聚合酶链反应(PCR)检测花鲈鳗弧菌感染
食品中五种致病性弧菌MPCR-DHPLC检测方法的建立

※分析检测
食品科学
2008, Vol. 29, No. 10 501
(1.1833)标准菌株 中科院微生物所菌种中心;创伤弧菌 标准菌株(CMCPC 6) 北京兰伯瑞生物技术有限公司。 1.2 试剂
2 × Taq PCR MasterMix、dNTP、DNA marker Ⅰ 厦门泰京公司;细菌基因组 DNA 提取试剂盒 天根生 化科技有限公司;5 × Buffer(含 15mmol/L MgCl2)、Go Taq DNA 聚合酶(5U/μl) Promega 公司。 1.3 引物
参照文献[6],委托上海生工公司合成以下引物(表 1)。引物用 TE 溶液(pH8.0)稀释至浓度为 10μmol/L,- 20℃ 保存备用。
1.4 基因组 DNA 的提取 各取 100μl 弧菌菌悬液,接种于 4ml 3% NaCl 营养
肉汤中,37 ± 1℃培养过夜。取 1ml 菌液,按照细菌基 因组 DNA 提取试剂盒说明书提取 DNA,经 100 倍稀释 后,于核酸蛋白分析仪上测定浓度,用 TE 溶液(pH8.0) 稀释至 5 0 n g /μl ,- 2 0 ℃保存备用。 1.5 5 种弧菌间多重 PCR 反应体系的确立
接触潜在的致癌物质——溴化乙锭。变性高效液相色谱 技术( D H P L C ) 是一种新近发展的先进技术,可用于 PCR、MPCR 产物的快速分析。本实验选取 5 种主要的 致病性弧菌( 副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌、创 伤弧菌和拟态弧菌)为研究对象,拟建立这 5 种弧菌间 MPCR-DHPLC 检测方法,并用于日常送检样品的检测。
鳗鲡圆环病毒PCR检测方法的建立及应用

鳗鲡圆环病毒PCR检测方法的建立及应用李苗苗【摘要】鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus,EeCV)是引起鳗鲡病毒性疾病的病原之一.根据GenBank已经发表的EeCV基因序列,设计一对特异性引物,对PCR反应条件优化,进行特异性、敏感性和重复性试验,建立了EeCV的PCR检测方法,并应用该方法对从福建省不同地区采集的160份疑似鳗鲡病毒性疾病病料进行了检测,其中65份表现为阳性,阳性率可达40.6%.结果表明,建立的PCR方法特异性强、敏感度高、重复性好,可以应用于EeCV引起的病害检测.%Eel circovirus (EeCV) is one of the pathogens that cause virosis on eels.Based on the gene sequence of EeCV in GenBank,a pair of primers was selected for the development of the detection method using PCR.The optimized reaction conditions,as well as the specificity,sensitivity and repeatability of the methodology were determined to establish the preliminary testing protocol.Subsequently,160 epidemic specimens with the suspected viral infection were collected from are as in Fujian for the determination.Out of all samples,65 were shown to be positive,at a rate of 40.6%.It appeared that the current PCR method could be employed to detect EeCV for early disease diagnosis on eels.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2018(033)001【总页数】5页(P12-16)【关键词】鳗鲡圆环病毒(EeCV);PCR检测;方法建立;应用【作者】李苗苗【作者单位】福建省水产技术推广总站,福建福州 350002【正文语种】中文【中图分类】S943鳗鲡养殖过程中病毒性疾病的流行,严重影响鳗鲡产业健康发展和产品质量安全。
聚合酶链反应技术如何在医学检验中应用

聚合酶链反应技术如何在医学检验中应用(绵阳市肿瘤医院四川绵阳 621000)聚合酶链反应技术应用于是现代医学领域的一种检测技术,通过聚合酶链反应技术的诊断,可以通过患者的DNA检测出幽门螺旋杆菌。
在临床上,聚合酶链反应技术不仅可以检测出患者胃里面的幽门螺旋杆菌,还能够从患者的粪便、牙斑里检测幽门螺旋杆菌的存在。
除此之外,聚合酶链反应技术的检测敏感性非常强,所以经常被用在各种流行性疾病的检测中。
可以说,聚合酶链反应技术是一种非常有前景的细菌检测方法。
那么,在医学检验中,聚合酶链反应技术具体是如何应用的呢?下面我们就来了解一些,聚合酶链反应技术的相关知识。
1 聚合酶链反应技术在医学检验中的应用聚合酶链反应技术属于分子生物学范畴内,在医学进步与发展中,聚合酶链反应技术在医学检验中得到非常广泛的使用。
聚合酶链反应技术有着特异性良好、操作简便等应用优势。
所以在医学领域中,聚合酶链反应技术可以被应用在遗传病、感染性疾病、肿瘤的医学检验中。
具体来说,首先,在聚合酶链反应技术的首次应用中,医生通过聚合酶链反应技术,对患者身体内的镰状细胞进行检验,进一步分析着患者的基因突变情况,使聚合酶链反应技术的应用效果得到体现。
并且随着医学、社会经济的发展,聚合酶链反应技术在遗传病的检验中,使用次数不断增多。
在遗传病学发展中,由于遗传病比较特殊,受先天因素影响程度较大。
比如常见的先天性聋哑、血友病均属于遗传病。
遗传病出现之后,给很多家庭带来很多负担,如果可以尽早对胎儿展开检测,以便于发现胎儿异常,并采取科学的诊治,就可以有效降低遗传病出现的概率。
据了解,聚合酶链反应技术可以对遗传病患者的基因进行准确的检测,并在技术运用中,展开科学而全面的分析。
所以在遗传病的医学检验中,聚合酶链反应技术有着非常大的优势,目前,聚合酶链反应技术已经成为产前检测遗传病的主要方式。
其次,根据相关的医学研究显示,聚合酶链反应技术在感染性疾病的诊断中,可以检验出多种病原体,甚至对患者疾病的状态都可以进行有价值的判断,比如聚合酶链反应技术可以明确患者的感染疾病是否处于隐形状态。
Taqman-探针荧光定量PCR鉴定溶藻弧菌方法的建立

Taqman-探针荧光定量PCR鉴定溶藻弧菌方法的建立陈昌国;侯兵兵;陈秋圆;郭建巍;赵强元【摘要】目的建立一种基于DNA回旋酶B亚单位基因(gyrB)基因的Taqman-探针荧光定量聚合酶链式反应(PCR)鉴定溶藻弧菌的方法.方法以溶藻弧菌标准株(ATCC)和溶藻弧菌野生株(WT)为研究对象,通过软件设计溶藻弧菌gyrB基因的特异性PCR引物及Taqman-探针,采用荧光定量PCR仪进行检测,评价该检测方法的特异性和灵敏度.结果 Taqman-探针荧光定量PCR检测方法对溶藻弧菌gyrB基因的检测灵敏度为10-3 mg/L;在检测粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、霍氏肠杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌6种其他常见致病菌时未出现阳性扩增,特异性均为100%.结论成功建立Taqman-探针荧光定量PCR是一种特异性、灵敏度均较好的鉴定溶藻弧菌的方法,该方法适用于溶藻弧菌的快速检测,具有应用价值.【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2017(009)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】Taqman-探针;荧光定量PCR;溶藻弧菌;gyrB基因【作者】陈昌国;侯兵兵;陈秋圆;郭建巍;赵强元【作者单位】100048 北京,中国人民解放军海军总医院检验科;100048 北京,中国人民解放军海军总医院检验科;100048 北京,中国人民解放军海军总医院检验科;100048 北京,中国人民解放军海军总医院检验科;100048 北京,中国人民解放军海军总医院检验科【正文语种】中文溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)由Miyamoto在1961年命名,属弧菌科弧菌属,是一种革兰阴性(G-)嗜盐性弧菌[1],广泛存在于海洋、河水等水体环境中,是水生动物弧菌病的主要条件致病菌[2-3]。
对于人类,部分致病力较强的弧菌如创伤弧菌可以造成致命性感染[4],溶藻弧菌主要导致食物中毒和胃肠炎,严重时可引起脓毒症[5-6]。
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种新型的核酸扩增技术,它具有快速、灵敏、简便、特异等优点,逐渐成为分子生物学研究和临床诊断的重要工具。
创伤弧菌是一种引起人类创伤性溃疡病的病原菌,其早期诊断对病情的治疗和控制至关重要。
本文将结合RPA技术的特点和创伤弧菌的检测需求,探讨RPA技术在创伤弧菌检测中的应用。
一、背景介绍创伤弧菌是一种革兰氏阴性厌氧菌,可引起创伤性溃疡病,其主要传播途径为接触海水或海产品。
创伤弧菌感染后症状严重,且容易发生败血症,对感染者的生命安全造成威胁。
在感染创伤弧菌后,早期的诊断和治疗是十分重要的。
传统的创伤弧菌检测方法主要包括培养法和PCR技术,但这些方法在时间、灵敏度和特异性上存在一定的局限性。
迫切需要一种新型的检测技术,能够快速、准确地检测创伤弧菌的存在。
二、RPA技术的原理及特点RPA技术是一种基于酶的核酸扩增技术,其原理类似于PCR技术,但具有更快速、更简便的优点。
RPA技术的主要特点包括以下几点:1. 快速:RPA技术可以在常温下完成核酸扩增过程,通常只需要15-30分钟即可得到扩增产物。
2. 灵敏:RPA技术对于目标序列的检测具有较高的灵敏度,可以检测到极低浓度的核酸。
3. 特异:RPA技术在温度和时间上都具有高度特异性,不易受到非特异性扩增的影响。
4. 简便:RPA技术不需要复杂的设备和条件,只需简单的反应体系即可完成扩增反应。
RPA技术具有快速、灵敏、特异和简便等优点,适合用于临床快速检测和野外应用。
三、RPA技术在创伤弧菌检测中的应用基于RPA技术的创伤弧菌检测方法可以分为两种:基因组DNA检测和mRNA检测。
1. 基因组DNA检测创伤弧菌的基因组DNA检测可以通过RPA技术快速、灵敏地实现。
具体步骤如下:(1) 样品预处理:将样品(如患者组织、粪便、水样等)进行简单的提取处理,获得其中的创伤弧菌DNA。
(2) 反应体系:将提取得到的DNA与RPA反应体系(包括引物、酶、缓冲液等)混合均匀,接入反应管中。
多重PCR检测四种食源性病原弧菌

多重PCR检测四种食源性病原弧菌食源性病原弧菌主要包括副溶血性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌等。
这些细菌均具有较强的致病性,容易引起食物中毒等食品安全问题。
为了有效检测这些病原弧菌,多重PCR技术应运而生。
多重PCR检测技术是一种能够同时检测多个目标基因的PCR方法。
在这个过程中,不同的引物对应着不同的目标基因,通过特定的PCR扩增剂进行扩增。
在PCR反应过程中,如果存在目标基因,则会产生相应的扩增产物,从而被检测出来。
对于四种食源性病原弧菌的多重PCR检测,首先需要针对每种细菌设计特定的引物。
这些引物需要能够特异性与各自的目标基因序列进行结合,从而实现对目标基因的特异性扩增。
接下来,需要选择适合的PCR扩增剂,确保PCR反应的顺利进行,并产生足够的扩增产物。
在完成引物设计和PCR扩增剂选择后,就可以开始进行多重PCR实验操作。
需要将四种细菌的DNA样本进行混合,以实现对四种病原弧菌的同时检测。
随后,在PCR仪中进行多重PCR反应,通过调整不同的反应条件,如温度、时间等,以确保每种目标基因的特异性扩增。
通过凝胶电泳等手段对扩增产物进行检测,观察是否存在目标基因的特异性扩增条带。
多重PCR检测四种食源性病原弧菌具有较高的特异性和灵敏度,能够实现对这四种细菌的同时检测。
该方法还具有快速、简便等优点,可以在短时间内对大量样本进行检测。
在应用方面,多重PCR检测技术可以应用于食品检验、疾病诊断等领域,为食品安全和临床诊断提供有效的技术支持。
本文介绍了多重PCR检测四种食源性病原弧菌的方法。
该方法具有高特异性、高灵敏度和快速简便等优点,为食品安全和临床诊断等领域提供了有效的技术支持。
然而,尽管该方法具有许多优点,但仍存在一定的局限性,如可能受到实验条件、引物设计等因素的影响而出现假阳性或假阴性结果。
因此,在应用过程中需要结合其他检测方法进行综合判断。
未来研究方向应包括优化多重PCR反应条件、提高引物设计的准确性以及发掘更多新型的多重PCR技术,从而进一步提高检测的准确性和灵敏度。
PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌秦蕾;徐静;张正【期刊名称】《淮海工学院学报(自然科学版)》【年(卷),期】2008(017)002【摘要】以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)toxR基因内366~571bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针,探针长度为206bp.选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌,通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测,结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性,而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应.这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性,它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测.【总页数】4页(P66-69)【作者】秦蕾;徐静;张正【作者单位】淮海工学院,江苏省海洋生物技术重点建设实验室,江苏,连云港,222005;淮海工学院,江苏省海洋生物技术重点建设实验室,江苏,连云港,222005;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室,山东,青岛,266071【正文语种】中文【中图分类】S917【相关文献】1.地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究 [J], 郭大为2.PCR制备地高辛标记的探针检测禽流感病毒核酸 [J], 黄庚明;辛朝安3.PCR法制备地高辛标记DNA探针斑点杂交检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) [J], 杨冰;黄婕;宋晓玲;史成银;刘莉;刘庆慧4.PCR方法制备地高辛标记DNA探针检测中国对虾非包涵体型杆状病毒 [J], 徐洪涛;朴春爱;杨朵;王雷;张新宇;侯云德5.地高辛标记核酸探针斑点杂交法检测轮状病毒疫苗中残余MA-104细胞DNA 含量的研究 [J], 周旭;宁小军;李益民;白植生因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
聚合酶链反应技术在病原菌检测中的应用

聚合酶链反应技术在病原菌检测中的应用病原菌是一种可能引起疾病或感染状况的生物体,它们可能存在于生活周围的许多物体中,例如水、食物和空气中。
传统的病原菌检测方法是通过培养和观察细菌来确定是否存在病原菌。
但是,这种方法存在着许多问题,比如需要很长的时间和耗费大量的资源。
聚合酶链反应技术(PCR)解决了这些问题,这种技术能够更加快速、准确地检测病原菌,因此在医学诊断、食品安全以及环境检测等领域得到广泛应用。
PCR技术的原理PCR技术是一种基于DNA分子互补匹配的技术,能够在体外复制DNA分子。
PCR技术的实现需要引入一种叫做聚合酶的酶,这种酶能够识别特定的DNA序列并在这些序列的两侧进行复制,从而使得该序列得以扩增。
此外,PCR技术还需要反向引物和正向引物,这些引物是针对特定区域的两个小分子。
在PCR反应中,这两个引物将与DNA序列的两端结合,确保只有位于特定位置的序列扩增。
PCR反应的结果是产生大量的复制子,扩增出了感兴趣的DNA序列。
PCR技术的应用PCR技术是一种高灵敏度、高专一性的技术,这种技术不仅能够检测病菌,同时还可以检测病菌的药物耐药性和基因变异性。
下面,我们将介绍PCR技术在不同领域的应用。
医学诊断PCR技术在疾病诊断领域得到了广泛应用。
病原菌的DNA序列能够明确识别病原菌,并且在感染期间其DNA形状也能够发生变化,因此,通过PCR技术能够确定病人是否被感染。
此外,PCR技术可以检测病原菌的抗药性和基因变异性,从而为治疗提供更加精确的信息。
食品安全食品中可能存在着大量的病原菌,如果食用这些食品将有可能导致感染。
采用PCR技术能够更加快速的检测食品中的病原菌,这将有助于及早防范食品安全风险。
环境检测PCR技术还能够用于环境检测,例如检测污染的水、空气以及土壤中是否存在病原菌。
此外,环境检测也可以运用PCR技术来检测是否存在特定的非病原菌微生物,这将有助于判断环境的安全性。
总结PCR技术通过体外复制DNA分子、引入聚合酶和引物等手段,在体外复制出感兴趣的特定DNA序列。
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1 材料 和 方法
1.1 材 料
1.1.1 菌株 实 验 用 菌 株 见 表 1。鳗 弧 菌 标 准 菌 株 (血 清 型 O1~ O10)均 来 源 于 英 国 Heriot—W att大 学 ,其 它标 准 弧 菌来 源 于 比 利 时 根 特 大 学 。 所 有 标 准 菌 株 均 保 存 在 含 l5 9/6甘 油 缓 冲 液 的 保 种 管 中 ,一8O ℃ 冰 箱 保 存 。 菌 株 从 一 8O ℃ 冰 箱 取 出 后 活 化 2或 3次
弧 菌病 是 世 界水 产 养 殖 业 的 最 大 危 害 之 一 ,其 宿 主 范 围 很 广 泛 ,包 括 养 殖 和 野 生 鱼 类 。据权 威 报 道 ,目前 已有 超 过 14个 国 家 发 生 过 弧 菌 病 ,侵 染 大 约 48种 海 水 鱼 类 u 。海 水 养 殖 的许 多 鱼类 品 种 曾 因 为 弧 菌 病 导 致 严 重 的 经 济 损 失 L2 ]。鳗 弧 菌 (Vibro anguil— larum)是 海 水 鱼 类 弧 菌 病 的 最 主 要 病 原 菌 ,对 于 它 的毒 力 因 子 ,许 多 研 究 者 作 了 大 量 的 研 究 ,最 突 出 的 成 就 是 发 现 鳗 弧 菌 血 清 型 O1的 病 原 菌 中含 有 一 个 分 子 量 67 kd的毒 力 质 粒—— pJM1,它在 限 铁 的 条 件 下 与 铁 吸 收 系 统 有 关 ,消 除 此 质 粒 能 大 幅 度 降 低 毒 力Ls]。 除此 之外 ,一种 胞 外 锌 金 属 蛋 白酶 也 显 示 是 鳗 弧 菌 的 重 要 毒 力 因 子 。研 究 表 明 ,不产 生金 属蛋 白酶 的突 变 株 浸 泡 感 染 实 验 ,比野 生 株 毒 性 下 降 1OO倍 ]。
余俊红, 陈吉祥, 厉 云, 苟万里, 纪伟尚, 区
(青 岛海 洋 大 学 海 洋 生 命 学 院 ,山 东 青 岛 266003)
摘 要 :从 海 洋 鱼 类 重 要 病 原 茵 — — 鳗 弧 茵 基 因 库 中 选 择 金 属 蛋 白 酶 基 因 为 目标 检 测 基 因 , 以 此 设 计 一 对 引 物 ,建 立 聚 合 酶 链 反 应 (PCR)检 测 鳗 弧 茵 的 方 法 ,并 对 此 方 法 的 灵 敏 性 和 特 异 性 进 行 了研 究 ,结 果 表 明 该 方 法 对 鳗 弧 茵 的 检 测 快 速 、灵 敏 。 对 人 工 感 染 鳗 弧 茵 的 花 鲈 组 织样 品 选 行 栓 刹 .该 方 法 能 识 lJ组 织 样 品 中极 微 量 的 鳗 弧 茵 。 关 键 词 :聚 合 酶 链 反 应 (PCR);鳗 弧 茵 ;金 属 蛋 白 酶 基 因 ;花 鲈 中 图 分 类 号 :¥94l 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1000—7199(2002)02—0060—05
维普资讯
2期
余 俊 红 ,等 .聚 合 酶 链 反 应 (PCR)检 测 花 鲈 鳗 弧 菌 感 染
后 ,接 种 2216E斜 面 ,28℃培 养 24 h,用无 菌 0.85 9/6生理 盐 水 洗 脱 ,备 用 。
表 1 实 验 菌 株 及 金 属 蛋 白 酶 基 因 检 测 结 果
1.1.2 试 剂 和 缓 冲 液 Taq DNA 聚 合 酶 ,Biostar公 司 产 品 ;dNTP 2 mg/m L,购 于 上 海 生 工 公 司 ;1O× Buffer,Biostar公 司 产 品 ;抽 提 缓 冲 液 (TE),Tris—HC1 10 mmol/L,1 mmol/L EDTA;电 泳 缓 冲 液 (5×TBE) 1.1.3 引物 设 计 鳗 弧 菌 金 属 蛋 白 酶 基 因 的 引 物 由 上 海 生 工 公 司 合 成 ,经 鉴 定 为 电 泳 纯 。 序 列 为 :A 1(左 引 物 ),CCTTTAACCAAGTGGGCGTA ;A2(右 引 物 ),CG渤 海 海 洋
20(2)PP.60~64
2002年 6月 JOURNAL OF OCEANOGRAPHY OF HUANGHAI& BOHAI SEAS
June,2002
聚 合 酶 链 反 应 (PCR)检 测 花 鲈 鳗 弧 菌 感 染
本 文 从 鳗 弧 菌 基 因库 中 ,选 择 鳗 弧 菌 金 属 蛋 白酶 基 因为 目标 检 测 物 ,以此 设 计 了一对 引物 ,利 用 PCR 技术 检 测 不 同来 源 的 鳗 弧 菌 及 其 它 弧 菌 标 准 菌 株 ,并 且 对 人 工 感 染 鳗 弧 菌 的花 鲈 (Lateolabraxjaponicus)iJf行 了 PCR 快 速 检 测 ,以 期 为 水 产 养 殖 动 物 病 原 菌 的 检 测 提 供 参 考 。
Table 1 Detection results of metalloprotease gene in the experimental bacterial strains
菌
株
编
号
血 清 型
来
源
结
果
注 :OUQ:青 岛 海 洋 大 学 海 洋 生 命 学 院 微 生 物 室 }HW U :Heriot—W att University,英 国 爱 丁 堡 I LM G:Culture collec tion of the Laboratorium voor Microbiologie.比 利 时 根 特 ;T 代 表 标 准 菌 株 。