实验三 卵磷脂的提取和鉴定
实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定
实验过程中，我们遇到了许多困难和挑战，如提取效率不高、鉴定结果不稳定等。通过不断尝试和改 进，我们逐渐找到了解决问题的方法，提高了实验技能和解决问题的能力。
实验不足与改进建议
实验不足
在实验过程中，我们发现提取卵磷脂的 效率不够高，且鉴定结果有时不够准确 。此外，实验过程中也存在一些操作不 规范的问题。
02
常用的提取溶剂有氯仿-甲醇混合 溶剂、石油醚等，通过反复提取 可提高卵磷脂的提取率。
卵磷脂的鉴定原理
通过红外光谱法、核磁共振法、质谱法等现代分析手段对提取的卵磷脂进行结构 分析，确定其化学组成和分子结构。
通过色谱法（如薄层色谱法、高效液相色谱法）对提取的卵磷脂进行纯度鉴定， 确定其中所含杂质和溶剂残留量。
讨论
根据分析结果，与前人研究进行比较， 提出可能的改进措施和未来研究方向。
结论总结
总结
对整个实验过程和结果进行总结，概述实验的主要发现和结论。
展望
提出实验的局限性和不足之处，以及对未来研究的建议和展获与体会
实验收获
通过本次实验，我们成功地从蛋黄中提取了卵磷脂，并对其进行了鉴定。实验过程中，我们掌握了卵 磷脂的提取和鉴定方法，加深了对卵磷脂性质和作用的理解。
展望
未来，卵磷脂的研究将继续深入开展，探索 其在生物体内的生理功能和作用机制。同时， 随着人们对健康饮食的关注度不断提高，卵 磷脂在食品、保健品等领域的应用也将得到 更广泛的发展。我们相信，随着研究的不断 深入和应用领域的拓展，卵磷脂将会为人类 健康事业做出更大的贡献。
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学习卵磷脂的鉴定技术
薄层色谱法
利用薄层色谱法分离和鉴定卵磷脂中 的主要成分，了解其组成和比例。
卵磷脂的提取和纯化-学长
卵磷脂的提取和纯化浙江工业大学药学院罗杨春宋建林杰摘要：本实验探索以油菜花油脚为原料，制备高纯度卵磷脂的最佳条件，选择树脂类型、反应温度、反应时间、萃取剂等因素进行单因素实验。
实验结果表明：关键词：卵磷脂提取纯化离子交换树脂正文：1. 前言卵磷脂是一类具有重要生理活性和表面活性的生命物质，在生物细胞膜的功能和代谢方面具有十分重要的调节作用。
药用卵磷脂是磷脂类产品中最具高附加值的产品形态。
它不仅要求纯度高，而且要求乳化能力强，并达到静脉注射用的相关要求，其提取工艺和技术比较复杂、难度较大。
其中分离脑磷脂与卵磷脂方面为提高卵磷脂产品纯度较为关键的步骤。
国内外学者利用溶剂萃取法、超临界流体分离法、高效液相色谱法和柱层析法等方法分离纯化磷脂酰胆碱的分离效果一般不理想并且适应面窄;柱层析法是目前主要的研究方法,多数采用Al2O3为分离介质,但分离过程中PC和PE分离的选择性仍不理想,分离后PC中溶血磷脂(LPC)的分离不彻底,使该方法在制备注射级卵磷脂时受到极大限制。
利用大孔型离子交换树脂对PC,PE,LPC吸附能力的不同，可进行分离。
离子交换树脂法具有吸附容量大、选择性好、易于解吸、机械强度高、再生处理简单、吸附速度快等特点，从而达到高效的分离效果。
2.材料和方法2.1 药品与试剂自备粗卵磷脂（PC含量约为47%）丙酮（分析级）、无水乙醇（分析级）、超纯水 ZnCl2、CuSO4·5H2O、CaCl2、MgCl22.2 实验步骤2.2.1离子交换：用0.1mol/L NaOH 10mL碱洗、0.1mol/L Hcl 10mL酸洗各种树脂（D113、116、001x7、001x10、201x4）最后再水洗。
取一定量的CuSO4·5H2O、CaCl2、MgCl2、Zn(Ac)2配成浓度为0.05mol/L的溶液。
活化后的树脂各取1g至50ml具塞锥形瓶中，分别加入0.03mol/L的各溶液，恒温水浴震荡24 小时，水浴温度为36℃。
鸡蛋黄中磷脂的提取及分析
三、仪器和药品 仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花 药品：熟鸡蛋黄 20％NaOH 溶液 10％Pb(AC)2
丙酮 碘化铋钾溶液
1％CuSO4 溶液
硫酸 95％乙醇 氯仿
四、实验步骤 1．卵磷脂的提取 （1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入 10ml 95％乙醇研磨，再加入 10ml 95％
乙醇充分研磨，减压过滤，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加 10ml 95％ 乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发 皿内。
六．思考题： 1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？ 2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作何解释？ 3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？ 4．为什么实验中要进行减压过滤？操作时应注意哪些地方？
脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加 1 滴 20％氢氧化钠溶液与 5ml 水，用玻棒搅 拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入 10％醋酸铅 2 滴，观察 溶液的变化 甘油的检查：取试管一支，加入 1％硫酸铜溶液 1ml(二十滴)，2 滴 20％氢氧化钠溶液，振 摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入 1ml 水解液振摇，观察所得结果。 胆碱的检查：取水解液 1ml，滴加硫酸使其酸化（以 pH 试纸试之）加入 1 滴碘化铋钾溶液， 有砖红色沉淀生成。
（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。 （3）冷却后，加入 5ml 氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 （4）在搅拌下慢慢加入 15ml 丙酮，即有卵磷脂析出，搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶 内）。 2．卵磷脂的水解及其组成分析 （1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入 5ml 20％氢氧化钠溶 液，放入沸水浴中加热 10 分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中 用棉花过滤。滤液供下面检查用。 （2）检查
卵磷脂的提取与鉴定一试验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的
卵磷脂的提取与鉴定一试验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的卵磷脂的提取与鉴定一实验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的原理和方法。
二实验原理卵磷脂在脑神经细胞中含量很高，蛋黄中含有特别高。
根据卵磷脂溶于乙醇、乙醚等有机溶剂进行提取。
新提取的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后被氧化为黄褐色。
利用卵磷脂的胆碱基在碱性溶液中可以分解为三甲胺(特殊的鱼腥臭味)进行鉴别。
三实验器材与试剂鸡蛋黄、乙醇(95,)、10,NaOH、烧杯、量筒等。
四实验步骤1 提取卵磷脂取2g蛋黄于15mL(95,)乙醇，过滤、蒸气浴蒸干，残留物为卵磷脂。
2 鉴别取少量的卵磷脂于试管中，加10,NaOH溶液2mL，水浴加热是否产生鱼腥臭味。
五注意事项滤液要清。
六作业完成实验报告，写出实验小结。
1粗脂肪的提取和定量测定——索氏提取法一实验目的1 学习和掌握用索氏提取器提取脂肪的原理和方法2 学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定。
二实验原理利用脂类物质溶于有机溶剂的特性，在索氏提取器中用有机溶剂对样品中的的脂类物质进行提取。
因提取的物质是脂类物质的混合物，故称其为粗脂肪。
三实验器材1索氏提取器 2 分析天平 3 烧杯 4 恒温水浴锅 5 脱脂棉和脱脂滤纸 6 镊子7 干燥器四实验试剂与材料1 样品2 石油醚五实验步骤1称量索氏提取瓶将索氏提取瓶洗净烘干至恒重，记录重量。
2提取样品粗脂肪将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积1/2—2/3。
将样品包放入提取管内。
连接索氏提取器各个部分。
用70度,80度恒温水浴加热提取瓶，抽提进行2―3小时，直至提取管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止，表示提取完全。
3 计算样品中粗脂肪的含量提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，倒出石油醚。
取下提取瓶，洗净瓶的外壁，烘干至恒重。
记录重量。
2按照下式计算样品中粗脂肪的百分含量。
粗脂肪(,),(提取后提取瓶的重量,提取前提取瓶的重量)/样品重量*100% 六作业计算样品中粗脂肪的含量，完成实验报告。
鸡蛋黄中的卵磷脂提取和分析
3 产品回收率
回收纯化产物，并计算产物回收率。
表1 蛋黄脂质提取率随乙醇用量的变化：
数量/g 生蛋黄 乙醇 n-己烷 提取脂 质 1000 1000 1500 300 数量/g 数量/g 数量/g 1000 750 1500 298 1000 500 1500 265 1000 250 1500 1.9
实验分析
1 冷冻与加盐
直接冷冻蛋黄可以使蛋白质变态，有利于解除 乳化，可提高提取卵磷脂的效率，但适宜地少量 (0.01% 0.3%) 加入一些食盐(0.01%～0.3%)可以减少蛋白质的 变性。
2 溶剂的用量
从食品和医用要求考虑溶液采用乙醇和n己烷，但乙醇的量以占蛋黄量的50%～ 100%为宜，n-己烷的量以占蛋黄量的 100%～200%为宜，且只出一种溶剂效果 不好，蛋黄脂质提取率随乙醇量的增加而 提高，见表1数据。
试实验仪器和试剂
1 . 仪器 : 冰箱、离心机、超滤膜。
2 . 试剂 : 蛋黄、乙醇、n-己烷、NaCl。
实验方法
• 1. 在1000g冷冻的蛋黄中加入1500ml n-己烷和 500mL乙醇的混合溶剂，用搅拌器搅拌5min后，离 心分离(3000r/min)，得到1958mL溶剂层。 •2. •2.在该溶剂层中加入200mL 3%食盐水，混合后 200mL 3% 静放，然后倾析，得到1630mL己烷层。己烷中 脂质含量为24.8%， 3.然后用日本产的超滤膜Mps-3400(划分子量为 30000～40000)用3000mL己烷对该脂质层进行定容 过滤，得到高纯度达的蛋黄卵磷脂。
实验注意事项
• 1 该法单纯使用非极性溶剂难以分离提取 • 2 使用前先对蛋黄冷冻处理。 • 3 乙醇和n-己烷以适当比例使用。
鸡蛋中卵磷脂提取鉴定
卵磷脂在药物研发中的应用
卵磷脂在药物生产中的应用
卵磷脂在药物质量控制中的应 用
在化妆品行业中的应用前景
卵磷脂在化妆品中的功效：保湿、抗氧化、抗衰老等
卵磷脂在化妆品中的安全性：无毒、无刺激、无过敏反应
卵磷脂在化妆品中的应用范围：护肤品、彩妆、洗发水、沐浴露等 卵磷脂在化妆品中的市场前景：随着消费者对健康和环保的关注度提高， 卵磷脂在化妆品中的应用前景广阔
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汇报人：
目录
鸡蛋卵磷脂提取原理
卵磷脂的溶解性：卵磷脂在油脂中 的溶解度较高，因此可以利用这一 性质将其从鸡蛋中提取出来。
卵磷脂的纯化：提取出的卵磷脂往 往含有一定的杂质，需要进行纯化 处理，常用的纯化方法包括重结晶、 柱层析等。
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卵磷脂的提取方法：通常采用有机 溶剂萃取法，将鸡蛋中的油脂溶解 后，再利用不同溶剂对卵磷脂和油 脂的选择性不同，将卵磷脂从油脂 中分离出来。
观察溶解性：卵磷脂难溶于水，易 溶于有机溶剂
化学性质鉴定
溶解性：卵磷脂溶于氯仿等有 机溶剂
皂化值：卵磷脂具有皂化特性
酸碱度：卵磷脂在酸性条件下 稳定，在碱性条件下易水解
红外光谱：卵磷脂具有特征红 外光谱峰
仪器鉴定
气相色谱-质谱联用法：鉴定 卵磷脂中脂肪酸组成的有效 方法
红外光谱法：鉴定卵磷脂中 官能团的有效方法
提取步骤
萃取：使用有机溶剂提取卵 磷脂
分离：通过离心、过滤等方 法分离出卵磷脂
预处理：去除蛋壳，收集蛋 黄
鉴定：通过色谱、质谱等方 法鉴定卵磷脂的出卵磷脂
鉴定步骤
卵磷脂鉴定：通过光谱、色谱等技 术，对卵磷脂进行鉴定
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卵磷脂的提取鉴定
卵磷脂的提取及鉴定作者：未知来源：郑州轻工业学院时间：2006-9-23一、实验目的1.加深了解磷脂类物质的结构和性质。
2.掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。
二、实验原理磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。
卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。
甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。
这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。
三、仪器和试剂仪器小烧杯、试管。
试剂1. 鸡蛋黄2. 红色石蕊试纸3. 95%乙醇4. 10%氢氧化钠溶液5. 钼酸铵试剂将6g 钼酸铵溶于15mL 蒸馏水中，加入5mL 浓氨水，另外将24mL 浓硝酸溶于46mL的蒸馏水中，两者混合静置一天后再用。
6. 丙酮7. 乙醚8. 3%溴的四氯化碳溶液9. 硫酸氢钾四、操作步骤(一)卵磷脂的提取称取约10g 蛋黄于小烧杯中，加入温热的95%乙醇30mL，边加边搅拌均匀，冷却后过滤。
如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。
将滤液置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。
(二)卵磷脂的溶解性取干燥试管，加入少许卵磷脂，再加入5mL 乙醚，用玻棒搅动使卵磷脂溶解，逐滴加入丙酮3～5mL，观察实验现象。
(三)卵磷脂的鉴定1.三甲胺的检验取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL 氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。
将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。
实验三卵磷脂的提取和鉴定
实验器材
鸡蛋黄，95%乙醇，乙醚，丙酮，10% NaOH， 鉬酸铵试剂； 50 mL、500 mL烧杯，电炉，蒸发皿，药勺， 玻璃棒，玻璃漏斗，试管，吸管，石蕊试纸， 试管夹，洗瓶
实验操作步骤与现象观察记录 (一)卵磷脂的提取 取约10g （两吸管）蛋黄于50 ml小烧杯中
搅拌加入95%乙醇30mL
卵磷脂的化学结构
1 R1-COO-CH2 2* R2-COO-C—H O 3 CH2 —O—P—O—R OH
R1 常为饱和脂肪 酸如C16，C18 R2 常为不饱和脂 肪酸如花生四烯 酸
+ R= —CH2CH2-N(CH3)3 OH 卵磷脂 卵磷脂彻底水解的产物是什么？
极性端 疏油端，亲水端
CO2-CH2 CO2-CH 非极性端 疏水端，亲油端
实验三 卵磷脂的提取和鉴定
实验目的 了解磷脂类物质的结构和性质
学习卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。
实验原理
磷脂是生物体组织细胞的重要成分，在脑、 神经组织、肾上腺和红细胞中含量较高，在 蛋黄中含量特别丰富(10%左右)。卵磷脂能溶 于乙醇而脑磷脂、蛋白质及糖类等不溶，利 用此性质可将卵磷脂和其它成分分离。卵磷 脂溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将 其与醇溶性的中性脂肪分离开，达到纯化卵 磷脂的目的。
O + CH2O-P-O-CH - 2CH2-N(CH3)3 O
H-OH
磷脂分子中同时具有疏水基和亲水基。正是由于 这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要 的生理作用。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、 胆碱和磷酸盐，可分别进行化学鉴定。胆碱在 碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气 味的三甲胺；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作 用，生成黄色的磷钼酸沉淀。通过对分解产物 的检验可以对提取的卵磷脂粗品于蒸发皿内，水浴锅中 蒸干，所得干物即为卵磷脂粗品。
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卵磷脂的化学结构 1 R1-COO-CH2 2* R2-COO-C—H O 3 CH2 —O—P—O—R OH
R1 常为饱和脂肪 酸如C16，C18 R2 常为不饱和脂 肪-N(CH3)3 OH 卵磷脂 卵磷脂彻底水解的产物是什么？ 卵磷脂
极性端 疏油端，亲水端
CO2-CH2 CO2-CH 非极性端 疏水端，亲油端 O + CH2O-P-O-CH2CH2-N(CH3)3 O H-OH 磷脂分子中同时具有疏水基 亲水基 疏水基和亲水基 疏水基 亲水基。正是由于 这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要 的生理作用。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、 胆碱和磷酸盐，可分别进行化学鉴定。胆碱在 碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气 味的三甲胺；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作 用，生成黄色的磷钼酸沉淀。通过对分解产物 的检验可以对提取的卵磷脂粗品进行鉴定。
实验三 卵磷脂的提取和鉴定 实验三
实验目的 了解磷脂类物质的结构和性质 学习卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。
实验原理 磷脂是生物体组织细胞的重要成分，在脑、 神经组织、肾上腺和红细胞中含量较高，在 蛋黄中含量特别丰富(10%左右)。卵磷脂能溶 于乙醇而脑磷脂、蛋白质及糖类等不溶，利 用此性质可将卵磷脂和其它成分分离。卵磷 脂溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将 其与醇溶性的中性脂肪分离开，达到纯化卵 磷脂的目的。
现象：
滤纸过滤
滤液性状：
将滤液置于蒸发皿内，水浴锅中 蒸干，所得干物即为卵磷脂粗品。
粗提物性状：
(二)卵磷脂的溶解性观察 二 卵磷脂的溶解性观察 药勺刮取取粗提物少许，置干燥试管底部，
加入1mL 乙醚，用玻棒搅动
现象？
加入2mL丙酮
现象？
(三)卵磷脂的水解与鉴定 三 卵磷脂的水解与鉴定
1.三甲胺的检验 取干燥试管一支，加入少量提取物和3mL 10% NaOH溶液，水浴加热15min，在管口放一片蒸馏水 润湿过的红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其 气味，记录。 将上述加热过的溶液过滤。滤液性状： 2.磷酸的检验 取干净试管一支，加入10滴上述滤液，加入10滴 95%乙醇，摇匀，再加入10滴钼酸铵试剂，观察现 象；最后将试管放入热水浴中加热5～10min，观察 有何变化。
实验器材
鸡蛋黄，95%乙醇，乙醚，丙酮，10% NaOH， 鉬酸铵试剂； 50 mL、500 mL烧杯，电炉，蒸发皿，药勺， 玻璃棒，玻璃漏斗，试管，吸管，石蕊试纸， 试管夹，洗瓶
实验操作步骤与现象观察记录 (一)卵磷脂的提取 取约10g （两吸管）蛋黄于50 ml小烧杯中
搅拌加入95%乙醇30mL