细菌学卫生检验种类及标准 ppt课件
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细菌学检验ppt课件
2、标本的直接检查： ★ 直接显微镜检查：
革兰阴性小杆菌或多形态杆菌，结合临床 症状，可做出初步诊断。
★ 抗原检测
荚膜肿胀试验等
★ 核酸检测
3、分离培养与鉴定 （1) 分离培养
★ ★ ★ ★ 营养要求：高，生长中需要X、V因子。 气体环境：生长时需要5%～10%的CO2环境。 温度：35℃ 培养基：兔血或马血最好
方法：密集划线接种待测菌，再点种金葡菌，培养后观察。
流感嗜血杆菌
流感嗜血杆菌（兔血+X、V因子）
流感粘液型菌落
大菌落为奈瑟菌
小菌落为嗜血杆菌
咽拭子培养（未加万古霉素）
咽拭子培养（加万古霉素）
标本接种后点种金葡菌
卫星现象
琼脂卫星试验（脑心琼脂）
X、V因子需求试验→又称纸片法卫星试验
① 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或0.5麦 氏单位菌悬液涂抹接种。 ②将X、V、X+V因子三种纸片贴在接种细菌的平板上 纸片间相距5cm以上，（因为V因子分子量小，扩散 距离远），否则会出现X因子假阳性结果。 ③培养后观察结果 ④ （X+V）因子结果阴性的几种可能原因
一、分类
根据伯杰细菌分类手册，嗜血杆菌属隶属于 巴斯德菌科。本菌属共包括17个菌种，其中与临 床有关的有9种，分别是流感嗜血杆菌、副流感 嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜 克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、 副嗜沫嗜血杆菌和迟缓嗜血杆菌。后三者现划归 “凝聚杆菌属”。
二、临床意义
1、致病因子：细菌结构成分、毒素和酶类。
2、在假单胞菌属细菌引起的临床感染中占70%。 3、可引起机体各个系统的感染。 4、眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜 穿孔而失明。
细菌感染的病原学诊断、细菌分类与命名ppt课件
主要用于肠杆菌科细菌中属及种的鉴别
2019
-
67
明胶液化试验
明胶
胞外酶 分解
氨基酸
失去凝固力
液态明胶
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别 2019 也用于鉴别- 炭疽杆菌（+）和类炭疽杆菌 68
苯丙氨酸
苯丙氨酸脱氨酶 脱氨基
苯丙酮酸 +
氯化铁
绿色
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别
2019
-
69
氨基酸脱羧酶试验
2019
-
6
一、检查方法
（一）不染色标本检查法
主要用于观察生活状态下微生物某些形态 特点及运动性
٭常用的方法有压滴法和悬滴法
如:用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动”
悬滴法观察霍乱弧菌的“穿梭样运动”
如在同一方法制作的另一标本中加入效价≥1:64
霍乱多价血清则穿梭样运动停止并发生凝集,则为制
2动019 试验(+)
2019
-
二氧化碳培养箱
46
2、烛缸法:
3、化学法： 按每升容积重碳酸钠
0.4g与1mol/L盐酸 0.35ml比例放入标本 缸,密封后倾斜容器使 两者接触产生CO2
2019
-
烛缸二氧化碳培养法
47
★厌氧培养法：厌氧罐培育法和厌氧袋法 1、厌氧罐培育法：用理化方法除去密
闭容器中的氧，造成无氧环境，以利于专 性厌氧菌生长。
2019
-
28
（7）鸡蛋和动物血清:虽然不是构成培养基 的基本成分,但却是某些细菌生长所必需的营养物 质,所以仅用于制备一些特殊的培养基。
（8）生长因子：是细菌生长所必需的，但需 要量很小。在制备培养基时，常加入维生素、氨 基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。
细菌检验技术ppt课件
+ 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯 一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
+ 培养基：枸盐酸盐培养基（淡绿色）
+ 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
3、玻璃器材的清洗
★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡－→清水 清洗
★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷－→清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷
★盛培养基试管和平皿：高压灭菌－→趁热倒出－ →洗涤剂洗刷－→清水冲洗
★吸管：3％来苏浸泡－→清水冲洗 ★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡－→清水
冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗 涤
★含油脂的器皿：单独灭菌
（四）培养箱
1、电热恒温培养箱 2、二氧化碳培养箱 3、厌氧培养箱
（五）培养基 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖 的综合营养基质。 1、培养基的成分及作用
+ 营养物质：肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血 液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐
+水 + 凝固剂：琼脂、明胶 + 抑制剂 + 指示剂
调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
检定
保存
二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术 1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台
+ 糖发酵试验 + 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） + 甲基红试验 + V-P试验 + 七叶苷水解试验 + Β－半乳糖苷渗透酶试验
水体卫生细菌学检验共29页PPT
5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近300或30的平均菌 落数乘以稀释倍数报告之。
6.若所有的菌落数匀为“无法计数”时，应注明水样的最大稀释倍数。 7.在求同稀释度的平均数时，若其中1个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜 采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约
1.取样 25g或25ml
检样
2、稀释样品的取样和倾注平皿
1mL
1mL
1ml无菌水
1：10稀释液 225mL无菌水
1mL
9mL稀释液 1：100
1mL
9mL稀释液 1：1000
1mL
每个稀释度
做两个平皿
1mL
1mL
1mL
倾注平皿
将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿 约15ml，并转动平皿，混合均匀。
将产气发酵管培 养物转种于伊红 美蓝琼脂平板上， 36±1℃培养1824h，观察菌落形 态。
证实试验
挑取平板上的可 疑菌落，进行革 兰氏染色观察。 同时接种乳糖发 酵管36±1℃培养 24±2h，观察产 气情况。
根据证实为 大肠杆菌阳 性的管数， 查MPN表， 报告每 100ml（g） 大肠菌群的 MPN值。
作用：判定水体被细菌污染的程度
基本操作一般包括： 样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
1、样品的处理和稀释
25g或25ml 检样
充分振摇或研磨
225mL稀释液
1ml
含有玻璃珠的灭
1ml
菌玻璃瓶或乳钵
1：10稀释液。 1ml
9ml稀释液 1：100
操作要求：“无菌操作”贯彻始终。
9ml稀释液 1：1000
水体卫生细菌学检验
6.若所有的菌落数匀为“无法计数”时，应注明水样的最大稀释倍数。 7.在求同稀释度的平均数时，若其中1个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜 采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约
1.取样 25g或25ml
检样
2、稀释样品的取样和倾注平皿
1mL
1mL
1ml无菌水
1：10稀释液 225mL无菌水
1mL
9mL稀释液 1：100
1mL
9mL稀释液 1：1000
1mL
每个稀释度
做两个平皿
1mL
1mL
1mL
倾注平皿
将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿 约15ml，并转动平皿，混合均匀。
将产气发酵管培 养物转种于伊红 美蓝琼脂平板上， 36±1℃培养1824h，观察菌落形 态。
证实试验
挑取平板上的可 疑菌落，进行革 兰氏染色观察。 同时接种乳糖发 酵管36±1℃培养 24±2h，观察产 气情况。
根据证实为 大肠杆菌阳 性的管数， 查MPN表， 报告每 100ml（g） 大肠菌群的 MPN值。
作用：判定水体被细菌污染的程度
基本操作一般包括： 样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
1、样品的处理和稀释
25g或25ml 检样
充分振摇或研磨
225mL稀释液
1ml
含有玻璃珠的灭
1ml
菌玻璃瓶或乳钵
1：10稀释液。 1ml
9ml稀释液 1：100
操作要求：“无菌操作”贯彻始终。
9ml稀释液 1：1000
水体卫生细菌学检验
《常见细菌鉴定》课件
绿脓杆菌的鉴定
总结词
常见于土壤和水环境中，可引起皮肤和肺部 感染
详细描述
绿脓杆菌是一种常见的土壤和水环境中的细 菌，可引起皮肤和肺部感染。它对某些抗生 素具有抗性，因此治疗较为困难。鉴定绿脓 杆菌的方法包括细菌培养、生化试验和免疫 学检测等。
肺炎球菌的鉴定
总结词
常见于人类上呼吸道中，可引起肺炎和脑膜炎等疾病
详细描述
大肠杆菌O157:H7是一种常见的肠道致病菌，可通过食物和水传播。它具有强致病性，可引起严重的腹泻、腹痛 等症状，甚至导致溶血性尿毒综合征等严重并发症。鉴定大肠杆菌O157:H7的方法包括细菌培养、生化试验和血 清学检测等。
金黄色葡萄球菌的鉴定
总结词
常见于食品和环境中，可引起食物中毒和感染
细菌鉴定实验操作
04
实验准备
实验材料
显微镜、培养皿、培养基、细菌样本 等。
实验试剂
染色剂、生理盐水、酒精等。
实验仪器
恒温箱、离心机、天平等。
实验步骤
阅读实验指导书，了解实验原理和操 作步骤。准备好实验材料和试剂，检 查实验仪器是否正常工作。
实验操作步骤
步骤一
步骤二
细菌样本制备：将细菌样本进行稀释，涂 布在培养基上，放入恒温箱中培养。
免疫学鉴定
总结词
利用抗原-抗体反应检测细菌的抗原性物质。
详细描述
制备针对特定细菌抗原的抗体，通过抗原-抗体反应检测样品中是否存在相应细 菌，常用于临床病原体快速检测。
分子生物学鉴定
总结词
通过细菌基因组的DNA序列进行分析鉴定。
详细描述
提取细菌基因组DNA，进行基因测序或PCR扩增特定基因片段，通过比对分析确 定细菌的种属和基因型。
常见细菌鉴定ppt课件
β溶血：溶血隐秘杆菌（明胶阴性） 化脓隐秘杆菌（明胶阳性）
（3）菌落无β溶血，多形：放线菌，CDC2群。
嗜血杆菌种间鉴定
菌名 流感 + 溶血 杜克雷 副流感 D 副溶血 X因子 V因子 马血溶血 + + + + + 乳糖 甘露糖 触酶 + + CO2
+
-
-
-
-
-
-
+ +
+
-
+ -
D +
奈瑟菌科不同属间的鉴别
0
0
96
0
化酶
（阳性%）
伴放线放线杆菌 人心杆菌 啮蚀艾肯菌 金氏金氏菌 99 %） （阳性 1 8 0 19 100 100 100
多杀巴斯德
98
96
一些嗜二氧化碳杆菌鉴定
试验 肯 葡萄糖 0 乳糖 0 麦芽糖 0 蔗糖 0 精氨酸 伴放线 99 狗咬CO2嗜纤维 人心 93 100 艾
0
95 0 0
大多数常见共栖菌及部位
部位 呼吸道
需氧菌
菌名
化脓性链球菌及其他β溶血链球菌 肺炎链球菌，金葡，CNS，柰色球菌 支原体， Stomatococcus, 莫拉菌， 肠道菌，微球菌，乳杆菌，嗜血杆菌 韦荣球菌，消化链球菌, 梭杆菌 卟啉单胞菌, 拟杆菌, 普雷沃菌， 真杆菌，双歧杆菌，丙酸杆菌 念珠菌
大多常见致病菌及部位
部位
骨和关节 需氧菌
菌名
金葡，淋球菌，链球菌，流感，肠道菌 假单胞菌，CNS，分枝杆菌 申克孢子菌，球孢子菌，念珠菌属
大肠杆菌，奇异变形，克勒伯菌， 肠杆菌，假单胞菌，肠球菌，腐生葡 金葡，TB，淋球菌， 脲原体 念珠菌属
（3）菌落无β溶血，多形：放线菌，CDC2群。
嗜血杆菌种间鉴定
菌名 流感 + 溶血 杜克雷 副流感 D 副溶血 X因子 V因子 马血溶血 + + + + + 乳糖 甘露糖 触酶 + + CO2
+
-
-
-
-
-
-
+ +
+
-
+ -
D +
奈瑟菌科不同属间的鉴别
0
0
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0
化酶
（阳性%）
伴放线放线杆菌 人心杆菌 啮蚀艾肯菌 金氏金氏菌 99 %） （阳性 1 8 0 19 100 100 100
多杀巴斯德
98
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一些嗜二氧化碳杆菌鉴定
试验 肯 葡萄糖 0 乳糖 0 麦芽糖 0 蔗糖 0 精氨酸 伴放线 99 狗咬CO2嗜纤维 人心 93 100 艾
0
95 0 0
大多数常见共栖菌及部位
部位 呼吸道
需氧菌
菌名
化脓性链球菌及其他β溶血链球菌 肺炎链球菌，金葡，CNS，柰色球菌 支原体， Stomatococcus, 莫拉菌， 肠道菌，微球菌，乳杆菌，嗜血杆菌 韦荣球菌，消化链球菌, 梭杆菌 卟啉单胞菌, 拟杆菌, 普雷沃菌， 真杆菌，双歧杆菌，丙酸杆菌 念珠菌
大多常见致病菌及部位
部位
骨和关节 需氧菌
菌名
金葡，淋球菌，链球菌，流感，肠道菌 假单胞菌，CNS，分枝杆菌 申克孢子菌，球孢子菌，念珠菌属
大肠杆菌，奇异变形，克勒伯菌， 肠杆菌，假单胞菌，肠球菌，腐生葡 金葡，TB，淋球菌， 脲原体 念珠菌属
食品的卫生细菌学检验医学PPT
精选ppt
27
四、大肠菌群检验方法及操作方法
国家标准： 三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→
证实试验(乳糖发酵试验)
行业标准： 两步法：推测试验→证实试验
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28
不产气 大肠杆菌阴性
报告
检样 稀释处理 乳糖胆盐发酵管
革兰氏染色
产气 EMB等
乳糖发酵管
革兰氏阳性
革兰氏阴性无芽胞 产气
不产气
大肠杆菌阴性
精选ppt
7
检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所 用时间不宜超过20min，以防止细菌有 所死亡或繁殖。
精选ppt
8
（二）培养
普通食品:37 ℃ 48h 倒放平板 清凉饮料、调味品、糕点、酒类： 37 ℃ 24h 水产品: 30℃ 48h
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9
（三）计数和报告
到达规定培养时间，应立即计 数。如果不能立即计数，应将平板 放置于0－4℃，但不得超过24h。
食品饮料大肠菌群快速检验纸片 饮料、食用纯水和糕点的大肠菌群测定
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45
餐具大肠菌快速检验纸片 餐具卫生消毒效果检测
精选ppt
46
大肠菌群测试片 适用于需要对大肠菌群准确计数的样品，如消毒牛乳、
冷饮和调味品等。
精选ppt
47
八、水的大肠菌群检验
生活饮用水 瓶装饮用纯净水 饮用天然矿泉水罐装产品 地面水质量标准 准备加氯消毒后供饮用的水 准备加氯消毒后供饮用的水 游泳池水
精选ppt
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• 3.培养：
• 将接种好的纸片轻轻压平（可叠放），在 36℃下培养15－24h观察结果。
• 4.结果判定:
• 纸片上出现紫红色斑点,其周围有黄圈者,为 阳性.
第五章 卫生指标菌的检测OKPPT课件
1ml 1ml 1ml
1:10
1:100
25g/m 1ml l样品
1:1000 1:10000
1ml
1ml
生理盐 水
1ml
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加入46℃营养琼脂15~20mL
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（一）样品稀释及做平板
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检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所 用时间不宜超过20min，以防止细菌有所 死亡或繁殖。
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（二）培养
➢ 倒放平板 ➢ 普通食品：36 ℃±1℃ 48h±2h ➢ 水产品: 30℃±1℃ 72h±3h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥
漫生长的菌落时，可在凝固后的平板计数 琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4mL），凝固后翻转平板，按上步条件进 行培养。
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蛇类等血动物的正常肠道寄居菌，偶见于健康人或 腹泻者粪便内
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式中：
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之 和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。
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注意：旧版标准的做法为：比值小于或等于2取 平均数，比值大于2则其较小数字
第五章 卫生指标细菌 的检验
第一节 食品中菌落总数的测定
30.11.2020
2
一、菌落总数
概念：是指食品检样经过处理，在一
定条件下培养后,单位质量（g）、容积 （mL）或表面积（cm2）内所形成的好氧 或兼性厌氧细菌菌落的总数。
是活菌计数，需氧菌数； 不代表实际所有的细菌总数。
细菌的分型及其检测技术PPT课件
过夜增殖噬菌体。分离纯化单斑
3次，至平板噬斑形态大小一致
纯第化11页/共70页
11
• （三）噬菌体的增殖、保存
1、噬菌体增殖 液体增殖法：定时加入对数期菌体 固体增殖法：同时加大菌体和噬菌体的浓度 2、去除菌体
细菌滤器法和三氯甲烷法
3、噬菌体的保存
冷藏保存：无需防腐剂，分装后7d，不宜超过4w
冷冻干燥：2年
鉴定时不需活分析细菌在体外培养物中的代谢产物如厌氧菌产生的短链脂肪酸色谱图需氧菌的有机酸色谱图等临床标本中检出和鉴定细菌如检测脑脊液中的乳酸对细菌性脑膜炎做出明确诊断等热裂解气相色谱法鉴定细菌将样品干燥高温裂解碎片色谱图鉴定微生物如沙门菌属十种血清型鉴别高分辨气相色谱法分析冷冻条件下细菌的挥发性有机产物鉴定引起冷冻品腐败的微生物液相色谱法基于混合物中各组分对固定相和流动相亲和力的差异分离组分的
24
第24页/共70页
(二)培养基和抗菌药物纸片
1．抗菌药物纸片：商品化，选择直径为，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片 加样或浸泡方法使每片含药量达规定要求。含药纸片密封贮存于超低温冰箱。
2．培养基：水解酪蛋白（M-H）培养基是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养 基，4℃保存。
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第16页/共70页
第二节 细菌素分型技术
一、概述
• 细菌素(bacteriocin)
• 是某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质仅 对与产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产 生菌本身不敏感。如大肠菌素、绿脓菌素、蜡样芽 胞杆菌素等。
• 抗生素
• 抗菌素是细菌、真菌等微生物在生长过程中为了生 存竞争需要而产生的化学物质,这种物质可保证其自 身生存,同时还可杀灭或抑制其它微生物。细菌产生 的有多粘菌素、抗菌肽等。
细菌学卫生检验种类及标准 PPT
2、分离培养及鉴定：①必须做倾注培养法计数
尿液菌，培养结果才有临床意义。② 离心沉淀物 分别接种血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板 或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色 、生化鉴定、药敏等。
3、结果报告
涂片镜检，报告形态特点和染色情况；
• 尿液细菌计数，如为革兰阳性菌＞104CFU／m1 ；如为革兰阴性菌＞105CFU／m1，可诊断为泌 尿系感染。
床边接种
报告单
三、穿刺液和引流液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、标本来源：胸腔积液、腹水、心包积液、关节
液、胆汁、鞘膜液深部组织液等 2、标本量：心包积液、关节液为1-5ml，胸腔积
液、腹水为5-10ml 3、收集送检：无菌收集并置于无菌抗凝试管送检
，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌 氧运送培养基内送检，无法立即送检可室温保存。
形态观察
生化反应
血清学鉴定
药物敏感试验
报告 结果
五、脓液和分泌物标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 拭子采集法、纱布条采集法、注射器抽吸法 开放式脓肿 清洗后，棉拭子直接采样 封闭式脓肿 切开排脓时用无菌棉拭子采样或注射器抽吸 大面积烧伤 可多部位棉拭子采集创面分泌物 瘘管采样 纱布条塞入瘘管或棉拭子采样 样品不能及时送检可冷藏； 厌氧培养要床边接种或厌氧运送。
2、采集时间：通常应采集早晨起床后第一次尿 液，在抗菌药物应用之前采集尿液10-15ml
3、送检：及时送检，室温不超过2h；冷藏不超 过8h；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检。
（二）细菌学检查
1、显微镜检查：离心沉淀物涂片。根据临床情
况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋 球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显 微镜直接观察（钩端螺旋体）。
尿液菌，培养结果才有临床意义。② 离心沉淀物 分别接种血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板 或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色 、生化鉴定、药敏等。
3、结果报告
涂片镜检，报告形态特点和染色情况；
• 尿液细菌计数，如为革兰阳性菌＞104CFU／m1 ；如为革兰阴性菌＞105CFU／m1，可诊断为泌 尿系感染。
床边接种
报告单
三、穿刺液和引流液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、标本来源：胸腔积液、腹水、心包积液、关节
液、胆汁、鞘膜液深部组织液等 2、标本量：心包积液、关节液为1-5ml，胸腔积
液、腹水为5-10ml 3、收集送检：无菌收集并置于无菌抗凝试管送检
，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌 氧运送培养基内送检，无法立即送检可室温保存。
形态观察
生化反应
血清学鉴定
药物敏感试验
报告 结果
五、脓液和分泌物标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 拭子采集法、纱布条采集法、注射器抽吸法 开放式脓肿 清洗后，棉拭子直接采样 封闭式脓肿 切开排脓时用无菌棉拭子采样或注射器抽吸 大面积烧伤 可多部位棉拭子采集创面分泌物 瘘管采样 纱布条塞入瘘管或棉拭子采样 样品不能及时送检可冷藏； 厌氧培养要床边接种或厌氧运送。
2、采集时间：通常应采集早晨起床后第一次尿 液，在抗菌药物应用之前采集尿液10-15ml
3、送检：及时送检，室温不超过2h；冷藏不超 过8h；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检。
（二）细菌学检查
1、显微镜检查：离心沉淀物涂片。根据临床情
况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋 球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显 微镜直接观察（钩端螺旋体）。
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细菌学卫生检验种类及标准 11
3. 样本采集的量：成人血量5～10ml，婴儿1ml ～2ml，儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时 ，应采集双份量，分别作双相培养(37℃/28℃) 。
4. 样本的送检：尽快，室温 5. 操作：直接采血注入含増菌肉汤的培养瓶或用
不含防腐剂的肝素抗凝管至实验室接种，需同时 做需氧和厌氧培养
，尤其脑
膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和链球菌多见。抗酸染 色：查找结核分枝杆菌。墨汁染色：查找新型隐 球菌。 2．细菌培养：脑脊髓液培养多数需3～4天，在 此期间如有细菌生长，经鉴定报告“××菌”，同 时报告药敏试验结果。
细菌学卫生检验种类及标准 16
议
细菌学卫生检验种类及标准 6
细菌学卫生检验种类及标准 7
无菌原则 正确采 样时间
正确采 样部位
足够样本量
多样性采集 做好记录
细菌学卫生检验种类及标准 8
一、血液标本细菌学检验 二、脑脊液标本细菌学检验 三、穿刺液和引流液标本细菌学检验 四、尿液标本细菌学检验 五、脓液和分泌物标本细菌学检验 六、痰液标本细菌学检验 七、生殖道标本细菌学检验 八、粪便标本细菌学检验
临床感染性疾病的诊断和治疗
细菌学卫生检验种类及标准 3
细菌学鉴定方法
• 1、形态结构检查 • 2、细菌生长特性检查如菌落 • 3、生化试验 • 4、血清学试验 • 5、药敏试验 • 6、细菌毒素检测 • 7、分子生物学检测 • 8、噬菌体分型试验 • 9、动物试验
细菌学卫生检验种类及标准 4
临床标本常规细菌学检验程序
1. 不染色镜检 2. 革兰、抗酸、墨汁染色
离心涂片，同时增菌
离心沉淀物或増菌培养物
脑脊液
单菌落涂片染色
床边接种
细菌学卫生检验种类及标准
报告单
17
三、穿刺液和引流液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、标本来源：胸腔积液、腹水、心包积液、关节
液、胆汁、鞘膜液深部组织液等 2、标本量：心包积液、关节液为1-5ml，胸腔积
液、腹水为5-10ml 3、收集送检：无菌收集并置于无菌抗凝试管送检
，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌 氧运送培养基内送检，无法立即送检可室温保存。
细菌学卫生检验种类及标准 18
（二）细菌学检查
1、标本处理：①浆液离心沉淀物涂片；②脓液直
接涂片；③含血细胞，加等量蒸馏水破坏红细胞后， 离心沉淀物涂片
2、涂片检查：这类标本因原部位是无菌的，只要
检出细菌即可诊断感染的类型，故直接涂片很重要。 革兰染色：查找一般细菌。抗酸染色：查找结核分枝 杆菌。
3、分离培养及鉴定：离心沉淀物分别接种增菌肉
汤、血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板、厌氧血
琼脂平板。如有细菌生长，需进一步鉴定和药敏试验
后报告。
细菌学卫生检验种类及标准
念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
厌氧菌 拟杆菌、产气荚膜梭菌
细菌学卫生检验种类及标准 10
（一）血液标本的采集与送检 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 例1：亚急性心内膜炎：24h内在三个不同部位采
集3次血标本，两次间隔不少于15分钟，如培养 阴性，就再采3次血标本。 例2：急性脓毒血症：在10分钟内在不同部位采2 ～3次血标本。
细菌学卫生检验种类及标准 12
血培养
一级报告
二级报告
细菌学卫生检验种类及标准
三级报告
“检出***菌”，药敏试验结果； 7天仍无生长现象，报告为“7 天培养无细菌生长”（结核可
培养8周报告阴性）
13
（二）细菌学检验
细菌学卫生检验种类及标准 14
二、脑脊液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1. 采样：腰椎穿刺术无菌采集脑脊液3-5ml，床边接种
标本选择 标本采集与运送 观察标本、前处理
直接涂片
快速检验
分离培养 可疑菌落
增菌培养
形态观察
生化反应
血清学鉴定
结果报告 细菌学卫生检验种类及标准
药物敏感试验
5
细菌学检验报告原则
• 分级报告 • 一级报告：直接涂片染色结果及培养结果 • 二级报告：分离培养及药敏结果 • 三级报告：细菌种属、药敏结果、结果评价和建
第七章 细菌学卫生检验种类及标准
细菌学卫生检验种类及标准 1
主要内容
第一节
体液、分泌物及排 泄物细菌学检验
第二节
各种环境标本细菌学检 验及卫生标准（自学）
细菌学卫生检验种类及标准 2
临 床
第一节
体液、分泌物及排 泄物细菌学检验
检
验
流
确定检查目的和方法
程
正确规范的采集和运送标本
应用良好的检测技术和方法，提供准确的结果或报告
或放入无菌试管中，立即送检（采样到送检不超过1h）；
2.注意保温，不可置冰箱保存，因为会使病原菌 死亡，尤其是脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌及流 感嗜血杆菌；
3、脑脓肿吸出物尚须检测厌氧菌和寄生虫
培养基选择：普通血培养瓶、厌氧血培养瓶、血平皿、
中国蓝平皿、流感嗜细血菌学杆卫生菌检平验种皿类及等标准。
15
细菌学卫生检验种类及标准 9
一、血液标本细菌学检验
种类 常见病原菌 G+球菌 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、
化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌
G+杆菌 结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌
G-球菌 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌
G-杆菌 真菌
大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变 形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜 血杆菌
19
四、尿液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、采集方法：防止尿液被尿道口菌群污染，采
用中段尿采集法、导尿法和膀胱穿刺法采集标本
无菌导尿管采集尿液，在排出15ml尿液后收集，有潜在 引入尿道菌的危险；留置导尿管采尿，先以75%酒精消 毒导管口，用无菌注射器收集10ml；长期留置导尿管患 者，应在更换新尿管时留取尿标本。
细菌学卫生检验种类及标准 20
2、采集时间：通常应采集早晨起床后第一次尿 液，在抗菌药物应用之前采集尿液10-15ml
3、送检：及时送检，室温不超过2h；冷藏不超 过8h；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检。
细菌学卫生检验种类及标准 21
（二）细菌学检查
1、显微镜检查：离心沉淀物涂片。根据临床情
况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋 球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显 微镜直接观察（钩端螺旋体）。
3. 样本采集的量：成人血量5～10ml，婴儿1ml ～2ml，儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时 ，应采集双份量，分别作双相培养(37℃/28℃) 。
4. 样本的送检：尽快，室温 5. 操作：直接采血注入含増菌肉汤的培养瓶或用
不含防腐剂的肝素抗凝管至实验室接种，需同时 做需氧和厌氧培养
，尤其脑
膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和链球菌多见。抗酸染 色：查找结核分枝杆菌。墨汁染色：查找新型隐 球菌。 2．细菌培养：脑脊髓液培养多数需3～4天，在 此期间如有细菌生长，经鉴定报告“××菌”，同 时报告药敏试验结果。
细菌学卫生检验种类及标准 16
议
细菌学卫生检验种类及标准 6
细菌学卫生检验种类及标准 7
无菌原则 正确采 样时间
正确采 样部位
足够样本量
多样性采集 做好记录
细菌学卫生检验种类及标准 8
一、血液标本细菌学检验 二、脑脊液标本细菌学检验 三、穿刺液和引流液标本细菌学检验 四、尿液标本细菌学检验 五、脓液和分泌物标本细菌学检验 六、痰液标本细菌学检验 七、生殖道标本细菌学检验 八、粪便标本细菌学检验
临床感染性疾病的诊断和治疗
细菌学卫生检验种类及标准 3
细菌学鉴定方法
• 1、形态结构检查 • 2、细菌生长特性检查如菌落 • 3、生化试验 • 4、血清学试验 • 5、药敏试验 • 6、细菌毒素检测 • 7、分子生物学检测 • 8、噬菌体分型试验 • 9、动物试验
细菌学卫生检验种类及标准 4
临床标本常规细菌学检验程序
1. 不染色镜检 2. 革兰、抗酸、墨汁染色
离心涂片，同时增菌
离心沉淀物或増菌培养物
脑脊液
单菌落涂片染色
床边接种
细菌学卫生检验种类及标准
报告单
17
三、穿刺液和引流液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、标本来源：胸腔积液、腹水、心包积液、关节
液、胆汁、鞘膜液深部组织液等 2、标本量：心包积液、关节液为1-5ml，胸腔积
液、腹水为5-10ml 3、收集送检：无菌收集并置于无菌抗凝试管送检
，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌 氧运送培养基内送检，无法立即送检可室温保存。
细菌学卫生检验种类及标准 18
（二）细菌学检查
1、标本处理：①浆液离心沉淀物涂片；②脓液直
接涂片；③含血细胞，加等量蒸馏水破坏红细胞后， 离心沉淀物涂片
2、涂片检查：这类标本因原部位是无菌的，只要
检出细菌即可诊断感染的类型，故直接涂片很重要。 革兰染色：查找一般细菌。抗酸染色：查找结核分枝 杆菌。
3、分离培养及鉴定：离心沉淀物分别接种增菌肉
汤、血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板、厌氧血
琼脂平板。如有细菌生长，需进一步鉴定和药敏试验
后报告。
细菌学卫生检验种类及标准
念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
厌氧菌 拟杆菌、产气荚膜梭菌
细菌学卫生检验种类及标准 10
（一）血液标本的采集与送检 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 例1：亚急性心内膜炎：24h内在三个不同部位采
集3次血标本，两次间隔不少于15分钟，如培养 阴性，就再采3次血标本。 例2：急性脓毒血症：在10分钟内在不同部位采2 ～3次血标本。
细菌学卫生检验种类及标准 12
血培养
一级报告
二级报告
细菌学卫生检验种类及标准
三级报告
“检出***菌”，药敏试验结果； 7天仍无生长现象，报告为“7 天培养无细菌生长”（结核可
培养8周报告阴性）
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（二）细菌学检验
细菌学卫生检验种类及标准 14
二、脑脊液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1. 采样：腰椎穿刺术无菌采集脑脊液3-5ml，床边接种
标本选择 标本采集与运送 观察标本、前处理
直接涂片
快速检验
分离培养 可疑菌落
增菌培养
形态观察
生化反应
血清学鉴定
结果报告 细菌学卫生检验种类及标准
药物敏感试验
5
细菌学检验报告原则
• 分级报告 • 一级报告：直接涂片染色结果及培养结果 • 二级报告：分离培养及药敏结果 • 三级报告：细菌种属、药敏结果、结果评价和建
第七章 细菌学卫生检验种类及标准
细菌学卫生检验种类及标准 1
主要内容
第一节
体液、分泌物及排 泄物细菌学检验
第二节
各种环境标本细菌学检 验及卫生标准（自学）
细菌学卫生检验种类及标准 2
临 床
第一节
体液、分泌物及排 泄物细菌学检验
检
验
流
确定检查目的和方法
程
正确规范的采集和运送标本
应用良好的检测技术和方法，提供准确的结果或报告
或放入无菌试管中，立即送检（采样到送检不超过1h）；
2.注意保温，不可置冰箱保存，因为会使病原菌 死亡，尤其是脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌及流 感嗜血杆菌；
3、脑脓肿吸出物尚须检测厌氧菌和寄生虫
培养基选择：普通血培养瓶、厌氧血培养瓶、血平皿、
中国蓝平皿、流感嗜细血菌学杆卫生菌检平验种皿类及等标准。
15
细菌学卫生检验种类及标准 9
一、血液标本细菌学检验
种类 常见病原菌 G+球菌 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、
化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌
G+杆菌 结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌
G-球菌 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌
G-杆菌 真菌
大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变 形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜 血杆菌
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四、尿液标本细菌学检验
（一）标本的采集与送检 1、采集方法：防止尿液被尿道口菌群污染，采
用中段尿采集法、导尿法和膀胱穿刺法采集标本
无菌导尿管采集尿液，在排出15ml尿液后收集，有潜在 引入尿道菌的危险；留置导尿管采尿，先以75%酒精消 毒导管口，用无菌注射器收集10ml；长期留置导尿管患 者，应在更换新尿管时留取尿标本。
细菌学卫生检验种类及标准 20
2、采集时间：通常应采集早晨起床后第一次尿 液，在抗菌药物应用之前采集尿液10-15ml
3、送检：及时送检，室温不超过2h；冷藏不超 过8h；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检。
细菌学卫生检验种类及标准 21
（二）细菌学检查
1、显微镜检查：离心沉淀物涂片。根据临床情
况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋 球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显 微镜直接观察（钩端螺旋体）。