massarray 系统的检测原理
核酸飞行质谱massarray_概述说明以及解释
核酸飞行质谱massarray 概述说明以及解释1. 引言1.1 概述核酸飞行质谱MassArray技术是一种基于时间质量转化法的质谱分析方法，广泛应用于生物学研究领域。
它通过将待测样品中的核酸片段与特定引物相结合，并经历一系列制备、质谱分析和数据分析步骤后，实现对核酸序列及其变异状态的快速检测和定量分析。
1.2 文章结构本文将从以下几个方面对核酸飞行质谱MassArray进行全面介绍和说明。
首先，我们将在第2部分概述该技术的原理和应用范围。
接着，在第3部分详细解释了核酸飞行质谱MassArray的操作步骤，包括样本制备与处理、质谱分析以及数据分析和结果解读等方面内容。
然后，在第4部分我们将讨论该技术的优势和局限性。
最后，在第5部分给出总结并展望未来发展方向。
1.3 目的本文旨在全面介绍核酸飞行质谱MassArray技术的原理、操作步骤及其在生物学研究中的作用，并对其优势和局限性进行探讨。
通过对该技术的深入了解，可以为科研人员提供指导，并推动其在生物学领域的广泛应用。
此外，本文还将对未来核酸飞行质谱MassArray技术的发展方向进行展望，并提出相关建议，以促进该技术的不断创新和完善。
2. 核酸飞行质谱massarray 概述说明：2.1 核酸飞行质谱简介核酸飞行质谱（MassArray）是一种基于矩阵辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱技术的生物分析方法。
该技术结合了基因芯片上扩增和测序的优点，可以进行快速、高通量、准确和经济的核酸分析。
相比传统的Sanger测序方法，核酸飞行质谱具有高灵敏度、高特异性和高重复性等优势。
2.2 MassArray技术原理及应用范围核酸飞行质谱基于时间串联质谱（Time-of-Flight, TOF）原理，通过将目标核酸样本与特定引物进行PCR扩增，并与金属标记的校正引物混合形成扩增产物。
这些扩增产物首先被去除未利用引物和副产物，然后经过逐个碱基释放并定向解吸，进入质谱仪中进行离子化和加速，在电场作用下进入飞行时间分析管道，根据它们的分子量反映出其到达检测器的时间。
DNA甲基化检测技术全攻略
DNA甲基化检测技术全攻略近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术，少说也有十几种。
大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。
下面大家介绍一些常用的方法。
特异位点的甲基化检测甲基化特异性PCR(MS-PCR)这种方法经济实用，无需特殊仪器，因此是目前应用最为广泛的方法。
在亚硫酸氢盐处理后，即可开展MS-PCR。
在传统的MSP方法中，通常设计两对引物，一对MSP引物扩增经亚硫酸氢盐处理后的DNA模板，而另一对扩增未甲基化片段。
若第一对引物能扩增出片段，则说明该检测位点存在甲基化，若第二对引物能扩增出片段，则说明该检测位点不存在甲基化。
这种方法灵敏度高，可用于石蜡包埋样本，且不受内切酶的限制。
不过也存在一定的缺陷，你要预先知道待测片段的DNA序列，并设计出好的引物，这至关重要。
另外，若存在亚硫酸氢盐处理不完全的情况，那可能导致假阳性。
亚硫酸氢盐处理+测序这种方法一度被认为是DNA甲基化分析的金标准。
它的过程如下：经过亚硫酸氢盐处理后，用PCR扩增目的片段，并对PCR产物进行测序，将序列与未经处理的序列进行比较，判断CpG位点是否发生甲基化。
这种方法可靠，且精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序，过程较为繁琐、昂贵。
联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)DNA样本经亚硫酸氢盐处理后，利用PCR扩增。
扩增产物纯化后用限制性内切酶(BstUI)消化。
若其识别序列中的C发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则PCR扩增后保留为CGCG，BstU I能够识别并进行切割;若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。
这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可得出原样本中甲基化的比例。
这种方法相对简单，可快速定量几个已知CpG位点的甲基化，且需要的样本量少。
无菌工艺快速微生物检测方法
无菌工艺快速微生物检测方法自21世纪初以来，国际制药工业界在无菌药品生产领域开展了一项重要的检测技术——快速微生物检测（RMM，Rapid Microbiological Methods），包含快速检出和鉴定。
在多年制药工业实践中，许多实验室发现当微生物养分被剥夺，或抗菌剂，如防腐剂、消毒剂、高温蒸汽或去污染气体的浓度达亚致死量时，微生物会发生应激，无法在传统人工介质上复制培养。
因为这种培养不能达到最佳复活条件，微生物不能增殖。
当这种情况发生时，无菌培养阴性不能证明产品没有受到污染。
另外，无菌培养需时较长，不能实时发现产品生产过程中发生的污染，不能使产品快速放行，增加仓储时间和成本。
于是，人们希望开发出新的微生物检查、定量和鉴定方法。
近年来生物检测技术高速发展并迅速向制药领域渗透。
当前RMM各类技术平台已经能够检测到多种微生物及变异微生物；能明确样品中微生物的数目；识别微生物的属，种和亚种。
这些技术主要分为基于微生物培养的快速发现和鉴定技术、活细胞识别鉴定技术和基因及芯片识别鉴定技术。
基于微生物培养的快速发现和鉴定技术基于微生物培养的快速发现和鉴定技术是在微生物培养过程中早期快速发现微生物生长。
电阻监测系统能测量微生物生长过程中液体介质中电势的变化。
微生物生长过程中，较大的，不带电的分子分解为较小的，高度带电的分子，如蛋白质变成氨基酸，脂肪变成脂肪酸，多糖变成乳酸等。
通过监测电极间离子移动（电导率）或电极表面电荷数量（电容），检查是否有微生物生长。
bioMérieux Bactometer 系统就是基于这一原理。
微生物液体培养时会产生CO2，在密闭容器中，可通过监测容器中CO2含量的变化来检测微生物生长。
BacT/ALERT系统设备是bioMérieux的第二代技术。
该技术将微生物生长产生的二氧化碳扩散至液体乳胶传感器，触发颜色警报器，告知用户检测到微生物。
Genzyme Biosurgery已将这种技术用于其细胞培养产品的快速无菌检查。
临床实验室质谱检测原理介绍
临床实验室质谱检测原理简介临床实验室质谱（mass spectrometry, MS）技术在临床实验室中的应用随着MS分析仪的创新不断拓展。
最早的MS分析仪采用扇形电场及磁场实现质量分离, 体积大、价格贵。
随着四极杆MS分析仪与色谱分离、第1代气相色谱（gas chromatography, GC）及液相色谱（liquid chromatography, LC）技术的联用, 大大提升了MS技术的实用性。
三重四极杆等多重MS技术的联用与LC分离技术令检测向高敏、可重复、定量方向发展, 这是目前临床实验室开展MS检测的基础[1]。
随着MS分析仪的不断发展及轨道阱（Orbitrap）MS分析仪的诞生, LC-MS的联用更是如虎添翼。
采用GC/MS对类固醇[2]及有机酸[3]进行检测是MS技术最先在临床实验室应用的项目。
继串联MS检测酰基肉碱诊断新生儿遗传代谢病（inborn error of metabolism, IEM）后, 其在临床检测中的应用开始加速[4]。
LC-MS联用尤其是与串联四极杆MS联用时, 能实现对小分子药物及其代谢产物的量化检测, 促进了该领域仪器研发的进步[5]。
治疗药物监测与毒理学的迅速发展在提升仪器灵敏度及实用性的同时, 进一步扩大了MS技术的应用范围[6]。
1 仪器1.1 MS分析仪类型MS分析仪可对单个分子或分子片段进行质量分析, 要求被分析对象带电荷并呈气相, 一般由紧密相连的离子源、质量分析器及检测器3个部分组成。
离子源外接样品引入系统, 是离子生成的部位; 多数MS分析仪的质量分析器根据离子质荷比（mass-to-charge ratio, m/z）区分离子; 检测器将离子分别转换成信号并传入仪器数据处理系统, 由数据处理系统控制整个仪器。
MS技术具有较高的特异性, 尤其在与可重复色谱分离技术联用时, 其检测结果可作为许多临床检测的“金标准”。
也就是说, 该技术可作为其他特定分子浓度检测手段的校准方法。
MASSARRAY原理培训讲学
M A S S A R R A Y原理MassARRAY图〔1〕MassARRAY系统由美国Sequenom 公司开发，在癌症研究、遗传学分析、分子诊断和药学等领域已经得到越来越广泛的应用，受到全球多个顶尖研究中心的推崇。
应用领域飞行时间质谱技术搭配不同Sequenom的检测和软件模块，可以在一个平台上实现以下技术：SNP分型以及SNP位点等位基因频率计算体细胞突变检测和分析甲基化定量分析基因表达定量分析CNV检测分析寡核苷酸质量控制和检测检测服务流程客户提供DNA或者各类生物样本以及检测位点信息样本完整性检测以及前处理引物设计、合成PCR扩增、SAP纯化、延伸或转录裂解点样质谱分析分析报告SNP分型1、技术名称Sequenom MassARRAY SNP基因型分析技术MassARRAY技术流程：2、技术原理Sequenom SNP 检测系统基本原理为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 技术。
主要特点是，PCR扩增后的产物，加入SNP序列特异延伸引物，在 SNP 位点上，延伸 1个碱基。
然后将制备的样品分析物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管 , 而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子，产生的离子多为单电荷离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能，进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率加以分离，在真空小管中飞行到达检测器。
MALDI产生的离子常用飞行时间（Time-of-Flight,TOF）检测器来检测，离子质量越小，就越快到达。
理论上讲，只要飞行管长度足够，TOF检测器可检测分子的质量数是没有上限的。
MASSARRAY SNP 检测的质谱范围为5000到8500 Dalton。
图2：飞行时间质谱法对SNP进行分型的原理示意图质谱检测3、技术特点灵活：¨可以自由选择感兴趣的SNP位点¨一张芯片上，样本的数量和位置可以自由选择¨一张芯片上，样本和SNP位点的配对可以自由选择准确：¨直接检测待测物分子量，准确度超过99.7%¨质谱技术灵活检测PCR实验失败或三等位基因的存在高通量：¨一张芯片上可完成384个样品的多重iPLEX GOLD实验¨每个反应孔可实现多达40重反应¨每天最多能进行十万个基因型分析性价比高：¨无需荧光标记，成本大大降低¨即便在低通量的情况下每个基因型分析的成本仍然很低4、优势：（1）质谱仪检测的是分子最本质的特征之一——分子量，不涉及荧光标记、凝胶电泳等，就能检测一个碱基的差异，准确性高，机器本身出错的概率非常低；（2）质谱仪的灵敏度非常高，检测窗口内，任何pmol级别的物质都能被检测出来；（3）通量高：几秒就能检测完一个反应孔；（4）操作简单，仪器要求简单，除质谱仪外，都是常规PCR仪器；（5）灵活：每天可以完成几个反应至上万个反应；（6）便宜：引物不带荧光标记，普通长度（3条引物总长80bp左右），此外在一个反应孔内能完成4个或更多的反应，即通常所说的4重反应；（7）兼容性强：质谱仪还能在核酸的其它方向，以及蛋白质组学、微生物鉴定等领域也能应用。
分子检测丨MassARRAY技术介绍
分子检测丨MassARRAY技术介绍前言基因的变异类型有多种（点击查看），对应的分子检测方法亦有多种，当前资本市场驱动着分子检测市场，并极力追捧NGS技术，因为其通量高，灵敏度高且性价比高。
小编承认NGS是分子检测的必然发展趋势，但是短时间内，NGS并不会取代其他分子检测方法，因为针对不同的需求，都有对应的理想检测方法，每个检测平台都有着自己的优势，比如：操作简单：PCR，ARMS-PCR，HRM等时间快速：ARMS-PCR，HRM等成本低：PCR，PCR-RFLP，MassARRAY等准确：Sanger等通量高：NGS等灵活性：Pyrosequencing等结果分析简单：ARMS-PCR等自动化：核酸提取等......小编一直认为：没有最好的技术，只有最合适的技术！最好的，不一定是最合适的；最合适的，才是真正最好的。
现在，质谱分析在医学临床诊断和研究方面变得非常普遍，我们可能经常会听到用XX质谱分析在临床检验某种遗传代谢性疾病，提及质谱我们一般都会想到气相色谱质谱联用、串联质谱、遗传代谢病、代谢组学（有机酸、氨基酸、脂肪酸等）等。
但是当有一天，我们听到用质谱检测核酸的时候，是不是会有一种错觉？这么“粗糙”的质谱能检测这么“精细”的核酸分子？对，没错，有一款质谱可以检测核酸分子，它就是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，MassARRAY-MALDI-TOF-MS！今天，我们聊一聊MassARRAY技术，首先，我们先了解下什么是MassARRAY？MassARRAY：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS），在基质辅助下使结合后的分子发生电离，产生的离子在电场作用下加速通过飞行管道，它们的质量和所带电荷可以影响其飞行时间，因此，根据它们到达检测器飞行时间的不同对待检测物进行分离。
基于MassArray核酸质谱的叶酸代谢能力的检测方法及其应用[发明专利]
![基于MassArray核酸质谱的叶酸代谢能力的检测方法及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c75286f64128915f804d2b160b4e767f5acf80cd.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011019197.5(22)申请日 2020.09.24(71)申请人 江苏先声医疗器械有限公司地址 210000 江苏省南京市玄武区玄武大道699-18号28幢申请人 江苏先声诊断技术有限公司(72)发明人 曹尚志 陈永玲 任用 李诗濛 卜范峰 丁然 吴炳耀 (51)Int.Cl.C12Q 1/6883(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称基于MassArray核酸质谱的叶酸代谢能力的检测方法及其应用(57)摘要本发明提供一种基于MassArray核酸质谱平台的叶酸代谢能力的引物组、方法及其应用。
本发明基于MassArray核酸质谱平台设计检测叶酸代谢能力相关SNP位点的引物组及其检测体系，可以对叶酸代谢能力相关的点突变进行准确分型，具有准确性强、灵敏度高、重复性好、成本低、检测周期短、结果直观等优势。
权利要求书1页 说明书13页序列表2页 附图3页CN 112094899 A 2020.12.18C N 112094899A1.一种用于检测叶酸代谢能力相关SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物序列分别如SEQ ID NO.1-6所示，或者所述引物序列分别与SEQ ID NO.1-6具有至少85％同一性。
2.权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组进一步包括延伸引物，所述延伸引物序列如SEQ ID NO.7-9所示，或者所述延伸引物序列与SEQ ID NO.7-9具有至少85％同一性。
3.权利要求1-2任一所述的引物组在制备检测叶酸代谢能力产品中的应用。
4.权利要求1-2任一所述的引物组在核酸质谱检测中的应用。
5.一种用于叶酸代谢能力检测的组合物/产品/试剂盒，其特征在于，所述组合物/产品/试剂盒包括权利要求1-2任一所述的引物组。
massarray飞行质谱
massarray飞行质谱
质谱是一种用于分析化合物的方法，而飞行时间质谱（TOF-MS）则是质谱的一种类型。
飞行时间质谱是一种高分辨率、高灵敏度的
质谱技术，它利用离子在电场中的飞行时间来确定其质量。
MassARRAY是一种基于飞行时间质谱原理的质谱分析平台，是Sequenom公司开发的一种基因分型技术。
通过MassARRAY平台，可
以进行基因分型、DNA测序、甲基化分析等。
该技术具有高通量、
高灵敏度、高准确性等特点，被广泛应用于基因组学、药物研发、
临床诊断等领域。
从技术角度来看，飞行时间质谱通过测量离子在电场中飞行的
时间来确定其质量，因此可以实现高分辨率的质谱分析。
而MassARRAY作为基于飞行时间质谱原理的分析平台，具有高通量、
高灵敏度和高准确性的特点，能够满足对基因分型、DNA测序等方
面的需求。
从应用角度来看，MassARRAY平台在基因组学、药物研发和临
床诊断等领域具有广泛的应用。
在基因组学研究中，可以用于基因
分型、SNP分析等；在药物研发中，可以用于药物代谢动力学研究、药物结构分析等；在临床诊断中，可以用于癌症早期筛查、遗传病
检测等。
总的来说，MassARRAY飞行时间质谱技术在科研和临床应用中发挥着重要作用，其高通量、高灵敏度和高准确性的特点使其成为一种强大的分析工具。
希望这些信息能够帮助你更全面地了解MassARRAY飞行时间质谱技术。
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massarray 系统的检测原理
MassArray系统是一种用于基因分型和突变分析的生物技术工具。
它采用基于质谱分析的原理，能够快速、准确地识别和测量DNA序列中的单核苷酸多态性（SNP）和突变。
下面是对MassArray系统检测原理的详细解释：
1. 原理介绍：
MassArray系统基于基因质谱分析技术，利用基因特定引物将待分析的DNA片段扩增成大量的复制品。
然后，通过一系列的离子化和分离步骤，将DNA片段分离为单个的DNA链。
接下来，通过激光脱附质谱（LDI-MS）技术将DNA片段中的碱基逐个离子化，并根据其质量/电荷比（m/z）进行质谱分析。
2. 引物设计：
为了准确识别和测量SNP和突变，MassArray系统需要使用特异性引物。
这些引物通常包含一个与待测DNA片段匹配的区域和一个质谱分析所需的引物序列。
通过这种方式，引物可以在扩增反应和质谱分析过程中特异性地识别和测量待测的SNP和突变。
3. 扩增和净化：
在MassArray系统中，待测的DNA片段通常通过聚合酶链反应（PCR）进行扩增。
PCR是一种能够产生大量DNA复制品的技术。
扩增后，通过一系列的净化步骤，去除引物和其他杂质，保证样品的纯度和质量。
4. 质谱分析：
在质谱分析步骤中，单个DNA链片段被离子化，并通过飞行时间质谱仪（TOF-MS）进行分析。
LDI-MS技术使用激光将DNA片段中的碱基逐个离子化，并通过其离子质量进行质谱分析。
通过与已知的SNP 和突变参考质谱进行比较，系统可以准确识别和测量待测的SNP和突变。
5. 数据分析：
MassArray系统生成的质谱数据可以通过专用的数据分析软件进行解读和分析。
这些软件能够将质谱数据与已知的SNP和突变信息进行比对，并生成相应的分型和突变结果。
此外，还可以通过统计学方法和图表来分析和解释数据，以支持进一步的研究和应用。
总结起来，MassArray系统是一种利用基因质谱分析技术进行基因分型和突变分析的工具。
它通过扩增、质谱分析和数据分析等步骤，能够准确、快速地识别和测量DNA序列中的SNP和突变。
这种技术在基因研究、临床诊断和药物研发等领域具有广泛的应用前景。