抗体效价测定操作规程
Q_HBY QF0001-2016抗体检验标准操作规程
Q/HBY抗体检验标准操作规程杭州博茵生物技术有限公司发布前 言本规范由杭州博茵生物技术有限公司提出。
本规范起草单位:杭州博茵生物技术有限公司。
本规范主要起草人：李因来、徐东鑫、陈浙、潘剑用。
本规范于2016年7月27日首次发布编制人陈浙日期2016.07.26部门抗体研发部审核人徐东鑫日期2016.07.27部门质量部批准人潘剑用日期2016.07.27部门抗体研发部发放编号Q/HBY QF0001‐2016生效日期2016.07.27抗体检验标准操作规程1.目的对单克隆抗体成品的检验操作做出规定，以保证成品质检结果的准确性。
2.范围适用于下述第6条“合格标准”表格中所列抗体成品的效价测定。
3.职责操作人员依据本规程进行抗体检验。
4.材料与设备、试剂与溶液见下述相关文件。
5.检验方法5.1外观包装完好，无漏液现象，标签准确。
5.2物理性能自然光下目测，观察产品溶液是否澄清、是否有沉淀或悬浮物。
5.3浓度按QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》测定样品的浓度。
5.4纯度将样品稀释到1mg/ml，按QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》进行检测并作记录。
其中，样品缓冲液含DTT或β-巯基乙醇，样品应加热处理，浓缩胶浓度为3%，分离胶浓度为12%，染色方法为考染。
5.5效价按QC-0002《效价检测标准操作规程》进行。
6.合格标准项目产品M010101M010102外观包装完好，无漏液现象，标签准确包装完好，无漏液现象，标签准确物理性能无色澄清液体、无沉淀、无悬浮物无色澄清液体、无沉淀、无悬浮物浓度≥3mg/ml，且偏差±5%≥3mg/ml，且偏差±5%纯度≥95%≥95%效价 1.28ng/ml 1.28ng/ml 7.相关文件QC-0002《抗体效价检测标准操作规程》QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》8.相关记录QF-0001-RE-01《抗体检验报告》QF-0002-RE-01《抗体效价检测记录》QC-0003-RE-01《蛋白SDS-PAGE检测记录》QC-0004-RE-01《抗体浓度测定（A280）记录》。
母体IgG抗体效价检测卡操作规程
孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程[样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。
[样品准备]：试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存.红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右.血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有絮状物或沉淀；[配套试剂]：孕妇IgG抗体效价卡，标准A、B、O红细胞（取决于父亲血型），0.2M(2-Me)应用液[实验步骤]1、试剂卡室温平衡，离心一次，标记编号；2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体）既得到孕妇的中和血浆。
34、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟；6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。
判定结果。
[结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
[参考值]1、RH系统抗体效价16有临床意义2、ABO系统抗体效价64有临床意义[注意事项]1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度（根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》）2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
疫苗效价测定方法
疫苗效价测定方法疫苗效价测定是评估疫苗质量和有效性的重要指标之一。
通过准确测定疫苗中的有效成分，可以确定疫苗的效力。
本文将详细介绍疫苗效价测定的方法及其步骤，旨在帮助读者了解和应用这一重要的测定方法。
一、疫苗效价测定方法的基本原理疫苗效价测定是通过实验方法测定疫苗中有效免疫物质的含量，进而评估疫苗的免疫力。
一般来说，疫苗效价的测定主要分为两种方法：生物学方法和化学物理方法。
生物学方法是通过动物实验来评估疫苗效力，如活病毒疫苗的TCID50法、灭活疫苗的保护性实验法等。
化学物理方法则是通过测定特定成分的含量来评估疫苗效力，如疫苗抗原含量的酶标法、蛋白质含量的比色法等。
1. 建立实验流程：首先，需要确定实验目的和所需测定的疫苗成分，然后制定实验方案和操作流程，确保实验的可重复性和准确性。
2. 样品制备：样品制备是疫苗效价测定的关键步骤之一。
根据实验方案，选择适当的方法提取和纯化疫苗中的有效成分。
具体方法可以根据疫苗类型和测定对象的不同而有所区别。
3. 样品检测：将制备好的样品进行检测，可以选择合适的化学物理方法或生物学方法进行测定。
比如通过酶标法检测疫苗中的抗原含量，或通过保护性实验评估疫苗的免疫力。
4. 数据处理和分析：根据实验结果，进行数据处理和统计分析，计算出疫苗中有效成分的含量，并评估疫苗的效力。
在此过程中，需要根据实验设计和原理进行相应的计算和判断。
三、疫苗效价测定方法的举例说明以灭活疫苗的抗体测定为例，介绍疫苗效价测定的具体步骤：1. 实验目的：评估灭活疫苗中免疫抗体的含量，以确定疫苗的效力。
2. 实验方案：按照标准操作要求，严格控制所有实验条件，包括实验设备、试剂和动物模型的选取。
3. 样品制备：将灭活疫苗经过特定处理提取出相关免疫抗体。
方法可以采用比色法、酶标法等。
4. 样品检测：选取合适的生物学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)，进行免疫抗体的定量测定。
5. 数据处理和分析：根据测定结果，计算出免疫抗体的含量，并进行统计分析。
血清抗体效价的检测方法
血清抗体效价的检测方法
血清抗体效价的检测方法主要包括免疫双向扩散法和酶联免疫吸附法（ELISA）。
免疫双向扩散法是一种简便的方法，其基本原理是抗原和抗体在同一凝胶内扩散，相遇后形成特异性的沉淀线。
具体操作步骤是将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
然而，该方法敏感性较低，易出现假阴性结果。
另一种常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）。
该方法具有较高的灵敏度，将抗原置于反应板上，然后加入处理过的血清、组织液等检测样品液。
如果测试样本中有抗体，会与抗原结合。
然后加入酶标记的抗体，与样品中的抗体结合。
添加显色剂，显色后，通过吸光度测定抗体含量。
请注意，具体采用哪种检测方法可能需要根据具体情况进行选择，建议您咨询专业医师。
血清抗体效价的测定
实验报告
10.选择波长630nm，将酶标板置于载板台上，开始扫描，测定OD值。
结果如下所示：
思考题：
1.查阅资料，了解共有哪些类型的ELISA实验，以及本实验中所用ELISA属于哪一类？答：本实验中所用ELISA属于间接法ELISA。
①直接ELISA
原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加酶标抗体进行孵育。
固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
加底物反应。
直接法主要用于测定抗原。
②间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。
经洗涤后，加酶标二抗。
固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。
洗涤后，加底物显色。
③双抗夹心法ELISA
原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。
将特异。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
ELISA方法确定制备抗体效价的标准操作规程
ELISA方法确定制备抗体效价的标准操作规程（编号：033）1、目的及适用范围该SOP用于规范利用ELISA方法检测制备抗体的标价的操作。
2、主要仪器及试剂离心机、冰箱、37℃恒温箱、酶标仪、洗板机、包被缓冲液、洗涤缓冲液、封闭液、0.2M Na2HPO4、0.1 M 柠檬酸、0.1 M EDTA、A、B底物反应液、终止液、HRP标记二抗（ELISA效价1:10000-100000）3、操作步骤3.1 目的蛋白的纯化；3.2 免疫兔子或小鼠；3.3 采集免疫动物的血清；3.4 抗原包被，每孔包被抗原50-200ng，4℃包被过夜或37℃包被5h；3.5 用封闭液37℃封闭3h或4℃封闭过夜，然后用PBST洗涤3次，每次2min；3.6 将抗体（免疫血清）和阴性血清分别按1:1000，1:2000，1:5000，1:10000和1:50000稀释后，每孔加入50μL，37℃温育45min，用PBST洗涤5次；3.7 加入相应的HRP标记二抗，37℃温育30min，用PBST洗涤5次；3.8 每孔分别加入50μL A液和B液，然后每孔加入50μL终止液；3.9 测定其A450nm，如果样品孔与阴性对照孔A450nm比值大于2.1最高稀释倍数为抗体效价。
3.10 抗体效价评定：一般来说，用重组蛋白作为抗原免疫动物所得到的免疫血清，其ELISA效价应不低于1:5,000。
为了能更充分验证制备抗体的效价及特异性，最好是联合Western-blot及IFA 等方法一起来检测制备抗体的效价及特异性。
4、注意事项4.1免疫抗原选择要点4.1.1尽量选择标签比较小的载体来纯化目的蛋白，而且在克隆目的基因时尽量去除载体序列。
如可以选择PET-30a载体(His标签)作为表达载体时，尽量选择Nde I/Xho I这两个酶切位点来克隆目的基因。
4.1.2重组蛋白纯度应不低于90％。
一般来说，纯度在90％以上的蛋白，取10μg电泳，在SDS-PAGE 胶上应基本看不到杂带。
抗体效价滴定操作规程
抗体效价滴定操作规程抗体效价是衡量抗体活性和浓度的重要指标，在医药研究和临床应用中有着广泛的应用。
抗体效价滴定操作规程是对进行抗体效价测定的步骤和方法进行规范和描述的文件，下面是一个关于抗体效价滴定操作规程的示例，包括前期准备、试验步骤和结果判定等内容。
一、前期准备1.阅读相关文献和实验说明书，了解抗体效价滴定的原理和方法。
2.了解实验所需物品清单，准备好所需的试剂、试管、移液器等实验器材。
3.检查实验设备，确认设备处于正常工作状态。
4.准备好质控抗体和待测抗体溶液，并按实验要求进行稀释。
二、试验步骤1.根据实验要求，将待测抗体和质控抗体分别加入试管中。
2.通过稀释系列将质控抗体稀释为一系列不同浓度的溶液。
3.充分混匀待测抗体和质控抗体溶液，保证溶液均匀。
4.将待测抗体和质控抗体溶液放置于室温，使其达到相同的温度。
5.取一组试管，依次加入相同体积的质控抗体溶液和待测抗体溶液，混匀后，在每个试管中加入适量的相同抗原。
6.将试管放置于恒温箱或洗涤器中，进行适当的培养时间，使抗原和抗体充分反应。
7.取出试管，加入适量的二抗或底物，并根据实验要求，进行适当的显色反应。
8.根据显色反应的颜色深浅和强度，判断抗体效价的高低。
9.计算抗体效价的对数，确定抗体效价。
三、结果判定1.根据检测结果，得出相应的抗体效价，记录在实验记录表中。
2.将实验结果进行统计和分析，确定最终的抗体效价。
3.根据实验结果，进行抗体效价滴定的质控和质量保证。
四、实验安全1.在操作过程中，注意安全操作，避免溶液的直接接触和飞溅。
2.使用刀片或针头等锐利物品时，要特别注意安全，防止划伤和刺伤。
3.遵守实验室的安全规定，佩戴实验室服装和防护设备，保证实验操作的安全性。
五、实验记录和数据处理1.记录实验过程中的各个步骤和操作细节，包括使用的抗体和试剂名称、溶液浓度和体积等。
2.记录显色反应的颜色深浅和强度，以及操作过程中的问题和异常情况。
3.对实验结果进行统计和分析，计算抗体效价的平均值和标准偏差，并进行结果的合理解释和讨论。
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抗体效价测定操作规程
操作步骤：
一.IgG 类
I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清
600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是
1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。
2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。
（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）
3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。
通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。
二.IgM
1•血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐
水备用，排列6 支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是
1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。
2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。
（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。
四．
五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。