酶催化分光光度法测定过氧化氢
中图分类号 : O657. 32 文献标志码 : A 文章编号 : 100124020 (2009) 0420401203
Enzyme Catalytic Spectrophotometric Determination of Hydrogen Peroxide
Key words : Spect rop hotomet ry ; Enzyme catalysis ; Hydrogen pero xide ; Haemoglobin ; Alizarin red
过氧化氢在临床医学和环境化学中是一种非常 重要的活性中间体 ,在临床诊断 、环境分析等应用十 分广泛 。其中利用酶催化体系测定过氧化氢具有灵 敏度 高 , 检 出 限 低 的 优 点[1] 。辣 根 过 氧 化 物 酶 ( HRP) 能够催化过氧化氢或有机过氧化物氧化有
按试验方法对 5. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1 过氧化氢标 准溶液进行测定 ,当相对误差不超过 5 %时 ,以下共 存物质 不 干 扰 测 定 : 1 000 倍 的 N H4+ 、Na + 、F - 、 H PO24 - 、草酸 ,250 倍的 Cl - 、CO23 - 、乙二胺四乙酸 ( ED TA) 、脲 、PO34 - ,20 倍的乳酸 ,5 倍的 Cu2 + ,1 倍 的 Mn2 + 。对 于 干 扰 较 大 的 金 属 离 子 , 可 加 入 0. 1 mol ·L - 1 ED TA 溶液掩蔽 。 2. 5 标准工作曲线和检出限
收稿日期 : 2008202225 基金 项 目 : 河 南 省 教 育 厅 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 ( No . 2007150048 和 No . 2008A150029) 作者简介 : 陈亚红 (1975 - ) ,女 ,河南鲁山人 ,博士 ,副教授 ,主 要从事分析化学教学及分子光谱的研究 。
血红蛋白 (生化试剂) 储备 液浓 度为 5. 0 × 10 - 5 mol ·L - 1 ,在 4 ℃的冰箱内保存 ,使用时配成 5. 0 ×10 - 6 mol ·L - 1 。
茜素红溶液浓度为 1. 0 ×10 - 3 mol ·L - 1 。 氨水2氯化铵缓冲溶液 :以氯化铵和浓氨水按不 同比例 配 成 p H 值 分 别 为 9. 1 , 9. 5 , 9. 8 , 10. 1 , 10. 4 ,10. 7 ,11. 0 的缓冲溶液 。 其他 试 剂 均 为 分 析 纯 , 试 验 用 水 为 二 次 蒸 馏水 。 1. 2 试验方法 在 10 mL 比色管中依次加入 p H 9. 8 的氨水2 氯化铵缓冲溶液 2. 0 mL ,1. 0 ×10 - 3 mol ·L - 1 茜素 红溶液 0. 4 mL , 不同浓度的过氧化氢标准溶液 , 5. 0 ×10 - 6 mol ·L - 1 血红蛋白溶液 2. 0 mL ,用水定 容 ,混合均匀后 ,室温放置 25 min 。用 1 cm 比色皿 于 525 nm 波长处测定吸光度 A ,以水为参比 ,同时 测定空白溶液的吸光度 A0 ,计算吸光度差值ΔA = A0 - A 。
2. p H 9. 8 的氨水2氯化铵 + 1. 0 ×10 - 6 mol ·L - 1血红蛋白溶液 + 4. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1茜素红溶液 + 5. 0 × 10 - 5 mol ·L - 1过氧化氢溶液 图 1 反应体系的吸收光谱
Fig. 1 Absorptive spect ra of t he reaction system
收波长不变 ,但体系的吸光度明显降低 ,表明在血红 蛋白的催化作用下过氧化氢对刚果红具有强烈的氧 化能力 。
1 试验部分
1. 1 仪器与试剂 J A SCO V2530 型紫外2可见分光光度计 。 过氧化氢标准溶液 :用高锰酸钾溶液标定过氧
化氢溶液 ,标准储备溶液 0. 10 mol ·L - 1 ,于 4 ℃冰 箱内保存 ,标准工作液浓度为 1. 0 ×10 - 3 mol ·L - 1 , 现配现用 。
工作简报
酶催化分光光度法测定过氧化氢
陈亚红1 , 刘红梅2 , 田丰收3 , 宋毛平3 , 陈鹏丽1
(1. 周口师范学院 化学系 , 周口 466000 ; 2. 周口市第一高级中学 , 周口 466000 ; 3. 郑州大学 化学系 , 郑州 450052)
摘 要 : 过氧化氢能够氧化茜素红使之褪色 ,而模拟酶2血红蛋白对其具有催化作用 。建立了一 种以茜素红为指示剂的过氧化氢2茜素红2血红蛋白酶催化反应体系测定痕量过氧化氢的方法 。确 定了反应的最佳条件 ,体系的酸度为 p H 9. 8 的氨水2氯化铵缓冲溶液 ,最大吸收波长为 525 nm 。 线性范围为 3. 0 ×10 - 7 ～8. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1 ,检出限 (3s/ k) 为 5. 2 ×10 - 8 mol ·L - 1 ,表观摩尔吸 光率为 1. 1 ×104 L · mol - 1 ·cm - 1 。该方法可用于雨水及消毒水中过氧化氢含量的测定 。并以此 样品为基体 ,测定了方法的平均回收率和相对标准偏差 ( n = 5) 依次为 100. 3 %及 3. 26 %。
在试验条件下 ,催化反应在室温即可进行 ,既减 少了酶活性的丧失 ,又可以避免过氧化氢在高温下 分解 ,并且反应时间达 25 min 后 ,反应平衡 。试验 选择 25 min 后进行测定 。
理化检验 - 化学分册
陈亚红等 :酶催化分光光度法测定过氧化氢
2. 3 试剂加入次序对体系吸光度的影响 在 p H 9. 8 氨水2氯化铵缓冲溶液中 ,按不同次
Hale Waihona Puke 机化合物显色或褪色以及催化过氧化氢而建立的对 酶活性 、过氧化氢的测定[223] 。然而 ,天然酶不仅来 源短缺价格昂贵 ,而且为了保持其活性 ,要求试验条 件和操作环境均较为苛刻 。目前 ,包括金属卟啉化 合物 、天然活性小分子化合物 、天然蛋白质模拟物 、 金属酞菁化合物和席夫碱化合物等作为模拟酶在分 析化学中有广泛应用[427] 。已有报道血红蛋白 ( Hb) 具有与 HRP 相同的铁卟啉辅基和相似的空间结 构 ,可替代作为生物催化剂[829] 。对于酶催化体系测 定过氧化氢的氢供体 ,目前有苯酚类[10 ] 、苯胺类[11 ]
3. De pt. of Chemist ry , Zhen gz hou U ni versit y , Zhen gz hou 450052 , Chi na)
Abstract : It was fo und t hat t he oxidatio n of alizarin red by hydrogen pero xide was catalyzed enzymatically by
haemoglobin in an ammoniacal buffer solution of p H 9. 8 , leading to decolo ration of alizarin red. Abso rption maximum of t he reactio n system was found at t he wavelengt h of 525 nm. Linear relatio nship was kept in t he range of 3. 0 ×10 - 7 - 8. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1 between values of decrease in absorbance (ΔA ) and concent ration of hydrogen peroxide. Apparent molar abso rptivity (ε525 ) and detectio n limit (3s/ k) were fo und to be 1. 1 ×104L · mol - 1 · cm - 1 and 5. 2 ×10 - 8 mol ·L - 1 respectively. Base o n t hese fact s , t he met hod mentioned above was p ropo sed fo r determinatio n of t race amount s of hydrogen pero xide. Test s for average recovery and p recision of t he met hod were perofo rmed o n t he base of samples of rainwater and disinfactant liquo rs , average values of recovery and RSD′s ( n = 5) obtained were 100. 3 % and 3. 26 % respectively.
序加入茜素红溶液 、5. 0 ×10 - 5 mol ·L - 1 过氧化氢 溶液 、血红蛋白溶液 ,测定不同加入次序对体系吸光 度的影响 。试验结果表明 :加入次序为缓冲溶液 、茜 素红 、血红蛋白 、过氧化氢为最佳 。由于过氧化氢见 光易分解 ,此加入次序能最大限度发挥过氧化氢的 氧化能力 。 2. 4 干扰试验
CHEN Ya2hong1 , L IU Hong2mei2 , TIAN Feng2shou3 , SONG Mao2ping3 , CHEN Peng2l i1
(1. De pt. of Chemist ry , Zhoukou N orm al College , Zhoukou 466000 , Chi na; 2. Zhoukou N o. 1 H i g h S chool , Zhoukou 466000 , Chi na;
2. 2 试验条件的选择 2. 2. 1 介质及酸度
按试验方法对氨水2氯化铵 、硫酸 、盐酸2邻苯二 甲酸氢钾等缓冲体系进行试验 ,结果表明 :在氨水2 氯化铵缓冲溶液中 ,过氧化氢的氧化能力较强 ,因血 红蛋白的催化活性也可被氮配体所增强 ,并在 p H 9. 8 氨水2氯化铵缓冲溶液中ΔA 值较大且较稳定 。 试验选择 p H 9. 8 氨水2氯化铵缓冲溶液 。 2. 2. 2 茜素红溶液用量
酶活性的测定
式中
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）;
W—样品鲜重（g）；
1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L旳KMnO4相当于
紫外分光光度法:
H化测2O氢量2在，吸2使光40反率nm应旳波溶变长液化下吸速有光度强度即烈可(吸A测2收40出)，随过过反氧氧应化化时氢氢间酶酶而旳能降活分低性解。。过根氧据 以1min内A240降低0.1旳酶量为1个酶活单位（u）。
硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌 呤氧化酶，醋酸等。
试验环节：
计算措施：
每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时相应 旳SOD 量为一种SOD 活力单位（U），待测 样品中旳SOD 活力由下式计算：
SOD克制率（％）＝（A2-A1）/A2×100% SOD 活力（U/ml）＝（A2-A1）
据此，可根据H2O2旳消耗量或O2旳生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）旳H2O2溶液，经酶促反 应后，用原则高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多出旳H2O2
。
即可求出消耗旳H2O2旳量。
酶表活达性 ：用每克鲜重样品1min内分解H2O2旳毫克数
酶活(mgH2O2/gFW·min)=
测定茶树鲜叶APX活性旳最佳条件
PVPP旳加入量为鲜叶重旳1.5倍，提取液pH 为7.8，反应液pH为7.0，底物AsA浓度为 0.5mmol/L。
注意事项：
（1）因为测定反应是经过加液量控制在60s内，使产生旳A290光值下 降呈良好旳线性关系。
1.试剂： 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液
(pH8.2
(完整版)实验35过氧化氢酶的活性测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。
制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。
过氧化氢含量的测定
过氧化氢含量的测定：双氧水(过氧化氢，化学式H2O2)，是一种重要的无机化工产品，也是工业领域重要的氧化剂、漂白剂、消毒剂和脱氯剂。
在纺织、造纸、化工、轻工、医药、电子、食品、环保等领域应用广泛。
目前我国双氧水产品分工业级、试剂级、医药级和电子级，浓度有27.5%，35%，50%，70%等多种规格。
过氧化氢含量的测定H2O2在化学工业、医药工业、印染工业和食品行业等领域有着广泛的应用，可作为氧化剂、消毒剂、漂白剂等使用。
但H2O2在使用的过程中会产生一些羟基自由基，具有很强的氧化性，对人体有一定危害。
近年来，H2O2在环境中也普遍存在，因此对H2O2的检测具有重要的意义。
检测H2O2的方法主要有:分光光度法、滴定法、电化学法、色谱法、化学发光法、共振散射光谱法、荧光光度法、原子吸收光谱法等。
荧光光度法测定过氧化氢(一)实验部分1、仪器和试剂Cary Eclipse型荧光分光光度计。
H2O2储备溶液:取2mL30%H2O2稀释至500mL，用KMnO4法标定得准确浓度为4.06×10-2mol/L;H2O2工作溶液:1.624×10-4mol/L(临用前用储备溶液稀释);NaOH溶液:1mol/L;邻苯二胺:2×10-3mol/L;四羧基铁酞菁(FeC4Pc)0.0186g用3.5mL 0.2mol/L NaOH溶液溶解，用水定容至250mL，得到浓度为1.0×10-4mol/L。
所用试剂均为分析纯，实验用水均为二次去离子水。
2、实验方法在2支5mL刻度试管中，分别加入0.2mL NaOH，0.1mL FeC4Pc，0.4mL OPDA，其中1支管中加入一定量的H2O2工作液，用水稀释至5mL，摇匀，静置80min。
然后在荧光光度计上用1cm 石英比色皿，设置电压为700V，狭缝宽度为10nm，激发波长为423nm，发射波长为577nm，分别测定加有H2O2的溶液的荧光值F和不加H2O2的试剂空白的荧光值F0，计算△F=F-F0。
酶活力测定实验报告
酶活力测定实验报告一、实验目的酶活力测定实验的主要目的是了解酶的特性和作用机制，掌握测定酶活力的基本方法和原理，并通过实验数据的分析和处理，计算出酶的活力值，为进一步研究酶的性质和应用提供基础数据。
二、实验原理酶是一种具有生物催化活性的蛋白质或核酸分子，能够加速化学反应的进行。
酶活力是指酶催化一定化学反应的能力，通常用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量来表示。
本次实验采用的是分光光度法测定酶活力。
以过氧化氢酶为例，过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解为水和氧气。
在一定条件下，加入适量的过氧化氢溶液，然后通过测定反应体系中剩余过氧化氢的量，间接计算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的猪肝组织过氧化氢溶液（3%）磷酸缓冲液（pH 70）2、实验仪器分光光度计离心机恒温水浴锅移液器试管、量筒、烧杯等玻璃仪器四、实验步骤1、酶液的制备称取新鲜猪肝组织_____g，剪碎后放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液（pH 70），研磨成匀浆。
将匀浆转移至离心管中，在 4℃下以_____rpm 离心_____min，取上清液即为酶液。
2、绘制标准曲线取 6 支干净的试管，分别加入 0、01、02、03、04、05 mL 的过氧化氢标准溶液（10 mmol/L），然后用磷酸缓冲液（pH 70）补足至 1 mL。
向各试管中加入 2 mL 显色剂（4-氨基安替比林与酚的混合液），摇匀后在 37℃水浴中保温 15 min。
以第一支试管为空白对照，在分光光度计上于 510 nm 波长处测定各管的吸光度值。
以过氧化氢的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3、酶活力的测定取 2 支干净的试管，分别标记为测定管和对照管。
向测定管中加入 1 mL 酶液和 1 mL 过氧化氢溶液（3%），立即摇匀，在 37℃水浴中反应 5 min。
向对照管中加入 1 mL 磷酸缓冲液（pH 70）和 1 mL 过氧化氢溶液（3%），在 37℃水浴中保温 5 min。
分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究
分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究引言过氧化氢酶（catalase）是一种催化分解过氧化氢（H2O2）为水和氧气的酶，在植物细胞的抗氧化防御系统中起着重要的作用。
过氧化氢是由于氧化还原反应过程中产生的副产物，对细胞结构和功能造成损害。
因此，了解植物过氧化氢酶的活性对于研究植物抗氧化防御系统以及应对环境胁迫具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定植物过氧化氢酶活性。
该方法基于过氧化氢与酶催化下的酚酞（phenolphthalein）反应。
过氧化氢与酚酞反应生成的产物具有特定的吸收峰，根据产物的颜色变化可以间接测定过氧化氢酶活性。
实验方法材料准备：-植物样品：从植物叶片中采集新鲜样品，并切成小片。
-植物提取液：将植物样品置于离心管中，加入适量的磷酸盐缓冲液并研磨。
离心后，将上清液收集并过滤以获得植物提取液。
过氧化氢酶活性的测定步骤：1.预处理样品：将植物提取液稀释至合适的浓度，使得产生的吸光度在仪器检测范围内。
2.准备反应体系：将稀释后的植物提取液（500μL）放入试管中，加入适量的过氧化氢溶液（100μL）。
3. 开始反应：将试管放入分光光度计，设置适当的波长（通常为546 nm）并开始监测吸光度的变化。
4.计算反应速率：根据实验期间记录的吸光度数据，绘制出反应曲线，并计算反应速率。
结果与讨论通过分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的实验结果可以得出如下结论：-过氧化氢酶活性随着时间的增加而逐渐升高，表明其在反应体系中展现了催化效应。
-利用吸光度数据绘制的反应曲线，可以确定反应速率，据此可以定量分析过氧化氢酶活性。
然而，需要注意的是，分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的实验仅仅提供了该酶活性的定性或近似定量信息。
为了得到更精确的结果，还需要使用其他具体的分析方法，比如酶动力学方法。
结论本实验采用分光光度法测定植物过氧化氢酶活性，通过分析吸光度数据可以定量测定该酶的活性。
这一方法操作简便，结果快速且可靠。
伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书
最终解释权所有©伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，保留一切权利服务热线：伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司过氧化氢酶（Catalase ，CAT ）试剂盒（钼酸铵比色法）说明书分光光度法50管/48样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理：过氧化氢能氧化MoO 42-成MoO 52-,MoO 52-接受氢氧根的电子成键，分子间立即脱水缩合，得到稳定的黄色复合物(H 2MoO 4·XH 2O)n 在405nm 处有强烈吸收峰，其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。
测定出体系剩余过氧化氢在405nm 的吸光值即可反映CAT 的催化活性。
组成：产品名称SR008-50T/48SStorage 提取液：酸性提取液60ml 4℃试剂一：液体6ml 4℃避光试剂二：液体18ml RT 试剂三：液体45ml4℃说明书一份自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
最终解释权所有©伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，保留一切权利服务热线：*************伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司测定步骤：1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm 。
高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定
高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定原理过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。
测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。
用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。
放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品氧电极仪记录仪50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。
仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
绘制酶活性标准曲线在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。
用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。
样品测定在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。
根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。
如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。
颜色反应、染色类试剂实验名称发生颜色变化的物质或结构颜色变化或现象斐林试剂检测生物组织中的还原糖还原糖蓝色→棕色→砖红色双缩脲试剂检测生物组织中的蛋白质蛋白质蓝色→紫色苏丹Ⅲ/Ⅳ检测生物组织中的脂肪脂肪橘黄/红色碘液检测生物组织中的淀粉淀粉蓝色甲基绿观察DNA和RNA在细胞中的分布DNA绿色吡罗红观察DNA和RNA 在细胞中的分布RNA红色溴麝香草酚蓝水溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式CO2蓝色→绿色→黄色重铬酸钾溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式酒精橙色→灰绿色龙胆紫(醋酸洋红溶液)观察根尖分生组织细胞有丝分裂染色体深色健那绿(活性染料)用高倍显微镜观察线粒体线粒体蓝绿色台盼蓝死细胞蓝色N-1-萘基乙二胺盐酸盐泡菜制作中测定亚硝酸盐的含量亚硝酸盐(经酸化、重氮化)玫瑰红酚红分离土壤中分解尿素的细菌的检测氨红色刚果红分解纤维素的微生物的分离纤维素红色二苯胺DNA的粗提取与鉴定DNA(水浴加热)变蓝冲洗、漂洗类实验名称冲洗、漂洗试剂作用检测生物组织中的脂肪体积分数95%的酒精洗去苏丹Ⅲ/Ⅳ的浮色观察DNA和RNA在细胞中的分布蒸馏水洗去盐酸，利于染色观察根尖分生组织细胞有丝分裂清水洗去解离液，防止过度解离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精洗去卡诺氏液使用酒精的实验实验名称浓度作用检测生物组织中的脂肪体积分数50%的酒精洗去浮色绿叶中色素的提取和分离无水乙醇溶解并提取绿叶中的色素观察根尖分生组织细胞有丝分裂体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离土壤中小动物类群丰富度的研究体积分数70%的酒精保存收集的小动物DNA粗提取与鉴定体积分数95%的酒精(冷却)使DNA析出，与蛋白质分离使用盐酸的实验实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布8%盐酸改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；使染色质中DNA与蛋白质分离，利于DNA与染色剂的结合影响酶活性的条件5%盐酸设定酸性条件观察根尖分生组织细胞有丝分裂15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1：1比例制成解离液，使组织中的细胞相互分离沃泰默、斯他林和贝利斯实验刺激小肠腔引起分泌促胰液素，发现人体中第一种激素：促胰液素使用NaOH溶液的实验实验名称浓度作用检测生物组织中的还原糖0.1g/mlNaOH形成Cu(OH)2检测生物组织中的蛋白质0.1g/mlNaOH创造碱性环境影响酶活性的条件5%NaOH设定碱性条件探究酵母菌的细胞呼吸方式10%NaOH吸收空气中的CO2，排除对实验结果的影响使用NaCl 溶液的实验实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布0.95NaCl(生理盐水)保持人口腔上皮细胞正常形态DNA粗提取与鉴定2mol/L NaCl溶解DNA0.14mol/L NaClDNA的溶解度最小，DNA析出植物芳香油提取增加盐浓度，易于分层使用清水的实验实验名称作用体验制备细胞膜使细胞吸水涨破观察根尖分生组织细胞有丝分裂漂洗，洗去解离液，防止过度解离植物细胞质壁分离和复原保持植物细胞正常形态，观察洋葱鳞片叶外表皮细胞中紫色中央大液泡大小，及原生质层位置其他试剂试剂种类实验名称作用30%蔗糖溶液植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离现象30%KNO3植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离和自动复原现象35%FeCl3比较过氧化氢酶在不同条件下的分解过氧化氢分解过程中的无机催化剂，与过氧化氢酶的作用进行相互对照SiO2绿叶中色素的提取和分离充分研磨CaCO3绿叶中色素的提取和分离防止叶绿素被破坏层析液(汽油)绿叶中色素的提取和分离分离绿叶中的四种色素卡诺氏液低温诱导植物染色体数目变化固定细胞形态秋水仙素诱导染色体加倍；诱导基因突变看看网友们都有什么想法网友1实验原理：原理一：新鲜肝脏中含有过氧化氢酶，Fe3+是一种无机催化剂，它们都可以催化过氧化氢分解成水和氧。
催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性
第19 卷第4 期Vol . 19 No . 4四川省卫生管理干部学院学报J OU R NAL O F SICHUAN CON TINU IN G EDU C A TION COLL E G E O F MS2000 年12 月Dec . 2000 催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性Ξ陈大义1 ,余蓉1 ,许沧1 ,汪勇2( 1.四川省卫生管理干部学院检验系,四川成都610041 ;2 .遂宁市卫生防疫站,四川遂宁629000)[ 摘要] 目的:建立一种简单快速的血清过氧化氢酶活性分光光度测定方法。
方法: 利用过氧化氢酶催化分解底物过氧化氢,剩余的过氧化氢与钼酸铵、碘化钾反应生成单质碘,后者与淀粉反应生成蓝色,其蓝色深浅与酶的活性成反比。
结果:底物过氧化氢浓度在0 . 025～100μmol/ ml 范围内线性关系良好γ,为0 . 9995 ,检测限为0 . 025μmol/ ml 。
用本法测定316 例正常人血清,过氧化氢酶活性为50 . 78 ±17 . 46 KU/ L 。
结论: 本方法灵敏度高,稳定性较好,简单快速,适用于血清过氧化氢酶活性的测定。
[ 关键词] 血清;过氧氢化酶;活性测定[ 中图分类号] R44611 [ 文献标识码]A [ 文章编号]1003 - 403 X(2000) 04 - 0249 - 02Active Determination of CAT in Serum by Spectrophotometry/ Chen D a yi , Yu Rong , Xu Ca ng , W a ng Yong ∥Sichu an Contin2 uing Education College of Medical Sciences ,610041Abstract Objective : To establish a simple ,rapid determining met hod of CA T in serum. Method :CA T deco mposes a certain amount of H2 O2 . The surplus can act wit h ammo nium hep tamolybdate and potassium iodide. I odine ,o ne of t he p roduct s ,changes into blue colour when meeting starch mucilage. The intense of colour is inverse ratio wit h t he activit y of enzyme. R esults :There is a good linear relatio n ship in t he range of 0 . 025～100μmol/ ml H2 O2 ( r = 0 . 9995) . The detectio n limit is 0 . 025μmol/ ml . U s2 ing t he met hod ,we detected 316 serums of healt h people. The activit y of CA T in t hese people was 50 . 78 ±17 . 46 KU/ L (珔x ±s) . Conclusion :The met hod is sensitive ,stable and rapid. It is suitable to determine t he activity of CA T in serum.K ey w ords Serum ; C A T ;Activit y ;Determinatio n过氧化氢酶( CA T) 亦称触酶,主要参与体内自由基的清除,催化H2 O2 分解为H2 O 和O2 。
分光光度法测定过氧化氢的含量
0
c
.
再加入 1 0
,
.
o mo l
L
一 ’
硫 氰 酸钾 用 p H 值 =
n
1 6
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.
硫 酸 稀 释 至 刻度 摇 匀 以 试剂
,
,
空 白为参 比 用 1
m 比 色皿 在 波长 4 8 5
m
处 测量 吸光 度
收稿 日期
:
1 99 6 12 1 7
一
一
吉 林 师 范 学 院 学 报
年
条件 试 验
辉
中学 )
刘欣茹
( 吉 林 师 范 学院 化
( 吉林 市 第 三
学系 )
摘要 关键词 分类号
Fe ( 本 文 提 出用 〔
,
C S
~ N )〕 间接 测 定过氧 化
,
.
氢稀 溶 液 的 分 光 光 度 法
分 光 光度 法 氧 化 还 原 过 氧化 氢
0 65
过 氧 化 氢是 一 种 无 公 害 的 强 氧化 剂 定 过 氧化 氢 一 般 采 用 氧 化 还 原 滴 定 法 `
标定为
9
.
一 8 1 1 X 10
2
,
稀释至
9
.
8l l X
备用
.
所 用 试剂均 为分 析纯
2
实 验 方法
(1 )
取
1
.
2 mL
铁
( l )标准 溶 液于
,
0 5
m L
棕 色 容 量 瓶 中 加 入 定 量 过 氧 化 氢 溶液 1 0
m i l飞
,
.
,
mL
,
d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。