基因功能分析的基本策略

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基因网络的结构与功能分析

基因网络的结构与功能分析

基因网络的结构与功能分析基因网络是指由多个基因及其相互作用所构成的复杂系统,是研究基因调控和生物进化的重要手段之一。

随着生物信息学技术的迅速发展,对基因网络的研究已经成为了生命科学研究的热点之一。

本文将介绍基因网络的结构与功能分析方法。

一、基因网络结构分析基因网络结构分析是研究基因网络的建模、构建和分析方法,通常包括以下步骤:1. 数据收集:基因网络的结构分析需要收集大量的基因表达数据和生物信息数据,可以使用DNA芯片、RNA测序、质谱等技术。

2. 基因网络构建:基因网络构建是基于基因表达数据和生物信息数据建立基因网络的过程。

目前常用的方法有互作蛋白质网络、共表达网络、调控网络等。

3. 基因网络可视化:基因网络的可视化能够使人们更加直观地理解基因网络的结构和特点,目前较常用的可视化软件有Cytoscape等。

4. 基因网络富集分析:基因网络富集分析可以对基因网络中某一特定功能模块的特征进行分析,例如对基因调控的功能模块分析可以揭示基因调控的关键基因和调控因子。

5. 基因网络结构分析:基因网络结构分析可以对网络的连通性、度分布、聚集系数等结构特征进行研究,分析网络中存在的小世界效应、无标度网络等特征。

二、基因网络功能分析基因网络的功能分析是根据基因网络结构研究其生物功能和生物学过程的过程。

目前较常用的基因网络功能分析方法有以下几种:1. 基因调控路径分析:基于基因网络分析调控途径,可以识别出调控因子和调控基因的关联关系,进而研究基因调控的生物过程。

2. 基因共表达网络分析:根据基因表达谱构建基因共表达网络,可以分析基因之间的相互关系,推断基因的相互作用和生物过程。

3. 基因集富集分析:基于基因网络对基因上下家路径、生物通路等进行分析和富集分析,可以揭示基因网络中存在的生物过程和功能模块。

4. 生物网络拓扑分析:分析不同生物网络的拓扑学特征,例如小世界、无标度、随机网络等,可以揭示生物网络的特殊性质和生物过程的特性。

基因功能研究的整体解决方案

基因功能研究的整体解决方案
1
BamHI
Sal I
Bgl II
XhoI
Sal I
2
BamHI
Bgl II
XhoI
Sal I BamHI
1
2
Bgl II XhoI
A)miRNA的串联
B )miRNA串联试验结果
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Life Technologies Proprietary & Confidential
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miRNA载体特点-组织特异性表达miRNA
9
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Life Technologies Proprietary & Confidential
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BLOCK-iT™ miR RNAi Select
1. BLOCK-iT™ miR RNAi Select :在Invitrogen网站的数据库里边 有已经设计好了的针对不同基因的oligo DNA(4对/一套); Oligo DNA可以用来插入到BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression载体里边,进行RNAi研究。
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RNAi Vector + RNA合成
standard siRNA
(21-mer overhangs)
Stealth™ RNAi
(25-mer blunt)
shRNA expression
miRNA expression
5
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Life Technologies Proprietary & Confidential
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体外合成RNAi vs. RNAi载体
体外合成RNAi 长效稳定沉默 RNAi载体
可调控的沉默
导入到难转染的细胞 沉默效果快速而强力 最高特异性 容易操作

多基因遗传病基因研究的策略和方法

多基因遗传病基因研究的策略和方法

多基因遗传病基因研究的策略和方法多基因遗传病是由多个基因的遗传变异所致的疾病,其研究策略和方法主要包括以下几个方面:1.基因组关联分析(GWAS)GWAS是一种广泛应用于多基因遗传病研究的方法,它通过对大量样本进行基因组分析,寻找与疾病相关的基因位点。

GWAS可以发现与疾病相关的单核苷酸多态性(SNP),从而确定疾病的遗传风险因子。

GWAS的优点是可以发现新的遗传变异,但其缺点是只能发现单个基因的影响,而无法考虑基因之间的相互作用。

2.基因组学数据整合分析基因组学数据整合分析是将不同来源的基因组学数据整合起来,以发现与疾病相关的基因和通路。

这种方法可以将GWAS、转录组、蛋白质组等多种数据整合起来,从而更全面地了解疾病的遗传机制。

3.基因组学功能研究基因组学功能研究是通过对基因的功能进行研究,以了解其在疾病发生和发展中的作用。

这种方法包括基因敲除、基因表达调控、蛋白质相互作用等实验手段,可以揭示基因在疾病中的作用机制。

4.系统生物学分析系统生物学分析是将基因组学数据与生物学网络相结合,以了解基因之间的相互作用和通路。

这种方法可以揭示疾病的复杂性和多样性,从而为疾病的预防和治疗提供新的思路。

总之,多基因遗传病的研究需要综合运用多种方法和技术,以全面了解疾病的遗传机制和发展规律。

基因功能分析的基本策略课件(共 71张PPT)

基因功能分析的基本策略课件(共 71张PPT)

RNAi 是真核生物中广泛存在的现象
植物:干扰因素自叶脉向外扩散,绿色荧光蛋白 线虫:左侧为 转基因线虫;右侧线虫则经 (GFP) GFP dsRNA 基因 Hela 细胞:经GFP ORC6 siRNA 作用后,细胞出现多核现象。 果蝇:右侧果蝇为野生型,左侧为 shRNA 造成的色素缺乏的 被抑制,显露出红色。 处理。部分细胞 RNAi 相关蛋白表达较低,仍有绿色荧光。 绿色为 tubulin, 缺陷型。 红色为 DNA。ORC6 细胞分裂调控蛋白。
检测的提示重组体存在的基因。GFP、 LacZ、AP、 LUC。
融合基因 (fusion gene): 将特定的目的基因与报告
基因拼接成融合基因,并与顺式作用元件拼接成完 整的转录单位。
动物转基因常用的载体
腺病毒载体 逆转录病毒载体 非病毒类载体:如质粒等。
2. 中游—基因转移、胚胎移植与建系
基本原理
转基因动物
基本过程
上游—基因改造和载体构建
中游—基因转移、胚胎移植与建系 下游—基因整合、表达的检测与细胞筛选
1. 上游—基因改造和载体构建
外源基因: 完整的转录单位, 由顺式作用元件、结构
基因和转录终止信号组成。
报告基因 (reporter gene) : 在表达载体中引入易于
第十二章
基因功能分析的基本策略
转基因模型是研究基因功能的主要手段
转基因生物: 外源基因导入生物体表达。 基因打靶: 外源基因替换内源基因。 基因敲除。 基因敲入。 基因沉默: 导入特定基因,抑制内源性基因表达。
第一节 转基因技术
转基因技术(transgenic technology):将外源 基因导入细胞,随机整合到受体基因组内, 并随细胞分裂而遗传给后代。 细胞模型。 转基因动物。 转基因植物。

研究基因功能的实验方案

研究基因功能的实验方案

基因功能研究一般先用生物信息学分析对基因的结构和功能做预测,然后就要对我们的推测进行验证,如何验证一个基因的功能,目前最常用的基因功能研究策略为功能获得与功能失活。

1、功能获得策略是指将基因直接导入某一细胞或个体中,通过该基因在机体内的表达,观察细胞生物学行为或个体表型遗传性状的变化,从而鉴定基因的功能。

常用的功能获得的具体方法有基因过表达技术以及CRISPR-SAM技术等。

2、基因的过表达技术:基因过表达技术是指将目的基因构建到组成型启动子或组织特异性启动子的下游,通过载体转入某一特定细胞中,实现基因的表达量增加的目的,可以使用的载体类型有慢病毒载体,腺病毒载体,腺相关病毒载体等多种类型。

当基因表达产物超过正常水平时,观察该细胞的生物学行为变化,从而了解该基因的功能。

基因过表达技术可用于在体外研究目的基因在DNA、RNA和蛋白质水平上的变化以及对细胞增殖、细胞凋亡等生物学过程的影响。

可使用产品:过表达慢病毒、cDNA克隆(可用作ORF克隆)CRISPR-SAM技术:CRISPR-SAM系统由三部分组成:第一个部分是dCas9与VP64融合蛋白;第二个部分是含2个MS2 RNA adapter的sgRNA;第三个是MS2-P65-HSF1激活辅助蛋白。

CRISPR-SAM系统借助dCas9-sgRNA的识别能力,通过MS2与MS2 adapter的结合作用,将P65/HSF1/VP64等转录激活因子拉拢到目的基因的启动子区域,成为一种强效的选择性基因活化剂,从而达到增强基因表达的作用。

可使用产品:全基因Cas9 SAM-慢病毒文库2、功能获得两种方法的比较:基因的过表达技术与CRISPR-SAM技术都能达到基因表达的上调,但是由于基因的过表达技术使用的载体容量的限制,导致基因的过表达技术只能用于研究一定长度内的基因。

而CRISPR-SAM技术是通过增强目的基因启动子的转录而实现基因的过表达,可以不受基因大小的限制。

植物基因定位和基因功能分析的方法研究

植物基因定位和基因功能分析的方法研究

植物基因定位和基因功能分析的方法研究随着现代生物学和遗传学的发展,人们对植物基因定位和基因功能分析的方法进行了深入研究,这不仅可以帮助人们更好地理解植物发育和生长的机理,还能为植物育种和生产提供有用的信息和工具。

本文将重点介绍当前主要的植物基因定位和基因功能分析方法。

一、植物基因定位方法1.遗传连锁图谱遗传连锁图谱是一种利用遗传标记来分析不同基因之间遗传联系的方法。

通过对多个遗传标记在植物基因组中的位置进行测定和分析,可以建立起一张遗传图谱,用于揭示不同基因之间的距离和相对位置。

这种方法通常使用分子标记进行,如限制性片段长度多态性(RFLP)、简单重复序列(SSR)、随机扩增多态性(RAPD)等等。

2.基因组关联分析基因组关联分析是一种利用大规模基因组数据来解析复杂性状遗传基础的方法。

这种方法可以在典型生境群体中寻找有影响的变异位点,并确定它们与复杂性状之间的关系。

这种方法使用的主要技术是基因芯片和全基因组二代测序等高通量技术。

3.定位克隆定位克隆是一种在表型、遗传连锁图谱和基因组关联分析的基础上,利用分子遗传学的技术从候选区域中精确定位基因的方法。

这种方法最初是通过描述多态性突变体的表型特征并与别的单基因遗传性神经病的解决方案进行议会比较,通过遗传性状继承模式的推断、基因组DNA库筛选和分子标记标示等技术逐渐细化到定位至遗传连锁图谱中的一个小区域或物理图谱上的一小段碎片。

目前随着技术不断升级,整个过程已经极度自动化,能够对基因进行深准碎片定位和氨基酸序列注释,进一步明确植物基因的功能和作用机制。

二、基因功能分析方法1.反相留出反向遗传(反相留出)是一种采用RNA干扰技术降低或抑制嘌呤和非嘌呤物种基因表达的途径。

这种技术利用RNAi的调控机制,特异性破坏mRNA分子,并通过RNA的剪切或配对等方式,实现对靶基因的抑制。

这种技术能够有效地研究基因在发育、生长、代谢等过程中的功能,并探究不同基因之间的互相作用。

新基因功能研究的策略和方法

新基因功能研究的策略和方法

文档仅供参考,如有不当之处,请联系改正。
利用转基因技术,则可将外源基因引入动物体 内,建立携带而且能够遗传给子代旳转基因动物 模型,经过对转基因动物旳表型分析研究外源基 因旳功能,目前已经利用转基因技术建立了数千 种转基因动物,而且还能够经过在携带外源基因 旳载体上加上组织特异性开启子等手段,从而控 制外源基因在特定旳时间或特定旳组织器官体现。 利用转基因动物来研究基因功能旳优势在于它是 一种在活体水平上旳多维旳研究体系,能够从分 子到个体水平进行多层次、多方位旳研究。
同步,因为人类全基因组测序已经完毕,所以与其完全同源基因组DNA
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序列及其染色体定位信息,而无需进行荧光原位 杂交等基因染色体定位技术,进而还可经过分析 其内含子、外显子序列及其调整位点,推测其可 能旳基因体现调控方式。即经过此法拟定了富含 亮氨酸反复序列蛋白新基因旳基因组DNA序列及 其染色体定位。
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此类技术中最常用旳主要为反义寡核苷酸 (ASON)、核酶和RNA干扰(RNAi)技术。
然而,涉及这3种技术在内旳该类技术均具有 诱导干扰素和其他细胞因子体现等非特异性效应, 另外,它们也会因为作用与和靶分子序列相近旳分 子而产生脱靶效应,其中,ASON因使用剂量大,其 非特异性效应最大;而RNAi旳这两种副效应最小。
用expay软件分析氨基酸序列同源性
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主要是经过联网或数据库行蛋白质是基因功 能旳体现者和施行者,而蛋白质旳构造则是蛋白质 执行生物学功能旳基础,所以对新基因所编码蛋白 质旳功能域分析将对推测新基因功能提供极其有价 值旳信息。目前,已经有大量被发觉旳蕴藏于蛋白 质构造中旳与特定生物学活性有关旳所谓保守模体。

基因表达及功能分析基本策略

基因表达及功能分析基本策略
13
目录
Western blot基本程序
1. 蛋白质样品的制备 2. SDS-PAGE分离 3. 蛋白质转膜 4. 特异抗体(即第一抗体)与膜上的蛋白质(抗原)印
迹杂交 5. 再经偶联了可检测标记信号的第二抗体(即抗抗体,
商品试剂盒中多采用偶联辣根过氧化物酶的Ig) 6. 最后经与酶的底物反应而显影、成像,经扫描后获取
26
目录
根据蛋白质芯片制作方法和用途不同,可将其分为 1. 蛋白质检测芯片 2. 蛋白质功能芯片两大类
蛋白质检测芯片包括: 1. 抗体芯片 2. 抗原芯片 3. 配体芯片 4. 碳水化合物芯片等
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目录ห้องสมุดไป่ตู้
2.双向电泳结合质谱普遍用于蛋白质表达 谱的分析和鉴定
目前比较和鉴定蛋白质表达谱更多采用双向聚丙烯酰 胺凝胶电泳结合质谱技术。双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 又称二维电泳(two-dimensional electrophoresis, 简称2-D电 泳)。
➢虽然原位杂交在功能性方面提供的信息较少,但是该 技术还是被广泛用于组织中的基因表达分析,这是因 为其较高的稳定性、较广泛的靶点和组织适用性。
8
目录
(二)两种变换的聚合酶链式反应是常用的 mRNA检测方法
1.反转录PCR
➢ 可用于mRNA的半定量分析
➢ 反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR) 是 一种简单、快捷地对RNA进行定性、定量分析的方法。 它是以mRNA为模板,体外扩增cDNA,再以cDNA为模 板进行特定基因转录产物的PCR扩增。RT-PCR技术一般 用于RNA的定性分析;如果设置阳性参照,则可对待测 RNA样品进行半定量分析。
➢ 运用双重着色或多重着色程序同时对多个感兴趣的靶分子 进行检测,是一种揭示更多有关细胞群的功能和它们之间 相互作用信息的有效方法。
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基因模型是研究基因功能的主要手段
转基因生物: 转基因生物: 生物 ִ外源基因导入生物体表达。 外源基因导入生物体表达。 基因打靶: 基因打靶: ִ外源基因替换内源基因。 外源基因替换内源基因。 ִ基因敲除。 基因敲除。 ִ基因敲入。 基因敲入。 基因沉默: 基因沉默: ִ导入特定基因,抑制内源性基因表达。 导入特定基因,抑制内源性基因表达。
一.转基因生物的意义
20 世纪 80 年代 (Brinster and Palmiter): : ִ著名的转基因小鼠实验,金属硫蛋白基 著名的转基因小鼠实验, 著名的转基因小鼠实验 因启动子驱动大鼠生长激素基因表达。 因启动子驱动大鼠生长激素基因表达。 转基因生物的用途: 转基因生物的用途: ִ研究手段:疾病的转基因动物模型。 研究手段:疾病的转基因动物模型。 ִ改良动物性状:抗病性、耐寒性等。 改良动物性状:抗病性、耐寒性等。 ִ生产产品:抗体、疫苗等的生产。 生产产品:抗体、疫苗等的生产。
分析动物表型与外源基因的关系,揭示外 分析动物表型与外源基因的关系, 源基因的功能。 源基因的功能。 建立人类疾病的转基因动物模型。 建立人类疾病的转基因动物模型。 基因产品的制备:乳腺、膀胱生物反应器。 基因产品的制备:乳腺、膀胱生物反应器。
人类疾病的转基因动物模型
完整的动物模型可以模拟人类疾病的起始 和发展,帮助了解疾病的病因和发展过程。 和发展,帮助了解疾病的病因和发展过程。 为测试各种可能的治疗方案提供一个统一 有效的系统。 有效的系统。 转基因动物模型提供了人类疾病的研究手 段。
提高显微注射 DNA 表达的成功率
转入的外源基因要能够高效表达,最好是 转入的外源基因要能够高效表达, 可以诱导表达。 可以诱导表达。 转入基因中应该包含有帮助提高整合效率 的序列,如微卫星序列。 的序列,如微卫星序列。
微卫星序列
诱导表达 启动子
外源基因
微卫星序列
2) 胚胎干细胞法
胚胎干细胞(embryo 胚胎干细胞(embryo stem cells, ES 细胞): 细胞) ִ可人工培养增殖的小鼠胚泡发育期胚胎细 胞,当把这种胚胎细胞重新导入另一胚泡 期的胚胎之后, 期的胚胎之后,它仍然保持着分化成其他 类型细胞的能力。 类型细胞的能力。 ES 细胞具有与胚胎细胞相似的形态特征和分 化特性。 化特性。
胚胎干细胞法的特点
定点整合。 定点整合。 ES 细胞在体外培养,外源 DNA 导入后可 细胞在体外培养, 用正细胞, 用正-负选择法筛选择正确整合的 ES 细胞, 相对较简单。 相对较简单。 目前只在小鼠身上获得成功。
3)逆转录病毒感染法
逆转录病毒载体的构建 获得四/八细胞胚胎/囊胚/ 获得四/八细胞胚胎/囊胚/原肠胚 外源 DNA 导入早期胚胎: 导入早期胚胎: 获得病毒颗粒感染早期胚胎 包装细胞与早期胚胎共培养 感染后的胚胎植入受体动物子宫,发育 感染后的胚胎植入受体动物子宫, 成携带外源基因的动物。 成携带外源基因的动物。
1) DNA显微注射法 DNA显微注射法
制备超量受精卵。 制备超量受精卵。 DNA 显微注射。 显微注射。 转移注射卵到输卵管或子宫。 转移注射卵到输卵管或子宫。 转基因鼠的鉴定及鼠系建立。 转基因鼠的鉴定及鼠系建立。
DNA 显微注射
DNA注射针 DNA注射针
精原核 卵原核 持卵管
DNA 显微注射
基本原理
供体基因
受体的受精卵
基本原理
转基因的受精卵
基本原理
转基因动物
基本过程
上游— 上游—基因改造和载体构建 中游—基因转移、 中游—基因转移、胚胎移植与建系 下游—基因整合、 下游—基因整合、表达的检测与细胞筛选
1. 上游—基因改造和载体构建 上游—
外源基因: 完整的转录单位, 由顺式作用元件、 外源基因: 完整的转录单位, 由顺式作用元件、结构 基因和转录终止信号组成。 基因和转录终止信号组成。 报告基因 (reporter gene) : 在表达载体中引入易于 检测的提示重组体存在的基因。GFP、 LacZ、AP、 检测的提示重组体存在的基因。GFP、 LacZ、AP、 LUC。 LUC。 融合基因 (fusion gene): 将特定的目的基因与报告 基因拼接成融合基因, 基因拼接成融合基因,并与顺式作用元件拼接成完 整的转录单位。 整的转录单位。
利用转基因动物反应器生产药用蛋白
转基因动物反应器:乳腺、膀胱、 转基因动物反应器:乳腺、膀胱、血液 生物反应器等。 生物反应器等。 III:转基因绵羊的乳汁中。 抗凝血酶 III:转基因绵羊的乳汁中。 β乳球蛋白 红细胞生成素 凝血因子 VIII 凝血因子 IX 生长激素
转基因改良移植器官
改造异种来源器官的遗传性状,使之适应 改造异种来源器官的遗传性状, 于人体器官或组织的移植。 于人体器官或组织的移植。 1997 年起,利用遗传改良的转基因猪肝做 年起, 为严重肝病患者的离体生命支持物。 为严重肝病患者的离体生命支持物。
第二节 基因打靶
基因打靶(Gene 基因打靶(Gene Targeting) :通过 DNA 定 点同源重组, 点同源重组,改变基因组中的某一特定基 在生物活体内研究此基因的功能。 因,在生物活体内研究此基因的功能。 基因敲除(gene 基因敲除(gene knockout): 将某个基因定向 去除。 去除。 基因敲入(gene 基因敲入(gene knockin): 定向将一段基因 序列替代另一段基因序列。 序列替代另一段基因序列。
胚胎干细胞法
分离和培养 ES 细胞。 细胞。 细胞。 外源基因导入 ES 细胞。 细胞的子宫转移。 导入外源基因的 ES 细胞的子宫转移。 转基因鼠的鉴定及鼠系建立。 转基因鼠的鉴定及鼠系建立。
胚胎干细胞的分离和培养
胚胎干细胞 胚泡 培养皿中分离 胚泡内层细胞
加饲养层细胞培养
胰蛋白酶 消化解离
胚胎干细胞的分离和培养
3. 下游—基因整合与表达检测及筛选 下游—
染色体基因水平:是否整合了外源基因以 染色体基因水平: 及整合的位点和拷贝数。 及整合的位点和拷贝数。 转录水平:转基因的 mRNA 的存在与否以 转录水平: 及表达水平。 及表达水平。 蛋白水平: 蛋白水平:转基因的蛋白质的表达以及功 能检测。 能检测。
4)精子载体法
外源 DNA 共育法 脂质体转染法 电穿孔法 精子 卵细胞 受精卵 转基因动物
DNA 磷酸钙-DNA共沉淀法 磷酸钙-DNA共沉淀法 DNA 逆转录病毒感染法 电穿孔法
精子 卵细胞
受精卵 显微注射 DNA 四细胞 胚胎
胚胎干细胞
微注射 囊胚 原肠胚 转基因 动物
逆转录病毒感染 DNA
第一节 转基因技术
转基因技术(transgenic technology): 转基因技术(transgenic technology):将外源 基因导入细胞,随机整合到受体基因组内, 基因导入细胞,随机整合到受体基因组内, 并随细胞分裂而遗传给后代。 并随细胞分裂而遗传给后代。 ִ细胞模型。 细胞模型。 ִ转基因动物。 转基因动物。 ִ转基因植物。 转基因植物。
DNA 显微注射到尚未发生核融合的受精卵 的精原核。显微镜下观察, 的精原核。显微镜下观察,精原核比卵原 核大,容易辨别。 核大,容易辨别。 线性 DNA 整合效率比超螺旋 DNA 高出数 倍,因而用于显微注射的转入基因通常是 DNA。 去除载体序列的线状 DNA。
DNA 显微注射法的特点
DNA 大小无限制,最大可达 250Kb。 大小无限制, 250Kb。 随机整合: 随机整合:在染色体上整合的位点是随 机的,整合的拷贝数也不一定。 机的,整合的拷贝数也不一定。 转入的基因有可能碰巧整合到具有重 要功能的基因之中, 要功能的基因之中,干扰该基因的正 常表达,影响转基因动物的正常发育 常表达, 和代谢。 和代谢。 总效率较低(实际成功率1/1000)。 总效率较低(实际成功率1/1000)。
鉴定方法
PCR Southern blot 染色体原位杂交 Northern blot RT-PCR RTWestern blot
基因转移鼠纯合鼠系的建立
生殖系细胞中不 含转入基因
×
生殖系细胞中含 转入基因
转基因杂合鼠 未转基因鼠 未转基因鼠
子代多次交配可得到纯合 转基因鼠系
三、转基因动物的应用
一、基因打靶的基本程序
打靶载体的构建。 打靶载体的构建。 细胞及其鉴定。 打靶载体导入 ES 细胞及其鉴定。 细胞注射入胚泡。 基因敲除 ES 细胞注射入胚泡。 胚泡植入假孕小鼠的子宫。 胚泡植入假孕小鼠的子宫。 嵌合体的杂交建立基因打靶的纯合鼠系。 嵌合体的杂交建立基因打靶的纯合鼠系。
动物转基因常用的载体
腺病毒载体 逆转录病毒载体 非病毒类载体:如质粒等。 非病毒类载体:如质粒等。
2. 中游—基因转移、胚胎移植与建系 中游—基因转移、
基因导入技术:物理、化学和生物学方法 基因导入技术:物理、 1) 显微注射法 (microinjection) 2) 胚胎干细胞法(embryonic stem cells, ES 胚胎干细胞法( 细胞) 细胞) 3) 逆转录病毒感染法 4) 精子载体法
逆转录病毒感染法
外源基因 逆转录病毒载体
四/八细胞胚胎/囊胚/原肠胚 八细胞胚胎/囊胚/
逆转录病毒感染
纯合体小鼠 嵌合小鼠
逆转录病毒感染法的特点
通过病毒 DNA 插入宿主 DNA 的机制,将 的机制, 外源目的基因整合到宿主基因组,整合效率 外源目的基因整合到宿主基因组, 高。 反转录病毒载体容量有限,只能转移小片段 反转录病毒载体容量有限, DNA(<10kb)。 DNA(<10kb)。 对家禽类的转基因研究有重要意义。 对家禽类的转基因研究有重要意义。
动物的克隆
1996 年,首次实现动物的无性生殖。 首次实现动物的无性生殖。 由绵羊的乳腺细胞提供细胞核, 由绵羊的乳腺细胞提供细胞核,卵细胞提供 细胞质发育而来。 细胞质发育而来。 核移植技术( 核移植技术(Nuclear Transfer)
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