微生物弧菌属和弯曲菌属
弧菌、弯曲菌

3.检验方法 ⑴显微镜检查:G-弯曲杆菌,菌体细长呈弧 形、螺旋形和S形,呈鱼群样排列。 ⑵快速诊断:①尿素酶试验;②13CO2呼气试 验;③血清学试验;④PCR检测;⑤核酸探 针检测HP ⑶分离培养:
三、生化反应 发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等, 迟缓发酵乳糖。氧化酶、明胶酶和DNA酶 试验均阳性。能还原硝酸盐、吲哚试验阳 性。 绵羊红细胞溶解试验可鉴别古典生物型 (-)和ElTor生物型(+)
四、抗原结构与分型 具有耐热的O抗原和不耐热的H抗原 O抗原特异性高,具有群特异性和型特 异性,有O-1群和非O-1群。O-1群弧菌又 分为三个血清型。 五、抵抗力 耐碱力较强、对庆大霉素有耐受性
微生物学检验 1.标本采集: 粪便、肛拭子和可疑食物 2.检验程序(图19-2)
3.检验方法及鉴定 ⑴增菌培养 ⑵分氧化酶阳性 + 分类:Ⅰ.真正弯曲菌
ⅠA.嗜热、肠道致病性菌种 空肠弯曲菌空肠亚种 大肠弯曲菌等 ⅠB.其他真正弯曲菌 胎儿弯曲菌胎儿亚种 胎儿弯曲菌性病亚种
分类:ⅠB.其他真正弯曲菌 痰弯曲菌痰液亚种 痰弯曲菌牛生物亚种 简明弯曲菌等 Ⅱ.嗜湿菌种 与螺旋菌属相关弯曲菌 幽门螺杆菌
一、形态染色: G-杆菌、菌体细长, 呈弧形、螺旋形、S 形,无荚膜、无芽胞、 有鞭毛(有动力)
二、培养 微需氧菌 气体要求:5%O2、10%CO2、85%N2 温度要求:空肠弯曲菌43°C生长;胎儿弯 曲菌25°C生长;简明弯曲菌在25°C和 43°C均不生长;各种弯曲菌在37°C均可 生长。
致病物质: 1.毒素:肠毒素、细胞毒素和内毒素 2.侵袭力:粘附、定居能力
所致疾病: 肠道感染:空肠弯曲菌引起急性肠炎;幽门 螺杆菌与胃、十二指肠等慢性疾病有关。 肠道外感染:胎儿弯曲菌胎儿亚种引起:败 血症、心内膜炎、流产等;简明弯曲菌与 牙周病有关 。
弧菌属

弧菌有100多种,广泛分布于自然界,尤以水中最多见。 形态短小呈弧形或杆形,菌体一端有鞭毛,能活泼运动, 革兰氏染色阴性,培养特性为喜碱怕酸,皆有内毒素,霍 乱弧菌可产生外毒素;大多数弧菌不致病,能引起人体致
病的有以下几种:
1,霍乱弧菌:是引起人类霍乱病的烈性病原菌;
2,不凝集弧菌(non-agglutinable vibrio, NAG), 即 不被抗霍乱弧菌免疫血清所凝集的弧菌,有很多种,小部 分可引起人类致病,发生霍乱样腹泻;
为7.6-8.2;对酸敏感; 3, 生长迅速: ◆ 碱性蛋白胨水生长为浑浊,表面形成菌膜;
◆ 碱性琼脂培养基生长有菌落较大、扁平、湿 润、 边缘整齐、透明似水滴;
◆ 亚碲酸钾的平皿上,菌落呈黑色。
(三)、生化反应:
1, 糖发酵反应:霍乱弧菌能发酵蔗糖、甘露糖、 产酸不产气;不分解阿拉伯糖
2, V-P试验:大多Eltor型V-P试验为阳性;而经 典型为阴性;
-
-
第2次 1826-37(11) +++ +++ +++ +++ +++ ++
第3次 1846-62(16) +++ +++ +++ +++ +++ -
第4次 1864-75(11) +++ +++ +++ +++ +++ -
第5次 1883-87(4) +++ +++ +++ +++ -
5.4.2弯曲菌属微生物学检验

组织切片染色镜检
组织块经福马林固定、切片经W-S银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染 色等染色后镜检HP,以W-S银染效果最好
免疫组化
用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整HP及破碎的菌体或抗原成分
间接免疫荧光法(IIF)
核酸检测
PCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌,但目前尚未 被广泛采用
空肠弯曲菌(箭头所指),儿童粪便涂片
(四)分离培养与鉴定
1. 分离培养
粪便或肛拭标本直接接种改良Campy-BAP选择平板 血、脑脊液标本先接种于布氏肉汤增菌后转种分离培养基 微氧环境培养 空肠/大肠弯曲菌最适生长温度42~43℃,24h可观察菌落,
营养要求较高,一般需含血液或血清才能生长,常用的培 养基有哥伦比亚血琼脂、心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养 基等
最适温度:37℃ 不能生长:42 ℃,25 ℃
三、生物学特性
HP生长缓慢,需经48~72h才长出菌落 圆形孤立的小菌落,无色半透明呈露滴状,直径约0.5~1mm, 血平板上有轻度溶血。 沿接种线扩散生长,融合成片,扁平,无色半透明
将接种后的平板放入微需氧和98%以上湿度的环境培养
鉴定
主要根据菌落特征、形态和染色性;37℃生长;氧化酶和触 酶均阳性、脲酶强阳性;对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感;在 1%甘油和1%胆盐中均不生长。HP的主要培养和生化特性见 表12-3
(四)分离培养与鉴定
分离培养
宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上 反复涂擦,或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种
如于37℃培养则需48~72h 胎儿弯曲菌于25℃和37℃均可生长
弧菌的鉴定要点

弧菌是一类以弧状细菌形态为特征的微生物,其中最熟知的是弧菌属(Vibrio)和弧菌弯曲菌属(Campylobacter)。
下面是进行弧菌鉴定时的一些要点:形态特征:弧菌通常呈弧状或弯曲的形态,有时也会呈直杆状。
它们是革兰氏阴性菌,通常具有单一的极少鞭毛。
营养需求:弧菌属通常是好氧菌,需要氧气进行生长。
它们多数是嗜盐菌,喜欢在高盐浓度的环境中生长。
生理特征:弧菌通常是好氧发酵菌,能够利用多种碳源进行生长。
它们具有强烈的细胞外酶活性,可以产生一些特殊的酶,如溶血素、黏附素等。
生物化学试验:进行弧菌鉴定时,可以使用一系列生物化学试验,如氧化/发酵碳水化合物试验、氧化酶试验、羟基酸氧化试验等。
分子生物学方法:近年来,分子生物学方法在微生物鉴定中得到广泛应用。
可以使用PCR或基因测序等技术,通过特定基因的序列分析来确定是否为弧菌,并进一步确定其种属。
需要注意的是,弧菌具有多样性和复杂性,在鉴定时可能会遇到一些挑战。
因此,建议在进行弧菌鉴定时结合多种方法与技术,以提高准确性和可靠性。
07.螺形菌

第二节 副溶血性弧菌
副溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌,存在 于近海岸的海水和鱼、贝类海产品中,具有 致病性的菌株能引起人类食物中毒,是我国 沿海地区最常见的一种食物中毒
1、G- 菌,常呈弧状、杆状、丝状等多 形性,菌体一端有单鞭毛,营养要求不高, 故在外界可长期生存。本菌特点嗜盐,在含 3.5%-4.5%NaCl的培养基中最易生长,在无 盐蛋白胨水中生长很差,甚至不生长。生长 的pH范围是7.0-9.5,最适pH为7.7
2、绝大多数致病性副溶血性弧菌能产
生溶血毒素使人或家兔的红细胞溶解。其溶
血能力与该菌的致病力呈平行关系,而大多
数非致病性菌株则无此毒素。该毒素也具有
肠道毒性
3、副溶血性弧菌引起的食物中毒 经海产品及盐淹渍后,经2-26h潜伏期后
发病 主要症状是腹痛、腹泻,呕吐及发热,粪便为水样 或糊状,少数有血水样便或粘液血便。多发于夏秋季, 病程较短,一般恢复较快
90%以上。
幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等
疾病相关。
一、生物学特性
形态结构 G-,细长弯曲呈螺形。一 端或两端有多根带鞘鞭毛, 运动活泼有动力。鞭毛在定 居中起锚住作用。
培养特性
1. HP为微需氧菌,最适温度为37℃
2. HP对湿度(85%以上)要求较高,营养要求较高
需含血液才能生长,常用血琼脂培养基,经
72h才长出菌落
3. HP的菌落形态为圆形孤立的小菌落,无色半 透明呈露滴状
生化反应
• HP生化反应不活跃,不能利用糖类。
• HP具有大量高活力的胞外脲酶,故脲酶活性的
测定可作为HP的快速诊断方法。
• 还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、α-谷
氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。
致病性弧菌

古典生物型(Classical biotype) 埃尔托生物型(EL-Torbio-type)。
一、生物学性状
1、形态与染色
革兰染色阴性;弧性或逗点状;在病人“米泔水” 样便中呈“鱼群”样排列;
有一根单鞭毛,运动非常活泼,呈鱼群穿梭样或流 星状,
有菌毛和性菌毛,0139群有荚膜。
致病性弧菌
弧菌属(Vibrio)
弧菌属,为一大群菌体短小、弯曲成弧形的 革兰阴性菌
主要特点
有单鞭毛,运动活泼 培养要求为碱性环境 自然界广泛分布,以水中最多 只要有霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌
一、霍乱弧菌
霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水,死亡率 甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
诊断
标本采集:患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养:SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
抵抗力
El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌 在外环境中的生存力较古典型为强
不耐酸,在正常胃酸中仅能存活4分钟 水中存活长,河水、井水、海水中1-3周 怕热,100℃1-2分钟死亡
致病物质
ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基 因
不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap
生化反应:
过氧化氢酶、氧化酶阳性 发酵多种糖类,产酸不产气 还原亚硝酸盐,吲哚反应阳性 霍乱红反应阳性,不同生物型生化反应不同 (当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中,产生靛基质与亚硝
酸盐,在浓硫酸存在时,生成红色,称为霍乱红反应)
抗原的构造与分群
有不耐热H抗原和耐热的O抗原。
医学微生物学名词解释总结

第一二章细菌的形态结构与生理1、微生物:(P1)存在于自然界形体微小,数量繁多,肉眼看不见,必须借助与光学显微镜或电子显微镜放大数百倍甚至上万呗,才能观察的一群微小低等生物体。
2、微生物学:(P2)用以研究微生物的分布、形态结构、生命活动(包括生理代谢、生长繁殖)、遗传与变异、在自然界的分布与环境相互作用以及控制他们的一门科学3、医学微生物学:(P3)主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学症状、对人体感染和致病的机理、特异性诊断方法以及预防和治疗感染性疾病的措施,以控制甚至消灭此类疾病为的目的的一门科学4、代时:细菌分裂倍增的必须时间5、细胞壁:包被于细菌细胞膜外的坚韧而富有弹性的膜状结构6、肽聚糖或粘肽:原核细胞型微生物细胞壁的特有成分,主要由聚糖骨架、四肽侧链及肽链或肽键间交联桥构成7、脂多糖:(P13)LPS 革兰阴性菌细胞壁外膜伸出的特殊结构,即细菌内毒素。
由类脂A、核心多糖和特异多糖3个部分组成8、质粒:(P15)是细菌染色体外的遗传物质,双链闭合环状DNA结构,带有遗传信息,具有自我复制功能。
可使细菌或的某些特定形状,如耐药、毒力等9、荚膜:(P16)某些细菌能分泌粘液状物质包围与细胞壁外,形成一层和菌体界限分明、不易着色的透明圈。
主要由多糖组成,少数细菌为多肽。
其主要功能是抗吞噬,并有抗原性10、鞭毛:(P16)从细菌细胞膜伸出于菌体外的细长弯曲的蛋白丝状物,是细菌的运动器官,见于革兰阴性菌、弧菌和螺菌。
11、菌毛:(P17)是存在于细菌表面,由蛋白质组成的纤细、短而直的毛状结构,只有用电子显微镜才能那个观察,多见于革兰阴性菌12、芽孢:(P18)那个环境条件下,某些革兰阳性菌能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小题,成为内生孢子,简称芽孢13、细菌L型:(P14)即细菌缺陷型。
有些细菌在某些体内外环境及抗生素等作用下,可部分或全部失去细胞壁。
14、磷壁酸:(P12)是由核糖醇或甘油残基经磷酸二酯键互相连接而成的多聚物。
微生物学--弧菌

分离培养与鉴定
分离培养 粪便或肛拭标本:直接接种改良Campy-BAP
选择平板 血、脑脊液标本:布氏肉汤增菌后转种分离培
养基 微氧环境培养 不同细菌培养温度不同
Key Points
革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼 微需氧:最佳生长环境为含5%O2、10% CO2、
85%N2 最适生长温度因菌种而异 营养要求高 氧化酶、触酶阳性,不能利用、不发酵各种糖类,
(3)快速诊断:O1和O139抗体做玻片凝集
(4)霍乱毒素的测定
二 分离培养和鉴定
初次分离用pH8.5碱性蛋白胨水,经4~6小时 液体表面大量繁殖,形成菌膜。
二 分离培养和鉴定
TCBS(硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板)
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成 发酵蔗糖的较大的黄色菌落
含亚碲酸钾的培养基:4号琼脂 庆大霉素琼脂
临床意义 (致病因素)
1.侵袭力
进入小肠,鞭毛、菌毛、分泌黏液,O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义 (致Βιβλιοθήκη 因素)2.霍乱肠毒素 MW:80000-90000 A1:活性亚单位 21812 A2:连接亚单位 5000 B:结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素(CE, cholera enterotoxin)
鉴
定
定
生物学特性(培养特征)
需氧或兼性厌氧 营养要求不高,嗜盐(无盐不生长,最适盐浓度
3%) TCBS上形成绿色菌落
副溶血弧菌在TCBS 上菌落
鉴定特征
革兰阴性弧菌或杆菌,动力(+) 氧化酶(+),临床分离株脲酶常(+) TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验 神奈川现象(+) 各种生化试验 TDH和TRH的检测:毒素和基因检测
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血水样便
三、微生物学检查法
标本:采患者粪便、肛拭或剩余食物。 分离培养:SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板。 血清学鉴定
四、防治原则
治疗可用抗生素。
空肠弯曲菌(C.Jejuni)
引起细菌性肠炎最常见的病菌
致病性
产生细胞毒素和一种不耐热肠毒素 散发性细菌性肠炎 传播:消化道 腹痛,腹泻,血便或果酱样便;头痛等;病 程5~8d,自愈
B亚单位
(结合单位
)
与小肠粘膜上皮细胞GM1神经 节苷脂受体结合,介导A亚单位 进入细胞。
鞭毛、菌毛及粘液素酶等
2. 所致疾病
霍乱:烈性肠道传染病,我国甲类法定传病。 传染源:患者及无症状感染者 传播途径:粪-口途径,通过污染的水或食物 临床表现: 剧烈的腹泻和呕吐(米泔水样腹泻), 大量水分和电解质丧失,引起低容量性休克和肾 衰竭(死亡率高达60%)。
一、生物学性状
1. 形态与染色
G-、呈弧型或逗点状、单鞭 毛;液体中运动非常活泼, 呈穿梭样;涂片中呈鱼群状 排列。
扫描电镜下的霍乱弧菌
2. 培养特性
营养要求不高,在碱性琼脂平板上生长良好。
TCBS平板上黄色菌落
3. 抗原构造与分型
根据O抗原可分为155个血清群,其中O1、 139群引起霍乱。根据表型差异,O1群可分为两 个生物型:古典生物型和ElTor生物型。
3. 免疫性
感染后可获得牢固免疫力,SIgA起主要作用。
“米泔水”样便“Rice-water” stool
三、微生物学检查
1. 标本:污染的水样、食物和粪便,病人肛试子
2. 直接镜检:悬滴法观察细菌呈穿梭样运动;涂 片可见G-弧菌,鱼群状排列。
3. 分离培养:碱性蛋白胨水或选择培养基(TCBS) 增菌。
4. 血清学鉴定:玻片凝集反应。
四、防治原则
• 控制传染源,切断传播途径
改善环境, 加强水源管理
• 提高易感者免疫力: 疫苗预防接种
霍乱死菌苗:肌肉注射,保护率50%,3-6个月; 减毒重组活菌苗:口服,保护率82-100%; 菌苗加类毒素:B亚单位+灭活菌细胞,3年以上 霍乱、伤寒杂交菌苗,基因工程菌苗
一、生物学性状
TCBS培养基:显示绿色菌落,非蔗糖发酵 嗜盐(halophilic)培养:在培养基中以含3.5%的 NaCl最为适宜。不耐热,不耐酸。
二、致病性与免疫性
食物中毒
经烹饪不当的海产品或盐腌制品传播。
潜伏期5~72小时,可从自限性腹泻至中度霍乱 样病症。属感染性食物中毒。
2004年4月28日中午12时左右,嘉兴市秀城区某 餐厅。婚宴10桌,100人就餐。从当日17时起,就餐 人群开始出现病人,至次日11时,中毒病人31人, 罹患率为31%。症状主要为腹痛、腹泻、恶心、呕 吐等胃肠道症状。
古典生物型引起。 • 第七次霍乱大流行发生在1961年,源于印度尼西亚,然后传
到亚洲其他国家和欧洲,1970年进入非洲,百年不见霍乱踪 影的非洲从此深受其害。由Eltor生物型引起。 • 1992年10月印度和孟加拉相139群引起。
津巴布韦2008年8月爆发的霍乱,当时9.6万 多人被感染,4200多人死亡。缺少饮用水和污水 处理设施,更加剧了疫情。
4. 抵抗力
六怕六不怕:怕热不怕冷、怕干不怕湿、 怕酸不怕碱、怕咸不怕淡、怕氯不怕酒、怕茶 不怕奶 。
二、致病性与免疫性
1. 致病物质
霍乱肠毒素:最强的致泻毒素,不耐热。
A亚单位
(毒性单位)
腺苷酸环化酶活性增高,使细 胞内cAMP水平升高,主动分 泌Na+、K+、HCO3-和水,导 致严重的腹泻与呕吐。
弧菌属和弯曲菌属
一大群菌体短小,弯曲呈弧形的G-单毛菌。 分布广泛,尤以水中最多,致病菌主要有霍 乱弧菌和副溶血性弧菌。
第一节 霍乱弧菌
(Vibrio cholerae)
流行病学概况
• 1883年KOCH在埃及从腹泻患者中分离出。 • 引起烈性传染病——霍乱。1817年至今已引起7次世界性大
流行。 • 1817—1923年的百余年间发生的六次世界性霍乱大流行皆由
诊断与防治粪便标本涂片、镜检 主要是注意饮水和食品卫生
幽门螺杆菌 (H.pylori)
与胃炎、 十二指肠 溃疡、胃 溃疡密切 相关,与 胃癌的发 生有关
致病性与免疫性
确切机制尚未完全阐明,与胃窦炎、 十二指肠溃疡和胃溃疡关系密切。 • 可能与胃癌的发生也有关。
• 治疗关键
及时补充液体和电解质,预防大量失水导致的低血容 量性休克和酸中毒。
第二节 副溶血性弧菌
V. parahemolyticus
1950年从日本一次暴发性食物中毒中分离发现。 广泛存在于近岸海水和鱼贝类等食物中,在沿海地 区是引起食物中毒最常见的一种病原菌。 我国华东沿海该菌的检出率为57.4~66.5%,尤以 夏秋季较高。海产鱼虾的带菌率平均为45-48%,夏季可 高达90%。腌制的鱼贝类带菌率也可达42.4%。