母体IgG抗体效价检测卡操作规程
抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程
抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。
2.适用范围检验科免疫组工作人员。
3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：规格：164.、Scl-70、IgG5.6.及核糖蛋性率在风湿疾病—多肌炎/7.8.储存条件及有Array效期：2-8°C 保存，不要冷冻。
未开封前，除非特别说明，试剂盒自生产日起可稳定 18 个月。
稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内用完。
9.样本要求样本：人血清或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。
稳定性：待检患者样本于 2-8°C 可稳定 14 天，稀释后的样本应在同一个工作日内检测。
样本稀释：患者样本用样本缓冲液匀。
10.10.12-8°C-- 稀释如：- 酶结合物：10 倍浓缩。
使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液 1:10 稀释。
如需温育一条检测膜条，用 1.35 ml 样本缓冲液稀释 0.15 ml 酶结合物。
已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。
- 样本缓冲液：直接使用。
- 清洗缓冲液：10 倍浓缩。
使用时用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水 1:10 稀释。
如需温育一条膜条，用 9ml 蒸馏水稀释 1ml 浓缩缓冲液。
稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。
- 底物液：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。
10.2操作流程预处理:取出所需的膜条，将其放入温育槽内。
膜条上有编号的一面朝上。
在温育槽中分别加入 1.5ml 样本缓冲液，于室温在摇摆摇床上温育 5 分钟后，吸去温育槽中的液体。
血清温育第一次:在温育槽中分别加入 1.5 ml 已稀释的血清样本，在摇摆摇床上室温（18°C-25°C）温育 30 分钟。
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。
【试剂】6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡【标本采集】孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。
将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。
本文来源于中华检验医学网【操作步骤】1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul；4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本；5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）；6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟；7．取出判定结果；【结果判定】阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中；阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
【注意事项】1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。
2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。
3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。
【临床意义】有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。
抗体效价检测步骤
抗体效价检测步骤抗体效价检测是一种常用的方法，用于评估抗体样品的质量和活性。
该检测可以确定抗体样品中所含抗体的浓度以及其与靶标结合的能力。
以下是抗体效价检测的一般步骤：1. 制备样品和控制组：首先需要准备抗体样品和相应的阳性和阴性对照物。
阳性对照物是对于靶标已知有高亲和力的抗体样品，而阴性对照物则是不包含任何抗体的样品。
2. 稀释样品：将抗体样品进行连续稀释，通常从高浓度开始，以便确定抗体效价的范围。
每一次稀释应按照一定比例进行，如1:2或1:10等。
3. 设置试验板：将稀释好的抗体样品、阳性和阴性对照物，以及含有靶标的试验物添加到试验板中的孔中。
每个样品应设置多个孔，以获得平均效价。
4. 孵育：将试验板置于孵化器中，在适当的温度和时间下进行孵育。
这有助于抗体与靶标结合，并形成固定复合物。
5. 洗脱：将试验板的孔洗脱干净，以去除未结合的抗体。
这可以通过重复洗涤孔中添加和去除缓冲液来实现。
6. 反应：加入检测抗体，这是一种能与固定复合物中的抗原结合的二抗。
检测抗体通常被标记，以便进行可视化。
典型的标记物包括酶，如辣根过氧化物酶（HRP），或荧光染料，如荧光素等。
7. 反应孵育：将试验板放回孵化器中，在合适的温度下进行孵育。
这有助于检测抗体与固定复合物结合，并形成更大的复合物。
8. 洗脱：类似于步骤5，洗涤试验板的孔，以去除未结合的检测抗体。
9. 可视化：根据检测抗体的标记物，对于酶标记的检测抗体可以加入亮色底物，并观察色素的产生。
对于荧光标记的检测抗体，则可以在荧光显微镜下直接观察发光信号。
10. 数据分析：根据样品和对照组的可视化结果，测定抗体效价。
通常使用半最大抗体效价（EC50）来表示抗体效价，即抗体浓度在50%时与靶标结合。
抗体效价检测是一个常见的实验技术，它在抗体研究和生物医学领域有着广泛的应用。
通过正确执行上述步骤，可以准确地确定抗体样品的效价和活性，进一步支持科研和临床应用。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
抗体效价检测步骤
抗体效价检测步骤抗体效价检测是一种测定抗体的浓度及活性的方法，通常用于评估抗体的质量和效能。
以下是抗体效价检测的一般步骤，供您参考。
1. 制备样本：首先，从动物体内或培养物中收集抗体样本。
例如，可以从实验动物体内收集抗体样本，或从培养的细胞上清液中收集抗体样本。
确保样本的收集过程在符合生物安全标准的条件下进行。
2. 稀释样本：抗体样本通常会被稀释，以确保在合适的浓度范围内进行测定。
稀释倍数的选择应根据抗体的预计浓度和检测方法的灵敏度来确定。
3. 样本预处理：根据实验的需要，可能需要对样本进行一些处理。
例如，可以对样本进行加热、酶处理或亲和纯化等步骤。
4. 准备控制组：在进行抗体效价检测之前，还需要准备一些控制组。
这些控制组可以包括阴性对照、阳性对照和参考标准，用于确保检测结果的准确性和可靠性。
5. 测定方法选择：根据实验的需要和可用的设备/试剂，选择适合的抗体效价测定方法。
常见的方法包括ELISA、Western blot、免疫组化等，可根据实验目的选择不同的方法。
6. 进行测定：按照选定的方法操作，将稀释的样本和控制组加入适当的载体（如微孔板）中，与相应的检测试剂反应。
通过适当的信号检测方法，如吸光度测定、荧光测定或放射免疫测定等，测量不同样本的信号强度。
7. 数据分析：使用适当的软件或计算方法，对测定结果进行数据分析。
根据标准曲线、控制组和参考标准的结果，计算样本中抗体的浓度或抗体效价。
8. 结果解释：根据测定结果，对抗体样本的浓度或效价进行解释。
可以根据人体抗体效价的标准范围，判断抗体活性和质量的好坏。
9. 结果验证：为了确保结果的准确性，可以进行结果的验证实验。
例如，可以通过再次测定部分样本或使用其他独立的方法进行验证。
以上是抗体效价检测的一般步骤，实际操作中可能会有些差异，具体步骤可能会根据实验目的、检测方法和设备要求等因素进行调整。
在进行抗体效价检测时，一定要严格按照实验操作规程进行，确保结果的准确性和可靠性。
血型抗体效价测定标准操作规程(sop)
血型抗体效价测定标准操作规程一、目的为规范红细胞血型抗体效价测定的技术操作，保证结果的准确性从而为临床疾病的诊断和治疗做出正确的评估。
二、适用范围输血科负责红细胞血型抗体效价测定的技术人员。
三、原理：将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体效价须先用巯基试剂裂解其中的IgM型抗体）经连续倍比稀释后与表达目标抗体对应的抗原红细胞试剂反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，同时根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
四、步骤和方法（1）盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价1、排试管12支，编号，以第1支试管为原倍进行生理盐水倍比稀释受检血清，第12支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。
2、分别往12支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀。
3、用专用离心机120g离心1min，观察有无溶血和凝集情况。
4、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
（2）IgG类红细胞血型抗体效价测定1、取200微升受检血清加入0.2mol/L二巯基乙醇（2—Me）应用液200微升混匀，将试管口密封，37℃孵育30min。
2、排11支试管，编号，进行生理盐水倍比稀释2—Me处理过的血清。
由于第1支已经进行了稀释，所以第11支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。
3、凝聚胺法检测时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀，按照凝聚胺法操作步骤进行试验。
4、抗球蛋白法测定时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀后置37℃孵育30min后，按照抗球蛋白法操作步骤进行试验。
5、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
（1）评分标准根据稀释血清各管凝集强度进行评分，凝集强度与评分标准为：4+为12分，3+为10分，2+为8分，1+为5分，+/-或W+为2分，阴性为0分，稀释各管评分之和为积分。
母体效价SOP
新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
免疫球蛋白G(IgG)测定标准操作程序SOP文件
定标频率：A试剂批号更换
B由质控结果决定
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-44
免疫球蛋白G（IgG）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共3页
4.3质控物
来源：Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
4.2校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准，CRM470,具体如下：
S1：0.9％的NaCl
S2-6:Preciset Serum protein
批特异的定标液的靶值乘以下列的转换因子，用来计算定标曲线。
S2:0.10
S3:0.25
S4:0.50
S5：1.00
S6:2.00
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
3标本
血清及肝素-Li、Na-肝素或EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20-25℃3个月
4-8℃3个月
-20℃6个月
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定90天
R2：打开后机上稳定90天
准备：直接使用。
IgG是再次免疫应答的主要抗体，具有吞噬调理作用、中和毒素作用、中和病毒作用及激活补体经典途径。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白，并且对胎儿及新生儿有保护作用。婴儿在6个月左右建立免疫系统，在18个月左右达到成人水平。
多克隆IgG水平的升高见于系统性红斑狼疮、慢性肝炎及传染性疾病中。单克隆IgG水平的升高见于骨髓瘤。
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孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程
[样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。
[样品准备]：
试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存.
红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右.
血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃
放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有
絮状物或沉淀；
[配套试剂]：孕妇IgG抗体
效价卡，标准A、B、O红细
胞（取决于父亲血型），
0.2M(2-Me)应用液
[实验步骤]
1、试剂卡室温平衡，
离心一次，标记编
号；
2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和
0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体）
既得到孕妇的中和血浆。
3
4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔
中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul
5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟；
6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。
判定结果。
[结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
[参考值]
1、RH系统抗体效价16有临床意义
2、ABO系统抗体效价64有临床意义
[注意事项]
1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度
（根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》）
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不
得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。