丹红注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究
丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制
丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞（rBMECs）的保护机制。
该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定，建立缺氧4 h损伤模型的同时，丹红注射液（25，50，100 mL·L-1）作用于rBMECs，生化法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平，RT-PCR法检测细胞MMP-9，ICAM-1，P53 mRNA表达水平，透射电镜观察细胞超显微结构变化。
结果表明缺氧使原代培养的rBMECs受到明显损伤，与模型组比较，丹红注射液（50，100 mL·L-1）可显著对抗缺氧造成的损伤，增强SOD活性，降低MDA 水平，明显下调MMP-9，ICAM-1，P53 mRNA的表达，丹红注射液100 mL·L-1能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接，抑制缺氧诱导的细胞凋亡。
从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤rBMECs具有明显的保护作用，其机制与增强细胞抗氧化能力，抑制炎症反应及细胞凋亡有关。
标签：丹红注射液;乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMECs）;缺氧;抗氧化;炎症;细胞凋亡1 材料1.1 动物SD大鼠，雌雄兼用，3～5日龄，由浙江中医药大学动物实验研究中心提供，许可证号SCXK（沪）2008-0016，上海西普尔-必凯实验动物有限公司。
1.2 药品与试剂丹红注射液（菏泽步长制药有限公司，国药准字Z20026866，批号12091021）;M199培养基、胎牛血清（Gibco公司）;D-Hank′s液、Ⅱ型胶原酶、PBS液、FITC标记山羊抗兔IgG、碘化丙锭（PI）、Folin-酚试剂、兔抗鼠Ⅷ因子相关抗原抗体、胰蛋白酶（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）;丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所）;High Pure RNA Isolation Kit，Transcrptor First Stand cDNA synthesis kit（Roche公司）;All-in-OneTM Q-PCR Primer Array（GeneCopoeia公司）;β-actin上游引物5′-CACCCGCGAGTACAACCTTC-3′，下游引物5′-CCCATACCCACCATCACACC-3′;ICAM-1上游引物5′-TCTCATGCCCGTGAAATTATG-3′，下游引物5′-TTGATTCAAAGGAAAGGCTTCT-3′;MMP-9上游引物5′-ATCTGTATGGTCGTGG- CTCTAA-3′，下游引物5′-TGGCTTCCTCCGTGATTCG-3′;P53上游引物5′-CAGCTTTGAGGTTGGTGTTTGT-3′，下游引物5′-ATGCTCTTCTTTTTTGC- GGAAA-3′;其余试剂均为市售分析纯。
丹红注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究
ＣＨＩ Ｓ ＯＵＲＮＡＩ ） ＮＴＥ ＮＥ Ｅ Ｊ （Ｆ Ｉ ＧＲＡＴＩ ＤＩ ＮＥ ＯＮ ＣＡＲ１Ｉ） ， Ｅ ＶＥ ＭＥ ＣＩ ）（ 一 Ｃ ＲＥＢ ／ ＲＯＶＡＳ ＵＩ Ｃ ＡＲ ＳＥ Ｅ Ｍ ａ ｃ ２ Ｏ Ｖｏ ． Ｎｏ ３ ＤＩ ＡＳ ｒｈ ０１ １８ ．
Ａｂｔａ ｔＯｂｅｔ ｅ Ｔｏ ｉｖ ｓｉａｅｔ ｅａ ｇｏ ｅ ｅ ｉ ｅｆｃ ｆＤａ ｈ ｇ ｉｊｃｉｎ ｏ ｈ ｈ ｃ ｍ ｂ ｙ ｝ ｒ ａｌｎｏｃｍｅ ｒｎ ｓｒｃ ： ｊｃｉ ｖ ｎ ｅ ｔ ｔ ｈ ｎ ｉｇ ｎ ｓ ｆｅ ｔｏ ｎ ｍｉ ｎｅ ｔ ｎ ｔｅ ｃ ｉｋ ｅ ｒ ｏ ｃ１ ｉ ｌ ｔ ｉ ｇ ｏ ｏｏ ａ ｍｂ ａ ｅ
管 内膜 损 伤 后 的 血 清和 内膜 损 伤 丹 红 治 疗 组 也 分 别 强 于 血 管 内膜 未损 伤 时 。 关键 词 ： 红 注 射 液 ； 管 生 成 ； 胚 绒 毛 尿 囊膜 ； 丹 血 鸡 内膜损 伤 中 图分 类号 ： ２ ５ ５ Ｒ ８ ． Ｒ ８ ． ２ ９ ５ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编号 ： ６ ２ ３ ９ ２ １ ） ３ Ｏ １ ０ １ ７ —１ ４ ｛ ０ ０ Ｏ 一 ３ Ｏ一 ２ 、 － ．
暴 露 Ｃ Ｍ 建 立模 型 。将 ６ Ａ ０枚 存 活 鸡胚 随机 分 为 生理 盐水 组 （ 组 ） 正 常 血 清 组 （ Ｎ 、 Ｃ组 ） 丹 红 注 射 液 治疗 组 （ 组 ） 血 管 内膜损 伤 、 Ｔ 、 组 （ 组 ） 血 管 内膜 损 伤 后 丹 红 注射 液 治 疗 组 （Ｔ 组 ） Ｉ 、 Ｉ 以及 血 管 内皮 生 成 因子 （ ＧＦ ２ ｇ ｍＩ 组 （ 组 ） 每 组 １ ＶＥ ， ０ ｆ ／ ） Ｖ ， ０枚 鸡 胚 。新 西 兰 大 白兔 腹 主 动脉 用球 囊导 管损 伤 建 立 血 管 内膜 损 伤 模 型 ， 红 注 射 液 治 疗 组 及 血 管 内膜 损 伤 后 丹 红 注 射 液 治 疗 组 于 大 白 兔耳 缘 静 丹 脉 注射 丹 红 注射 液 ２ ｎＬ ｋ ， 组 连 续 ７ ｄ后 取 血 清 。 第 ８天 ， 鸡 胚 Ｃ Ｍ 上放 一 直 径 为 ５ｉｍ 的 滤 膜 作 为 载体 ， 剐 加 样 ５／ １ ／ｇ 各 在 Ａ ． Ｂ 分 ａ Ｌ，
丹红注射液作用机制的研究进展
丹红注射液作用机制的研究进展【摘要】丹红注射液的主要成分是丹参、红花等药理成分，具有抗动脉粥样硬化，抑制血小板聚集，改善血液流变学，促进纤维蛋白溶解，抗凝等作用。
本文将对丹红注射液的作用机制的研究现状及进展作一综述。
【关键词】丹红注射液；作用机制丹红注射液的主要成分是丹参、红花。
丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的干燥根；红花为菊科1～2年生草本植物红花的干燥花。
丹参通血脉，散瘀结，是主药；红花化瘀血，通经络，为辅药。
现代药理学研究证实，丹红注射液具有抗动脉粥样硬化，抑制血小板聚集，改善血液流变学，促进纤维蛋白溶解，抗凝等作用。
本文现对丹红注射液的作用机制各方面的研究现状及进展作一综述。
1抗动脉粥样硬化1.1 降低血脂徐小明[1]等采用胆固醇高脂饮食喂养复制家兔动脉粥样硬化模型，观察到丹红注射液可使动脉粥样硬化家兔的血清总胆固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显下降。
管高峰[2]等实验证实，丹红注射液不仅对实验性对动脉粥样硬化(AS)家兔的血清TC和LDL-C具有降低作用，而且斑块／内膜面积比及内膜／中膜厚度比也分别较对照组下降了26.71%和38.05%(P＜0.05)，减轻了AS斑块的形成，实验结果提示：丹红注射液对实验性AS具有明显抑制作用。
1.2 减少血清高敏C反应蛋白(hs—CRP) hs—CRP是炎性反应的一个敏感检测指标，也是预测心血管疾病危险性的一项独立而较敏感的指标，在动脉粥样硬化(AS)慢性炎症过程中，必然伴有hs—CRP含量的升高。
管高峰[3]等实验证实，丹红注射液能显著降低实验性AS家兔血清hs—CRP而发挥抗AS作用；王召亿[4]等研究提示，丹红注射液在治疗脑梗死的过程中，通过降低血清hs-CRP水平，抑制急性脑梗死后血管炎性反应，从而达到改善脑梗死所致的神经功能障碍的目的。
廖奕华等观察发现，丹红注射液能显著降低不稳定型心纹痛患者血清hs一CRP水平，改善患者预后。
1.3保护血管内皮细胞管高峰[2]等实验发现，丹红注射液通过调节血管内皮细胞生成和释放血清一氧化氮(NO)和血浆内皮素(ET)，保护血管内皮细胞功能，进而产生抗AS作用。
鸡胚胎在生命科学研究中的应用
文章编号： １０００－１３３６（２０１０）02－0207-04鸡胚胎在生命科学研究中的应用满朝来 刘玉芬 李 响哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，哈尔滨 １５００２５摘要：鸡作为优秀的模式动物在生命科学研究中的作用日益受到人们重视，其中以鸡胚胎的贡献尤为突出。
本文简要综述了鸡胚胎在发育生物学、肿瘤、再生、神经生物学和胚胎干细胞等研究领域中的应用，同时对鸡基因组和鸡胚胎的研究方法也进行了简单探讨。
关键词：鸡；胚胎；发育生物学；肿瘤；再生；免疫中图分类号：Ｑ９５－３收稿日期：２００９－１０－１５作者简介：满朝来（１９７６－），博士，通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｎｃｈａｏｌａｉ＠１２６．ｃｏｍ；刘玉芬（１９７２－），博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｙｕｆｅｎ１９７２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ；李响（１９８９－），本科生，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｘｉａｎｇ８９５１１＠１２６．ｃｏｍ鸡以其独特的生物学特性已经成为研究许多生物学问题的重要模式生物。
作为一种中间进化模式生物介于哺乳动物和低等脊椎动物之间，鸡被人们认为是非哺乳动物中研究遗传学最重要的模式生物之一。
另外，由于鸡的胚胎发育起源于卵而非子宫，便于体外操作与观察，因此鸡也成为胚胎生物学和发育生物学研究中的优秀动物模型之一。
目前，鸡已经成为发育生物学、免疫学、遗传学、病毒学、癌症和细胞生物学等学科的重要实验系统，并且获得了许多重要的研究成果。
本文主要以鸡胚胎为探讨对象，简要综述鸡胚在生命科学研究中的应用和重要。
１． 鸡的基因组学近年来鸡的基因组学发展迅速，已完成的鸡基因组测序结果表明：鸡与哺乳动物在３．１亿年前具有共同的祖先，在进化距离上没有被其他基因组所涵盖，这使我们能够更好地理解基因及其调控序列、基因组／染色体组型进化和保守的规律性。
作为鸟类中第一个被测序的物种，鸡基因组测序必将会对禽类功能基因组时代的各个研究方面起到巨大的推动作用［１］，也必然对禽类中控制重要性状基因的分离和鉴定有所帮助。
试论中医药对血管新生促进或抑制作用的研究进展
试论中医药对血管新生促进或抑制作用的研究进展摘要：中医在血管新生的治疗中积累了丰富经验，研究发现常用的一些中药复方是通过影响血管新生来发挥药效的，其作用机制主要体现在对血管新生的正反两方双向调节。
本文经过研究总结，归纳了近年来中医药对血管新生调节促进作用的相关资料，并展开探讨，以期为业内相关学者提供借鉴。
关键词：中医药；血管新生；作用引言：血管新生包括血管生成和血管发生，前者是组织中既存的血管内皮细胞移行并增生，形成新的血管网；后者是由内血管内皮前体细胞分裂、增殖，产生大量成熟的内皮细胞，再经过有序排列形成新的血管中。
人为给予刺激以促进缺血周围组织的血管新生和侧支血管形成，使缺血得到改善的治疗方法称为治疗性血管新生。
目前治疗性血管新生的西医治疗方式主要有直接应用生长因子、基因治疗、骨髓移植等方法。
一、治疗性血管新生的机理与生长因子生长因子能够促进血管新生已形成共讽，目前研究及应用最多的是、VEGF、和、bFGF。
研究证实，它们可以通过促进vecc分裂、增殖，形成新的血管；抑制凋亡蛋白的表达，维持内皮细胞存活；降解基底膜，升高血管通透性以利于VEC 迁移等途径促进血管新生。
二、中医药在治疗性血管新生的新发展目前，中医药治疗心肌梗死、脑梗死、肢体缺血及骨折等基础及临床研究已经在探讨对血管新生的作用。
这些研究表明，中医药可通过上调相关细胞因子如血管内皮生长因子等的表达，进而促进内皮细胞的增生，从而促进血管新生，这也是中医药促进血管新生的机制之一。
在不同的组织中，同一种中药复方表现出促血管新生和抗血管新生两种截然相反的作用，被同时应用于缺血性疾病和肿瘤的治疗中。
如王大英等研究表明，麝香保心丸能够促进血管新生从而降低大鼠心肌梗死面积，而章忱等研究发现其能够明显抑制小鼠肿瘤组织的血管生成。
（一）促进缺血心肌血管新生，减小梗死面积缺血性心脑血管疾病和肿瘤严重地威胁着人类的生命和健康，血管新生其中发挥着重要作用，促进和抑制血管新生已分别成为治疗缺血性心脑血管疾病和抗肿瘤的新策略。
血管生成实验模型研究进展
血管生成实验模型研究进展吴家明1,陆 茵1,2,郜 明1,张伟伟1(1.南京中医药大学中医药研究院,江苏南京 210029;2.江苏省方剂研究重点实验室,江苏南京 210029)收稿日期:2007-09-21,修回日期:2007-11-01基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30371727,30772766);江苏省自然科学基金资助项目(No BK2003113)作者简介:吴家明(1980-),男,硕士生,研究方向:肿瘤血管生成与抗肿瘤转移研究,E 2mail:nj w ujia m ing@;陆 茵(1963-),女,教授,博士生导师,研究方向:肿瘤血管生成与抗肿瘤转移研究,通讯作者,Tel:025286798154,E 2mail:luyingreen@中国图书分类号:R 205;R 332;R 3632332;R 36413文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2008)01-0011-04摘要:抗血管生成已经成为治疗肿瘤转移、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的重要策略之一。
血管生成模型作为一种研究工具在探讨血管形成机制、发现促进或抑制血管生成药物等研究中发挥十分积极的作用。
如何寻找适合的血管生成模型是研究人员在研究中常遇到的问题。
该文就主要常用模型做较全面的介绍,并对其优缺点进行评价。
关键词:血管生成;模型 血管生成(angi ogenesis )是指在原有的毛细血管和(或)微静脉基础上通过血管内皮细胞的迁移和增殖,从已存在的血管处以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛细血管为主的血管系统过程[1]。
血管生成是许多促进或抑制血管生成的分子参与调节的一个平衡过程[2]。
血管生成过多与肿瘤、糖尿病性视网膜病变等疾病有关[3],抑制血管生成已经成为治疗这些疾病的重要策略。
因此寻找血管生成抑制剂成为研究热点。
血管生成研究需借助血管生成模型进行,血管形成的许多过程都可以在血管生成模型中模拟完成,包括内皮细胞增殖、迁移、毛细血管网状结构的形成等。
丹参注射液含药血浆及血清对CAM血管生成的影响
收稿日期 ： ２００７－ １１－ ２１ 基 金 项 目 ： 国 家 “８６３”科 技 攻 关 项 目 （ ２００３ＡＡ２Ｚ３２５０） ， 教 育 部 教 学 改 革 科 研 项 目 （ １２９２Ｂ１６０３１） 作 者 简 介 ： 贺 龙 刚 （ １９８２— ） ， 男 ， 助 教 ， 医 学 硕 士 ， 主 要 从 事 中 药 有 效 成 分 的 药 效 学 研 究 。
丹参注射液含药血浆及血清对 ＣＡＭ 血管生成的影响
贺龙刚 １， 周 丽 ２， 黄 枚 １， 吴符火 １ （ １．福 建 中 医 学 院 药 学 系 ， 福 建 福 州 ３５０１０８； ２．福 建 中 医 学 院 中 医 系 ， 福 建 福 州 ３５０１０８）
关键词： 鸡胚绒毛尿囊膜； 血管增生； 血浆； 血清； 丹参注射液 中 图 分 类 号： Ｒ２８５．５ 文 献 标 识 码： Ａ 文 章 编 号 ： １００４－ ５６２７（ ２００８） ０１－ ００２８－ ０３
（ Ｐ＜０．０５） ； 空白血浆组与空白血清组比较， 血管数
明显减少（ Ｐ＜０．０５） ； ６．０ ｇ ／ｋｇ、３．２ ｇ ／ｋｇ 剂量血浆组
与同剂量血清组组比较， 血管数无明显增加 （ Ｐ＞
０．０５） 。Ｘ 代表给药浓度， Ｙ 代表血管数， 计算对数给
药浓度－ 血管数回归方程，射液含药血浆及血清对 ＣＡＭ 血管生成的影响
２９
微孔滤膜过滤除菌。对 ＣＡＭ 血管生成的影响： 选 择０．４５ μｍ 混合纤维素滤膜为载体， 用打孔器制成 直径 ６ ｍｍ 的 小 圆 片 ， 蒸 馏 水 浸 泡 后 灭 菌 干 燥 备 用。轻轻撕掉透明胶带纸， 将载体置于正对观察窗 的 ＣＡＭ 表面的血管最少处， 然后在载体中 央分别 加入供试样品 ２０ μｌ， 每日 １ 次。加药后， 用无菌贴 膜 封 窗 ， 标 记 后 再 放 入 ３７．８℃的 孵 箱 。 加 药 ３ ｄ 后， 每蛋注入 １∶１ 的 甲 醇 、 丙 酮 等 量 混 合 固 定 液 ２．５ ｍｌ， 室温下固定 ２０ ｍｉｎ， 待 ＣＡＭ 血管内的血液 凝 固 后 ， 揭 去 封 窗 的 透 明 膜 ， 剪 除 ＣＡＭ 水 平 以 上 的 蛋 壳 ， 以 滤 膜 载 体 为 中 心 把 ＣＡＭ 剪 下 ， 放 入 盛 有少量水并铺有滤纸的平皿内展开， 阴干， 连同滤 纸保存［３］ 。 １．２．４ ＣＡＭ 模型的血管测定： 以滤纸 为背景， 由 专人观察裸眼可及的载体周围的血管数并进行比 较， 在自然光线下， 将佳能 Ａ７５ 数码相机固定在三 角架上， 禁用闪光灯， 采用近距离模式拍照， 放大 ２．３ 倍。观察计数， 分析比较各组血清和血浆对血 管生成的影响。ＣＡＭ 自然状态的血管生长呈叶脉 样， 以被检物为中心， 周围血管放射状朝向被检物 的生长状态， 称为血管辐辏。主干血管向载体盘的 弯曲和靠近， 称之为血管的吸引。实验部位边缘血 管， 凡属趋向性生长的血管， 即以载体为中心发 出 ， 与 滤 膜 半 径 的 夹 角 小 于 ４５°者 均 予 计 数 ； 而 穿 行、绕行的血管则不算在内［４］ 。 １．３ 统 计 学 处 理 ： 所 有 数 据 以 ｘ±ｓ 表 示 ， 用 ＳＰＳＳ １３．０ 统计软件包处理数据， 采用单因素方差分析。 ２ 试验结果 ２．１ 鸡 胚 发 育 和 存 活 情 况 观 察 ： 鸡 胚 在 温 度 ３７．８℃、湿度 ４０％～６０％条件下正常发育。照卵灯连 续观察胚膜发育情况， 依次见到樱桃珠（２ 日胚） 、 蚊 虫 珠 （ ３ 日 胚 ） 、蜘 蛛 胚 （ ４ 日 胚 ） 等 特 征 ， 绒 毛 尿 囊膜生长情况与孵育时 间相吻合［５］。胚 胎活动活 跃 ， 动 脉 血 管 搏 动 有 力 ， ＣＡＭ 透 明 ， 血 管 丰 富 ， 脉 络清晰。 ２．２ 各组对鸡胚血管生成的影响： 通过肉眼观 察， 大多数空白各组向载体生长的血管少而细， 分 布零乱， 甚至产生视觉可见的无血管区域。但空白 血清组较空白血浆组周围血管密度增加， 血管反 应较重。用药各组有明显的血管辐辏， 以载体为中 心， 尿囊膜血管大量向载体生长集中， 排列成车辐 状， 说明丹参注射液能显著促进鸡胚绒毛尿囊膜 血 管 的 新 生 。血 浆 组 较 血 清 组 血 管 密 度 明 显 增 加 ， 分支增多， 管径增粗， 且与剂量呈正相关。见表 １、 表 ２ 及图 １、图 ２、图 ３。
丹红注射液论文：丹红注射液的某些临床应用
丹红注射液论文：丹红注射液的某些临床应用[关键词] 丹红注射液；临床应用丹红注射液由丹参和红花组成，具有理气活血化瘀通脉舒络的功效。
临床广泛应用于心脑血管病等多种疾病，取得了良好效果。
现就丹红注射液在临床中的某些应用综述如下。
1 脑血管疾病1.1 脑梗塞巴瑞琼等将400例脑梗塞患者随机分为两组，治疗组300例，采用丹红注射液20ml加5%葡萄糖或0.9%氯化钠100-500ml中缓慢静脉滴注每天一次。
对照组予复方丹参注射液20ml加入0.9%氯化钠100-500ml静脉滴注，两组其他基础治疗相同。
结果治疗组总有效率89.33%。
对照组72%。
对血液流变学的影响，治疗组血液流变学各项指标有所下降，表明治疗组具有改善血液流变学的作用。
血浆纤维蛋白原、红细胞压积两项与对照组比较有显著性差异。
[1]方岩等治疗脑梗塞，所有患者均予常规治疗。
治疗组用丹红注射液30ml加入生理盐水250ml静脉滴注，对照组用曲克芦丁420mg加入生理盐水250ml静脉滴注，均连续14天。
根据功能缺损及病残程度进行疗效评价。
治疗组有效率92%，对照组70%。
[2]脑梗塞的形成是局部脑动脉导致相应的脑组织急性缺血缺氧坏死，不及时治疗可致周围仍存活的半暗带神经元死亡，加重神经功能缺损。
丹红注射液可扩张血管，防止血栓形成，改善局部血流，有助于减少自由基，减轻脑水肿，防止迟发型神经功能缺损[3]。
1.2 椎-基底动脉供血不足方岩等治疗椎-基底动脉供血不足120例，同时与复方丹参注射液对照，两组治愈率有显著差异，48小时内起效时间、血流速度改善均优于对照组。
认为丹红注射液具有降低纤维蛋白原、降低血黏度、抑制血小板聚集、抗凝等作用，可改善微循环、抑制栓子形成。
[4]高春光等将62例椎-基底动脉供血不足性眩晕患者随机分为两组，治疗组用丹红注射液20ml加生理盐水静脉滴注，对照组用曲克芦丁360mg静脉滴注，均连续治疗10天，未用其他药物，治疗组总有效率100%,对照组90.3%。
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丹红注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究唐昱;盛国太;钟志英;葛郁芝【摘要】目的探讨丹红注射液对鸡绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响.方法种蛋在(37.5±0.5)℃条件下孵育,第7天开窗暴露CAM建立模型.将60枚存活鸡胚随机分为生理盐水组(N组)、正常血清组(C组)、丹红注射液治疗组(T组)、血管内膜损伤组(I组)、血管内膜损伤后丹红注射液治疗组(IT组)以及血管内皮生成因子(VEGF,20 μg/mL)组(V组),每组10枚鸡胚.新西兰大白兔腹主动脉用球囊导管损伤建立血管内膜损伤模型,丹红注射液治疗组及血管内膜损伤后丹红注射液治疗组于大白兔耳缘静脉注射丹红注射液2 mL/kg,各组连续7 d后取血清.第8天,在鸡胚CAM上放一直径为5 mm的滤膜作为载体,分别加样5 μL,每日1次,连续3 d,第11天取CAM,数码相机拍照后平铺于载玻片上,计数载体周围血管数目及滤膜周围0.5 cm范围内的血管分支点数并进行比较.结果比较CAM周围血管数目,T组(31.80±3.08)条与C组(28.40±3.75)条比较,血管以载体为中心呈辐辏状生长,血管总数明显增多,具有统计学意义;I组(47.30±3.27)条与C组相比较,载体周围血管数量明显增多,具有统计学意义;与IT组(47.60±3.89)条相比较,血管总数无统计学意义.结论含丹红注射液的兔血清能够明显促进CAM上血管生成,血管内膜损伤后的血清和内膜损伤丹红治疗组也分别强于血管内膜未损伤时.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2010(008)003【总页数】2页(P310-311)【关键词】丹红注射液;血管生成;鸡胚绒毛尿囊膜;内膜损伤【作者】唐昱;盛国太;钟志英;葛郁芝【作者单位】江西省人民医院,330006;江西省人民医院,330006;南昌大学第四附属医院;江西省心血管病研究所【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R289.5血管生成在缺血性疾病的创伤愈合、组织修复和再生及侧支循环建立过程中发挥着重要作用[1,2]。
探讨血管新生的发生机制和研制促进血管生成的治疗方法或药物已经成为近年来医学研究的热点之一。
丹红注射液具有抗动脉粥样硬化、缩小心肌梗死面积、抗氧化自由基、减轻心肌肥厚、改善血管内皮功能等作用[3]。
本研究应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察丹红注射液对血管生成的影响,进一步探讨活血化瘀中药的作用机制。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物新西兰大白兔,体重2.0 kg～2.5 kg,由南昌大学医学院医学实验动物科学部提供。
新鲜白皮种蛋重50 g～60 g,由江西省种鸡厂提供。
1.1.2 药品试剂与仪器重组人血管内皮生长因子(VEGF165,英国 Peprotech公司生产),丹红注射液(商品名:倍通,济南步长制药有限公司),孔径0.45 μ m的混合纤维素微孔滤膜(上海华美生物工程公司)。
数码相机(日本索尼公司)。
1.2 实验方法1.2.1 实验分组将60枚存活鸡胚随机分为生理盐水组(N组)、正常血清组(C组)、丹红注射液治疗组(T组)、血管内膜损伤组(I组)、血管内膜损伤后丹红注射液治疗组(IT组)以及血管内皮生成因子(VEGF,20 μ g/mL)组(V组),其中N 组为阴性对照组,I组为阳性对照组,每组10枚鸡胚。
1.2.2 模型制作血管内膜损伤模型的建立,新西兰大白兔戊巴比妥钠(30 mg/kg～50 mg/kg)静脉麻醉,无菌条件下,分离右侧髂总动脉,用2.5F球囊导管经右髂动脉逆行插入腹主动脉,(2～4)个大气压下,来回拖拉3次,损伤兔腹主动脉约5 cm,再结扎右髂动脉,缝合皮肤,术后每天给予青霉素8×105 U,连续 5 d。
CAM模型的制作,新鲜白皮种蛋0.01%苯扎溴铵擦洗消毒后放入37.5℃±0.5℃恒温箱中孵育,孵至第7天,75%酒精消毒种蛋大头端及开窗,滴加2滴生理盐水使CAM下陷,与壳膜分离,制成假气室。
开窗后第2天揭开透明胶,将直径为5 mm的混合纤维素微孔滤膜小碟放于两条前卵黄静脉之间的相对无血管的 CAM 上,分别加5 μ L各待测物,每24 h加1次,连续加3 d。
孵育第11天,揭去透明胶,向假气室内加入10%甲醛,固定20 min,剪下CAM,平铺于加有固定液的玻璃平皿中继续固定,数码相机拍照,并将CAM平铺于载玻片上,阴干保存。
1.2.3 血清的制备丹红注射液治疗组及血管内膜损伤后丹红注射液治疗组均于大白兔耳缘静脉注射丹红注射液2 mL/kg,共治疗7 d。
正常血清组和血管内膜损伤组注射等剂量的纯净水。
第8天从兔耳缘静脉采取静脉血4 mL,在无抗凝剂的试管中离心,取血清并分装,-20℃保存备用。
1.2.4 血管计数在自然光线下,以虑纸为背景,用数码相机拍照,在显微镜(×10倍)下计载体边缘的血管数目。
根据管径将血管分为3类:＞0.1 mm为大血管;0.1 mm～0.05 mm为中血管;＜0.05 mm为小血管。
凡属趋向性生长的血管,即以载体为中心发出,与滤膜半径的夹角小于45度者均予计数。
计数载体周围0.5 cm内的血管分支点数。
1.3 统计学处理实验数据以均数±标准差(±s)表示,用SPSS 13.0统计软件处理数据,方差齐采用组间t检验,方差不齐采用q检验进行统计分析。
2 结果2.1 鸡胚发育观察鸡胚在温度37.8℃、湿度40%～70%条件下正常发育。
通过照卵灯连续观察胚膜发育情况,可见樱桃珠(2日胚)、蚊虫珠(3日胚)、蜘蛛胚(4日胚)等特征,绒毛尿囊膜透明,血管丰富,脉络清晰,生成情况与孵育时间相吻合。
2.2 各组对鸡胚血管生成的影响生理盐水组载体周围血管数量较少,呈正常的树枝状分布。
治疗组血管以载体为中心呈辐辏状生长,血管数量明显增多。
与生理盐水组比较,正常血清组血管生成数量无明显差异。
血管VEGF组血管生成数量明显多于生理盐水组及正常血清组丹红注射液治疗组血管生成数明显高于正常血清组,与血管VEGF组相似。
血管内膜损伤后血清组血管生成现象与VEGF相似,血管以载体为中心呈辐辏状生长,且可见血管吸引现象。
血管生成数量不仅明显多于正常血清组,而且较血管VEGF组也明显更多,大、中血管数也较正常血清组及血管VEGF 组明显增多。
然而,血管内膜损伤后丹红注射液治疗组与血管内膜损伤组相比,两组血管生成数量无统计学意义。
详见表1。
表1 各组CAM上载体周围的血管计数比较(±s)条组别大血管中血管小血管血管总数生理盐水组1.5±0.5 3.5±1.1 20.4±3.9 25.4±3.9正常血清组2.2±1.0 4.5±0.9 21.4±3.2 28.6±3.2血管VEGF组3.6±0.91) 4.9±1.2 24.3±2.433.9±3.1丹红注射液治疗血清组3.0±1.02) 4.6±1.2 24.1±2.7 31.8±3.0内膜损伤血清组6.7±1.22) 6.1±1.52) 25.9±2.22) 38.7±3.1内膜损伤丹红治疗组9.8±1.83) 10.5±2.94) 19.6±5.6 39.1±3.5与正常血清组比较,1)P＜0.05;与血管VEGF组比较,2)P＜0.01;与丹红注射液治疗血清组比较,3)P＜0.01;与内膜损伤血清组比较,4)P＜0.053 讨论丹红注射液为丹参和红花的提取物,具有行气活血、解郁化瘀、养血通脉的功效。
本研究采用丹红注射液直接静脉给药取血,避免了传统给药途径所造成的外界因素对试验结果的影响,同时也较好地控制了血药浓度。
慢性缺血性心脑血管疾病因供氧和需氧之间失去平衡,如能促进新生血管生成,可以增加细胞血液供应,改善功能,减少细胞的凋亡。
本实验观察到血管内膜损伤后兔血清具有明显的促血管生成作用,其效应好于20 μ g/mL浓度的VEGF。
实验表明血管内膜损伤可以通过机体动员作用,产生多种促血管生长因子,如:VEGF、碱性成纤维生长因子(bFGF)是血小板生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)等多种细胞因子[4]。
血管损伤兔血清可明显促血管生成,作用与促血管生长因子的浓度明显增高有关。
含丹红注射液的兔血清具有明显的促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用。
血管生成受到多种生长因子调节,其中VEGF和bFGF是血管生成过程中的两个最重要的生长因子。
它们在诱导血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞表达抗凋亡蛋白,动员骨髓中的内皮祖细胞进入外周循环并定位到缺血组织等方面发挥重要作用[5,6]。
本实验兔血管内膜损伤后,丹红注射液治疗组呈现更为明显的促血管生成作用。
究其原因,可能与血管损伤[7]及切口愈合[8,9]激活机体自身产生的多种促血管生长因子具有强大的促血管新生作用,而丹参多酚酸盐是丹参的水溶性有效活性部位,对培养的人单核细胞通过对VEGF、bFGF释放及其mRNA的表达促进作用,促进内皮细胞迁移等机制有关[5]。
为阐明这一点,在血管损伤后更长的时间段内采取血清进行研究,可望得到更有价值的资料。
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