ABO血型检测(玻片法)
鉴定血型玻片法实验报告
#### 一、实验目的1. 掌握ABO血型鉴定的基本原理和方法。
2. 通过实验操作，学会使用玻片法进行血型鉴定。
3. 了解血型鉴定在临床医学、输血等领域的应用价值。
#### 二、实验原理人类的ABO血型系统由A、B、O三个基因决定，分别产生A、B、O三种抗原。
根据红细胞膜上抗原的种类和血清中抗体的种类，将血型分为A型、B型、AB型、O型四种。
在本实验中，利用玻片法观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，从而判断受试者的血型。
#### 三、实验材料1. 受试者血液样本2. A型标准血清3. B型标准血清4. 载玻片5. 滴管6. 生理盐水7. 75%乙醇8. 消毒棉签9. 抗A和抗B血清#### 四、实验步骤1. 准备工作：将载玻片擦干净，用75%乙醇消毒，放置在实验台上。
2. 滴加血清：在载玻片两端分别滴一滴A型标准血清和B型标准血清。
3. 制备红细胞悬液：用消毒棉签在受试者指尖或耳垂处取血，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，制成约5%的红细胞悬液。
4. 滴加红细胞悬液：用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。
5. 混合：用竹签两头分别混合，搅匀。
6. 观察结果：10～30分钟后观察结果，观察有无凝集现象。
7. 记录结果：记录凝集现象，并根据结果判断受试者的血型。
#### 五、实验结果与分析1. 实验结果：- 若加入A型标准血清时出现凝集，而加入B型标准血清时无凝集，则受试者为A型血。
- 若加入B型标准血清时出现凝集，而加入A型标准血清时无凝集，则受试者为B型血。
- 若加入A型、B型标准血清时均出现凝集，则受试者为AB型血。
- 若加入A型、B型标准血清时均无凝集，则受试者为O型血。
2. 实验分析：- 通过观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，可以判断受试者的血型。
- 实验过程中，需要注意操作规范，避免污染和误差。
#### 六、实验结论本实验成功利用玻片法对受试者的血型进行了鉴定，验证了ABO血型鉴定原理的正确性。
ABO血型检测(玻片法)
3．ABO红细胞血型检测波片法原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型、及O型四种。
可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原.ABO抗体有天然和免疫两种。
天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体.人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体;到5-6岁时,具有较高的效价.样本:在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血,有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。
试剂:有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。
试剂盒组成：1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。
2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。
3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体.4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。
5．蘸试剂棒。
操作步骤:1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。
4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。
5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。
6．轻微倾斜波片2分钟.不要把波片放于发热的表面上。
7．判断，解释并记录所有的反应结果。
结果判读：见表:红细胞的ABO定型正向定型结果判读抗A 抗B抗A，B---O+-+ A-++ B+++ AB有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。
注意:1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。
ABO血型的鉴定
实验步骤
1、在玻片两端分别标明“A”和“B”， 并各滴生理盐水一滴。 2、用75％酒精棉球消毒受测者一 侧耳垂或无名指尖，以采血针刺入 该处皮肤1.5—2mm再用清洁牙签蘸 取少量血液，分别混入玻片上的生 理盐水中，稍加搅拌成混悬液。
3、分别向标明“A”和“B”的两端混悬 液中加入抗A和抗B标准血清一滴并混 匀。 4、静置5-10分钟后观察结果。平置 玻片于光线充足处，后衬白色背景将 玻片轻轻摇动，红细胞结成小片块状 且不能摇散者为凝集；反之，摇动后 为均匀混悬液者为不凝集。根据有无 凝集现象判定血型。
结 果
A型血
抗A血清 抗B血清
B型血
抗A血清 抗B血清
O型血
抗A血清 抗B血清
AB型血
抗A血清 抗B血清
ABO血型的鉴定
实验目的
学会用玻片法测定ABO血型，根据测 定结果确定血型。
Hale Waihona Puke 实验原理用已知的凝集素（标准血清）鉴定出 被检者红细胞膜上未知的凝集原，从 而测出自己的血型。
实验器材
滴管、双凹玻片、牙签、采血针。 抗Ａ标准血清（从Ｂ型血的血清中 获得）、抗Ｂ标准血清（从Ａ型血的 血清中获得）、生理盐水，75%酒精 棉球。
ABO血型鉴定标准操作规程
ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。
2.试剂和材料：1、抗—A（B型血）、抗—B（A型血）及抗—A十B（O型血）分型血清，2、5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。
3、受检者血清；4、受检者5％红细胞盐水悬液。
3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混合。
（2）另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混合。
（3）立即以1000r／min离心lmin。
（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。
一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗-A、抗-B 和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混合。
ABO血型鉴定
二、ABO血型系统
1901年Landsteiner首先发现 分类依据：
凝集原 A B A＋B 无 凝集素 抗B 抗A 无 抗A＋抗B
血型 A型 B型 AB型 O型
血型与遗传
A、B抗原的前体物质是H抗原，受H 基因控制，H基因产物为L-岩藻糖转 移酶-1 酶，IB基因产物为D-半乳糖转移酶
× ♀O
♀A ♂AB × ♀O
♂O
O
♂AB
B(A)
血型与性格
A型人小时候比较任性，年轻时性格果 断刚毅，时时处处要强。走向社会后， 随着年龄的增长和社会经验的积累， 他们开始克制自己的情绪，表现出稳 重谦虚的态度，容易成为不愿过份表 现自己的谨慎派。A型人在老年时，则 显得很固执。
B型人大都有一个天真浪漫的幼年期， 随着年龄的增长，逐渐分成心直口快 和不擅交际应酬型两种倾向。B型人由 于性格自幼到老变化不大，相对来说 会让人感到他们越活越年轻。
O型人年少时比较温顺，但随着年
龄的增长，他们会积极地呈现出强 烈的自我主张和自我表现，甚至成 为非常有魄力的人。O型人从小至 老的变化是最大的，往往是少年温 顺，老来强硬。
AB型人大多小时候怕陌生人，很闭塞，但长 大以后善交朋友，交际广泛。AB型人因过于 自信，容易自满，老年时给人感觉很傲慢。 不过他们兼具A型与B型的特质，做事有计划， 但没有耐性，容易冲动，直觉敏锐，不喜欢 墨守成规，性情多变，有时表现极端的个性。 善于待人接物，很注意合情合理性，讨厌口 是心非的人，具有强烈的批评精神。 AB型 是不讲人情，不谈爱情的，男女关系在AB型 看来是件极具单纯的事情，不会像其他血型 的人弄得那样复杂 。
造成凝集的机制是抗原-抗体反应 红细胞表面上含有的特异性糖蛋白抗
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项一.原理根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。
二.试剂和材料1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注）2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清；4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。
三.方法1．试管法(1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。
(2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。
(3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细+-胞混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝MF集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
2.玻片法（1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。
ABO血型鉴定
ABO血型鉴定
【实验目的】学习用标准血清测定ABO血型的方法；掌握鉴定的原理；观察红细胞凝集现象；根据测定结果确定血型。
【实验原理】血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。
血型不相容的血液混合，红细胞会凝集成团，称红细胞凝集反应。
血型鉴定是将受试者的红细胞分别加入A型标准血清（含有抗B）与B型标准血清（含有抗A）中，根据是否发生红细胞凝集反应来确定受试者红细胞膜上有无A或B抗原。
【实验对象与用品】人，双凹玻片、采血针、消毒牙签、A型和B型标准血清、小试管、75％酒精等。
【实验步骤与结果】
1．取干净双凹玻片一块，在玻片两端标明A或B。
在A端、B端凹面中央分别滴入A型和B型标准血清各一滴。
2．用75％酒精棉球消毒指端或耳垂皮肤后，用无菌采血针刺破皮肤，挤1～2滴血于盛有1ml生理盐水的小试管中摇动混匀，制成红细胞悬液。
3.用牙签的两端各取红细胞悬液1～2滴分别放入A和B标准血清中，搅匀（竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧）。
4．室温下静置10～15min后观察结果。
如有凝集反应肉眼可见到朱红色颗粒状或细砂状沉淀，且液体变得清亮。
5．判断血型：根据被试者红细胞是否被A、B型标准血清所凝集，判断其血型。
抗原和血型的关系
红细胞膜上所含的抗原血型无A和B O
A A
B B
A和B AB
【注意事项】
1.所用双凹玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
2.混匀用的牙签两端只能专用，两种标准血清绝对不能相混。
【思考题】
1.怎样判断受试者是什么血型？
2.红细胞凝固、凝集、聚集三者有何不同？
图示：玻片法鉴定ABO血型。
ABO血型鉴定
在整个汉族中，O型血是一种非常古老的最 早血型，主要分布在中原地区，血缘来源 是黄帝集团和东夷集团。 B型血占20%，主 要是由匈奴、突厥、鲜卑、女真、契丹、 西夏融入于汉族的血液中造成的；A型血占 40%，主要分布在南方，是由楚苗南蛮等古 老民族融入华夏集团演变而来的；AB型是 B型血人南下跟A型血人繁杂而成的。
红细胞表面上含有的特异性糖蛋白抗
原物质统称为 凝集原Agglutinogen。
在血浆中则含有与之相应的特异性抗
体，称为凝集素Agglutinin。
造成凝集的机制是抗原-抗体反应
凝集原的抗原决定簇是寡糖。 凝集原A和B以糖脂和糖蛋白等形式 存在。 ABO血型抗原在多数个体（约占人 群的85％）中除分布在红细胞膜和 大多数其他细胞膜外，还以不同浓 度存在于血浆、唾液、乳汁等体液 中 凝集素是凝集原的抗体，一般为IgM 类
血型和寿命
拥有最长的估计寿命的人是O型血人， 平均寿命几乎达到87岁。这些人身体 强壮，有坚定的意志，心理上相对平 衡，并且无忧无虑。 B型血的人比O型血人早10年去世，他 们沉着冷静、顽固，并对一切事情过 于执著。 AB型血的人估计寿命平均达到70岁。 平均活得最短的是A型血的人，仅仅62 岁！
ABO血型鉴定
——玻片法
【目的要求】
1．观察红细胞凝集现象。 2．掌握ABO血型鉴定的原理。 3 ．学习辨别血型的方法。
【基本原理】
血型 ABO血型系统 Rh血型系统 输血
Hale Waihona Puke 一、血型Blood Group/type
血型：是对血液分类的方法，血细 胞（红细胞）膜上存在的特异抗原 性物质的类型。 血型分类的依据：红细胞表面是否 存在某些可遗传的抗原物质。
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3．ABO红细胞血型检测
波片法
原理:
根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原,将血型分为A型、B型、AB型、及O型四种。
可利用红细胞凝集试验即用已知抗A或抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
ABO抗体有天然和免疫两种。
天然抗体是指未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体。
人在出生前尚未产生抗体，一般在出生几个月后才开始形成自己的抗体；到5-6岁时，具有较高的效价。
样本：
在操作前应先看说明书，有的厂商推荐用全血，有的厂商指定用盐水、血清或血浆悬浮的浓度较低的红细胞悬浮液。
试剂：
有卫生部颁发的生产许可证和批准文号的厂家生产的经中国药品生物制品检定所批批检定合格，并贴有防伪标签的试剂。
试剂盒组成：
1．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A抗原抗体。
2．有生产许可证的单克隆或多克隆抗B抗原抗体。
3．有生产许可证的单克隆或多克隆抗A、B抗原抗体。
4．玻璃载波片或划分成小格的检测板。
5．蘸试剂棒。
操作步骤：
1．取清洁玻片，标明抗A、抗B、抗A、B,
2．在标记好的洁净波片上滴一滴抗-A
3．在另一标记好的洁净波片上滴一滴抗-B。
4．在每一波片的试剂上滴一滴已混匀的要检测的红细胞悬浮液（在盐水、血清或血浆）。
5．每一块波片用一个洁净的试剂棒将试剂和红细胞充分混匀，使混合物的面积大约为20mm x 40mm。
6．轻微倾斜波片2分钟。
不要把波片放于发热的表面上。
7．判断，解释并记录所有的反应结果。
结果判读：见表：
红细胞的ABO定型
正向定型结果判读
抗A 抗B抗A,B
O
+ + A
+ + B
+ + + AB
有明显的凝集块为阳性结果，2分钟后仍为均匀的红细胞悬液则为阴性结果。
注意：
1．波片法较试管法更易使操作者接触样本，工作人员必须阅读厂商说明书上的安全措施
2．波片法不适用于患者和供者血清中的抗体。