巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程

血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程

1、检测目的

规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。

2、检测方法

采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IgM抗体。

3、检测原理

采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体（HCMV-IgM），微孔中预包被鼠抗人-IgM（u链），首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份（包括特异的IgG抗体）将被洗涤除去；第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。

4、实验条件

（1）实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。

（2）检验人员应经过操作前培训。

（3）用酶标仪测定。

5、操作程序

（1）样本采集。无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4℃保存，必要时，-20℃冻存。

（2）操作步骤。参照试剂盒说明书进行操作。一肌步骤如下：①取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。②37℃温育30分钟；弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。③每孔加酶标记抗体100ul，37℃，30分钟。洗板同上。④加酶

底物／色原溶液(OPD／TMB)，每孔100ul37℃，15分钟。⑤加终止液(2mo1／L H

2SO

)，

每孔50ul。于酶标仪上读取吸光度(A)值。

(3)结果判定：①阴性对照平均A值必须小于0 .2；弱阳性对照平均A值在0 .20～0 .65；弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。符合以上3个条件，

本次试验结果可信，否则必须重复检测。②若待测血清孔呈色较弱阳性对照孔深则判为阳性，反之为阴性。但在弱阳性对照A值±10％范围内应复测一次，如确实高于弱阳性对照则判为阳性。

6、参考区间

正常人血清抗巨细胞病毒抗体IgM为阴性。

7、质量控制

(1)不同试剂盒所用抗原可能存在差异，检测敏感性也有差别，应参照阳性、阴性对照设定cutoff(co)值。

(2)试剂盒自冰箱取出后应恢复至室温(18～25℃)后再开封使用。

(3)不同厂家、不同批号试剂不可混用，不得使用过期试剂。

(4)溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。

(5)洗涤微孔板时应彻底，孔内残留液体应在吸水纸上拍干，否则会影响测试结果。

(6)检验人员应经过操作前培训，熟悉判读结果；所使用加样器，酶标仪设备应定期进行校正，以确保实验数据的稳定。

8、临床意义

(1)巨细胞病毒(CMV)是人类病毒性感染的常见病原体之一。CMV感染可引起多种传染性疾病，特别是围产期孕妇感染是引起胎儿宫内发育迟缓、发育畸形的主要原因，可影响神经系统发育及导致智力障碍。

(2)血清中抗HcMY-IgM抗体阳性有助于对急性或活动性HcMV感染的诊断，脐带血查出抗HcMV—lgM抗体说明胎儿宫内感染。

(3)抗HcMV—IgG抗体阳性对诊断既往感染和流行病学调查有意义，若间隔3周后抽取血清该抗体阳性滴度升高4倍以上(双份血清进行对比)，则对判断HCMV近期复发感染有意义。

(4)由于技术上的原因和生物学上的交叉反应，对阳性结果的意义应结合临床综合分析，尤其是孕妇，不应仅将抗HcMV—IgM抗体阳性作为终止妊娠的依据。

抗血清制备及抗体效价测定

摘要............................................................................. .. (4) 【实验过程】 (5) PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5) 一、实验原理 (5) 二、实验仪器、材料和试剂 (7) 1. 仪器 (7) 2. 材料 (7) 3. 试剂 (7) 三、方法和步骤 (7) （一）NDV 兔抗血清制备 (7) 1. 家兔捉拿方法 (7) 2. 家兔固定方法 (8) 3. 初次免疫 (9) 4. 二次免疫 (10) 5. 终末免疫 (10) 6. 试血 (10) 7. 颈动脉放血 (10) 8. 血清分离 (12)

9. 抗血清保存 (12) （二）NDV 鼠抗血清制备 (12) 1. 小白鼠的捉拿和固定 (12) 2. 初次免疫 (13) 3. 二次免疫 (15) 4. 终末免疫 (15) 5. 试血 (16) 6．放血 (18) 7．血清分离 (19) 8．抗血清保存 (19) Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19) 一、基本原理 (19) 二、实验仪器、材料和试剂 (20) 1. 仪器 (20) 2. 材料 (20) 3. 试剂 (20) 三、方法和步骤 (20) 1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20 2. 1%琼脂糖配制 (20) 3. 倒平板 (21) 4. 打孔 (21) 5. 稀释抗血清 (22)

6. 加样 (22) 7. 孵育 (23) 8. 结果观察 (23) Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23) 一、基本原理 (23) 二、实验仪器、材料和试剂 (24) 1. 仪器 (24) 2. 材料 (24) 3. 试剂 (24) 三、方法和步骤 (25) 1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25 2、抗原包被 (25) 3. 封闭 (25) 4. 洗板 (25) 5. 稀释抗血清 (25) 6. 加抗血清 (26) 7. 洗板 (26) 8. 加酶标二抗 (26) 9. 洗板 (27) 10. 显色 (27) 11. 终止 (27) 12. 读数 (27)

Q_HBY QF0001-2016抗体检验标准操作规程

Q/HBY 抗体检验标准操作规程杭州博茵生物技术有限公司发布

前言本规范由杭州博茵生物技术有限公司提出。本规范起草单位:杭州博茵生物技术有限公司。本规范主要起草人：李因来、徐东鑫、陈浙、潘剑用。本规范于2016年7月27日首次发布

编制人陈浙日期2016.07.26部门抗体研发部审核人徐东鑫日期2016.07.27部门质量部批准人潘剑用日期2016.07.27部门抗体研发部发放编号Q/HBY QF0001‐2016生效日期2016.07.27 抗体检验标准操作规程 1.目的对单克隆抗体成品的检验操作做出规定，以保证成品质检结果的准确性。 2.范围适用于下述第6条“合格标准”表格中所列抗体成品的效价测定。 3.职责操作人员依据本规程进行抗体检验。 4.材料与设备、试剂与溶液见下述相关文件。 5.检验方法 5.1外观包装完好，无漏液现象，标签准确。 5.2物理性能自然光下目测，观察产品溶液是否澄清、是否有沉淀或悬浮物。 5.3浓度按QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》测定样品的浓度。 5.4纯度将样品稀释到1mg/ml，按QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》进行检测并作记录。其中，样品缓冲液含DTT或β-巯基乙醇，样品应加热处理，浓缩胶浓度为3%，分离胶浓度为12%，染色方法为考染。 5.5效价按QC-0002《效价检测标准操作规程》进行。

6.合格标准项目产品 M010101M010102 外观包装完好，无漏液现象，标签准确包装完好，无漏液现象，标签准确物理性能无色澄清液体、无沉淀、无悬浮物无色澄清液体、无沉淀、无悬浮物浓度≥3mg/ml，且偏差± 5% ≥3mg/ml，且偏差± 5% 纯度≥95%≥95% 效价 1.28ng/ml 1.28ng/ml 7.相关文件 QC-0002《抗体效价检测标准操作规程》 QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》 QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》 8.相关记录 QF-0001-RE-01《抗体检验报告》 QF-0002-RE-01《抗体效价检测记录》 QC-0003-RE-01《蛋白SDS-PAGE检测记录》 QC-0004-RE-01《抗体浓度测定（A280）记录》

血型抗体效价测定

血型抗体效价测定目的了解血型抗体效价测定的操作方法。原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。标本被检者血清。操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。血型抗体效价测定目的了解血型抗体效价测定的操作方法。原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。标本被检者血清。操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。

风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查.docx

风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项检查内容：包括风疹、弓形虫、巨细胞病毒三项。检查目的：60％～70％的女性都会感染上风疹病毒，一旦感染，特别是妊娠头三个月，会引起流产和胎儿畸形。检查方法：静脉抽血检查时间：孕前三个月检查价格：全套240元左右，医院一般每星期做一次检测。（因各地物价差异，此价格仅供参考）检查对象：所有育龄女性检查内容分析：不同病原体导致的宫内感染对胎儿造成的不良后果也不尽相同。巨细胞病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害单纯疱疹病毒感染对胎儿的危害：可造成多脏器损害。风疹病毒感染对胎儿的危害：可导致先天性风疹综合症，主要表现为耳聋、白内障和先先性心脏病。弓形虫感染对胎儿的危害：多侵害神经系统。诊断方法目前调查孕妇中的感染主要通过病毒抗体水平的检测，如何看懂检测报告单呢？抗体IgG阴性的临床意义：没有感染过这类病毒。或感染过，但没有产生抗体。抗体IgM阴性的临床意义：没有活动性感染，但不排除潜在感染。

抗体IgG阳性的临床意义：表明孕妇既往有过这种病毒感染。或接种过疫苗。抗体IgM阳性的临床意义：表明孕妇近期有这种病毒的活动性感染。一般认为孕妇的活动性感染与胎儿宫内感染有关，约40%的活动性感染容易引起胎儿的宫内感染，所以，孕期检查主要检查孕妇血中的IgM抗体。我国妇女中巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒、人乳头瘤的感染率很高，既往感染率高达90%。据调查，孕妇中各种病原体的活动性感染约在3%~8%，但也有一些IgM 抗体不高的孕妇可能有潜在感染，也可能造成胎儿的宫内感染。经过以上的分析，您可能清楚了，在化验单上，不是一看到有加号（+），就认为会造成胎儿的宫内感染。IgG抗体阳性，仅仅说明既往感染过这种病毒，或许对这种病毒有了免疫力了。IgG抗体阴性，说明孕妇也许没有感染过这种病原体，对其缺乏免疫力，应该接种疫苗，待产生免疫抗体后再怀孕。接种过一些病毒疫苗的妇女，会出现IgG抗体阳性。如接种过风疹疫苗的妇女会出现风疹病毒IgG抗体阳性。接种过乙肝疫苗的妇女会出现乙肝抗体阳性。所以，要分清哪个是保护性抗体，哪个是非保护性抗体。相关链接：孕前检查，你清楚了吗？一般体检代孕前检查？莫儿戏！孕前检查，男人查什么？

巨细胞病毒和巨细胞病毒感染的诊断

巨细胞病毒和巨细胞病毒感染的诊断文章来源： 2006-7-22 11:39:26 巨细胞病毒和巨细胞病毒感染的诊断中华儿科杂志 1999年第7期第37卷专论作者：方峰董永绥单位：430030 武汉，同济医科大学附属同济医院儿科临床病毒研究室巨细胞病毒感染(cytomegalovirus infection)是由人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，CMV)引起［1］，在我国相当普遍，且大多在幼年时期发生。据我们1995年至1997年连续3年对1 678例就诊小儿筛查结果发现，1～3岁组幼儿CMV感染率83.2%，～7岁组83.7%，～14岁组87.3%；成人组高达95%。虽然大多数感染者无明显症状，但在婴儿期和有免疫抑制的个体可引起严重疾病［2］。现在，国内不少单位已开展CMV感染的诊断工作，但存在不少问题。有必要对近年来有关CMV的病毒学研究和怎样正确诊断CMV感染予以介绍。一、有关CMV的病毒学研究进展（一）CMV的结构及其生物学特性［1］： CMV属疱疹病毒科(herpesviridae)，不同毒株间核苷酸序列具有80%以上的同源性，有共同抗原，暂定为一个血清型，因此在临床检测上可以不受毒株型别影响。近年来，国外的病毒学家们对CMV的分子结构作了很多研究，现知完整的病毒颗粒直径约230 nm，内核为CMV DNA；其外为外径约110 nm的二十倍体，称核衣壳(nucleocapsid)，由162个壳粒构成。病毒的最外层为厚约10 nm的膜状囊膜，或称包膜(envelope)，包膜与核衣壳之间为无明显构型的被膜(tegument)，厚约50 nm。CMV基因为线性双股DNA分子，长约230 kb，由长单一序列(U L)和短单一序列(U S)构成。CMV DNA携带大约200个开放读码框(ORFs)。与其他疱疹病毒的表达特性相似，CMV前早期(immediate-early，α)、早期(early，β)和晚期(late，γ)蛋白基因连锁调控，呈时序级联地相继表达。前早期抗原(immediate early antigen，IEA)主要包括IE1(72 000，UL123)和IE2(18 000～86 000，UL122)蛋白，在感染后1小时开始出现在感染细胞核内，这些转录调控蛋白与细胞蛋白相互作用，调节后继病毒基因的表达。早期抗原(early antigen，EA)在感染后3小时出现在感染细胞核和胞浆中，为一组合成子代DNA和蛋白质所需的酶和调控因子，如病毒DNA多聚酶(140 000，UL54)、核DNA结合蛋白(140 000，UL57)和一组核磷蛋白(分子量分别为34 000，43 000，50 000和 84 000，UL112)。另一种核DNA结合磷蛋白(52 000，UL44)在不同启动控制下于感染早期和晚期表达，可促进病毒DNA多聚酶的活性。晚期抗原(late antigen，LA)在感染后6～24小时内表达，为病毒结构蛋白。核衣壳含三种高丰余蛋 1

新生儿溶血病血清学检查标准操作规程

新生儿溶血病血清学检查标准操作规程 (一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。 (二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。 (三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。 (四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系

统使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。 2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。 (六)标本要求 1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。 2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。 (七)校准步骤参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。 ’ (八)操作程序

母体IgG抗体效价检测卡操作规程

孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程 [样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。 [样品准备]：试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存. 红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右. 血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃ 放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有絮状物或沉淀； [配套试剂]：孕妇IgG抗体效价卡，标准A、B、O红细胞（取决于父亲血型）， 0.2M(2-Me)应用液 [实验步骤] 1、试剂卡室温平衡，离心一次，标记编号； 2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和 0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体）既得到孕妇的中和血浆。 3 4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul 5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟； 6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。判定结果。 [结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 [参考值] 1、RH系统抗体效价16有临床意义 2、ABO系统抗体效价64有临床意义 [注意事项] 1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度（根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》） 2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。

抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程操作步骤：一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐

水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。四．五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）

输血相容性检测作业指导书范本

输血相容性检测作业指导书范本目录第一章规章制度第一节临床输血管理委员会一、临床输血管理委员会组成二、临床输血管理委员会工作职责三、临床输血管理委员会工作计划第二节临床用血申请与审批管理一、临床用血计划的拟定二、临床用血申请和审批制度三、临床退血管理第三节临床输血操作步骤及岗位职责一、临床输血操作步骤二、各岗位职责流程图第四节输血科管理制度一、科室工作守则二、临床用血有控制感染的方案及管理制度三、输血反应及输血感染疾病的登记报告与调查处理制度四、消毒隔离及污物处理制度五、工作人员健康体检制度六、考勤制度七、请假制度八、人事考核制度九、奖惩制度十、计算机使用管理制度十一、仪器设备管理制度

十二、值班工作制度十三、临床用血计划申报登记制度十四、配输血查对制度 1 十五、血型鉴定与交叉配血的复查与核对制度十六、血液储存、发放、临床输血和血液报废制度十七、血液质量监测制度十八、仪器设备认购、验收、使用管理、保养、维修及报废制度十九、试剂的认购与入库、领用制度二十、计量管理制度二十一、差错事故登记、报告制度二十二、方便病人配合临床制度二十三、科学合理用血制度二十四、紧急用血制度二十五、输血治疗知情同意制度二十六、各种登记记录管理和保存制度二十七、库房管理制度二十八、档案保管制度二十九、输血不良反应处理和回报制度三十、交接班制度三十一、血液标本的留取接收保存制度三十二、实验室管理制度第五节、岗位职责一、输血科主任岗位职责二、主任、副主任技师岗位职责三、主管技师职责四、输血科技师岗位职责五、输血科技士岗位职责六、临床医师在用血时的职责七、临床护士在用血时的职责第二章仪器、设备使用操作规程

65-人巨细胞病毒核酸检测标准操作程序

人巨细胞病毒核酸定量核酸检测标准操作规程（荧光PCR法） 1.目的规范人巨细胞病毒(HCMV)核酸DNA（荧光PCR法）检测操作流程，准确进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA分析。 2.应用范围使用中山大学达安基因股份有限公司人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒（荧光PCR 法）和PE GeneAmp 5700、ABI Prism 7000、ABI Prism 7700等仪器进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA 检测。 3.职责由PCR实验室制定程序文件，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。4.内容 4.1 实验原理和临床应用本品选取人巨细胞病毒珠（即人疱疹病毒5型）-AD169基因组中编码即刻早期转录调节蛋白的IE1基因的一高度保守的非编码区为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光探针，扩增片段长度为86bp,利用实时荧光定量PCR技术，定量检测尿液、乳汁、血清或淋巴细胞样本中人巨细胞病毒DNA。本品用于器官移植、骨髓移植及HIV阳性/AIDS患者尿液、乳汁、血清或淋巴细胞中的人巨细胞病毒(HCMV)感染的检测，用于人巨细胞病毒感染的辅助诊断和疗效监控，不用于血源筛查。本品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。 4.2标本采集 4.2.1 使用标本类型：尿液、乳汁、血清和淋巴细胞 4.2.2 标本采集；由合作单位按照以下要求进行采集。 4.2.2.1 尿或乳汁：取晨尿或成熟乳1ml于1.5ml的无菌离心管中，离心取沉淀即为标本。标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。 4.2.2.2 血清：用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml,注入无菌1.5mlEppendoff管，4℃静置过夜。吸取上层血清（注意勿带入红细胞）至另一无菌1.5mlEppendoff管中，即为血清标本。标本可立即用于测试（48小时以内），也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。

NDV抗血清制备及抗体效价测定

NDV抗血清制备及抗体效价测定【实验目的】 1. 学习抗血清制备的基本原理，掌握兔和小鼠免疫注射方法、兔颈动脉放血、小鼠眼球采血技术。 2. 学习双向琼脂扩散实验的基本原理，掌握的基本程序和结果判读方法。 3. 学习酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理，掌握间接ELISA的基本程序和结果判读方法。 4. 学习免疫印迹实验的基本原理，掌握免疫印迹记实验的的基本程序和结果判读方法。 PartⅠ. NDV抗血清制备一、实验原理将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。二、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器

弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则

附件2 弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）抗体亲合力检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。本指导原则是对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及IgG抗体亲合力检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、范围弓形虫( Toxoplasma, TOXO ) 、风疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨细胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四种病原体，以缩写形式ToRCH命名。上述四种病原体已引起围

产医学家和优生优育学家的关注，如何应用应基于大量的研究及相关学科的诊疗指南。依免疫球蛋白重链抗原特异性不同，免疫球蛋白可分为G型免疫球蛋白（IgG）、M型免疫球蛋白（IgM）、A型免疫球蛋白（IgA）、E型免疫球蛋白（IgE）和D型免疫球蛋白（IgD）五种类型。ToRCH抗体检测试剂，主要检测的免疫球蛋白为ToRCH特异性IgG和IgM。在病原体感染的初次体液免疫应答中(原发性感染)，特异性IgM抗体首先出现，但存在时间较短，通常为数周到数月。病原体特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的辅助判断。特异性IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且较长时间存在。在感染过程中特异性抗体对抗原亲合力随感染时间的延长而不断升高，检测IgG抗体亲合力，能够较准确地判断感染时间，可作为ToRCH 抗体检测的一种补充，高IgG抗体亲合力可辅助排除近期原发性感染。不同类型的ToRCH特异性抗体检测结果，在ToRCH病原体感染的辅助诊断及免疫状态的评估中，起着重要的指导作用，因此ToRCH特异性抗体检测的准确性至关重要。相关的生产企业必须充分意识到该类产品的潜在风险，根据本指导原则的要求对该类试剂的安全性和有效性进行科学合理的验证。 ToRCH抗体检测试剂是指一类利用免疫学方法，如酶免疫技术和化学发光免疫分析技术等，对人体血清或血浆样本中的ToRCH特异性抗体进行体外定性和/或半定量和/或定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可用于ToRCH感染辅助诊断及免疫状态的评估。IgG抗体亲合力检测试剂是一类对ToRCH特异性IgG抗体阳性的人血清和/或血浆样本中ToRCH特异性IgG亲合力进行体外定性检测的试剂，用于辅助判断感染时间，排除近期原发性感染。本类试剂尚不用作产前筛查。本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。

巨细胞病毒感染诊疗指南

巨细胞病毒感染诊疗指南【概述】巨细胞病毒感染(cytomegalovirus infection，CMV)是由人巨细胞病毒引起的先天性或后天获得性感染，人群普遍易感。主要通过母婴及水平传播。本病基本病理特征为受染的细胞体积增大，胞核和胞浆内出现包涵体。大多数感染者没有症状或亚临床表现。但在先天感染、免疫缺陷、器官和骨髓移植患儿中可引起严重感染，甚至危及生命。【病史要点】 1．流行病学资料询问母亲在妊娠期间有无CMV原发感染或再发感染。有无输血和输血液制品病史。有无器官和骨髓移植病史。有无免疫缺陷病史。 2．临床表现 1)先天性感染①肝炎表现：有无黄疸，出现时间、程度、进展与否，有无白陶土粪便。有无鼻衄、皮肤、注射部位出血倾向(警惕肝功能衰竭)。是否伴食欲减退、腹泻、呕吐等症状。②肺炎表现：有无咳嗽、呛奶、呼吸困难、气急、青紫、伴或不伴发热(先天感染多伴有严重肺炎)。抗生素治疗后有无好转。③神经系统症状：有无小头畸形、智力低下、视力障碍、脑瘫、抽搐及神经性耳聋(主要见于先天感染)。 2)获得性感染①婴儿感染：重点询问黄疸及其程度，

有无肝功能异常。有无咳嗽、气急、青紫(该年龄段可以并发肺炎)。②儿童期感染：重点询问有无发热、皮疹、伴有黄疸或无黄疸，肝功能有无异常(多数感染CMV后没有症状)。③免疫缺陷者感染(包括原发性免疫缺陷、艾滋病、器官及骨髓移植)：重点询问有无肺炎、肝炎、脑炎、视网膜炎、胃溃疡、糖尿病等多器官受累相应临床表现。【体检要点】 1．体检皮肤巩膜有无黄疸，程度(轻、中、重)，有无肝脾肿大，肿大程度、质地、边缘，有无腹部膨隆，腹壁静脉怒张，有无移动性浊音，是否伴有皮肤的出血点、浅表淋巴结肿大、浮肿。 2．体检智力发育及体格发育有无落后，有无小头畸形、视力减退、听力损害等。 3．注意有无气急、紫绀、呼吸困难、肺部啰音。【辅助检查】 1．病毒分离或巨细胞包涵体的检测病毒分离或巨细胞包涵体的检测的传统方法是从血、尿、唾液、脐血等受检标本中培养出病毒，若呈阳性即可确诊。但阳性率和敏感性很低，且耗时长达1个月以上，临床已很少应用。 2．巨细胞病毒抗原检测应用单克隆抗体与特异性抗原结合的原理，借免疫组化手段测受检材料中的CMV抗原。目前最常用的抗原为PP56，该抗原为病毒活动性感染早期标

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。【试剂】 6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡【标本采集】孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。【操作步骤】 1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul； 4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本； 5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）； 6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟； 7．取出判定结果；【结果判定】阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中；阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。【注意事项】 1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。 2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。【临床意义】有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。

PCR HPV-DNA荧光定量检测标准操作程序

进行巨细胞病毒核酸定量的检测。 2.适用范围： 2.1适用于进行高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测的检验人员。 2.2适合仪器：LightCycler480型核酸扩增荧光检测仪 2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术 2.4样品要求：宫颈脱落细胞 3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。 4.试剂来源：潮州凯普生物化学有限公司高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测试剂盒。 5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒 6.标准操作： 6.1 试剂准备（在试剂准备区操作） 6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（临用前取出，用后立即放回冰箱，反复冻融不可超过三次），取出PCR MIX,室温下避光解冻，上下颠倒混匀后，8000转/分钟10s从试剂盒中取出DVA聚合酶，8000转/分钟lOs。 6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂（1管=1 7.5ulPCR MIX +0.5ul DVA 聚合酶）总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n (n=标本数+1空白管对照+1管阳性对照) 取PCR反应管转移至样本制备区。 6.2样本处理(在样本处理区进行) 6.2.1.取宫颈脱落细胞样本0. 5ml~1ml(如果细胞数量少可以加大体积到2m1) 6.2.2. 13000转/分钟离心1分钟 6.2.3.弃上清，加入0.5m1细胞保存液重悬细胞 6.2.4. 13000转/分钟离心1分钟，尽量弃干净上清 6.2.5.每样本加入50ul细胞裂解液，充分振荡重悬细胞，煮沸10分钟。 6.2.6. 13000转/分钟离心10分钟，保留上清备用(上清中为释放的DNA)。6.2.7取上清2.0ul作为PCR扩增的模板，其余保存于一20℃ 6.2.8在对应的PCR反应管中分别加入2ul处理好的样本DV A,空白对照、阳性对照，盖紧管盖，稍做离心(反应总体积为2o u 1/人份，每次反应需要设置一个阳性对照以及一个空白对照)。转移到检测区，放入相应的荧光PCR检测仪内，记录样本摆放顺序 6.3 PCR扩增（在扩增区操作） 6.3.1打开稳压器电源，再打开计算机电源。 6.3.2 打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。 6.3.3设置四种荧光检测通道的报告荧光、淬灭荧光;Passive Reference选择none(见表1)

禽流感免疫抗体效价检测

龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/759080155.html, 禽流感免疫抗体效价检测作者：何生来源：《湖北畜牧兽医》2013年第07期摘要：为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解乌鲁木齐市米东区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区不同鸡场进行了禽流感抗体检测。结果表明，40只免疫鸡，免疫抗体效价合格数33只，总合格率为82.5%。说明近几年对高致病性禽流感采取的强制免疫措施达到了比较显著的效果。关键词：禽流感；免疫；抗体效价；血凝试验；血凝抑制试验中图分类号：S855 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）07-0029-02 禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病。禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。在世界各种家禽和野生禽类中，按照血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原来区分，已发现了数千种属于许多不同抗原亚型的病毒。各种品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感。该研究为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解本地区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区鸡场进行了禽流感抗体检测，并对不其检测结果进行了对比分析。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验动物 40只鸡由米东区铁厂沟镇大草滩村养禽场提供。 1.1.2 试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清，1%鸡红细胞悬液。 1.1.3 仪器 96孔V型微量反应板、台式离心机，单道、多道微量可调移液器，吸嘴，微量振荡器，加样槽。 1.2 方法 1.2.1 血凝（HA）试验在微量反应板的1～12孔均加入0.025 mL的PBS，换滴头，吸取0.025 mL病毒悬液加入第1孔混匀，从第1孔吸取0.025 mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入第3孔，依次倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025 mL弃之，换滴头，每孔再加入0.025 mL PBS。每孔均加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，充分混匀后加入。在微量振荡器上振荡2 min，在25 ℃恒温箱内静置40 min后观察结果。

医疗机构输血科建设管理规范

医疗机构输血科（血库）建设管理规范（征求意见稿）一、总则第一条为了加强医疗机构临床输血管理，规范输血科（血库）建设，保证临床用血安全，根据《中华人民共和国献血法》、卫生部《医疗机构临床用血管理办法（试行）》及《临床输血技术规范》等有关规定，结合我省实际，制订本规范。第二条输血科（血库）是医院开展输血相关诊疗活动和提供其它输血服务的科室。本规范是医院输血科（血库）建设管理的基本标准，是对医院输血科（血库）检查评价的基本依据。第三条本规范包括医院输血科（血库）科室设置、功能与任务、建筑与设施、人员配置、仪器设备、原辅材料、安全卫生、业务管理、计算机管理和质量管理等。第四条医疗机构应当加强临床输血管理，设立由院领导、业务主管部门、相关科室负责人及专家组成的临床输血管理委员会，贯彻落实临床用血相关法律法规，规范、指导和监督临床用血工作；协调处理临床用血工作中的重大问题；开展临床科学、合理、安全用血的教育和培训。二、科室设置第五条医疗机构开展临床输血业务，应设置输血科、血库或指

定相关科室负责。第六条三级综合医院、年用血量大于5000单位的三级专科医院和二级综合医院应设置独立建制的输血科；未设置输血科的二级及以上医院应设立独立血库；二级以下医院应由检验科负责开展临床输血业务，并参照血库标准进行建设管理。三、功能与任务第七条输血科在医院临床输血管理委员会的领导下，负责医院临床用血管理，指导临床输血技术应用，参与临床输血会诊，配合临床实施输血治疗，开展输血科研与教学。血库在医院临床输血管理委员会的领导下，负责医院临床用血管理，推广临床输血技术应用，参与临床输血会诊。第八条根据临床用血需要，制定用血计划，定期向供血机构申报用血计划，做好血液储存、发放工作。第九条按照卫生部《临床输血技术规范》的要求，为临床输血提供血型鉴定、交叉配血、血清抗体筛选和输血相关实验室诊断。第十条对输血工作实施全面质量管理，加强血液质量控制。第十一条负责临床用血制度执行情况的监督检查，开展临床输血疗效的评估，建立临床输血预警系统。第十二条及时向供血机构反馈血液质量和服务质量等问题。第十三条做好无偿献血、互助献血、临床用血政策的宣传，并配合做好相关事宜。

巨细胞病毒IgG亲和力检测

巨细胞病毒IgG亲和力检测：评估妊娠期感染风险 2011-01-23 09:06:18 作者：佚名来源：网络转载当孕期巨细胞病毒IgM和IgG抗体检测结果同时阳性，临床医生无法判断孕妇感染状态时，可以通过IgG抗体亲和力检测，以明确鉴别感染时期，评估胎儿CMV感染风险。巨细胞病毒（CMV）是一种疱疹病毒，人体感染后，将终身携带CMV病毒。巨细胞病毒在人群中的感染非常广泛，正常成人的免疫系统能产生保护性抗体，在中国约80％人群为巨细胞病毒血清学阳性。CMV通常为隐性感染，少数有临床症状。因此孕妇在孕期感染时，虽然对孕妇本身影响较小，但却会对胎儿产生严重危害。巨细胞病毒可通过先天性宫内感染、性接触感染以及围产期获得性感染等途径引起胎儿流产、死亡或畸形。对巨细胞病毒没有免疫力的孕妇，在孕期，尤其是孕早期的12周内，如果感染了巨细胞病毒感染，会严重影响胎儿的发育，因为这段时间是胎儿神经系统发育和器官形成的主要时期。长久以来，让妇产科医生困惑的是，孕期巨细胞病毒IgM和IgG抗体检测结果同时为阳性时，我们应该怎么做？应该如何评估胎儿感染的风险？在上世纪90年代早期，有一些孕妇，仅仅因为检验结果显示IgM阳性，便终止了妊娠，给孕妇和其家庭造成了伤害。因此，孕期CMV感染的准确诊断和感染分期是产科医生面临的巨大的挑战之一。临床医生需要判断该感染是怀孕之前的既往感染的再次复发还是怀孕后出现的原发感染，如果是前者，则胎儿将有充分的母体免疫作为保护，则危害和风险较低。反之，如果是怀孕时的原发感染，则母体很有可能将病毒传染给胎儿，危害胎儿的正常发育。在巨细胞病毒感染的血清学模式中可以看到，在出现病毒血症后不久，抗CMV IgM和IgG抗体几乎同时出现，IgM抗体在感染后约4至6个月达到峰值，然后抗体滴度开始下降，并最终转变为阴性。而IgG抗体水平则逐步升高达免疫水平。如果多年后再次妊娠，尽管该孕妇对CMV病毒已有保护性，IgG抗体阳性，但也会出现IgM血清学阳性的检测结果。其原因可能是由于妊娠期孕妇的免疫系统受到了抑制，导致CMV病毒的重新复制，出现IgM抗体阳性。而在CMV感染初期，人体免疫反应相对较弱，亲和力，即抗体与病毒的结合力低。随着感染的进程和时间的推移，免疫系统通过B淋巴细胞克隆选择，IgG抗体的与病毒的结合会逐步增强，即 IgG抗体亲和力会随时间升高（见图1）。检测IgG抗体与病毒的的结合强度可以帮助判断感染发生的时间和病程。图1 CMV 感染的血清学模式图因此，当孕期巨细胞病毒IgM和IgG抗体检测结果同时阳性，临床医生无法判断孕妇感染状态时，可以通过IgG抗体亲和力检测，以明确鉴别感染时期，评估胎儿CMV感染风险。在对600名孕妇进行随访检测和科学统计后，澳大利亚威尔士亲王医院Munro教授推荐将CMV IgG抗体亲和力检测列入孕妇巨细胞病毒感染检测的诊断流程中（见图2）。Munro教授建议，孕妇应接受敏感的IgM和IgG抗体检测，如果IgG和 IgM血清学检测均为阴性，则该孕妇没有免疫力，该孕妇需在孕期随访检测，以明确其血清学检测结果是否保持阴性。如果检测结果为IgG阳性/IgM阴性，则该孕妇具有免疫力，无需做进一步检测。如果检测结果为IgG阴性/IgM阳性，则可能为原发感染的早期阶段，或者有可能是因类风湿因子对IgM抗体检测的干扰而导致的假阳性结果。建议患者三周后进行重新抽血化验。三周后，如果IgG检测结果转为阳性，则为原发感染。如果IgG检测结果仍为阴性，则原先的 IgM检测结果为假阳性。而对于IgM和IgG抗体均为阳性的孕妇，需要进行抗体亲和力检测。大部分感染巨细胞病毒的孕妇，约需4个月时间形成高亲和力抗体，如果该孕妇处于妊娠早期，IgG亲和力高，可以判断CMV感染