠道传染病，由志贺菌属细菌引起，主要通过粪-口途径传播。
为了提高我们对细菌性痢疾的认识和防治能力，我们组织了一次细菌性痢疾实训活动。
本次实训旨在了解细菌性痢疾的病原学、流行病学、临床表现、诊断及防治措施，现将实训总结如下。
二、实训内容1. 病原学实训中，我们学习了志贺菌属细菌的分类、生物学特性、致病机制等。
志贺菌属细菌分为A、B、C、D四群，其中A群、B群、C群主要引起人类感染，D群主要引起动物感染。
志贺菌属细菌具有侵袭力、毒素、菌毛等致病因素，通过破坏肠道黏膜屏障，引起炎症反应。
2. 流行病学细菌性痢疾的流行病学特征包括：传染源、传播途径、易感人群。
传染源主要是患者和带菌者，主要通过粪-口途径传播，如饮用污染的水、食用未洗净的蔬菜水果等。
易感人群包括儿童、老年人、免疫力低下者等。
3. 临床表现细菌性痢疾的临床表现包括：发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便等。
重症患者可出现中毒性休克、呼吸衰竭等严重并发症。
4. 诊断细菌性痢疾的诊断主要依据临床表现、流行病学史和实验室检查。
实验室检查包括粪便常规、粪便培养、血清学检测等。
5. 防治措施细菌性痢疾的防治措施包括：控制传染源、切断传播途径、保护易感人群。
（1）控制传染源：对疑似患者和确诊病例实行隔离治疗，加强粪便管理，对污染的物品进行消毒。
（2）切断传播途径：加强饮用水、食品卫生管理，普及卫生知识，提高个人卫生习惯。
（3）保护易感人群：加强免疫力低下者的防护，开展疫苗接种。
三、实训收获1. 提高了我们对细菌性痢疾的认识，了解了其病原学、流行病学、临床表现、诊断及防治措施。
2. 学会了细菌性痢疾的实验室检测技术，如粪便常规、粪便培养等。
3. 增强了团队合作意识，提高了应对突发公共卫生事件的能力。
4. 培养了严谨求实的科学态度，为今后的工作打下了坚实基础。
四、实训不足与建议1. 实训过程中，部分同学对细菌性痢疾的病原学、流行病学知识掌握不够扎实，建议在今后的实训中加强理论知识的讲解和复习。
细菌性痢疾专题知识讲座
（3）对症治疗： A、高热：退热药及物理降温 B、腹痛：阿托品、654-2 C、毒血症严重者：小剂量激素
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2.中毒性菌痢：综合治疗
（1）一般治疗：①亲密监测生命体征 ②做好护理工作
（2）病原治疗：选择敏感抗菌药物 可联合用药，静脉给药可选环丙沙星、 左旋氧氟沙星或头孢菌素
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（3）对症治疗
变化
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六、实 验 室 检 查
（laboratory examination ）
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1、血常规： 急性期: WBC↑ 中性粒C↑ 慢性期：贫血
2、粪便检验： （1）外观、镜检：粘液脓血便，常无粪质。
镜检可见较多红细胞和成堆旳白细胞， 少许吞噬细胞。 （2）病原学检验：提升细菌阳性培养率旳措施： A、尽量在应用抗生素前 B、标本新鲜及取脓血部分 C、早期及时、屡次送检
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九、治 疗
（treatment）
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1、急性菌痢
（1）一般治疗： –卧床休息、消化道隔离至临床症状消失， 粪便培养2次阴性 –易消化、高热量、高维生素饮食 –退热、止痉、口服含盐米汤或予以口 服补液盐（ORS）或静脉补液
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（2）病原治疗：一般疗程不短于5-7天 A、喹诺酮类：首选，诺氟沙星口服 a、优点：敏感，口服吸收好 b、缺陷：胃肠道症状，影响骨骺发育 c、用量：200—400mg/次，3-4次/日 B、复方磺胺甲恶唑（SMZ+TMP） a、优点：敏感，口服吸收好 b、缺陷：过敏、血象克制，肝肾损害 c、用量：2片/次，2次/日 C、其他：甲硝唑、庆大霉素、阿米卡星 阿奇霉素及头孢菌素类等。
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3、免疫学检验：免疫荧光微菌落法, 新型乳胶凝集试验。
特点:早期、迅速,易出现假阳性 4、核酸检测：合用于细菌培养阴性 旳病人，分子杂交、PCR法等,敏感性高, 特异性强,但检测条件要求高,未广泛 应用。 5、结肠镜检验 6、X线钡剂灌肠检验
粪便中病原菌的分离培养与鉴定
粪便中病原菌的分离培养与鉴定[摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。
此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。
方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。
可鉴定粪便标本中的病原菌。
[关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定1.实验材料与仪器1.1标本：粪便标本1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。
1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。
2.实验过程2.1细菌的分离与培养细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。
无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。
于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。
2.2细菌群体生长特征的观察观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。
粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。
紫黑色菌落具有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。
淡粉红色菌落，半透明，直径1～2mm。
2.3细菌纯培养粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。
分别挑选这两种菌落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。
2.3.1斜面接种法选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。
细菌性痢疾
发病机理3
中毒性菌痢 全身中毒症状与肠道病变程度不一 致，虽有毒血症症状，但肠道炎症反应 极轻。除痢疾杆菌内毒素作用外，可能 与某些儿童具特异体质，对细菌毒素呈 现强烈反应，引致微血管痉挛、缺血和 缺氧，导致DIC、重要脏器功能衰竭、 脑水肿和脑疝。
病理改变
急性期的病理变化为弥漫性纤维 蛋白渗出性炎症，肠粘膜弥漫性充血、 水肿，分泌大量渗出物，间有微小脓 肿。坏死组织脱落形成溃疡，溃疡深 浅不一，但限于粘膜下层，故肠穿孔 和肠出血少见。发病后约1周，人体 产生抗体，溃疡渐愈合。毒素也可引 起内脏病变，表现在肝、肾小管、心 肌、脑细胞变性。
dysentery），是痢疾杆菌引起的
常见急性肠道传染病，以结肠化脓
性炎症为主要病变，有全身中毒症 状、腹痛、腹泻、里急后重、排脓 血便等临床表现。
一、病原学
痢疾杆菌是革兰氏阴性菌，不具 动力，在普通培养基中生长良好，最 适宜温度为37℃，在水果、蔬菜及腌 菜中能生存10日左右；在牛奶中可生 存24日之久；在阴暗潮湿及冰冻条件 下生存数周。阳光直射有杀灭作用， 加热60℃10分钟即死，一般消毒剂能 将其杀灭。
毒素和分群
志贺氏菌属有菌体抗原O及表面抗原K， 有其群与型的特异性，痢疾杆菌可分为4群： ①A群：包括志贺氏菌及其血清型1～15； ②B群：包括福氏菌及其血清型：1a～c、 2a～b、3a～c、4a～c、x、y等； ③C群：包括鲍氏菌及其血清型1～18； ④D群：宋内氏菌属。 目前以福氏和宋内氏菌占优势，某些地区 仍有志贺氏菌群流行。
七、 诊断和鉴别诊断
（一） 诊断 1、流行病学资料 2、临床特点 3、化验结果 （二） 鉴别 1、急性应与霍乱、伤寒、急性肠炎、食 物中毒等鉴别； 2、 慢性应与结肠炎、肠癌等鉴别。 3、 中毒菌痢应与乙型脑炎鉴别。
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痢疾杆菌的分离与鉴定濮阳市疾病预防控制中心许银怀第一节概述志贺菌属（Shigellae）细菌又称痢疾杆菌，引起人类及灵长类动物细菌性痢疾。
1899年由日本人志贺首先发现。
全球每年感染人次约为1.65亿，死亡110万，发病率、死亡率居感染性腹泻之首位。
发展中国家发病率较高，如阿根廷990.6／10万、印度972.3／10万；发达国家相对较低，如美国6～12／10万、德国2.7／10万、法国0.3／10万；我国上世纪50～80年代发病率在46.37～1018.93／10万之间。
近20年痢疾发病率在法定传染病中由第一位降至第三位，但在卫生状况不良的地区，发病率仍居高不下。
人群对细菌性痢疾普遍易感，各年龄组均可受到感染，5岁以下儿童发病率最高。
据估计，在临床就诊的腹泻病人中的5%～15%是志贺菌引起的，而因腹泻死亡病例中有75%是志贺菌感染造成的。
发展中国家福氏志贺菌最常见，发达国家以宋内志贺菌为主。
美国宋内志贺菌>75%，但在男-男性行为人群仍以福氏志贺菌常见。
鲍氏志贺菌最先在印度发现，除印度次大陆地区较为常见外，其它地区较为少见。
细菌性痢疾发病有明显的季节性，发病高峰为夏秋季，通常在7～9月份。
细菌性痢疾防治仍需探索、研究内容：细菌性痢疾在不同地区、不同人群的发病强度、分布特征、病原学特点缺乏全面、准确的数据；缺乏快速、简便的病原学诊断方法，细菌性痢疾漏诊和误诊现象普遍；志贺菌耐药性谱的不断扩大，细菌性痢疾抗菌治疗难度加大；洗手、母乳喂养、安全饮水、粪便无害化处理等行之有效的干预措施的落实需要强化；目前所用痢疾菌苗免疫保护效果仍需进一步评价。
第二节病原学一、抗原分类志贺菌属细菌有菌体（O）抗原，某些新分离菌株有表面（K）抗原。
(一) 菌体（O）抗原1.型特异性抗原：多糖，光滑型菌株主要抗原；分A、B、C、D 4个群及35个抗原型。
2.群特异性抗原：光滑型菌株次要抗原，主要存在于B群，籍此将菌型分为多种亚型。
(二)表面(K)抗原常在新分离的A、C、D群各血清型及B群的2a型、6型细菌中出现。
K抗原存在时，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集；需经100℃30分钟加热破坏后露出菌体抗原，与相应的免疫血清发生凝集。
二、血清分群(一)A群(志贺痢疾杆菌):有12个血清型;具有K抗原菌株可阻碍O抗原的凝集;在我国常见的为2型(又称司密斯杆菌)，1型较少见，其余各型更为罕见。
(二)B群（福氏痢疾杆菌）具有型、群抗原；型抗原存在于同型菌株中；群抗原有多种，存在于B群各菌型中。
近年1C（I:7）、2b（Ⅱ:3,4;7）、3c（Ⅲ:6）、4c（Ⅳ:7,8）及4型（Ⅳ:-）等新型菌株出现。
目前有6个血清型，（14个亚型及2个变种)。
(三)C群(鲍氏痢疾杆菌):18个血清型。
(四)D群(宋内痢疾杆菌):仅一个血清型(Ⅰ、Ⅱ相);Ⅰ相(光滑型菌落)多从急性期感染病人标本中分离;Ⅱ相亦称R型(粗糙型菌落)常从慢性患者或带菌者检出。
三、属间抗原关系志贺菌属与埃希菌属的O抗原关系非常密切，有近半数的菌型与大肠埃希氏菌的某些O抗原完全相同；相同抗原菌属间存在血清交叉凝集反应。
表1 志贺菌属与大肠埃希菌的O抗原关系四、菌群分布与变迁菌群分布与变迁因国家、地区、年份不同而异。
40年代前A群是优势流行菌,60年代初几乎销声匿迹，但1969-1970年突然在中美地区暴发，1972-1978年又在南亚的孟加拉国连年发生流行，继之印度、斯里兰卡、马尔代夫、尼泊尔、不丹、缅甸、泰国等地区和国家受到侵袭。
D群从60年代起在许多工业发达国家跃居首位。
国内过去流行菌型为2a为主;近年来4、4c、5b、1a等菌型呈上升趋势；城市D群为上升态势。
我国个别地区发现A1型和C18型局部暴发流行。
五、溶原性噬菌体对相应的细菌具有特异性裂解作用,温和噬菌体DNA侵入宿主细胞后，整合于宿主细胞的染色体DNA上，称为前噬菌体；前噬菌体与宿主细胞的染色体同时复制，这个过程称为溶原化；被感染的细菌称为溶原性细菌。
溶原性细菌对于相同的噬菌体具有免疫力，并获得一些新的性状，称为溶原性转换。
该转换可导致福氏志贺菌型抗原和群抗原发生广泛的变异。
六、变异性(一) S-R变异志贺菌属菌落可由光滑型变异成为粗糙型(S-R变异)，并常伴有生化反应、抗原构造和致病性的变异。
在慢性痢疾病人或恢复期病人体内，菌株可变异成为不典型菌株。
部分变异菌株可通过10％的胆汁肉汤培养发生返祖，成为典型菌株。
因而在分离这类细菌时注意要反复多次地检查。
(二) 抗原变异(溶原性转换)根据溶原性转换变种和细胞壁多糖免疫化学分析,福氏志贺菌除6型菌外其它型、亚型以及变种都是由一个种所产生的许多溶原性的变种。
y变种是非溶原性的前体型，当被六种不同的噬菌体溶原化后，可以变为各型福氏菌的a亚型或x变种，这是第一次溶原化；一次溶原化的培养物，还可以发生第二次溶原化，变为各型福氏菌的b亚型。
福氏型特异性抗原Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和群7,8抗原，均以y变种群3,4抗原多糖为前体型，经温和噬菌体溶原性转换而来。
噬菌体(Φ)7,8溶原化的结果是使群7,8抗原变为x变种，同时群3,4抗原成为隐蔽状态；前体型经ΦⅡ、ΦⅤ、ΦⅠ、ΦⅣ溶原化结果，则是相应型抗原的产生，分别变为2a、5a、1a、4a等型。
其中x变种、2a型和5a 型还可以经第二次的溶原化，变为2b型和5b型。
群6抗原是群4抗原乙酰化（ΦⅢ,6溶原性转换）所致；型Ⅲ抗原为群3,4复合抗原乙酰化的结果。
福氏1a型和4a型的群4抗原乙酰化后出现群6抗原，变为1b型和4b型，但此时型Ⅲ抗原成为隐蔽状态,仅当型抗原Ⅰ、Ⅳ消失时显现。
宋内志贺菌Ⅰ相抗原受控于一个140Mda大质粒，若质粒丢失，Ⅰ相抗原不能合成，菌则从Ⅰ相转变为Ⅱ相。
(三) 毒力变异志贺菌的2型肠毒素（ShET-2）、粘附性、侵袭力、胞内繁殖、细胞间扩散等活性编码基因均存在于一个140Mda的质粒上，其表达受染色体上多个基因的调控。
该调控基因的变异或大质粒的丢失，均可造成毒菌株的毒力减弱或消失。
七、致病性(一)侵袭力：菌毛-有利于菌粘附至肠粘膜(二)毒素：↗通透性增加内毒素→局部→作用于肠壁↘↘粘膜炎症、溃疡全身→内毒素血症外毒素（A群1型）→与内毒素协同作用↘加重局部和全身症状 志贺菌具有抗酸性，能顺利通过胃酸屏障进入肠道，侵袭于结肠粘膜上皮细胞，引起炎症反应。
有研究表明最小感染剂量为10个CFU。
产生的SHET1肠毒素是染色体编码毒素，主要见于福氏志贺菌；SHET2是质粒编码毒素，志贺菌和侵袭性大肠杆菌均能产生。
痢疾志贺菌可产生志贺毒素（ST），为染色体编码，由1个A亚单位和5个B亚单位构成，具有肠毒性、细胞毒性和神经毒性。
第三节实验室分离一、标本的采集和运送(一) 标本的采集腹泻病人粪便标本：监测点人员发现疑似病人和腹泻病人后，立即发给病人洁净塑料袋，要求其接取自然排出的可疑粪便部分立即送检；婴幼、儿童则让其父母协助其坐排于罩有干净塑料袋的痰盂内(要求勿混入尿液)。
用2个棉拭子分别在大便中可疑部分多点蘸取并旋转棉拭子使全部蘸满大便（约1-2克）。
将绵拭子插入装有Cary-Blair运送培养基的采样管中(注意培养基应埋住粪便拭子)，手接触的棉签尾部在管口处折断丢弃。
编号后将采样管置4℃冰箱或冷藏包中保存。
认真填写腹泻病人粪便采样表。
监测点/村医需配备和更换的监测材料:腹泻病人粪便采样登记表。
消毒棉签。
装有Cary-Blair运送培养基的采样管(4℃保存可备用半年)。
采便塑料袋。
冷藏包(应每日更换冰排) 。
(二) 标本的运送采集标本后应立即通知监测点运送标本人员，或每天分中午、下午两次送交实验室。
如当天晚上采集，最长保存时间最好是48小时内。
二、实验室分离技术(一)选择分离培养基直接划线分离于麦康凯（MAC）及木糖赖氨酸去氧胆酸钠(XLD)，也可选志贺-沙门菌琼脂(SS) 、去氧胆酸钠硫化氢乳糖琼脂(DHL)、去氧胆酸钠柠檬酸盐琼脂(DCA)或海克顿肠道琼脂(HE)。
但慎用SS，其可抑制志贺菌1型生长常造成漏检。
表2.志贺菌及大肠菌在选择培养基上菌落生长特征木糖赖氨酸去氧胆酸钠琼脂（XLD)：木糖；赖氨酸5g；乳糖7.5g；蔗糖7.5g；去氧胆酸钠2.5g；硫代硫酸钠6.8g；柠檬酸铁铵；酚红。
去氧胆酸钠柠檬酸盐琼脂（DCA）:乳糖10g；去氧胆酸钠1g；柠檬酸铁1g；中性红0.03g。
(二)病原分离用接种环多点沾取粪便标本中可疑部分,或用采样拭子涂种，直接划线分离选择琼脂平板各一块（见示意图4）；36℃培养18～24小时。
如无菌生长或接种过密应重新分离平板（可取菌苔处）（合格的分离平板菌落数>150个）。
图4 采样拭子接种平板及划线分离方法示意图(三) 菌落生长特性志贺菌属是需氧或兼性厌氧杆菌。
经37℃培养18～24小时，形成圆形、稍凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、无色、半透明、直径约2mm的较小菌落；相对宋内菌的生长菌落较大、扁平，较不透明，易出现粗糙型菌落。
志贺痢疾杆菌1型的营养需求比较高，必须补给15种氨基酸方能生长。
(四) 生化初筛1.可疑菌落的观察和挑选：许多细菌在选择性培养基上被抑制，既不发育也未死亡，有的能长出肉眼看不见的小菌落。
因而在观察、挑取可疑菌落时应用接种针挑取菌落中心，避免接触培养基表面以造成污染。
2.接种生化反应管：从选择培养平板上挑取可疑菌落3-5个，用接种针挑取菌落中心，分别接种KIA和MIU；先接种KIA(将接种针在其斜面上划直线，随之插入底层,取出后再在斜面上划密集的横线)，不经火焰直接穿刺接种MIU培养基；置36℃±1℃培养16～20小时后观察结果。
3.生化反应鉴别：KIA：斜面－黄(分解乳糖产酸)／红(不分解乳糖)；底部－红(产碱,非发酵菌)／黄(分解葡萄糖或乳糖)／产气／产H2S； MIU：动力(M)－沿接种线周围向外扩散生长呈现混浊者为阳性(用未接种MIU管对比观察)。
吲哚(I)－培养基变红为阳性。
尿素(U)－加0.5mlKovac’s试剂，数分钟内表层试剂变深红色为阳性。
表3.用克氏双糖(KIA) 和动力-吲哚-尿素(MIU)生化反应初步鉴别痢疾志贺菌与其它肠道菌4.注意事项：KIA管最好用棉花塞,若用螺旋帽或硅胶塞，将盖子拧松一些,使有足够的氧气促进反应;MIU需用橡皮胶塞盖紧，因尿素酶反应需避开氧气。
经4～6小时培养可先观察MIU管尿素酶反应，若为红色多为变形杆菌；再经36±1℃过夜培养后观察反应结果。
当KIA出现A／A反应时，应检查KIA管是否塞得过紧，若太紧应将塞子松一下后，放2-3小时再观察一次。
初筛中KIA底层不产气不一定分解葡萄糖不产气，应用带倒管的单糖管复核。
KIA斜面不产酸不一定是乳糖阴性，应用单糖管观察14天才能确定阴性或迟发酵。