Redzol一步法总RNA提取试剂
植物总rna提取试剂
植物总rna提取试剂植物总RNA提取试剂是一种用于从植物组织中提取总RNA的试剂盒。
总RNA是植物细胞中的一个重要组成部分，可以用于基因表达研究、转录组学和其他分子生物学研究。
本文将介绍植物总RNA提取试剂的原理、操作流程、优缺点以及注意事项。
一、植物总RNA提取试剂的原理植物总RNA提取试剂通过破碎细胞壁和细胞膜，溶解蛋白质，并在碱性条件下使DNA和RNA不同程度地溶解从而实现总RNA的提取。
它通常包括下述主要步骤：1.细胞破碎：将植物样品研磨或经过冻融循环处理，释放细胞。
2.蛋白质沉淀：添加试剂进行蛋白质沉淀，将细胞残渣上清液中的蛋白质沉淀下来。
3. RNA沉淀：通过加入酒精等试剂使RNA从上清液中沉淀下来。
4.清洗：用特定的试剂将沉淀洗涤，去除污染物。
5.溶解：加入溶剂溶解沉淀，得到纯度较高的总RNA。
二、植物总RNA提取试剂的操作流程1.准备样品：收集新鲜的植物组织，将其迅速冷冻在液氮中，然后使用试剂研磨或液氮研磨法将其破碎。
2.加入试剂：向研磨好的样品中加入试剂，根据试剂盒的要求进行操作。
3.离心：离心样品，以将细胞碎片和蛋白质沉淀分离。
4.沉淀RNA：将上清液转移至新的离心管中，加入酒精等试剂，使RNA沉淀下来。
5.清洗：用特定的试剂洗涤RNA沉淀，去除杂质。
6.溶解：使用特定的溶剂将RNA沉淀溶解，使其完全溶解。
7.检测：采用比色法、荧光法或电泳等方法对提取得到的RNA进行定量和质量检测。
三、植物总RNA提取试剂的优缺点1.优点：-操作简单，不需要复杂的仪器和设备。
-高效提取总RNA，得到纯度较高的RNA。
-可以快速提取大量的样品。
-可以适用于多个植物种类和组织类型。
2.缺点：-可能存在某些试剂无法完全溶解质体等问题。
-部分试剂存在对环境的污染隐患。
四、植物总RNA提取试剂的注意事项1.使用新鲜的植物组织进行提取，以确保RNA的质量和完整性。
2.严格按照试剂盒的说明进行操作，不要改变试剂的使用顺序或添加量。
提取总rna的方法
提取总rna的方法
总RNA是指从细胞或组织中提取出的含有所有类型RNA的混合物。
总RNA的提取是RNA研究的重要步骤之一，可以用于分析基因表达、RNA修饰、RNA结构等。
以下是一种常用的总RNA提取方法：材料与试剂：
- 细胞或组织样本
- TRIzol试剂（Invitrogen）
- 氯仿
- 异丙醇
- 离心管
- 离心机
- 热板
步骤：
1. 将细胞或组织样本加入到离心管中，用PBS或生理盐水洗涤
一遍。
2. 加入TRIzol试剂，按照试剂和样本的比例加入。
比例一般为1mL TRIzol/1g细胞或组织。
3. 用均质器将样本均质，使细胞或组织完全破碎，并使其与TRIzol完全混合。
4. 加入氯仿，并彻底混合，使其与TRIzol完全分离。
5. 离心管离心15分钟（4℃，12000rpm），使混合液分为两层，上层为清亮的上清液，下层为混浊的有机相。
6. 将上清液转移至新的离心管中，加入相同体积的异丙醇，混匀。
7. 离心管离心10分钟（4℃，12000rpm），使RNA沉淀在管底。
8. 倒掉上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心管离心5分钟（4℃，7500rpm）。
9. 将乙醇洗涤RNA沉淀挥干，加入适量的RNase-free水溶解即可。
注意事项：
1. TRIzol是一种强还原剂，需避免与其他化学物质接触。
2. RNA样本处理过程中需注意RNase污染的防止，使用
RNase-free试剂和器材。
3. RNA的保存需避免RNase污染和长时间保存，最好在-80℃低温下保存。
总RNA的提取（Trizol法提取）（PDF）
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
Lezol(总RNA抽提试剂)
Lezol-总RNA 提取试剂简介：Lezol 是一种Leagene 自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA 提取试剂。
Lezol 采用与Invitrogen TRIzol 相似的原理和方法，Lezol 颜色、抽提的方法和步骤亦与Invitrogen TRIzol 完全相同。
Lezol 含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA 的完整性。
加入氯仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。
上清层用异丙醇沉淀回收总RNA ，中间层用乙醇沉淀回收DNA ，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
Leagene Lezol 适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA ，既可用于小量样品(50～100 mg 组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g 组织/>107细胞)。
提取的总RNA 质量高，可用于Northern blot 、Dot blot 、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。
Lezol 具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 样品准备① 贴壁细胞：① 接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Lezol 裂解细胞，每10cm 2面积加1ml Lezol ，用移液器吹打混匀。
②胰蛋白酶消化：用无菌PBS 洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase 的离心管中，5000～6000g 离心5 min ，收集细胞沉淀，去除上清。
收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA 收获率。
⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000 g 离心5 min ，收集细胞。
每5×106～107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Lezol 。
总RNA提取试剂盒操作流程
总RNA提取试剂盒操作流程试剂配制：DNA酶1：将550ul无核酶水加入DNA酶1瓶中，分装32瓶，每瓶,可用3次。
注意，轻轻混匀，不要震荡。
置于-20度保存，避免反复冻融，不宜超过3次以上。
RNA裂解液：将1-硫代甘油按2%（V/V）加入RNA 裂解液中，可在4度保存6个月。
RNA洗液：将70ml无水乙醇加入到40mlRNA洗液中。
步骤：1、贴壁细胞裂解物的制备。
胰酶消化离心后得细胞悬浮液，取*103-5*106 细胞，离心后收集细胞沉淀。
（不同样品最适起始用量和裂解液、稀释液的使用量。
悬浮或贴壁细胞*103-5*106使用量，裂解液300ul,稀释液300ul。
）2、加入300ul的RNA裂解液，吹打混匀，移至管中二RNA提取1、加入300ul的RNA稀释液，用移液枪混匀，室温放置3-5分钟，（如果样品比较珍贵，可以选择裂解物加入稀释液后70℃下加热3分钟，可以提高RNA的得率）2、以最大速度离心5分钟，吸取上清液置于另一管中3、加入倍上层清液体积的无水乙醇，移液器吹打3-4次，混匀，4、取出离心柱/细心管（离心柱已安放在收集管上），将混合物移至离心柱中，如果混合物体积过大，可分2次上样过柱。
*g离心1分钟，弃掉滤液5、加入600ulRNA洗液，*g离心45秒，弃掉滤液6、配置DNA酶1孵育液，DNA酶1缓冲液5ul+dna酶1 液5ul+无核酶水40ul.注意轻轻混匀，不要震荡。
（这是提取一管RNA需要的量）7、加入50ulDNA酶1孵育液到吸附膜中央，室温放置15分钟8、加入600ulRNA 洗液，*g离心45秒，弃掉滤液。
将离心柱重新安置于收集管上，*g离心2分钟9、将离心柱转移到洗脱管上，在离心柱膜中央加入50-200ul无核酶水，室温下静置2分钟，*g离心1分钟。
将RNA保存在-70℃。
10、温馨提示，如果将第一次洗脱下来的洗脱液重新加回到离心柱中央，室温下静置2分钟，*g离心1分钟，再次洗脱RNA，可以提高RNA的得率。
细胞总RNA提取
细胞总RNA的提取一、准备1、物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml 灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管2、打开冷冻离心机4℃预冷二、操作步骤：将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室。
1、取出EP管、做好标记2、取出细胞、收集上清保存备用3、用冷PBS冲洗细胞两次4、加入1ml Trizol （24孔板每孔加0.5ml即可），调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清（生化：摇动混匀后室温孵育10min）5、将裂解液转移至1.5ml灭酶EP管中，用黄枪头加入氯仿0.2ml（1/5 Trizol 体积），用手剧烈震摇15秒，置室温5min（生化：3min dxyer：15min），分层6、4℃、12000g（12300rcf）离心15min，可见分层。
7、用黄枪头小心收集上层水相约0.5ml置于另一1.5ml灭酶EP管中（确保不要吸入中间层和有机相）。
8、各管分别加入0.5ml异丙醇（等体积），用力摇匀，置室温10min。
（提前将异丙醇4℃预冷，或混匀后置-20℃ 60min，提取效果更好）9、4℃、12000g离心10min，可见RNA沉淀。
10、倒弃上清，用滤纸吸干管口余液，加入预冷的75%灭酶异醇1ml，用指轻弹管壁使RNA沉淀飘起洗涤。
11、4℃、7500g（7700rcf）离心5min，生化为10min，（亦有dxyer用12000g），沉淀即为总RNA。
12、弃上清，真空干燥约4min或空气中干燥5~10min，加入20祃（30祃）DEPC 水。
13、 56℃水浴小于10min助溶，取少量测OD值，其余-70℃保存备用。
[/sell]。
总RNA的提取_(试剂盒法、氯化锂法和蛋白酶-热酚法)
总RNA的提取(试剂盒法、氯化锂法和蛋白酶－热酚法)所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即1）样品细胞或组织的有效破碎；2）有效地使核蛋白复合体变性；3）对内源RNA酶的有效抑制；4）有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；5）对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。
关键词：试剂盒；蛋白酶；总RNA提取；试剂盒法；氯化锂法；蛋白酶－热酚法；Total RNA Isolation完整RNA的提取和纯化，是进行RNA方面的研究工作，如Northern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。
所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即1）样品细胞或组织的有效破碎；2）有效地使核蛋白复合体变性；3）对内源RNA酶的有效抑制；4）有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；5）对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。
但其中最关键的是抑制RNA酶活性。
RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径，1) 提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；2) 直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。
第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。
方法一: 总RNA的试剂盒快速提取一些公司推出的总RNA提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA。
该总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行，这样就能显著降低RNA的降解速率。
GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。
而进一步从复合体中纯化RNA，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。
低pH值的酚将使RNA进入水相，这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。
水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。
TRIzol-法提取血液总RNA
TRIzol 法提取血液总RNA
一、所需试剂、耗材
1. 0.1% DEPC-DDW;
2. 5ml, 2ml, 1.5ml灭菌离心管；
3. TRIzol；
4. 氯仿；
5. 异丙醇；
6. RNase-free water；
7. 70% DEPC-EtOH;
8. 检测用胶盒等
二、操作步骤
1. 取经过DEPC-DDW泡过，且灭菌烘干的7 ml 离心管；
2. 在0.5 ml小鼠全血（4C）中加入3 ml的TRIzol，震荡摇匀，室温静置5 min；
3. 将上述混合液体转移到灭菌的2 ml离心管中，12000 rpm 4℃离心5 min；
4. 将上清液移至新的1.5 mL离心管中；
5. 加入0.2 ml的氯仿，震荡摇均匀，室温静置5 min；
6. 12000 rpm 4℃离心15 min；
7. 将上清液移至新的1.5 ml离心管中，加入等体积-20C预冷的异丙醇，
-20C静置10 min；
8. 12000 rpm 4℃离心10 min；
9. 向沉淀中加入1 ml 70% DEPC-EtOH清洗沉淀;
10. 12000 rpm 4℃离心15 min;
11. 弃上清液保留沉淀，室温干燥10 min；
12. 加入30 μl RNase-free DDW 溶解RNA沉淀；
13. OD值检测（OD260/OD280=1.8-2.0）以及1% agrose gel检测（5ul）；
14. -80℃保存。
28S
18S
5.8S。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Redzol（一步法总RNA提取试剂）
使用说明
用户请自备以下试剂
1. 氯仿
2. 异丙醇
3. 75%乙醇（用DEPC处理的水）
4. DEPC水或0.5%SDS溶液
操作方法
1. .. 准备
估算Redzol或组织细胞的用量。
每1ml Redzol的组织用量为50~100mg；细胞用量为5~10×106个细胞。
2. 组织或细胞的裂解
a、贴壁细胞
吸尽培养液，加入Redzol，用枪反复吹打数次，确保全部裂解，然后转移至新的离心管中。
裂解10cm2细胞需要1ml Redzol。
注：Redzol的加入量不是根据细胞数目来决定，而是根据细胞培养皿的面积（10cm2/ml）来决定。
b、悬浮细胞
离心收集细胞，吸尽液体，加入Redzol用枪吹打数次，确保全部裂解（某些酵母和细菌要用匀浆器匀浆才能全部裂解），然后转移至新的离心管中。
按1ml Redzol可裂解5~10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞的比例加入Redzol裂解细胞。
注：应避免在Redzol加入前洗涤细胞，这样会增加mRNA降解的几率。
c、组织
先将新鲜组织剪成小块，放入匀浆器内，加入Redzol用匀浆器匀浆，然后转移至新的离心管中。
或者将组织在液氮中研磨成粉末后，加入Redzol中。
每
50~100mg的组织加入1ml Redzol进行裂解。
注：样品总体积不要超过所用Redzol体积的10%。
3. 分相
a 将匀浆液15~30℃静置5分钟使其充分裂解。
b 每1ml Redzol中加入0.2ml的氯仿，震荡混匀后15~30℃静置2~3分钟。
c 2~8℃ 12,000g离心15分钟。
离心后混合物分成三相（下面的酚/氯仿相、中间的白色界面、上面的无色水相）。
RNA全部在无色的水相中。
注：对于含有高浓度蛋白、脂肪、多糖或纤维素（肌肉、脂肪组织、植物的微管组织）的样品，在分相前可以附加一个分离步骤：匀浆后2~8℃12,000g 离心10分钟弃沉淀。
RNA溶解在上清液中，纤维素、多糖、大分子量的DNA以不溶的形式沉淀从而与RNA分离。
对于脂肪组织的样品，上面一层脂肪组织可以被清除掉，将清澈的匀浆液转移到另一新管中，继续进行第3步分相。
4. 沉淀RNA
转移上层水相到另一新离心管中，按0.5ml异丙醇/1ml Redzol比例加入异丙醇，充分混匀后15~30℃静置10分钟，然后2~8℃ 12,000g离心10分钟，RNA 形成白色的小团沉淀在离心管的底部和侧面。
注：一定不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，于4℃保留下层酚相。
5. 洗涤RNA
弃上清，RNA沉淀于管底。
按1ml 75%乙醇/1ml Redzol加入75%乙醇，漂洗2~3次RNA沉淀，2~8℃ 7,500g离心5分钟，尽量弃上清。
6. 溶解RNA
O、TE 在无菌工作台中干燥RNA沉淀5~10分钟。
可用DEPC处理的50μl H
2
buffer 或0.5% SDS溶解RNA样品，55-60℃温育10分钟使RNA完全溶解。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
常见问题解答
●每mg组织或106培养细胞的RNA产率
肝和脾6~10µg 肾3~4µg
骨骼肌和脑1~1.5µg 胎盘1~4µg
上皮细胞5~8µg 纤维原细胞5~7µg
●RNA产率低
样品裂解或匀浆不完全；提取的RNA溶解不完全。
●A260/A280<1.65
紫外检测时RNA样品应用水稀释，不能用TE稀释，低盐离子溶液和低pH 值溶液致使其在280nm的吸收值增加（Wilfinger, W. et. AL, Biotechniques 22: 474-481; Fox, D.K.(1998) Focus 20: 2 p.37）。
样品匀浆时加入试剂体积太少，匀浆后溶液分层不明显，水相被酚污染。
最后提取的RNA样品不能完全溶解。
●RNA降解
使用的动物组织没有被立即冻上或放入Redzol中匀浆；分离使用的样品或制备的RNA长期贮存在-5~-20℃，而不是贮存在-60℃~-70℃。
提取RNA的细胞被胰蛋白酶分解，易导致提取的RNA降解。
水相或使用的离心管没有完全处理仍残留有RNase。
变性凝胶电泳使用的甲醛pH值低于3.5。
●RNA污染
样品匀浆时加入试剂体积太少；分离使用的样品含有有机溶剂（乙醇，DMSO 等），盐离子或碱溶液。
●蛋白多糖和多糖污染
改进RNA沉淀方法：起始匀浆中每加1ml的Redzol，水相中加入0.25ml 的异丙醇和0.25ml的高盐溶液（0.8M的柠檬酸钠，1.2M的NaCl），混匀，离心，接着进行下一步RNA的提取。
此方法有效的沉淀了RNA，而蛋白多糖和多糖仍保留在水相中。
为了从多糖含量高的植物材料中获得高纯度的RNA，推荐采用改进的RNA沉淀和起始匀浆液离心这些步骤。