BioRad凝胶成像分析仪-PPT
凝胶成像系统的使用方法
凝胶成像系统的使用方法凝胶成像系统（gel imaging system）是一种用于电泳凝胶图像获取和分析的仪器。
它利用荧光或者化学发光等技术，将凝胶上DNA、蛋白等生物分子的分布图像化，并可以进行定量和定性的分析。
下面是凝胶成像系统的使用方法：1.准备工作：a.确保凝胶室和电源等设备处于正常工作状态。
b.准备与实验相匹配的荧光染料或发光底片。
c.打开成像软件并连接相机和计算机。
2.样本加载：a.准备好电泳完的凝胶。
b.将凝胶放入凝胶室，保证凝胶与成像仪的光学系统对位。
c.打开凝胶室，将凝胶放置在模板上，并用盖板覆盖好。
d.打开相机和荧光灯或化学发光装置，让其与凝胶进行相机系统的调试。
3.图像捕获：a.打开成像软件，选择需要的图像捕获模式（荧光或化学发光）。
b.根据实验需求设置合适的曝光时间和光强度。
c.在软件中点击进行图像捕获，等待图像生成。
d.确认图像质量，并检查是否有任何不良效果（如过曝或欠曝）。
4.图像处理：a.在成像软件中进行图像处理，如亮度、对比度和色彩平衡的调整，背景去除等。
b.根据需要在图像中标注和测量分子带或点。
c.使用相对分子量标准品或分子量估算工具进行标准品校正和分子量计算。
5.数据分析：a.根据实验目的选择合适的数据分析方法，如定量分析或比较分析。
b.使用软件中的工具计算分子带的相对表达量或相对分子量。
c.根据需要创建图表、图像或报告来呈现分析结果。
6.数据保存和管理：a.将图像和分析数据保存到计算机或外部存储设备中。
b.给保存的文件起一个有意义的名称，并在文件名中包含相关信息（如实验日期、样品名称等）。
c.建立一个合适的数据管理系统，确保数据的安全和可追溯性。
7.清洁和维护：a.在使用前，确保仪器的清洁和消毒工作已经完成。
b.在使用后，及时清理凝胶室、过滤器和光学元件等部件。
c.按照仪器的维护手册进行定期的用户维护和保养，包括更换灯泡、检查滤光片和清洁镜面等工作。
以上是凝胶成像系统的使用方法，其中包括准备工作、样本加载、图像捕获、图像处理、数据分析、数据保存和管理以及仪器的清洁和维护等步骤。
[课件]PCR仪和凝胶成像系统PPT
![[课件]PCR仪和凝胶成像系统PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/e808c626cc1755270622081f.png)
EB染色应用于双Marker DNA琼脂糖凝胶电泳成像
泸州医学院药理毒理研究室
SYBR Green荧光染料应用于NA琼脂糖凝胶电泳的成像
泸州医学院药理毒理研究室
考马斯亮蓝染色玉米种 子蛋白质SDS-PAGE电 泳的凝胶成像
微孔板荧光成像
泸州医学院药理毒理研究室
ECL发光底物检测小鼠BSA 蛋白的蛋白免疫印迹 （Western Blot）的成像
10 X PCR反应缓冲液 2.5 μL 25mmol/L MgCl2 10mmol/L dNTP 10μmol/L 引物1 2.0μL 1.0 μL 1.0 μL
10μmol/L引物2
质粒DNA Taq 水补充至
1.0μL
1.0 μL 0.1 μL(5U) 25.0 μL
泸州医学院药理毒理研究室
2.将反应体系放到PCR仪中扩增，PCR反应程序设置为 ⑴94~96℃ 30’’-3’ 25-35 个循环 ⑶45-65℃ 30’’-1’ ⑷72℃ n’ ⑹72℃ ⑺4-10℃ 3-7’ 保存 ⑵94℃ 30’’ 预变性（使模板充分变性） 变性 复性（使引物与模板充分退火） 延伸 (按1’扩增1kb计算） 总的延伸（使产物延伸完整）
泸州医学院药理毒理研究室
原位PCR(In situ PCR)
原位PCR是指在组织或细胞标本片上直接进行PCR ，对细胞中的靶DNA进行扩增，通过掺入标记基团 直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。可分为 直接法和间接法。 基本步骤：组织切片或细胞固定→蛋白酶消化→原 位PCR扩增→冲洗→产物检测 优点：灵敏度高，可进行细胞内定位
英国Techne多功能型 PCR仪TC-412
泸州医学院药理毒理研究室
凝胶成像系统操作方法
凝胶成像系统操作方法凝胶成像系统是一种用于分离、检测和分析蛋白质和核酸的实验方法。
该系统主要由凝胶电泳仪和成像仪组成。
下面将详细介绍凝胶成像系统的操作方法。
操作前准备：1. 将凝胶电泳仪和成像仪放置在平稳的桌面上，并接通电源插座。
注意确保电压稳定并符合设备要求。
2. 准备电泳缓冲液，注意根据实验目的选取合适的电泳缓冲液，如TAE缓冲液或TBE缓冲液。
3. 准备样品，根据实验需要将待测样品与适量的DNA标记物混合，并使之前处理均匀。
步骤1：电泳胶制备1. 将所需的琼脂糖粉末称取至适量，加入适量的电泳缓冲液中，充分搅拌溶解。
2. 将溶解后的琼脂糖溶液倒入电泳仪的平板中，并尽量排除气泡。
3. 安装电泳槽盖，使其与电泳仪平板密封。
步骤2：样品加载1. 将混合好的样品分别注入电泳槽的样品孔中。
注意不要滴漏液体到孔洞外部，保持样品孔里的液滴形状。
2. 加载样品后，将电泳槽盖盖好，确保样品孔与电极相连。
3. 打开电泳电源，设置合适的电压和时间参数，开始电泳实验。
步骤3：电泳操作1. 根据实验需要，选择合适的电压和电流进行电泳。
一般而言，较大的DNA 片段需要较低的电压和电流，较小的DNA片段则需要较高的电压和电流。
2. 等待电泳完成，根据DNA片段大小和设备要求，通常电泳时间在30分钟至数小时不等。
3. 电泳过程中，可以根据需要适时检查凝胶染色情况。
凝胶染色可以使用乙溴化乙锭溶液，并照射紫外线灯进行荧光成像。
步骤4：成像操作1. 电泳完成后，将凝胶取出，并将其放置在成像仪的托盘上。
2. 打开成像软件，在电脑上连接成像仪，选择合适的参数设置，如荧光通道、曝光时间等。
3. 确保样品准确对位，开始成像。
一般情况下，成像仪会自动调整荧光强度和对比度。
4. 成像完成后，可以保存图像，进行图像处理和分析。
操作注意事项：1. 操作电泳系统时，应确保安全，并遵守实验室规定的操作规程。
2. 在操作前，应检查设备和试剂是否处于良好状态，并及时更换或修复损坏的设备和试剂。
Bio-Rad凝胶成像分析仪PPT课件
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显
更
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改
将分 将分 将分
数
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析表ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ析表 析表
据
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复制 导出 导出
选
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到剪 到文 到EXCEL
项
方
切板 件
向
3.3.2.4 分子量分析
点击“分析工具箱”中的“MW分析工具”，在标准项下，点击“更改”，选择 所需的“分子量标准”，选择“标准泳道”，点击“分析表”，即可查看所要检测的 蛋白的分子量，通过“主窗口工具栏”的“标准曲线”查看标准曲线、“报告栏”查 看报告。
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3.2.2 此时可以点击主窗口工具栏的“快照”或“保存”，分别保存照片和软件格式，一边
日后查看或分析。
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3.3 图像分析
3.3.1 自动分析
点击左侧“分析工具箱”下方的“自动分析”，进行“检测设置”和“分子量分析设置” 点击“确定”，完成对图像的自动分析。
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3.3.2 手动分析 3.3.2.1 点击左侧“分析工具箱”下方的“图 像工具”，可以对图像进行“水平”和“垂直” 的翻转，“向左90°”、“向右90°”和“自定 义”的旋转，以及“裁切”、“逆变数据”、 “合并”等操作。
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3.3.2.5 定量工具
定量工具包括“相对定量”和 “绝对定量” 。在“相 对定量”里我们选用泳道5的1号条带为参考条带，其被定 义为“1”，其余条带依次得出相对结果。
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3.3.2.5 定量工具——“绝对定量”
通过选择已知标准品浓度的条带（至少两个以上，以R表示），并设定合适 的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标条带的绝对浓度，具体数据可以查看 分析表。
背景扣除方法里的“局部”是通过我们所圈选的未知 条带和标准条带的像素密度总和来进行背景值的扣抵； “全局”是通过整张胶（膜）的背景平均的密度来进行背 景值的扣抵。
Bio-Rad凝胶成像分析仪教学提纲
3.3.2.5 定量工具
定量工具包括“相对定量”和 “绝对定量” 。在“相 对定量”里我们选用泳道5的1号条带为参考条带，其被定 义为“1”，其余条带依次得出相对结果。
3.3.2.5 定量工具——“绝对定量”
通过选择已知标准品浓度的条带（至少两个以上，以R表示），并设定合适 的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标条带的绝对浓度，具体数据可以查看 分析表。
3.3.2.3 分析完毕后，点击主窗口工具栏的“分析表”，显示分析结果。同时“分析 上方的选项可以调整“分析表”的显示项，及保存成Excel或文件的格式等。
显
更
示
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析表 析表 析表
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复制 导出 导出
选
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到剪 到文 到EXCEL
项
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向
3.3.2.4 分子量分析
点击“分析工具箱”中的“MW分析工具”，在标准项下，点击“更改”，选择 所需的“分子量标准”，选择“标准泳道”，点击“分析表”，即可查看所要检测的 蛋白的分子量，通过“主窗口工具栏”的“标准曲线”查看标准曲线、“报告栏”查 看报告。
程序桌面
2.1 主窗口工具列
2.2 显示工具列
图放缩 像大小 显 示 设 定
全亮 改 转 图
窗度 变 换 像
口 明 图 3D 信
大暗 像 成 息
小度 色 模
转彩 式
换
像
2.3 分析工具列
图像工具 泳道及条带工具 分子量工具 自动定量工具 注释工具 手动定量工具
3、软件基本程序应用
3.1 建立图像获取程序
3.3.2.6 注释工具
可以通过注释工具增加文字批注及箭头批注， 并可调整批注相对位置、文字属性、颜色及 旋转方向等参数。
Bio-Rad定量PCR说明书.ppt
Introduction to Quantitative PCR
PCR仪 + 监测、分析系统 + 荧光标记
定量PCR仪应该具备的特点：杰出的温度控制
• 采用半导体加热和制冷 • 加热速度 3.3°C /秒 ，制冷速度
2°C/秒 • 升降温速度可调 • 控温准确性：±0.3℃
定量PCR仪应该具备的特点：梯度PCR功能
采用多点温控和传 感技术，可以实现 梯度PCR功能
温度梯度选择可以 允许使用者在同一 次扩增中优化复性 温度。
定量PCR仪应该具备的特点： 消耗品成本低，样品容量大
同时扩增和检测96个样品
采用0.2ml的离心管, 排管和 96 孔PCR反应板。 降低消耗品成 本。
Introduction to Quantitative PCR
•无法对扩增反应实时检测
PCR: Theory vs. Reality
• C(t)s from 96 replicates are nearly identical, but the final fluorescence varies.
End Point
Cycle
Real-Time PCR
实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中 加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通 过Ct值和标准曲线对样品中的未知样品 的起始浓 度进行定量的方法。
Quantitative PCR /Real time PCR
▪ Quantitative PCR 或 Real time PCR 是确定样品中DNA (或 cDNA) 拷贝 数最敏感、最准确的方法
PCR: Theory vs Reality
凝胶成像及Quantity-One中文操作说明
凝胶成像及Quantity-One中文操作说明第一章简介凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。
电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。
目前有大量软件可以用于分析电泳结果，要向大家介绍的是Bio-Rad公司的1D凝胶分析软件Quantity One（Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件PDQuest）。
Quantity One软件是常用1D凝胶分析软件中功能最强大，自动化程度最高的软件。
这个软件的最新版本可以在Bio-Rad的网（）免费下载，以供试用或用户升级之用。
Quantity One软件的主要功能包括定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等，此外，还可以直接控制Bio-Rad公司的各类图像仪和ExQuest自动切胶仪，使您的凝胶分析工作变得极为轻松。
Quantity One软件拥有与windows操作系统下绝大多数应用软件相同的友好界面。
插入密码狗，打开Quantity One软件，可以看到最上缘蓝色横条幅是标题栏，往下依次是菜单栏和工具栏。
File 图像打开、保存、引入、打印等操作Match分子量估算、条带匹配分析Edit 图像普通编辑操作Volumn定量分析View 图像缩放、三维视图、看光密度值等操作Analysis浓度估算、克隆计数等分析每个菜单的主要功能如下：往下一行是工具栏，上面每个按钮的功能见下表：Quantity One 软件Help àQuick Guide 快捷指南提示如何实现一个功能，如定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等。
BIO-RAD ChemiDocXRS+化学发光凝胶成像仪中文简易说明书
ChemiDocXRS+化学发光凝胶成像仪的应用一、实验流程：1、实验前需提前半小时打开冷CCD镜头的开关，打开仪器的开关，最后打开软件。
2、实验时先将抽屉拉开放置核酸凝胶或转印膜（若是蛋白凝胶需放在暗箱中的白光板上，不用时白光板竖立卡好在暗箱中），关上抽屉，检查暗箱门是否关好。
确认好后，打开ImageLab软件，设置拍照程序，当选择不同凝胶拍摄方法时，会提示滤光片的位置和使用激发光的类型（例如拍摄化学发光会提示：无光源，无滤光片，此时滤光片的位置要调到“0档”），严格按照软件中的提示操作。
等拍照结束后保存拍照程序及最终生成的图片，便于后续数据的分析及程序的再次调用。
普通核酸凝胶和蛋白质凝胶的成像步骤与GelDocXR+的操作一样，也可参照《ImageLab中文操作指南》。
化学发光成像的拍摄方法如下：（1） 在凝胶成像（Gel Imaging）对话框中选择Chemi（化学发光）应用程序（2）在成像区域（Imaging Area）对话框中的下拉菜单里选择合适的样品大小（非必需）（3）选择成像曝光（Image Exposure）方法可以人为估计曝光时间并手控设定（Manual Exposure），或者使用信号累积模式（Signal Accumulation Mode，SAM）。
在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分利用了相机大的动态范围的图像。
过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被识别；过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和（也就是说，超出了相机准确报告信号的能力）。
如果这是您第一次用ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号累积模式（SAM）之前决定一个合适的成像时间框架。
获得这个信息的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用Image Lab里的工具估计最适的曝光时间。
手控曝光1. 选择手控设定曝光时间（Manually setexposure time）并在读秒框中输入10秒。