细菌的分离与鉴定共37页
高温大曲中微生物的分离与鉴定
高温大曲中微生物的分离与鉴定刘效毅;郭坤亮;辛玉华【摘要】The diversity of microbes in high-temperature Maotai-flavor Daqu was analyzed by traditional separation and culture method and modern molecular biological method.147 microbial strains were separated successfully,among them,97 strains were bacteria includingBacillus,Actinomycetes,Staphylococcus,and Micrococcus,and the other 50 strains were mould including Penicillium,Aspergillusfumigatus,Mucor,Alternaria,Phoma,Chaetomium globosum,Eurotium,and Monascus.The research results further proved the diversity of microbes in high-temperature Daqu.（Tran.by YUE Yang）%采用传统分离培养方法和现代分子生物学方法,对酱香型白酒高温大曲中微生物的多样性进行研究分析。
从酱香型白酒高温大曲中分离出147株微生物,其中97株为细菌,包括芽孢杆菌、放线菌、葡萄球菌、微球菌4类;50株霉菌,包括青霉、曲霉、毛霉、交链孢霉、茎点霉菌、球毛壳、散囊菌、红曲霉8类,研究结果表明,高温大曲中的微生物具有高度的多样性。
【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】4页(P52-55)【关键词】酒曲;微生物;鉴定;生理生化特性;16S;rRNA基因;ITS【作者】刘效毅;郭坤亮;辛玉华【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;中国科学研究院微生物所,北京100101【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;TS261.1茅台酒是高温大曲酱香型白酒的典型代表，以用曲量大，制曲温度高为特点。
盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定
山东农业科学 2008,9:49～50,54Shandong Agricultural Sciences收稿日期:2008-05-30基金项目:山东省科技攻关重点项目(项目编号:2005GG3209057)作者简介:张广志(1978-),男,山东临朐人,硕士,主要从事农业微生物与生物技术等方面的研究。
3通讯作者盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定张广志1,周红姿1,杨合同1,23,赵晓燕1(11山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东省应用微生物重点实验室,山东济南 250014;21山东省科学院生物研究所,山东济南 250014) 摘 要:从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudo m onas ),黄杆菌属(Flavobacterium ),盐单胞菌属(Halo m onas ),微球菌属(M icrococcus )和芽孢杆菌(B acillus )。
各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。
关键词:耐盐细菌;分离;鉴定;耐盐性中图分类号:S154138+1 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2008)09-0049-03Isol ati on and I denti fi cati on of Halotolerant Bacter i afro m Salt -soda SoilZHANG Guang -zhi 1,ZHOU Hong -zi 1,Y ANG He -t ong1,23,Z HAO Xiao -yan1(11S I NO -Japanese Friendship B iotechnology Research Center of Shandong A cade m y of Sciences,Shandong Provincial Key L ab for A pplied M icrobiology,J inan 250014,China;21Institute of B iology,Shandong A cade m y of Sciences,J inan 250014,China )Abstract 12hal ot olerant bacteria were is olated fr o m salt -s oda s oil and identified t o bel ong t o Pseudo 2m onas,F lavobacterium ,Halo m onas,M icrococcus and B acillus res pectively .Every strain had the t olerance upt o 10%NaCl and no potential pathogenicity t o wheat,t o mat o,hot pepper and cucu mber .Key words Hal ot olerant bacteria;Is olati on;I dentificati on;Salt t olerance 我国盐碱地面广量大,改造治理及合理开发利用这些资源是我国农业可持续发展的重要途径之一,也对改善生态环境,推动区域经济、社会和生态可持续发展具有特别重要意义[1]。
细菌的分离、培养和鉴定ppt课件
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
微生物实验10水中大肠菌群数的测定
实验九水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。
3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。
取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。
取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。
如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。
2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。
3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。
纳豆菌的分离筛选与鉴定
纳豆菌的分离筛选与鉴定钱泽栋;张佑红;卢育兵;朱丽娜;田莉【摘要】采用酪蛋白平板初筛,从日本北海道生产的纳豆食品中筛选出5株产纳豆激酶的菌株,分别编号XD1～5;再采用纤维蛋白平板复筛,通过比较透明圈大小筛选得到高产纳豆激酶菌株XD2,并通过16 S rDNA基因序列对其进行鉴定.结果表明,5株菌株均能产纳豆激酶并能分解纤维蛋白,其中,菌株XD2所产纳豆激酶的酶活最高,为989.3 U·mL-1;16 S rDNA基因序列鉴定菌株XD2为枯草芽胞杆菌.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2018(035)008【总页数】4页(P41-44)【关键词】纳豆;纳豆激酶;筛选;鉴定【作者】钱泽栋;张佑红;卢育兵;朱丽娜;田莉【作者单位】武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074【正文语种】中文【中图分类】TQ924;Q939.97纳豆是日本的传统食品，距今已有2000多年历史,纳豆是日本普通家庭日常生活必不可少的食物之一，并且被大力推广[1]。
纳豆含有丰富的营养成分，如各种氨基酸、蛋白质等，具有溶栓作用，还有药用价值[2]。
血栓性疾病严重威肋人类的生命，世界每年死于血栓性疾病的人数高达1 500万以上[3]。
各国积极研发相关溶栓类药物，纳豆激酶具有安全性好、成本低、作用迅速、纤溶活性强等众多优点[4]，受到广泛关注。
1987年，Sumi等[5]首次在纳豆中提取出纳豆激酶，发现纳豆激酶能够溶解血栓纤维蛋白。
2002年，Milner等[6]发现,纳豆激酶是200多种具有纤溶作用物质中最具潜力的纤溶蛋白酶。
赵仲麟等[7]从我国黑豆中筛选出一株纳豆激酶生产菌株，酶活为509.64 IU·mL-1。
产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定
产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定吴自祥;张天亮;杨润霞;贾晓蕊;万学瑞;马亚茹;王艳;吴润;王川;魏姣;刘磊;张小丽【摘要】通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料.采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定.结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).%In order to provide bacteria for development of cellulase preparations and cellulase engineering,the high-yield cellulase bacteria strains were screened.Separate cellulase producing strains isolated from cow or sheep dung and putrid maize straws or wood chips with Congo red plate to screen cellulase producing strains through the determination of enzyme activity with DNS assay,and observe its shape,dyeing and cultural characteristics.16S rDNA universal primers were applied to amplify genomic DNA of the strain,and to identify the species of rescreening strains.The result indicated that the isolated 16 bacterial strains with higher cellulase production were gram positive,short rod and central spores.In which,10 strains were Bacillus subtilis,6 strain were Bacillus amyloliquefaciens.【期刊名称】《草原与草坪》【年(卷),期】2017(037)002【总页数】6页(P7-11,19)【关键词】纤维素酶;16SrDNA;分离;鉴定;枯草芽孢杆菌;解淀粉芽孢杆菌【作者】吴自祥;张天亮;杨润霞;贾晓蕊;万学瑞;马亚茹;王艳;吴润;王川;魏姣;刘磊;张小丽【作者单位】甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】Q939.99随着世界经济的快速发展，能源需求量急剧上升，为了实现可持续发展，世界各国均在寻求新的替代能源，如风能、核能、太阳能、生物质能等等。
细菌的分离培养技术
细菌的分离培养技术一、常用培养基的制备（一）肉膏汤培养基 (broth medium)1、成分牛肉浸膏3～5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml2、制法(1)于1000ml蒸馏水中加入上述成份，混合加热溶解。
(2)调整pH为7.4～7.6，煮沸3～5min，用滤纸过滤。
(3)分装于适当容器内，高压灭菌103.43Kpa 20min ,置阴暗处或冰箱中贮存备用。
3、用途供一般细菌培养之用，亦可制备糖发酵管及琼脂培养基用。
（二）肉浸汤培养基(infusion medium)1、成分⑴新鲜牛肉(去脂绞碎)500g 蛋白胨10g⑵氯化钠5g 蒸馏水1000ml2、制法(1)取新鲜牛肉(兔肉)除去肌键、肌膜及脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎或用刀剁碎，置于糖瓷或铝制锅中，每500g碎肉加水1000ml混合后置冰箱中过夜。
(2)次日取出肉浸液，搅拌均匀，煮沸30min并常搅拌以免沉淀烧焦。
如蛋白质已凝固，即停止加温，补足失去水分。
(3)用纱布或绒布挤压过滤，使所有肉汁尽量挤出，再用脱脂棉滤入大三角烧瓶内。
(4)在滤液中加入蛋白胨(10g/L)、氯化钠(5g/L)，再加热使其全部溶解。
(5)调整pH至7.6～7.8，煮沸10min，以滤纸过滤。
(6)分装三角烧瓶，塞好棉塞，再用厚纸将瓶口扎好，高压灭菌103.43KPa 20min，冷却后置阴暗或冰箱中保存备用。
3、用途供作基础培养基用，营养较肉膏汤好。
一般营养要求不高的细菌均能生长。
（三）普通琼脂培养基(agar medium)1、成分牛肉浸膏3～5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂20～25g蒸馏水1000ml2、制法⑴将上述成分置于三角烧瓶中，煮沸使其溶解(须防止外溢)，并补足由于蒸发失去的水分。
⑵趁热调整pH至7.6，以绒布过滤，分装试管或烧瓶内，高压灭菌103.43KPa 15min。
⑶琼脂斜面培养基制法：高压灭菌后，趁琼脂尚未凝固前，将其分装在已灭菌的试管内，斜放在台面上，待凝固后即成琼脂斜面培养基。
细菌的分型及其检测技术PPT课件
过夜增殖噬菌体。分离纯化单斑
3次，至平板噬斑形态大小一致
纯第化11页/共70页
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• （三）噬菌体的增殖、保存
1、噬菌体增殖 液体增殖法：定时加入对数期菌体 固体增殖法：同时加大菌体和噬菌体的浓度 2、去除菌体
细菌滤器法和三氯甲烷法
3、噬菌体的保存
冷藏保存：无需防腐剂，分装后7d，不宜超过4w
冷冻干燥：2年
鉴定时不需活分析细菌在体外培养物中的代谢产物如厌氧菌产生的短链脂肪酸色谱图需氧菌的有机酸色谱图等临床标本中检出和鉴定细菌如检测脑脊液中的乳酸对细菌性脑膜炎做出明确诊断等热裂解气相色谱法鉴定细菌将样品干燥高温裂解碎片色谱图鉴定微生物如沙门菌属十种血清型鉴别高分辨气相色谱法分析冷冻条件下细菌的挥发性有机产物鉴定引起冷冻品腐败的微生物液相色谱法基于混合物中各组分对固定相和流动相亲和力的差异分离组分的
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(二)培养基和抗菌药物纸片
1．抗菌药物纸片：商品化，选择直径为，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片 加样或浸泡方法使每片含药量达规定要求。含药纸片密封贮存于超低温冰箱。
2．培养基：水解酪蛋白（M-H）培养基是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养 基，4℃保存。
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第二节 细菌素分型技术
一、概述
• 细菌素(bacteriocin)
• 是某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质仅 对与产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产 生菌本身不敏感。如大肠菌素、绿脓菌素、蜡样芽 胞杆菌素等。
• 抗生素
• 抗菌素是细菌、真菌等微生物在生长过程中为了生 存竞争需要而产生的化学物质,这种物质可保证其自 身生存,同时还可杀灭或抑制其它微生物。细菌产生 的有多粘菌素、抗菌肽等。