黄曲霉素奶糕M1ELISA检测试剂盒操作步骤
黄曲霉毒素试剂盒说明书
黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。
挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。
黄曲霉毒素M1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉毒素M1检测卡【简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
GB 2761-2001中规定：乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的最大允许限量为1μg/kg，即1ppb。
本检测卡适用于液态奶和奶粉的检测，检测限为1μg/kg【精密度】同时使用本产品和黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒对 300 份样品包括 161 份阴性样本和 139 份阳性样本进行检测，检测结果表明，本产品与黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒的结果符合率为 98％。
【样品处理】奶粉1、取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）。
2、震荡3min，使充分溶解。
3、2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）。
4、后用移液器彻底去除上层奶油。
5、下层脱脂牛奶与纯净水1:6稀释用于检测。
奶样（1）取1 mL新鲜的牛奶（含脂牛奶）样本置于2ml离心管中，降温至10℃以下4000 r/min离心10分钟后，弃去上层脂肪（约四分之三），剩余四分之一奶样与纯净水1:6（1份奶样+5份纯净水）互溶，互溶后刻度刚好为总体积1ml。
用力震荡1min，使充分溶解后为备用待检液；（2）脱脂牛奶待检液配法，脱脂牛奶与纯净水1:6（1份脱脂牛奶+5份纯净水）互溶，用力震荡1min，使充分溶解后为脱脂牛奶备用待检液；【检测步骤及结果判断】检测前请仔细阅读使用说明书，检测应在室温下进行。
检测步骤为：（1）将铝箔袋沿切口部位撕开，取出检测卡放于平整的台面上，并做好标记；（2）用吸管吸取待检样品溶液，垂直加入2~3滴于加样孔中（注：样本中不要带入气泡），反应3~5min 判断结果。
黄曲霉M1酶联免疫法检测方法
黄曲霉毒素M1酶联免疫测试1．概述REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒可用于检测乳酪，牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1的残留。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉素素B1羟基化的产物。
黄曲霉毒素已被确认是最常见的致癌物。
该试剂盒特点包括：样品无需前处理提取，可直接用于检测。
应用于牛奶检测时有高灵敏度（0.005ng/g或ppb）低检测限（0.005ng/g或ppb）。
高重现性。
2．试剂盒原理REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗体已经包被于微孔板上。
药物分析时，样品加入微孔孵育，洗板后加入酶标记物，若样品残留有黄曲霉M1就会竞争包被抗体，抑制HRP酶标与包被抗体结合，加入TMB后显色反应，颜色显色强度与样品中靶毒素的含量成反比。
3.试剂盒组成部分和储存内容物规格保存条件黄曲霉毒素M1包被板(Aflatoxin M1 Plate) 96孔板（12×8 孔）2-8℃黄曲霉毒素M1标准品(Standards)：0ng/ml阴性质控(Negative control)0.005ng/mL0.015ng/mL0.03 ng/mL0.09ng/mL0.27ng/mL回收用10ng/ml(Spiking，可选) 1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8ml2-8℃HRP-酶标记物(HRP-Conjugate) 12mL2-8℃20×浓缩洗液(Wash Solution) 28mL终止液(Stop Buffer) 14mLTMB底物(TMB Substrate) 12mL10x PBS缓冲液（可选）25mL10x 牛奶提取液（可选）5mL本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。
如果一个月内不使用试剂盒，黄霉素毒素M1标准品和HRP-酶标应置于-20℃或者冷冻保藏。
4.样品检测下限检测物质检测下限（ng/g）牛奶0.005奶粉0.005（按1:10稀释成液体奶）乳酪0.05酸奶0.015.交叉反应数据药物交叉反应率（%）黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1) 100黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1) 46黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2) 35黄曲霉毒素M2(Aflatoxin M2) 29黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1) 27黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2) 66．未提供的设备或材料1)酶标仪(450nm)2)微量加样器(10、20、100和1000μL各一支)3)多道枪：50-300μL4)黄曲霉M1清洗试剂（可选）7.注意事项实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。
ELISA检测试剂盒操作流程
ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本：例如血清、尿液、细胞上清液等。
-ELISA试板：根据样本数量选择96孔或384孔的板。
- 试剂盒：包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。
2.样本处理-对于血清等生物液体样本，可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。
-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。
3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出，将不需要的孔进行盖膜封闭。
- 根据试剂盒说明书，添加适量的板液（Coating Buffer）到每个孔中，使其充分覆盖孔内壁。
-封闭板液的孔，将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。
4.样本添加-倒掉盘液，用PBS或TBST洗板3次，去除残留物。
-将样本加到每个孔中，根据需要添加正样本、负样本和待测样本。
-注意每个样本的剂量和添加的体积，通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。
5.抗体添加-清洗步骤同上，将洗板缓冲液加到孔中，重复3次。
-加入检测抗体，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。
6.洗涤-洗涤步骤同上，用洗涤缓冲液洗板，重复3次。
-每次洗涤时，将洗液完全加满孔，静置1分钟，然后倒出洗液。
-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制，以将非特异性结合物质彻底清除。
7.底物添加-清洗步骤同上，将洗液加到孔中，重复3次。
-加入底物，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-底物液体应完全覆盖孔底，防止反应过程中氧化。
8.反应停止-根据试剂盒说明书，将反应停止液加入到孔中，停止底物的反应。
-注意反应停止液的体积和浓度，以保证反应的准确停止。
9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。
-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。
-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。
总结：ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。
关于黄曲霉毒素M1定性快速检测试纸条的说明——牛奶
黄曲霉毒素M1快速检测试纸条使用说明书（乳品）【原理】本产品应用胶体金免疫竞争法，通过特异性抗原抗体反应，快速检测乳品中黄曲霉毒素M1残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
【检测限】0.3μg/kg （μg/kg=ppb）【适用范围】生鲜乳【产品组成】黄曲霉毒素M1快速检测试纸条（5桶，40份/盒）；黄曲霉毒素M1微孔试剂（5桶，40份/盒）；一次性手套；说明书【需要但未提供仪器】胶体金读数仪【检测步骤】1．仪器准备：打开胶体金读数仪，预热10分钟。
2. 样品检测a．使用前将试纸条、微孔试剂和待检样品恢复至室温（20～25℃）。
b．吸取200µL样品于微孔试剂中，缓慢抽吸至检测样品与微孔试剂充分混匀（大约5-6次）；室温孵育4min。
c．从试剂桶中取出所需数量的试纸条并插入微孔试剂中，室温反应5min，立即取出试纸条1分钟内进行结果判断。
3. 结果判读♦检测物质浓度低于检测限，或不含待检测物质；♦阳性（＋）：T线比C线显色浅，或T线无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限；♦无效：C线未显色，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
4．结果分析ａ．用吸水纸将试纸条下端吸水纸轻轻擦去，（注：勿碰到试纸条白色NC膜表面），打开样品卡壳，将试纸条插入样品卡壳槽内，保证白色NC膜表面的两条色带在卡壳视窗中间；ｂ．将样品卡壳插入胶体金读数仪样品卡槽中，点击“开始检测”键，按照仪器操作程序，读取结果。
【储存及有效期】2～8℃避光干燥保存，有效期12个月（生产日期、有效期及批号见外包装）。
【注意事项】1.检测试纸条及微孔试剂请在保质期内一次性使用；2.打开微孔试剂时，请轻轻揭开密封膜，切勿用力迅速揭开，以免有粉末飞出；3.微孔试剂打开后请在一个小时内使用完，否则失效，影响检测效果；4.在产品未使用完之前，切勿将桶中干燥剂丢弃;5.所检测牛奶样品必须为均匀液体，不能有结块、发酸和沉淀等现象；6.本检测方式为筛选方法，如遇阳性样本，请按照规定的标准进行取样，用确证法进行确证；7.实验中遇到的任何问题，请与供应商联系。
美国helica黄曲霉毒素M1检测试剂盒
美国helica黄曲霉毒素M1检测试剂盒美国helica黄曲霉毒素M1检测试剂盒．概述本产品是⼀敏感的⽤于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫学检测⽅法。
适⽤于⽜奶和⼀些乳制品中黄曲霉毒素M1的检1．概述测。
如果有必要可以利⽤HPLC, GC/MS⽅法加以证实。
2.安全性说明试剂盒含有少量的黄曲霉毒素M1；底物中含有四甲基联苯胺；终⽌液中含有稀硫酸，避免⽪肤和粘膜接触终⽌液；以上各溶剂不⼩⼼滴到⽪肤上请⽤⽔冲洗。
3.存储和稳定性存储：4–8℃在使⽤前试剂盒的温度要恢复到室温(20-25℃)。
试剂在有效期内都可以使⽤。
．原理此试剂盒是通过AFM1抗体来检测AFM1的。
将标准品或样品加⼊到微孔中和包被在微孔底部的抗AFM1的⾼亲和⼒抗4．原理体发⽣反应。
如果样品中存在AFM1，它将和包被的抗体结合，此过程孵育30分钟，洗板。
然后加⼊HRP（辣根过氧化物酶）标记的毒素，酶标记毒素与标准品或者样品与抗体没有结合的部位相结合。
孵育60分钟，倒出孔⾥的液体，清洗后加⼊显⾊底物作⽤20分钟，在酶的作⽤下孔⾥将会出现蓝⾊。
显⾊颜⾊的深浅与结合的酶结合物的量成正⽐例的关系，与标准品或样品中AFM1的量成反⽐例关系。
所以，标准品或样品中的AFM1浓度越⾼，显⾊的蓝⾊将会越浅。
加⼊酸，终⽌反应，底物颜⾊由蓝⾊变为棕黄⾊。
微孔板放进酶标仪⾥，在OD450nm读取吸光度值。
样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相⽐较，相对应得出结果。
如有需求请联系：深圳容⾦科技有限公司联系⼈：曾先⽣⼿机：133********Q Q：643173684传真：0755-********Email：reagen5@地址：深圳市宝安区福永街道怀德咸⽥三区富德商务⼤厦1030室邮编: 518103。
黄曲霉素M1试剂盒说明书1
Bioxl Diagnostic Systems,Inc2814,Brigadoon Dr.#21 1、 概述 黄曲霉素是霉菌的产物，高毒性并致癌。
黄曲霉素M 1不是微生物而是在动物体中由黄曲霉素B 1转化形成的。
当奶牛食用有黄曲霉素B 1污染的饲料后，通过消化和分泌，黄曲霉素就会转化为羟基化的黄曲霉素M 1，绝大部分分泌到乳汁中。
因此，黄曲霉素M 1浓度反映了饲料中黄曲霉素B 1的含量。
欧盟对奶中的黄曲霉素M 1限量是0.05ppb （50ppt ）。
用竞争酶联免疫分析法检测生物样本中的黄曲霉素M 1。
所有酶联免疫分析的试剂包括标准品都由试剂盒提供。
检测数量：96孔（含标准品孔） 检测时间：20分钟 2、 原理 分析在包被有黄曲霉素M 1抗体的聚苯乙烯微孔中进行。
黄曲霉素M 1标准溶液和样品加入微孔，在温浴过程中，游离的黄曲霉素M 1分子与抗体结合，没有结合的物质在清洗步骤中被清洗，第二次温浴时已经加入HRP-黄曲霉素M 1酶标物，它将没有结合的抗体位点全部覆盖。
通过加入基底物质可以确定酶活性，第三次温浴时酶将无色的显色剂转变成一种蓝色，加入终止液使蓝色变成黄色，用酶标仪在450nm 测定吸光度，通过颜色深浅不同换算成黄曲霉素M 1的浓度值。
3、 应用范围 黄曲霉素M 1ELISA 试剂盒用于定量检测牛奶和奶酪中的黄曲霉素M 1。
4、 提供的试剂 1、微孔板：96孔（12×8，可拆卸） 2、酶标物：冻干粉一瓶 3、酶标物稀释液：13ml 一瓶 4、样品稀释液：一瓶（使用时加入40mL 双蒸水充分溶解后使用） 5、清洗液（10×）：50ml 一瓶 6、显色剂：13ml 一瓶 7、终止液：13ml 一瓶 8、黄曲霉素M 1标准品溶液：6×1ml/瓶（0ng/mL ，0.005ng/mL ，0.03ng/mL ，0.15ng/mL ，0.5ng/mL ， 2ng/mL ）5、 试剂盒未提供的材料 1、10-1000 ul 不同规格的微量移液器 2、50-300ul 多道移液器 3、酶标仪（有450nm 滤光片） 4、离心机（如果离心速度低最好使用低温离心机） 5、带盖试管6、涡旋振荡器7、正己烷8、二氯甲烷9、离心管 10、去离子蒸馏水 6、 试剂贮存 1、试剂盒贮存在2～8℃，切勿冰冻 2、未用完的微孔板反应该密封干燥2～8℃保存 7、 注意事项1、终止液具有刺激性，显色剂具有毒性，切勿接触皮肤2、试剂盒过期后不得使用3、请勿混用不同批号的试剂 8、 工作溶液准备 1、酶标物工作液：使用时精确加入12mL 酶标物溶解液充分溶解，使用前恢复至室温，并且摇匀，切勿涡旋振荡。
黄曲霉毒素的测定ELISA法
黄曲霉毒素的测定ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介黄曲霉毒素黄曲霉毒素是一种剧毒且致癌的物质，它是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌A的某些菌株产生的。
黄曲霉毒素有四种类型：B1，B2，G1和G2。
黄曲霉毒素B1是毒性最大且最常有的。
最容易产生黄曲霉毒素污染的物质是谷物、花生、棉子、高梁和大多数的树果。
动物食入过量黄曲霉毒素的影响从慢性健康直到死亡，已经证明黄曲霉毒素能引起肝损坏或癌症、降低奶和蛋的产出、免疫抑制和干扰再生效率。
美国食品药物管理局已经规定了食品和饲料中最大黄曲霉毒素限量。
因此，准确测定黄曲霉毒素的含量，对于监测可能发生黄曲霉毒素污染的食品和饲料的质量来说，是非常重要的。
测试程序包括仔细的采样、化学提取、卫生学评价和定量分析。
2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppb级的黄曲霉毒素。
样品和标准控制液中游离的黄曲霉毒素与轭合物中的黄曲霉毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明黄曲霉毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中黄曲霉毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；4瓶1.5ml浓度为0、5、15、50ppb黄曲霉毒素控制标准液(黄色标签)（甲醇溶液的处理，见注意事项）；1瓶7ml黄曲霉毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24mlK兰○R底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色 (红色标签)。
4.2需要但未提供的材料70%甲醇溶液；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；12通道移液器5.注意事项甲醇易燃，其容器应密闭并远离热、火花、明火和烟。
黄曲霉素M1免疫胶体金速测盒
+ 试剂板一次性使用；不要使用过期试剂板，
废弃物应妥善处理；请勿触摸试剂板中央 的白色膜面；切勿重复使用配备的滴管， 以免交叉污染；切勿食用配备的试剂；若 需直接检测标准品，我方可提供配置液； 试验遇到的任何问题，请与供应商联系
+ 阴性（-）：T线（检测线，靠近加样孔一端）显色比C线
（对照线）深或一样深，表明样品中黄曲霉素M1浓度低于 0.3ul/kg或无黄曲霉素M1残留 + 阳性（+）：T线显色比C线浅，比C线越浅，表明样品中黄曲霉素M1 浓度越高；T线无显色，表明样品中黄曲霉素M1浓度高于 0.5ul/kg + 无效：未出现C线，可能操作不当或试剂板已失效。应再 次阅读说明书，并用新的试剂板重新测试
使用说明书 宁波美成生物科技有限公司
+ 撕开黄曲霉素M1免疫胶体金快速检测试剂板包装，取金标
微孔（试验环境的温度必须20度以上。冷冻过的原奶，明 显出现颗粒的，容易导致跑板不完全，此时必须使用加热 器加热或离心 取中间层样本进行检测） + 用移液枪取200 ul（或用滴管取9滴）生 乳于金标微孔 中，2分钟后用滴管将微 孔中的金和生 乳充分混匀，再等2分钟 后，将混匀的 生乳用滴管吸取滴加到 试剂板的加样 孔中 + 5-8分钟后判 读结果
农产品快速检测技术W2105-2 双流向酶联免疫法快速检测牛乳中黄曲霉毒素M1-微课件(初稿)
试剂盒结构
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试剂盒结构
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试剂盒结构
首先，将奶样加入含有酶标 抗体的试管反应数分钟，然 后加入到试剂盒的加样孔中。 然后，样品从加样孔向前流 动到样品点和对照点，发生 酶联耦合反应，随后按下反 应键，勾刺刺穿洗涤液池和 酶底物池；之后，洗涤液先 反向流动洗去反应点和对照 点上的杂质酶底物，接着反 向流动到反应点和对照点， 颜色在此两点发生。
农产品快速检测技术
双流向酶联免疫法快速检测 牛乳中黄曲霉毒素M1
主讲教师：上海农林职业技术学院 徐莉
黄曲霉毒素M1的标准
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试剂盒
加热器
双流向ELISA实验耗材与设备
读数仪
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目录页 CONTENTS PAGE
试剂盒结构 检测步骤 检测视频
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过渡页 TRANSITION PAGE
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过渡页 TRANSITION PAGE
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检测步骤
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第一步：准备
检测步骤
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第结果判读
检测步骤
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使用要点：
• 水温：45℃ • 降温：4-8℃ • 还原充分
复原乳还原
• 始终置于加热器
预热和保温
吸取奶样
读数
检测步骤
• 伸入样品中
• 1 min 内读数
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3
检测视频
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插入视频 检测步骤
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黄曲霉素奶糕M1ELISA的检测和注意事项操作步骤：
1.将所需试剂从微孔板中取出，放置室温(20～25℃)30min以上，液体试剂使用前均须摇匀。
2.取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板与干燥剂一起重新真空密封，保存于2～8℃。
不要冷冻。
3.洗涤工作液在使用前也需回温。
4.将样本和标准品对应微孔编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5.加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入酶标物50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6.小心揭开盖板膜，用洗涤工作液充分洗涤300ml/孔，洗板5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。
7.加入显色液100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应30min。
8.加终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设酶标仪于450nm处读每孔OD值。
注意事项
1.室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20～25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2.在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。
所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3.每种试剂使用前均需摇匀。
4.反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。
5.不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6.储存条件：
7.试剂变质的迹象：
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质，应当弃之。
0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时，表示试剂可能变质。
8.加入显色液后，一般显色时间为15～30min。
若颜色较浅，可延长反应时间到
35min(或更长)，但不得超过40min。
反之，则减短反应时间。
9.该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
试剂盒保存于2～8℃，不要冷冻，将不用的微孔板重新真空密封。
标准物质和无色的显色剂对光敏感，因此要避光保存。