测定单糖组分
TLC快速分析多糖的单糖组成
ＹＡＮ Ｊｕｎ，ＧＵＯ Ｘｉａｏ－ｑｉａｎｇ，ＬＩ Ｘｉａｏ－ｇｕａｎｇ，ＷＵ Ｘｉａｏ－ｙｏｎｇ，ＧＯＵ Ｘｉａｏ－ｊｕｎ＊ （Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１０１０６， Ｃｈｉｎａ）
多糖作为来自高等植物、动物细胞膜和微生物细胞 壁中的天然高分子化合物，是构成生命的四大基本物质 之一。随着人们对多糖组成、性质、结构与功能研究 的不断深入。对多糖的生物活性也有了更多的认识，能 提高机体免疫力，增强机体耐缺氧能力，清除自由基， 抑制肿瘤，可用于治疗高血压、高血脂、糖尿病、乙 型肝炎等多种现代医学中的疑难病症［１ ～３］ 。多糖的研究 受到了越来越广泛的重视。并取得了丰硕的成果，已 有香菇多糖、灵芝多糖等应用于临床。国内外研究表 明，多糖的活性与许多因素有关，如分子量、溶解性 等，特别是与其空间结构密切相关［ ４ ， ５ ］ 。由于一级结构 是空间结构的基础，而多糖的单糖组成是一级结构的主 要内容，所以有必要找到一种简便、灵敏的方法以确 定多糖的单糖组成。
［２］ 胡慰望， 谢笔钧． 食品化学［Ｍ］． 北京： 科学出版社， １９９２． ２４３． ［３］ 黄伟坤， 等． 食品检验与分析［Ｍ］． 北京： 中国轻工业出版社， １９８９．９６． ［４］ Ａ Ｈ Ｅｎｓｍｉｎｇｅｒ， Ｍ Ｅ Ｅｎｓｍｉｎｇｅｒ， Ｊ Ｅ Ｋｏｎｌａｎｄｅ， 等． 食品与营养百科
量进行正确的测量，我们自制了几种样品。自制样品 组成为：１．０ × １０ －４ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｃａ（ＮＯ３） ２、葡 萄糖、麦芽糖、果糖、蔗糖、酒石酸及柠檬酸及 ０ ． ５ × １０－５～１ × １０－５ｍｏｌ／Ｌ 抗坏血酸。其测定结果如表 ２ 所 示。由表 ２ 可知，测定的抗坏血酸含量与已知含量基本 一致。
糖类结构鉴定
单糖组分（连玉红）标准样品的配制：取葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸10 mg，加5ml水配成2mg/mL的溶液。
1、多糖水解取l0mg纯化后多糖，加入5mL 2mol/L的三氟乙酸(1.5mL 三氟乙酸+8.5mL 蒸馏水)，充氮气保护，封管，于120℃下水浴5 h 。
反应物用氮气吹干，加入2mL甲醇重新溶解，再用氮气吹干，以充分带走TFA。
2、糖腈乙酰酯衍生物的制备将降解后的多糖中加入5mg 盐酸羟胺，2mg肌醇，0.5ml吡啶，振荡混匀，放入90℃水浴中加热30min。
取出后冷却至室温，加入醋酸酐0.5ml，于90℃水浴中继续反应30min进行乙酰化。
将反应物用氮气吹干，加入氯仿1ml重新溶解，再用氮气吹干，反复进行3~4次。
最后加入2ml氯仿复溶，供气相色谱分析使用。
3、气相色谱条件色谱柱：OV-225-capillary column；内径：0.25mm；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度：280 ℃；进样口温度：250 ℃；载气：N2 (40 mL/min)。
以单糖标准品建立GC标准图谱为参照，根据多糖完全水解样品的出峰时间和峰面积比可知样品的单糖组成和摩尔比。
单糖组分（廖文镇）1、水解：称取20 mg 的雪莲果多糖于安瓿瓶中，加入4 mL 2 mol/L 三氟乙酸（TFA），用酒精喷灯对安瓿瓶进行封口后置于105℃下反应6 小时。
反应完后，冷却至室温，将多糖水解液与适量的甲醇混合后，减压旋转蒸干，再加入适量的甲醇，减压旋转蒸干，重复 5 次以完全去除残留的三氟乙酸。
2、衍生化：往干燥后的竹荪多糖水解物中加入0.5 mL 吡啶和10 mg 盐酸羟胺，置于95℃下恒温震荡反应30 分钟，反应完后冷却，加入0.5 mL 醋酸酐，于95℃下进行乙酰化反应35 分钟，最终生产糖腈乙酸酯衍生物。
所有的单糖标准品也按照上述步骤进行衍生化。
3、色谱条件：色谱仪为Dionex ICS-3000 离子色谱仪，检测器为电导检测器；色谱柱为Carbopac PA20 柱（2×250 mm）；流速为0.6 mL/min，柱温为20℃，采用梯度洗脱方式：0-2 min：100% 200 mmol/L NaOH，2.1-20 min：10%20 mmol/L NaOH + 90%超纯水，20.1-40 min：100% 200 mmol/L NaOH。
HPLC-ELSD测定银杏叶多糖组成及单糖含量
摘要：目的
建立高效液相色谱法测定银杏叶多糖组成及单糖含量。 方法
1
采用 Agilent Zorbax Carbohydrate 色谱柱 色谱峰分离良好，鼠李
(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(80∶20)为流动相，流速：1.0 mL·min ，柱温：30 ℃。结果
糖在 4.160~20.80 μg、阿拉伯糖在 8.040~40.20 μg、果糖在 4.096~20.48 μg、甘露糖在 4.000~20.00 μg、葡萄糖在 8.152~ 40.76 μg、半乳糖在 3.960~19.80 μg 内呈良好的线性关系。平均加样回收率鼠李糖为 99.6%、阿拉伯糖为 100.9%、果糖为 99.7%、甘露糖为 99.1%、葡萄糖为 98.8%、半乳糖为 100.1%。结论 分质量控制。 关键词：银杏叶；多糖；单糖；含量测定；质量控制 中图分类号：R917.101 文献标志码：B DOI: 10.13748/ki.issn1007-7693.2015.06.017 文章编号：1007-7693(2015)06-0711-04 该方法简单快速、稳定可行，可用于银杏叶中多糖成
基金项目： “重大新药创制”科技重大专项 (2011ZX09203-001-18)；浙江省科技计划项目(2009E10009) 作者简介：任红，女，硕士生 Tel: 13575711633 Tel: (0571)87774766 E-mail: wangrw@ E-mail: Renhong@
*
通信作者： 王如伟，男，博导，教授级高工
·711·
中国现代应用药学 2015 年 6 月第 32 卷第 6 期
Chin J Mod Appl Pharm, 2015 June, Vol.32 No.6
单糖组成测定原理
单糖组成测定原理单糖是一类简单的糖类，由一个单糖分子组成。
常见的单糖有葡萄糖、果糖和半乳糖等。
单糖组成测定是一种分析方法，用于测定样品中单糖的种类和含量。
本文将详细介绍单糖组成测定的原理和方法。
一、单糖组成测定的原理单糖组成测定的原理基于单糖具有特定的化学性质。
常见的单糖是光学异构体，包括D-型和L-型两种构型，这两种构型可以互相转化。
在溶液中，单糖分子可形成开环结构和环状结构。
开环结构包括直链和链末内酯两种形式。
环状结构包括五元环（呈菱形）和六元环（呈椭圆形）。
单糖还具有亲水性和各种还原性反应。
单糖组成测定的核心原理是利用单糖的还原性反应进行测定。
单糖具有显著的还原性，可以将银离子（Ag+）还原为银（Ag）并生成沉淀。
这种反应被称为单糖还原反应或银镜反应。
还原反应的原理是单糖中的羟基（OH）在碱性条件下断裂形成还原剂，将银离子还原为银。
不同种类的单糖具有不同的还原性，因此可以利用还原反应测定样品中的单糖种类和含量。
二、单糖组成测定的方法1.高效液相色谱法（HPLC）HPLC是一种基于色谱原理的分析方法，可以用于分离和定量测定多种化合物。
对于单糖组成测定，HPLC通过分离和检测样品中的单糖，以确定其种类和含量。
HPLC的原理是将样品溶液通过高效液相色谱柱，利用固定相对样品进行分离。
样品中的单糖分子会因为相互作用力的不同而在柱上以不同的速度移动，从而实现分离。
继续沿柱流动的单糖分子会被检测器检测到，并根据峰的高度或面积进行定量分析。
2. 紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）UV-Vis光谱法是一种基于物质对紫外-可见光的吸收特性进行分析的方法。
对于单糖组成测定，UV-Vis光谱法可以通过测量样品在特定波长下的吸光度来确定其含量。
单糖在紫外-可见光谱中的吸收峰通常位于200-350 nm之间。
根据测量样品的吸光度，可以建立吸光度与浓度之间的标准曲线，从而定量分析样品中的单糖含量。
3.催化剂反应法催化剂反应法是一种利用催化剂促进单糖还原反应的方法。
法测定黄芪多糖中单的糖组成及摩尔比
HPLC-ELSD 法测定黄芪多糖中单的糖组成及摩尔比陈卫平陈琴鸣刘斌（丽水市食品药品检验所，浙江丽水323000）摘要目的：用HPLC-ELSD测定黄芪中多糖单糖组成及摩尔比测定。
方法：采用Agilent XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温25 ℃；流动相为乙腈-水（80：20），流速0.8 mL·min-1；漂移管温度83.5 ℃，载气（N2）流速2.2L·min-1。
结果：鼠李糖（Rha ）Y=1.3583x+5.2624, r = 0.9992, 线性范围：0.1634～1.634μg、阿拉伯糖（Ara）Y=1.2533x+3.9617, r = 0.9992 线性范围：0.3818～3.8176μg、木糖（Xyl ）Y=1.3051x+5.7616 r = 0.9994 线性范围：0.1681～1.681μg、甘露糖（Man）Y=1.1817x+4.8772 r = 0.9918 线性范围：0.1604～1.604μg、半乳糖（Gal）Y=1.2622x+4.9182 r = 0.9952 线性范围：0.1634～1.634μg、葡萄糖（Glc）Y=1.3181x+7.4172 r = 0.9994 线性范围：0.1604～1.604μg、葡萄糖醛酸（Glc A）Y=1.2661X+0.2196 r = 0.9967 线性范围：11.64～116.4μg各个范围内呈良好的线性关系, 摩尔比Glu A :Rha: Ara: Gal: Glc 25.4∶0.03∶0.07∶0.08∶1。
结论：本方法灵敏、简便、准确。
关键词：HPLC-ELSD；黄芪多糖；单糖组成；摩尔比；鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸黄芪为豆科植物膜荚黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.]或蒙古黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao] ，具补中益气、升阳固表、托毒生肌、利水退肿之功[1]。
HPCE法测定灵芝多糖中单糖的组成
HPCE法测定灵芝多糖中单糖的组成梁加贝，程贝，王菁成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室，成都（610075）摘要: 目的：采用高效毛细管电泳法测定灵芝多糖中单糖的组成。
方法：灵芝多糖水解后，经PMP衍生化，高效毛细管电泳分析。
电泳条件为缓冲液为50mmol·L-1硼砂溶液(pH9.3)；柱温 25℃；电压20kV；检测波长200nm；气压进样0.5psi，进样时间5s。
结果：灵芝多糖主要是葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖4种单糖组成。
结论：该方法具有简单、快速、分离效率高等特点,可用于测定灵芝多糖中单糖的组成。
关键词：灵芝，多糖，毛细管电泳灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.或紫芝Ganodermasinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体。
灵芝多糖存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中，是灵芝的主要有效成分之一，是由肽多糖、葡聚糖、杂多糖等组成的混合物[1]。
多糖样品的单糖组成分析常用的方法包括薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。
薄层色谱法操作简单，但微量成分显色不明显；气相色谱法衍生化操作繁杂、费时；液相色谱法存在柱平衡时间长、色谱柱易污染、试剂消耗大等缺陷。
高效毛细管电泳法是近年发展起来的一种具有高效、灵敏和低耗的分析方法，在糖类物质的检测方面具有独特的优势[2]。
由于单糖缺乏常规紫外生色基团或荧光基团，需要对其进行柱前衍生，采用PMP为衍生试剂能够使其带上可被检测的基团[3～6]。
本实验首次采用高效毛细管电泳法测定了灵芝多糖中的单糖组成，为灵芝多糖的质量控制提供了一种快速、简便的新方法。
1. 材料与方法1.1 仪器与试剂电泳装置为Beckman公司P/ACE TM MDQ型毛细管电泳仪，二极管阵列检测器，用Gold 软件控制仪器操作和数据采集，弹性石英毛细管柱(57cm×50µm，有效长度50cm)（河北永年光导纤维厂）。
不同糖组分液相色谱检测方法
不同糖组分液相色谱检测方法引言糖类物质是生物学和食品科学中的重要组成部分，它们包括单糖、双糖和多糖等。
不同种类的糖分子在不同的环境下具有不同的生物学活性，因此对于糖类物质的分析和检测具有重要的意义。
液相色谱（HPLC）是一种高效、高灵敏度、高分辨率的分析方法，已广泛应用于糖类物质的分离和检测。
本文将重点介绍不同糖类物质的液相色谱检测方法。
一、单糖的液相色谱检测方法1. Fehling试剂法Fehling试剂法是一种常规的检测单糖的方法，它主要是通过单糖和酮糖的氧化还原反应来实现的。
色谱柱选用无极相逆向相色谱柱，可以溅破，适合小样品，检测较复杂。
2. 氨基树脂色谱法氨基树脂色谱法是通过氨基树脂柱分离和检测单糖的方法，氨基树脂柱对单糖有较好的分离性能，可以用于测定混合样品中的多种单糖。
3. 离子交换色谱法离子交换色谱法主要是通过离子交换柱对单糖进行分离和检测，它是一种常用的单糖检测方法，具有较高的分离和检测灵敏度。
二、双糖的液相色谱检测方法1. 碘酸法碘酸法是一种常用的检测双糖的方法，它是通过碘酸钠溶液和双糖反应生成碘的比色反应来实现的。
2. 色谱法色谱法是通过液相色谱柱分离和检测双糖的方法，色谱柱选用无极相逆向相色谱柱，可以有效地分离和检测双糖。
三、多糖的液相色谱检测方法1. 高效液相色谱-蒸发光散射检测法高效液相色谱-蒸发光散射检测法是一种常用的检测多糖的方法，它是通过高效液相色谱分离和蒸发光散射检测器联用来实现的，具有较高的检测灵敏度和分辨率。
2. 糖基柱色谱法糖基柱色谱法是通过糖基柱分离和检测多糖的方法，糖基柱具有较好的分离和检测性能，可以用于测定混合样品中的多种多糖。
结论通过不同的液相色谱检测方法，可以对不同糖类物质进行高效、准确的分离和检测。
在实际应用中，可以根据具体的需要选择合适的检测方法，以获得理想的分析结果。
液相色谱技术的不断发展将为糖类物质的分析和检测提供更多的选择和手段，为相关领域的研究和应用提供更好的技术支持。
气相色谱法测定新疆桑枝多糖中单糖组成及含量
气相色谱法测定新疆桑枝多糖中单糖组成及含量孙莲;孟磊;阿布都许库尔·吐尔逊【摘要】[目的]建立测定桑枝多糖中单糖的组成及含量的方法.[方法]水提醇沉法提取桑枝多糖,CF3 COOH水解多糖,水解产物用盐酸羟胺、吡啶和醋酸酐衍生化,生成糖腈乙酸酯衍生物,气相色谱法测定桑枝多糖的单糖组成及含量.[结果]新疆桑枝多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等组成,含量分别为鼠李糖(11.8 mg/ml)、阿拉伯糖(14.4 mg/ml)、木糖(1.6 mg/ml)、甘露糖(1.9mg/ml)、葡萄糖(22.3 mg/ml)及半乳糖(28.0 mg/ml).[结论]该方法简便、灵敏、准确可靠,可用于桑枝多糖中单糖的组成及含量测定.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)019【总页数】3页(P6207-6208,6262)【关键词】桑枝;多糖;气相色谱法【作者】孙莲;孟磊;阿布都许库尔·吐尔逊【作者单位】新疆医科大学药学院化学教研室,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学药学院化学教研室,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学药学院化学教研室,新疆乌鲁木齐830054【正文语种】中文【中图分类】S567桑枝(RAMULUS MORI)是桑科桑属植物桑(Morus alba L.)的一年生干燥嫩枝，是中医常用的传统药材，具有祛风活络、通利关节和燥湿利水之功效［1］。
桑枝中的主要功效成分为多糖、黄酮类和生物碱类。
现代药理研究证明，桑枝多糖具有抗炎、抗氧化、抗衰老、防癌、抗溃疡、解痉、抗菌、提高机体免疫功能以及降糖降脂等多种功能［2－8］。
测定桑枝多糖中单糖的组成及含量对桑枝的开发利用及药效学研究十分必要。
笔者利用气相色谱法对桑枝多糖的组成及含量进行测定［10］，以期为新疆桑枝的质量控制和开发利用提供参考数据。
1.1 材料1.1.1 研究对象。
桑枝，采自新疆喀什，经新疆医科大学药学院天然药物教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为桑的干燥嫩枝。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一株硅酸盐细菌胞外多糖的单糖组分分析
题目简介（200字以内）
硅酸盐细菌是最重要的土壤细菌之一，可以利用有限的营养大量生产多糖。
硅酸盐细菌的胞外多糖具有很好的絮凝作用，絮凝特性要优于许多微生物，通常用于废水处理。
在不同培养条件下，硅酸盐细菌的胞外多糖含量差异较大。
据文献报道在培养基中加入矿粉，可以提高硅酸盐细菌的胞外多糖含量，发酵液外观较对照组差异显著。
本研究将通过苯酚-硫酸法、DART-MS技术来确定不同培养条件下多糖含量和单糖组分的差异。
任务简介
1、硅酸盐细菌的培养
2、胞外多糖的含量测定
3、胞外粗多糖的提取、纯化及酸水解
4、LC-MS分析单糖组分差异
一、硅酸盐细菌的培养
种子液制备时，以接种环挑取单菌落2-3环于有氮液体培养基（蔗糖2.0 g，酵母提取物0.1g，硫酸铵0.04g，MgSO4·7H2O 0.2g，碳酸钙0.1g，K2HPO4·12H2O 0.2g，pH 7-7.5）中，180r/min，30℃，摇床培养3天。
发酵液培养基：配制添加7种不同矿粉的有氮培养基及不加矿粉的有氮培养基各200mL，接种量为10%（体积比），150rpm 30℃培养5天。
有氮液体培养基：
蔗糖（C12H22O11）10.0 g
酵母膏0.3 g
(NH4)2SO40.2 g
CaCO30.5 g
MgSO4·7H2O 1.0 g
K2HPO4 1.0 g
pH值7.0～7.5
蒸馏水 1.0 L
115℃高压蒸汽灭菌20 min
胶质芽孢杆菌荚膜观察：用胶头滴管在载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环从培养液中挑取少量胶质芽孢杆菌，与水滴混匀，涂成薄层，然后滴加10ul
10%刚果红溶液染色2min ，置于普通光学显微镜下观察细胞形态。
有氮固体培养基培养，放大1000倍
二、测EPS 含量
1、测蛋白质含量：用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。
取1ml 发酵原液，加入4倍体积-20℃预冷的丙酮，4℃过夜。
离心，烘干，加2ml 40mM Trise 在
80 ℃的水浴锅中加热溶解。
8000 r/ min 离心10min 后取60ul 上清于96孔板中加180ulBradford 试剂，反应5min 后于595nm 测定蛋白质含量。
测蛋白标曲：
2、测多糖含量：用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
取1ml发酵原液(1ml单蒸水调零)，加3倍体积无水乙醇，4℃过夜。
离心，烘干，加4ml水在80 ℃的水浴锅中加热溶解。
8000 r/ min 离心10min后取1ml 上清,加6%苯酚0.5ml，浓硫酸2.5ml，静置10min，摇匀，室温放置20 min后，取200ul于96孔板中，于490nm测定吸光值。
测多糖标曲
三、纯化多糖：
将培养 5 d 后的发酵液在8000 r/ min 离心20 min ，取其上清液；将沉淀及少许液体合并后再次离心取上清液；合并两次上清液在 80 ℃的水浴锅中浓缩 ，体积减少至原体积的三分之一时 ，加入3倍体积的无水乙醇进行醇沉多糖 ，在4℃静止12 h 以后，4000 r/ min 离心
10 min ，收集沉淀，再分别用 95 %乙醇、无水乙醇，甲醇及乙醚洗涤沉淀，离心后得多糖粗品，即粗多糖。
将该多糖粗品用20 mL 蒸馏水溶解后，用savge 试剂除蛋白5~7次后，再次醇沉离心得到较纯多糖，即纯化多糖。
酸水解多糖：用2M H 2SO 4在100℃下完全水解2小时，然后用碳酸钡中和（调Ph 为7）水解产物，4℃过夜。
四、LC-MS 定性定量分析单糖组分
用savge 试剂除蛋白：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1 混合液) 溶液1 ml ,置于具塞试管中,充分振摇30 min 后,经离心机离心1 min ,然后将水相与氯仿相分开。
将水相再加入相当于其体积1/ 4 的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复5次。
Sevag 法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到
理想效果。