鸡胚成纤维细胞制备PPT课件
用4层脱脂纱布将吹打后的细胞过滤到平皿中，收集滤液。
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实验步骤
（四）细胞形态观察 检查时注意培养液的颜色变化，变黄但不混浊表示有细胞
生长，变红表示细胞未生长或生长不佳。37℃培养24-48h后， 于倒置显微镜下观察，细胞可以长成单层，细胞透亮，呈纤维 状，细胞膜清晰。
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实验步骤
五、注意事项
1、整个过程严格无菌操作
将剪碎的组织块放入锥形瓶中，加入适量的胰酶。包紧瓶 口，37℃水域消化30min，每隔5min轻轻摇动1次。当组织块 变得蓬松透明时，吸弃消化液，用PBS洗两遍，中止消化。如 再继续消化，可破坏细胞膜而不易贴壁生长，如果消化不够， 则细胞不易分散。
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实验步骤
（2）分散细胞 将消化好的细胞悬液从水浴锅中取出，弃去上层液体，加
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实验步骤
（3）胚体匀浆 用灭菌剪将胚体剪碎至1mm3小碎块。加入PBS（淹住
组织碎块即可），轻摇，静置1-2min，待组织块下沉，吸去 上层悬液。重复2-3次（以除去其中的红细胞），至上悬液不 混浊为止，移入灭菌的锥形瓶中，吸去PBS。
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实验步骤
2、分散细胞 （1）酶消化
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实验原理
病毒能在易感的组织或单层细胞内增殖，并可产生细胞病变，因此， 细胞培养是病毒学研究的重要手段，是进行病毒性疫苗生产和病毒性 疾病诊断必不可少的工具。原代细胞培养是体外制备细胞培养物的必 经过程，从供体体内取出组织分散成单个细胞接种于培养液中为初次 培养，从初次培养到第一次传代培养为原代培养。本实验以鸡胚成纤 维细胞作为原代细胞，通过细胞培养实践操作，认识和体会原代细胞 的制备方法和影响细胞培养的主要因素，并掌握原代细胞培养的方法。
鸡胚成纤维细胞的制备和培养
鸡胚成纤维细胞的制备
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实验目的
学习和掌握鸡胚成纤维细胞的制备和培养方法； 了解原代细胞培养的原理和方法。
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鸡胚成纤维细胞元代培养
CEF的培养是在一定条件下，在体外模拟体内生理环 境，使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传 代，并维持原有组织细胞的结构和功能特性。
2、培养液不要太多，应有足够的空间保证细胞对氧的需要
3、放入CO2培养箱培养时，将CO2浓度控制在5%。
4、吸除消化液，向瓶内注入PBS数毫升，轻轻转动培养瓶， 把残余消化液冲掉。注意冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松 动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰酶液后， 可不用PBS冲洗，直接加入培养液。
5、细胞培养对玻璃器皿洗涤要求严格，彻底洗涤后用蒸馏水
冲洗，再用双蒸水冲洗，干燥 灭菌后备用。所有的溶液都要
用双蒸水配制，所用药品试剂用分析纯。
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液和胰蛋白酶液放入37℃水浴锅内预热；
2、用75%酒精棉擦拭双手和紫外线照射过的超净
工作台；
3、正确摆放要使用的器械：保证足够的操作空 间，不仅便于操作而且可减少污染；
4、点燃酒精灯. 5、准备好将要使用的消毒后的培养瓶。 6、取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球 擦拭好后方能放入超净台内。
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实验步骤
（二）鸡胚成纤维细胞的制备 1、鸡胚的处理 （1）蛋壳消毒
取9-11日龄的鸡胚，用检卵灯选取血管清楚、活动正常的 鸡胚，置蛋架上，令气室端向上，用碘酒棉消毒蛋壳气室部位。 （2）胚体采集
以镊子击破卵壳气室部位，并除去该部位卵壳。用无菌的 眼科镊子撕开蛋壳气室膜并小心拨开绒毛尿囊膜和羊膜，用弯 镊子夹住鸡胚颈部，移入灭菌的平皿内。用剪刀剪去胚头、四 肢及内脏，用PBS洗去体表血液，移入灭菌小烧杯中。
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实验所需器材、试剂
超净工作台，检卵灯，灭菌的细胞培养瓶、眼科剪、眼科镊、平皿、 吸管、离心管等；9-11日龄鸡胚；PBS，0.25%胰酶消化液，DMEM 营养液，75%酒精棉。
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实验步骤
（一）操作前的准备 1、预热培养液：把已经配制好的生长液、Hanks
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实验步骤
（三）分装与培养 1、细胞计数
用细胞计数器计数，根据计数结果，加入DMEM生长液， 调整细胞浓度至50万-60万个/ml。
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实验步骤
2、分装与培养 在培养瓶中加入2mLDMEM生长液(如果是50mL的培养
瓶，加4mL生长液)，小心吸出过滤后的细胞悬液0.25mL至培 养瓶中（如果是50mL的培养瓶，加0.5mL的细胞悬液)，吹打 均匀盖好瓶塞。在瓶上注明组别、日期，置37℃温箱中培养 (4h后细胞即可贴壁，24-36h生长成单层细胞，此时可更换培 养液，并接种病毒)。分装后2-4h不可大幅度移动培养瓶，以 免影响细胞的贴壁和生长。
鸡胚成纤维细胞单层培养
鸡胚成纤维细胞单层培养一、原理离体的器官、组织、细胞短时间并不死亡。
对机体的器官、组织、细胞提供适当的环境条件和营养物质，可使其在离体情况下继续生长和繁殖，这种技术方法分别称之为器官培养、组织培养、细胞培养，一般统称为组织培养，而在病毒学研究中通常指的是细胞培养。
原代细胞单层培养就是在无菌条件下，直接从机体取出器官和组织的全部或一部分，用机械方法或适当的组织分散剂（一般用胰蛋白酶）消化处理，使组织快分散成单个细胞悬液。
经洗涤和细胞计数，定量分装到一定的容器内，提供该细胞生长所必须的环境条件和营养物质，促使细胞贴壁并不断分裂生长繁殖，直至成均匀致密的细胞单成。
多种动物、植物、人的组织都可以用来进行细胞培养。
在实际工作中，对细胞来源的选择主要是根据细胞对病毒的易感性，细胞来源难易来决定的。
二、目的和要求了解细胞培养的一般原理，掌握原代细胞单成培养的操作技术。
三、实验材料1、孵育10日龄发育良好的鸡胚。
2、抗菌素溶液（每ml含青霉素10000单位、链霉素10000微克）；碳酸氢钠液。
3、洗涤液：Hank’s液（经碳酸氢钠液调节PH为7.0～7.2）；无钙、镁离子磷酸缓冲液（CMF－PBS）。
4、细胞分散剂：0.25%胰蛋白霉溶液。
5、营养液：0.5％水解乳蛋白－Hank’s液（LH液，也称乳汉液），加入1%抗菌素溶液，5％小牛血清，用碳酸氢钠调节PH为7.0～7.2。
6、实验器械：卵架、碘酒和酒精消毒棉球、酒精灯、镊子、血球计数板、显微镜、水浴锅、温箱、吸球、灭菌眼科镊和剪、培养瓶、橡皮塞、吸管、平皿、三角瓶、烧杯、带有过滤纱布（四层）的漏斗。
四、操作方法1、鸡胚的获得及处理：（1）去10日龄发育良好的鸡胚，照蛋标出气室。
气室向上直立于卵架上，依次用碘酒和酒精棉球由中央及四周涂抹卵壳除菌消毒。
无菌操作下，用镊子去除气室部卵壳；换无菌镊子去处壳膜，穿破绒毛尿囊膜夹住鸡胚胎颈部，取出鸡胚放于灭菌平皿中。
（2）除去鸡胚头、翅、肢体，清除内脏，用Hank’s液冲洗鸡胚三次。
鸡胚成纤维细胞的制作及培养
鸡胚成纤维细胞培养1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。
开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3、选胚：取9-10日龄鸡胚，（注：鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低）用新洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。
用碘酒、酒精消毒蛋壳。
用镊子打开气室。
4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。
5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
6、剪切：用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。
7、处理组织：将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml（组织消化液以及胰酶的配置见微生物指导）结扎瓶口或塞以胶塞。
8、消化：将其置入37℃水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器消化更好。
消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
消化10－15分钟。
一般约12分钟。
视鸡胚日龄大小而定。
越小消化时间越短。
见组织松软即可。
一般不可消化时间太长否则容易导致细胞活力不足。
9、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液少许。
（制法见微生物试验实习指导），用力震摇，或用吸管吹打。
使细胞分散，脱落。
然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。
低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清（可以不离心吸掉上清），加入适量含有血清的培养液。
10、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。
对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
实验一——鸡胚成纤维细胞的培养PPT课件
拔出瓶塞、塞上瓶塞时瓶口和塞子要灼烧；倾 倒液体前后都要灼烧瓶口，并且瓶口向下，低 于瓶底；倾倒液体时两瓶口之间不能接触。
瓶内是严格无菌的，所以要保证吸管不接触到 瓶口的外壁。若一旦接触，更换新的吸管。
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实验材料
预加10%FCS和双抗的1640培养液；消化液 (0.25%胰蛋白酶- 0.02%EDTA溶液)；DHanks平衡盐溶液；
灭菌培养皿、青瓶、细胞培养瓶各1个； 巴氏吸管若干支、纱布若干；眼科镊1把，剪
刀1把； 碘酒，75％酒精棉球；酒精灯1台；废液缸。
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实验设备
（1） 37℃-CO2培养箱 （2）倒置显微镜 （3）超净台
5.培养 于37℃-CO2温箱内培养。24-48h后可长成 单层细胞。
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实验结果
1、观察原代细胞的形态和生长状况；
2、如出现细胞培养液浑浊情况，请鉴别是否细 菌污染。
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注意事项
1. 切割组织块时务必要切成小块 2. 整个操作过程要严格保持无菌 3.严格控制胰酶消化时间 4. 放入孵箱前应在培养瓶表面标明细胞名称、日期 和组别 1 5. 实验用品放回原处，摆放整齐
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无菌操作的一般要求
用75％酒精擦拭消毒双手。 超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭擦净。 打开超净台的紫外灯照射台面30min左右。使用
超净台时，打开风机，点燃酒精灯。
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严格在酒精灯无菌范围之内操作。 使用巴氏吸管以及其他吸管时，取出后要手拿末端
安上橡皮头后，过酒精灯火焰略烧后插在无菌盐水 瓶或试管内。 操作时，严禁说话，尽量不用手直接拿无菌的物品， 如瓶塞等，而要用器械，如镊子等去拿。 不能用手接触瓶口、吸管口以及镊子和剪刀的头部。
鸡胚成纤维细胞制备.pptx
实验所需器材、试剂
超净工作台，检卵灯，灭菌的细胞培养瓶、眼科剪、眼科镊、平皿、 吸管、离心管等；9-11日龄鸡胚；PBS，0.25%胰酶消化液，DMEM营养 液，75%酒精棉。
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实验步骤
（一）操作前的准备 1、预热培养液：把已经配制好的生长液、Hanks
液和胰蛋白酶液放入37℃水浴锅内预热； 2、用75%酒精棉擦拭双手和紫外线照射过的超净
将剪碎的组织块放入锥形瓶中，加入适量的胰酶。包 紧瓶口，37℃水域消化30min，每隔5min轻轻摇动1次。当组织 块变得蓬松透明时，吸弃消化液，用PBS洗两遍，中止消化。 如再继续消化，可破坏细胞膜而不易贴壁生长，如果消化不够 ，则细胞不易分散。
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实验步骤
（2）分散细胞 将消化好的细胞悬液从水浴锅中取出，弃去上层液体
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鸡胚成纤维细胞元代培养 CEF的培养是在一定条件下，在体外模拟体内生理环 境，使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传 代，并维持原有组织细胞的结构和功能特性。
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实验原理
病毒能在易感的组织或单层细胞内增殖，并可产生细胞病变，因此， 细胞培养是病毒学研究的重要手段，是进行病毒性疫苗生产和病毒性 疾病诊断必不可少的工具。原代细胞培养是体外制备细胞培养物的必 经过程，从供体体内取出组织分散成单个细胞接种于培养液中为初次 培养，从初次培养到第一次传代培养为原代培养。本实验以鸡胚成纤 维细胞作为原代细胞，通过细胞培养实践操作，认识和体会原代细胞 的制备方法和影响细胞培养的主要因素，并掌握原代细胞培养的方法 。
取9-11日龄的鸡胚，用检卵灯选取血管清楚、活动正常的 鸡胚，置蛋架上，令气室端向上，用碘酒棉消毒蛋壳气室部位 。 （2）胚体采集
鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建
它整 J6K,;6L 技术是一种新的通用型克隆系统， 合了各种克隆载体的技术平台， 可加快达到最终研 究目标的速度。该技术克服了其它技术常用的两种 方法： 酶切和连接、 S/M 产品克隆等相关的制约因 素。J6K,;6L 技术基于已被详尽研究的 !噬菌体位 点特异性重组系统， 使得在不同的克隆载体之间转 移 FHI 片段、 保持基因定位和阅读框架及有效地取 代使用限制性内切酶和连接酶进行克隆和亚克隆的 方法成为可能， 具有简单快速、 克隆效率高、 方便灵
鸡传染性法氏囊病 （ !"#$%&’()* +),*-. /’*$-*$ ， 是由鸡传染性 法 氏 囊 病 病 毒 （ !"#$%&’()* +),*-. E0F） 引起的一种危害鸡的急性、 高度 /’*$-*$ 0’,)* ，E0FG） 接触性传染病。 E0FG 主要侵染幼鸡未成熟的 0 淋 年龄较大的 巴细胞， # ( & 周龄的幼鸡为易感鸡群， 鸡具有一定抵抗力， 小于 # 周龄的雏鸡感染后会产 生严重的免疫抑制
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一种鸡胚成纤维细胞快速制备与保存方法的研究
一种鸡胚成纤维细胞快速制备与保存方法的研究作者：赵海棋高庆芳张泽恺苗立中刘建钗苑文娴唐娜来源：《家禽科学》2023年第11期摘要：为了进一步提高鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblast，CEF）的制备效率和活力，试验以短时多次消化法缩短胰酶消化时间，提高细胞活力。
同时，通过优化血清、胰酶、培养基等保存条件，增加细胞4 ℃保存时间。
经CCK-8细胞活性检测、活细胞计数、传代培养等方法比较验证，结果表明，所建立的制备方法简易、快速、细胞活力高；细胞在4 ℃、不添加血清和胰酶的DMEM培养基中保存96 h内仍保有良好的贴壁生长能力。
该方法的建立为实验室内快速制备CEF细胞提供候选方案，可有效减少鸡胚的使用。
关键词：鸡胚成纤维细胞；细胞制备；细胞保存; 原代细胞；细胞培养作为细胞生物学试验研究中的一个重要环节，细胞培养技术被广泛应用于现代生物工程、生命科学和药物研发等领域，原代细胞也已成为基本的细胞生物学试验研究样品，在生理学、细胞生物化学、药学、毒理学等研究领域广泛应用。
其中，鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblast，CEF）因具有适应性强、繁殖速度快、来源广、成本低等优势，被大量应用于生物工程研究与疫苗生产中，多种常见的病毒如禽马立克病毒（Marek’s disease virus，MDV）[1]、传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease，IBDV）[2]、火鸡疱疹病毒（Herpesvirus of turkey，HVT）[3]等的研究都以CEF为重要材料。
目前，实验室制备CEF需要现用现制，大量使用鸡胚，既增加受污染的风险，也不利于动物福利，还给试验研究带来额外的工作量。
因此，通过多次试验，本研究尝试建立一种快速、小量制备鸡胚成纤维细胞的候选方案，在保障细胞活力、提高制备效率的同时，能够降低受污染风险，且可短期保存细胞，从而减少制备次数和鸡胚使用量。
CEF、DEF培养
鸡胚成纤维细胞（CEF）、鸭胚成纤维细胞(DEF)培养一、材料9¬10日龄鸡胚13¬14日龄鸭胚眼科剪、镊、外科镊、巴氏吸管、蛋架、灭菌平皿 25ml小三角瓶Hanks＇液 0.25%胰酶液 Versene液灭菌纱布、玻璃漏斗、0.1% 结晶柠檬酸（0.1M）或0.4%台盼兰,血球计数板、60ML培养瓶或60ML培养皿、灭菌盖玻片、营养液。
二方法（CEF为例）鸡胚理：取9¬10日龄鸡胚直于蛋架，在气室部用于5%碘酊棉消毒，再用洒精棉脱色，用外科镊击破蛋壳用眼科镊取出胚体放于平皿内，去喙瓜眼和内脏，用Hank＇s液洗两次，用弯头眼科剪剪胚剪成1-2mm的碎块，加Hank’s液20ml,略加摇振，静置使组织块下沉，将混有红血球及碎片的上悬液吸去，重复洗2—3次，直至上悬液不混浊为止。
2、消化：将0.25%胰蛋白酶溶液用5、6%NaHCO2滴定至PH7、6—7、8，加热至37度，按组织块量3—5倍加于装有鸡胚碎块的三角瓶中，每个鸡胚约需胰酶5ml，30分钟取出，静置1—2分钟，吸去胰液，再加HanK’s 液20ml，轻轻摇动后吸去，如此反复两三次，目的是洗去残余的胰酶。
第三次加入营养液，每胚3ml左右，用粗口吸管吹吸数次，使细胞脱落分散。
静置1—2分钟，候组织下沉后，细心将细胞悬液吸出，另置一只25ml三角瓶，如此反复数次，使细胞尽量自组织块脱落，将多次取得的悬液合并一处，纱布过滤悬液。
必须注意每次吹吸一般6—7次为宜，太多则细胞受损，消化时间要灵活掌握，不足细胞不易掊落，太久则细胞破碎。
在消化过程中，摇动时组织不易下沉即立即停止，消化后如组织粘连如涕，证明消化过度。
二、细胞计数：取细胞悬液0.1（100ul）置盛有0.9ml10.4%台盼蓝的试管中混合,用血球计数板计数。
计算方法：4大方格细胞数每ml细胞数=——————————————X10（5）45中格细胞数或每ml细胞数=——————————X10（4）三：接种以营养液配成每ml10（6）细胞（最终稀释度）接种链霉素瓶（1ml）、60ml瓶（8—10ml），100mm dish（10ml），60mm dish（4ml），37度孵育48小进后形成单层，接种病毒或作次代培养。
鸡胚成纤维细胞制备优秀课件
间，不仅便于操作而且可减少污染； 4、点燃酒精灯. 5、准备好将要使用的消毒后的培养瓶。 6、取出预热好的培养用液：取出已经预热好的养用液，用酒精棉球 擦拭好后方能放入超净台内。
实验步骤
（二）鸡胚成纤维细胞的制备 1、鸡胚的处理 （1）蛋壳消毒
实验步骤
（3）胚体匀浆 用灭菌剪将胚体剪碎至1mm3小碎块。加入PBS（淹住
组织碎块即可），轻摇，静置1-2min，待组织块下沉，吸去上 层悬液。重复2-3次（以除去其中的红细胞），至上悬液不混 浊为止，移入灭菌的锥形瓶中，吸去PBS。
实验步骤
2、分散细胞 （1）胰酶消化
将剪碎的组织块放入锥形瓶中，加入适量的胰酶。包 紧瓶口，37℃水域消化30min，每隔5min轻轻摇动1次。当组织 块变得蓬松透明时，吸弃消化液，用PBS洗两遍，中止消化。 如再继续消化，可破坏细胞膜而不易贴壁生长，如果消化不够， 则细胞不易分散。
实验步骤
（四）细胞形态观察 检查时注意培养液的颜色变化，变黄但不混浊表示有
细胞生长，变红表示细胞未生长或生长不佳。37℃培养24-48h 后，于倒置显微镜下观察，细胞可以长成单层，细胞透亮，呈 纤维状，细胞膜清晰。
实验步骤
五、注意事项 1、整个过程严格无菌操作 2、培养液不要太多，应有足够的空间保证细胞对氧的需要 3、放入CO2培养箱培养时，将CO2浓度控制在5%。 4、吸除消化液，向瓶内注入PBS数毫升，轻轻转动培养瓶，把 残余消化液冲掉。注意冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动 的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰酶液后， 可不用PBS冲洗，直接加入培养液。 5、细胞培养对玻璃器皿洗涤要求严格，彻底洗涤后用蒸馏水 冲洗，再用双蒸水冲洗，干燥 灭菌后备用。所有的溶液都要 用双蒸水配制，所用药品试剂用分析纯。
鸡胚发育图解(课堂PPT)
鸡胚孵化图片
第14天 尿囊血管 充分发育并紧贴 壳膜，通过内外 壳膜，蛋壳排除 二氧化碳和水蒸 气，吸进氧气； 尿囊液增加，主 要集中于羊膜周 围，新陈代谢旺 盛，胎儿增重迅 速，解剖胚蛋时 尿囊血管很容易 破裂。
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第15天 尿 囊所包 围的蛋 白减少， 照视胚 蛋，小 端发亮 部位缩 小，胚 体与卵 黄的黑 影部分 增多。
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种蛋 优良种蛋
是获得高孵化
率的物质基础，
是集现代家禽
遗传育种，全
价营养饲料和
疾病净化科技
成果的“载
体”。现代蛋
用种鸡的种蛋
分白壳和褐壳
两类，肉用种
鸡在选育过程
中不注重蛋壳
颜色，其蛋壳
颜色间于白壳
与褐
1
鸡胚孵化图片
壳之间，中国 地方鸡种的蛋 壳颜色也与此 类似。市场上 流通的主要是 商品代和父母 代种蛋。白壳 蛋鸡品种与褐 壳蛋鸡品种正 反杂交后，产 生的后代母鸡 在成年后均生 产浅褐壳的商 品蛋。
受精，受精卵在
母体内滞留期间
不断分裂，到种
蛋产出体外时已
分裂成一团细胞，
此时为胚胎发育
的囊胚期，从正
面看囊胚像覆盖
在卵黄表面的圆
盘，中央为明区，
边缘为暗区，通
常成为胚盘。
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鸡胚孵化图片
第1天 经过 24小时的 孵育，胚 盘变大变 厚，明区 和暗区同 时增大， 在卵黄上 可见到椭 圆形的盾 壮区称为 胚盾是未 来的胚区。
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新进来的水分并
不与卵黄液全面
融合而主要存于
胚区。胚胎与伸
展的卵黄囊血管
形似蚊子，白壳
种蛋通过照视可
鸡胚发育图解课件PPT
天增大了一倍，
几乎包围了卵黄
囊，从第4天到第
8天是尿囊发育的
第一阶段，胚胎
由卵黄囊呼吸转
化为尿囊呼吸，
胎儿外形发育趋
于完整，上喙白
色，破壳齿明显
可见，胸腹腔尚
未封闭，心、肝、
胃都暴露与体腔
外。羊水与尿囊
液迅202速1/3/1增0 多。
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鸡胚孵化图片
第9天 尿囊沿内壳 膜迅速向下端发 展，包围了胎儿 和卵黄，并包围 部分蛋白。胎儿 皮肤透明度下降， 皮肤表面出现排 列整齐的小点， 即羽毛原基。胸 腹腔已封闭，心、 肝、胃等器官已 包入体腔。
第15天 尿
囊所包
围的蛋
白减少，
照视胚
蛋，小
端发亮
部位缩
小，胚
体与卵
黄的黑
影部分
增多。
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鸡胚孵化图片
第16天 尿囊所
包围的蛋白
进一步减少，
尿囊液颜色
变混，有少
量尿酸盐沉
积，由于吞
食蛋白，胚
胎代谢产物
增多，排泄
的尿酸盐储
存在尿囊中。
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鸡胚孵化图片
第17天 这
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鸡胚孵化图片
第6天 尿囊增长迅速， 一天之内增长了约4 倍，尿囊血管系统 迅速发育，已经覆 盖羊膜与部分卵黄 囊，但较卵黄囊血 管细，卵黄囊血管 分布在卵黄面积2/3 以上，胚胎以初具 翼和腿的外形，眼 睛黑色素更多，照 蛋可见头部与躯干 部两个小圆团，俗 称“双珠”。
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内壳膜，可与外
界进行气体交换。
照蛋时卵黄不易
转动，胚与卵黄