OMEGArna提取试剂盒中文说明--总RNA提取
OMEGArna提取试剂盒中文说明
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ． 真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2． 匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
天漠科技 总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。
∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。
∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
∙整个过程仅需10分钟。
Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。
2.样品范围：≥17核苷酸。
3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。
4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。
试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。
添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒说明书货号：R1200规格：50T/100T产品内容：试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期裂解液50ml100ml2-8℃一年漂洗液15ml15ml×2RT一年洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。
用取样器吹打混匀。
d.细胞悬液：离心收集细胞。
每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。
弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。
离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4.2-8℃12000rpm离心10分钟。
RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。
6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液。
7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。
总RNA纯化试剂盒说明-中文版
总RNA纯化试剂盒产品说明书此款RNA纯化试剂盒提供了一种从培养的动物细胞、组织样品、血液、细菌、酵母、真菌、植物和病毒中快速提取和纯化总RNA的方法，。
该试剂盒可以纯化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到小RNA（microRNA或miRNA）和小干涉RNA（siRNA）。
RNA优先从蛋白等的细胞组分中纯化出来，而不使用抑制的苯酚或者氯仿。
纯化的RNA是高度完整的，可以应用到一系列的下游应用试验中，包括实时PCR，Northern免疫印迹分析，RNase保护实验和引物延伸，以及表达芯片分析。
纯化技术纯化的基础是旋转柱色谱法，用特有的树脂作为分离介质。
RNA优先从其他细胞组分（如蛋白质）中分离出来，而不使用苯酚或者氯仿。
纯化步骤包括首先用合适的裂解液融解细胞或组织，然后裂解液中加入乙醇后上样到旋转柱中。
树脂结合RNA是基于离子的浓度，所以只有RNA结合到柱子上而所有剩余的蛋白和其他的污染物会在流动液中而被除去或者仍在树脂的顶部。
然后结合的RNA用试剂盒提供的洗涤液洗涤以除去所有残余的杂质，然后纯化的总RNA用抽提缓冲液洗涤。
纯化的RNA是高度完整的，可以用于一系列的下游实验分析。
说明优点•使用旋转柱提取，步骤快且简单•提取总RNA，从大的核糖体RNA（rRNA）到小（RNAmicroRNA或者miRNA)•不需要苯酚或氯仿作提取液•从多种种类来源样品中提取高质量的总RNA•可以提取和检测到的RNA组织样品可以小到单个动物细胞试剂盒成分储存条件和产品稳定性所有的溶液需在室温密闭保存。
所有的试剂在不开封条件下稳定保存１年。
预防措施和警告事项该试剂盒只为科研目的设计，不可用于人或者临床。
要确保有合适的实验服，在操作化学试剂时一次性的手套和护目镜会磨损。
需要更多信息，请参考适合的材料安全表（MSDSs）。
所有人和动物组织的问题是要考虑到潜在的感染。
当操作全血样品时，所有在使用国家的有关当局建议的预防措施都要执行。
细菌RNA提取omega试剂盒
细菌RNA提取omega试剂盒细菌RNA提取OMEGA E.Z.N.A. Bacterial RNA KitR6950-01Before starting：1.溶菌酶溶液与TE buffer混合至浓度15mg/ml,aliquot into 合适的portioins，储存-20℃2.细菌培养至log-phase3.β-mercaptoethanol（β-ME，巯基乙醇破坏抑制核酸酶）加进buffer BRK（20ul/mlBRK）4.用96-100%的酒精dilute RNA wash buffer II(酒精：buffer2=4:1，降低盐浓度，避免影响下游反应)，储存在室温Spin protocol：实验前准备好：台式离心机，1.5-2ml EP管，70%酒精1.培养细菌至log-phase（勿过夜培养）2.取3ml（<5x108菌体）离心，4000-5000g，4℃，5-10min3.弃上清，用100ul lysozyme/TE buffer resuspend，用涡旋振荡器最大速混合30s（溶菌酶的需求量取决于细菌株系，对于某些细菌，其它酶可能更有效。
细胞壁完整digestion对细胞裂解影响大）4．Incubate 10min at 30℃。
在shaker-incubator中温育或每2min vortex 20s5.在样品中加350ul buffer BRK/2-ME和25-40mg玻璃粉，vigorously vortex 5min，13000g 离心5min6.取400ul supernatant于1.5ml管，加70%酒精于lysate中，pipette混匀7.将样品（可能已形成precipitate）加进mini colume inserted in a 2ml collection tube。
离心30-60s，10000g。
弃去下层液体，重利用collection tube8.加300ul RNA wash buffer I，离心30-60s，10000g，室温。
RNA提取-OMEGA
OMEGA E.Z.N.A. TM RNA 提取试剂盒操作步骤1.弃培养基，加入1ml RNA-Slov regent 裂解细胞，将裂解液转移到一干净的1.5ml EP管中，室温孵育2-3min。
2.每1ml RNA-Slov regent中加入200µl氯仿，涡旋混匀15s，冰上孵育10min。
3.12,000×g，4 ℃，离心15min。
4.吸取上层水相并加入1/3体积的无水乙醇，涡旋混匀15s。
5.将HiBind RNA Spin柱子套在2ml收集管中，该柱子一次性最多可以容纳700µl的溶液。
将上述溶液（包括沉淀）转移至柱子上，室温下，10,000×g离心1min，以完全滤过溶液。
如果还有溶液残留，请延长时间至溶液完全滤过柱子，去弃滤过液。
继续将剩余的裂解液转移至柱子，离心弃去滤出液。
Tip：如果在离心后，柱子发生堵塞，可延长离心时间或提高离心速率至裂解液完全流出柱子。
柱子发生堵塞的原因有以下几种原因：1.样品起始量太多；2.裂解不够充分；建议：1.减小样品量，提高匀浆效率；2.裂解完后，用匀浆柱过滤裂解液。
6.将柱子放入一个新的2ml收集管中，加入300µl Wash Buffer I至柱子上，室温下，10,000×g离心1min，去除滤过液；7.将柱子放置于2ml收集管中，加入400µl RNA Wash Buffer I，室温下，10,000×g离心1min，去除滤过液；8.将柱子套回离心管，加入500µl RNA Wash Buffer II(已用无水乙醇稀释)，室温下，10,000×g离心1min，弃去滤过液；9.将柱子套回离心管，加入500µl RNA Wash Buffer II，室温下，10,000×g离心1min，弃去滤过液。
10.将柱子套回空的收集管，室温下，14,000×g离心空柱2 min，以甩干柱子的基质。
OMG植物RNA提取试剂盒中文使用说明
OMG植物RNA提取试剂盒中文使用说明植物RNA提取试剂盒（Plant RNA Extraction Kit）是一种高效的试剂盒，用于从植物组织样品中提取RNA。
本文将详细介绍该试剂盒的使用说明，以帮助用户正确操作。
步骤一：样品的预处理1.1收集所需的植物组织样品，并将其快速冷冻在液氮中。
1.2在试验台上，用磨砂盘将样品研磨成粉末状。
使用过程中，要避免样品的过度加热以及溶液的损失。
1.3 从研磨后的样品中取出约100 mg的样品，放入2 mL离心管中。
步骤二：细胞破碎和裂解2.1向离心管中加入1mL细胞破碎液，然后快速颠倒数次，使样品均匀悬浮。
2.2将悬浮液在65摄氏度孵育30分钟，每隔5分钟振荡一次。
2.3孵育结束后，将管子在高速离心机中离心5分钟，以去除细胞残渣。
步骤三：RNA的沉淀3.1将上一步得到的上清液转移至新的2mL离心管中。
3.2加入1.5mL乙醇，轻轻颠倒数次，混合均匀。
3.3将混合液转移至RNA沉淀柱中，并在2mL收集管中储存过滤液。
3.4在6,000×g的离心机中离心柱子30秒，将上清液排除。
3.5在柱子上方放置一个新的2mL离心管，并将柱子放在上面。
3.6加入700µLRNA洗涤缓冲液，然后在6,000×g的离心机中离心柱子1分钟，将上清液排除。
3.7在同一个离心管中，再次加入700µLRNA洗涤缓冲液，然后在6,000×g的离心机中离心柱子1分钟，将上清液排除。
步骤四：RNA的洗涤和干燥4.1将柱子转移到新的2mL离心管中。
4.2加入600µL高盐洗涤缓冲液，然后在6,000×g的离心机中离心柱子1分钟，将上清液排除。
4.3在同一个离心管中，再次加入600µL高盐洗涤缓冲液，然后在6,000×g的离心机中离心柱子1分钟，将上清液排除。
4.4将柱子转移到新的1.5mL离心管中。
4.5 加入30 µL RNase-free水溶解RNA，然后在常温孵育5分钟。
OMEGA RNA提取步骤
OMEGA RNA 提取试剂盒步骤
1、将研磨好的冷冻植物组织100mg加入到离心管中，加入500ul Buffer RCL(使用前已加入β-巯基乙醇)，大力涡旋以使组织块状分散，均匀反应。
2、55℃孵育3min，室温下14,000×g离心5min
3、吸取上清液至gDNA过滤吸附住中，室温下14,000×g离心2min
4、丢弃gDNA过滤吸附柱，在收集管中加入等体积的BufferRCB，吹打混匀5-10次
5、吸取步骤4中混合液的1/2到HiBind RNA小吸附柱中，室温下10,000×g 离心1min，倒掉收集管中的液体
6、将步骤4中剩余的混合液再次加入到HiBind RNA小吸附柱中，室温下10,000×g离心1min，倒掉收集管中的液体
7、加入400ul RWC Wash Buffer，室温下10,000×g离心1min，扔掉收集管
8、将吸附柱放入新的2ml收集管中，加500ul RNA Wash BufferⅡ，室温下10,000×g离心1min
9、重复步骤8，再次用500ul RNA Wash BufferⅡ洗涤吸附柱，室温下10,000×g离心1min，倒掉收集管中液体，然后吸附柱空离，10,000×g离心2min，以使干燥
10、RNA溶解：将吸附柱放入新1.5ml离心管中，加30-50ul DEPC水，室温孵育2min,10,000×g离心1min(注：如果提取的RNA含量＞30ug，必须再次加入适量DEPC水溶解)。
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E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)
步骤
A．真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA。
TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1．用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a)使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b)如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器
里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。
加700ul的TRK
到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。
将液体布满整
个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c)如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK
裂解液，漩涡振荡混匀。
2．匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a)用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b)用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除
RNase。
3．将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1．用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。
当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2．离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3．转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4．在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5．样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。
所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。
室温离心，10,000*g,1min。
弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6．将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。
室温离心，10,000*g, 1min。
同样弃掉流出液。
7．DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8．将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9．将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释，按照标签上的说明。
10．用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。
室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥13,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11．转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。
确保水直接加到了柱子的基质上。
13,000*, 1min, 室温。
如果RNA的总量大于50ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。
如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。
提前将水加热到70℃并室温孵育柱子5min会增加产量。