层析技术的应用与发展
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层析法的主要介绍及其应用1.层析法的概念层析法又称色谱法[1].色层法或层离法(Chromatography),是一种应用很广的分离分析方法。
1903年,俄国的植物学家M,C.UBeT在研究分离植物色素过程中,首先创造了色谱法,这是一种根据化合物的不同结构和不同的物理,化学特性,从而具有不同吸附性能的原理,以分离混合物中的化学成分的一种物理化学分离方法,最初用于有色物质,之后应用于大量的无色物质。
色谱法的名称虽然仍然沿用,但已失去原来的含义。
层析法和其他分离方法比较,具有分离效率高,操作又不太麻烦的优点。
因此,层析法的应用越来越广,对于近代化学科学的发展有巨大的影响。
在制药、化工、农业、医学等方面都有着广泛的应用。
2.层析法的历史及原理层析法的历史1903年3月21日俄国植物学家茨维特(Michael Tswett,1872-1919)在华沙自然科学学会生物学会议上发表了“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”研究论文,介绍了一种应用吸附原理分离植物色素的新方法,并首先认识到这种层析现象在分离分析方面有重大价值。
1906年他在德国植物学杂志发表文章,首次命名上述分离后色带为色谱图,称此方法为色谱法(Chromatography)。
1907年在德国生物学会年会上,展示过带有色带的分离柱管和纯化过的植物色素溶液。
茨维特被世人公认为色谱创始人。
德籍奥地利化学家R.Kuhn 等利用他的方法在纤维状氧化铝和碳酸钙的吸附柱上将过去一个世纪以来公认为单一的结晶状胡萝卜素分离成 a 和b 两个同分异构体,并由所取得的纯胡萝卜素确定出了其分子式。
Kuhn 正是由于在维生素和胡萝卜素的离析与结构分析中取得了重大研究成果而获得了1938年诺贝尔化学奖.1952年,Martin和James发表第一篇气液色谱论文,首次用气体作流动相,配合微量酸碱滴定,发明了气相色谱,它给挥发性化合物的分离测定带来了划时代的革命。
2.2层析法的原理层析Chromatography(色谱),利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲合力等) ,使各组分在支持物上集中分布在不同区域,借此将各组分分离。
层析技术简单介绍及其应用

层析技术简单介绍及其应用层析技术(Tomography)是一种通过对物体进行多角度投影扫描来重建其内部结构的成像技术。
它的基本原理是使用射线或波束从不同的方向通过物体,然后通过对每个方向的投影进行综合分析来重建物体的内部结构。
层析技术可以用于各种领域,包括医学、工程、地质学和材料科学等。
在医学领域,层析技术常用于进行X射线断层扫描(CT扫描)。
CT扫描是一种无创且精确的成像方法,可以用来检测和诊断各种疾病和病变,如肿瘤、骨折和血管病变等。
在CT扫描中,X射线通过患者的身体,然后使用感应器测量X射线通过后的强度。
通过多个不同的角度进行扫描和测量,计算机可以根据这些数据生成患者身体的三维图像,从而帮助医生做出准确的诊断和治疗计划。
层析技术在工程领域也有广泛的应用。
例如,它可以用于检测和识别材料的缺陷,如焊接缺陷和裂纹等。
通过将材料放置在扫描仪中并进行多角度扫描,工程师可以获得材料的内部结构信息,从而判断其质量和可靠性。
此外,层析技术还可以用于工艺过程的监测和优化,如石油勘探和制造业中的流体流动和混合过程等。
地质学是另一个应用层析技术的领域。
地球内部的结构和成分对于理解地球演化和资源勘探具有重要意义。
通过射线或波束的投射和测量,地球科学家可以重建地球内部的密度分布和物质成分,在不必进行物质采样的情况下了解地球深处的情况。
这对于勘探石油、天然气和矿产资源等具有重要价值。
总结来说,层析技术是一种通过多角度投影扫描来重建物体内部结构的成像技术。
它在医学、工程、地质学和材料科学等领域都有重要的应用。
通过层析技术,我们可以获得物体的三维结构信息,帮助医生进行疾病的诊断和治疗,工程师检测材料的质量和可靠性,地球科学家了解地球内部结构和成分。
层析分离技术图文

利用层析分离技术,如活性炭吸附、 聚合物吸附等,可去除水中的有机污 染物,提高水质,保障饮用水安全。
05
层析分离技术的未来发展与挑战
新材料与新技术的研究与应用
新型吸附剂
研究具有高选择性、高吸附容量的新型吸附剂,以提高层析分离 的选择性和效率。
新型固定相
探索具有优异性能的新型固定相,以适应不同分离需求和条件。
层析分离技术图文
• 层析分离技术概述 • 层析分离技术的分类 • 层析分离技术的操作流程 • 层析分离技术的应用实例 • 层析分离技术的未来发展与挑战
01
层析分离技术概述
定义与原理
定义
层析分离技术是一种基于不同物质在 两相中的分配系数不同而实现分离的 物理分离方法。
原理
利用流动相和固定相的相互作用,使 混合物中的各组分在固定相和流动相 之间进行吸附、脱附、溶解、挥发等 过程,从而实现各组分的分离。
上样量控制
控制上样量,确保样品在柱子上得 到有效分离。
洗脱
洗脱液选择
根据分离需求选择合适的洗脱液,如有机溶剂、缓冲液等。
洗脱方式
采用适当的洗脱方式,如分段洗脱、梯度洗脱等。
洗脱速度控制
调节洗脱速度,确保样品得到充分分离。
检测与收集
检测方式
01
根据待分离组分的性质选择合适的检测方式,如紫外可见光谱、
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术,开发具有高分离性能的纳米尺度层析分 离材料。
提高分离效率与分辨率
优化分离条件
深入研究层析分离的原理和动力 学过程,优化分离条件,提高分 离效率和分辨率。
联用技术
将层析分离与其他分离技术联用, 实现多维分离,进一步提高分离 效果。
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目
CONTENCT
录
• 层析技术简介 • 层析技术在蛋白质分离纯化中的应
用 • 层析技术原理 • 层析技术的应用实例 • 层析技术的优缺点及展望
01
层析技术简介
层析技术的定义
层析技术
是一种分离和纯化混合物中各组分的方法,基于各 组分在固定相和流动相之间的分配差异进行分离。
05
层析技术的优缺点及展望
层析技术的优点
分离效果好
层析技术能够根据分子间的吸附、分配等作用力 的差异,将混合物中的组分进行有效的分离,得 到高纯度的产物。
适用范围广
层析技术可以应用于不同性质的混合物分离,如 有机物、无机物、离子、蛋白质等,具有广泛的 适用范围。
分离过程可重复
层析技术是一种物理分离方法,不涉及化学反应 ,因此分离过程可以重复进行,适用于大规模分 离和制备。
凝胶过滤层析原理
原理概述
凝胶过滤层析是一种基于分子 大小差异的分离技术。通过不 同孔径的凝胶介质,不同大小 的分子会以不同的速度通过凝 胶,从而实现分离。
应用范围
凝胶过滤层析常用于蛋白质、 多糖等大分子物质的分离和纯 化。
技术特点
操作简便、分离效果好、分辨 率高。
离子交换层析原理
01 02
原理概述
1950年代
随着凝胶技术的发展,凝胶层 析、电泳等新型层析技术逐渐 兴起。
1970年代至今
层析技术不断改进和创新,应 用范围越来越广泛,成为生物 化学领域中重要的分离分析方 法。
层析技术的分类
根据固定相和流动相的物理状态
可分为液相层析和气相层析。液相层析又可分为液-固层析和液液层析,是生物分子分离纯化中最常用的技术。
层析成像原理及应用

层析成像原理及应用一、引言层析成像(Tomography)是一种通过对物体进行多次扫描,然后利用计算机重建出物体内部结构的技术。
它可以提供高分辨率的三维图像,广泛应用于医学、工业检测等领域。
本文将介绍层析成像的原理及其在医学诊断、材料检测等方面的应用。
二、层析成像原理层析成像的原理基于射线投影的思想,通过对物体进行多个角度的射线投影扫描,然后通过计算机对这些投影数据进行重建,得到物体的三维结构。
具体来说,层析成像主要包括以下几个步骤:1. 射线投影:在不同的角度上,通过物体的不同位置进行射线投影,得到一系列的投影图像。
2. 数据采集:将投影图像转化为数字信号,并存储在计算机中。
3. 重建算法:对采集的数据进行处理,使用重建算法恢复出物体的内部结构。
4. 图像显示:将重建后的数据以图像形式显示出来,供观察和分析。
三、层析成像的应用1. 医学诊断层析成像在医学领域被广泛应用于疾病的诊断和治疗。
其中最常见的应用就是X射线计算机断层扫描(CT)。
CT扫描可以提供人体内部器官的高分辨率图像,用于检测和诊断各种疾病,如肿瘤、骨折、脑出血等。
同时,CT还可以辅助手术规划,提高手术成功率。
2. 工业检测层析成像在工业领域也有重要应用。
例如,金属材料的缺陷检测。
通过对金属材料进行层析成像扫描,可以检测出内部的裂纹、气孔等缺陷,帮助判断材料的质量和可靠性。
此外,层析成像还可以用于材料的密度分布分析、形状重建等方面,对提高工业产品的质量和效率具有重要意义。
3. 资源勘探层析成像在石油、矿产等资源勘探中也有广泛应用。
通过对地下岩石和矿石进行层析成像扫描,可以获取地下结构的信息,识别石油、矿石等资源的分布情况,为勘探和开采提供重要依据。
层析成像在资源勘探领域的应用,不仅提高了勘探效率,还减少了勘探成本和环境影响。
4. 环境监测层析成像在环境监测中也有一定的应用。
例如,地下水资源的调查和管理。
通过对地下水进行层析成像扫描,可以获得地下水的分布情况、流动方向等信息,帮助科学家和决策者制定合理的水资源管理策略。
薄层层析分离技术的原理和应用

薄层层析分离技术的原理和应用薄层层析分离技术(Thin Layer Chromatography,TLC)是化学分离分析技术中的一种经典的方法,它在各种科研领域中得到了广泛的应用。
本文将从原理和应用两个方面对薄层层析分离技术进行介绍。
一、原理1. 薄层层析分离技术的基本原理薄层层析分离技术是基于化学物质在固定相(薄层硅胶等)和流动相(含有溶剂的液相)中运动时的协同作用来进行物质分离的一种方法。
化学物质在固定相中会因为与涂层材料之间的极性和吸附性差异而发生分离,因此这种分离技术常常被用来对复杂混合物中的化学物质进行定性或定量分析。
2. 薄层层析分离技术的过程薄层层析分离技术的过程可以分为三个步骤:样品的制备、薄层涂层材料的选取和设备的制备。
(1)制备样品:将待分离物质用适当的溶剂溶解或提取,制成样品溶液。
(2)选取涂层材料:涂层材料要选用与待分离物质有足够的吸附能力的固体物质,如硅胶、氧化铝等。
然后将这些固体物质均匀地涂在无水薄层板上,使涂层厚度相同。
(3)设备制备:设备一般由薄层板、涂层材料和流动相组成。
待分离物质通过样品施加在薄层层析板的一边,此时,待分离物质会根据其在涂层材料和流动相之间的吸附和分配状态沿着板子逐渐移动。
二、应用1. 定性分析薄层层析分离技术在化学分离分析领域的应用最广泛的就是对化学物质进行定性分析,如有机分析中对结构相似的物质进行鉴定。
2. 定量分析薄层层析分离技术还可以用来进行化学物质的定量分析。
在这种情况下,定量方法是比定性方法更复杂的,因为有必要确定待分离物和标准物在吸附场中的吸附和分配行为,并且必须保证定量方法的准确性和精密度。
3. 活性物质检测薄层层析分离技术除了可以用来分离和检测化学物质,还可以用来检测活性物质,如抗菌物质、抑制物和酶。
4. 生物分离薄层层析技术在生物分离领域中也有应用。
如用于蛋白质的纯化,薄膜层析也可以作为分离生物样品中的氨基酸或核苷酸的一种方法,还可以通过薄层层析技术提取和分离植物中的生物活性成分。
脂类薄层层析法及其应用

脂类薄层层析法及其应用
脂类薄层层析法是一种常用的分离和鉴定脂类的方法。
它是一种基于分子大小、极性和亲水性的分离技术,可以用于分离和鉴定各种脂类,如脂肪酸、甘油三酯、磷脂等。
脂类薄层层析法的原理是将待分离的脂类样品溶解在合适的溶剂中,然后将其涂抹在薄层层析板上,再将薄层层析板放入层析槽中,加入适当的层析剂,使样品在薄层层析板上进行分离。
分离后,可以通过显色或紫外线照射等方法进行检测和鉴定。
脂类薄层层析法具有操作简便、分离效果好、分离时间短等优点,因此被广泛应用于食品、化妆品、医药等领域。
例如,在食品领域中,脂类薄层层析法可以用于检测食品中的脂肪酸、甘油三酯等成分,以保证食品的质量和安全性。
在医药领域中,脂类薄层层析法可以用于分离和鉴定药物中的脂类成分,以确定药物的纯度和质量。
脂类薄层层析法是一种简便、有效的分离和鉴定脂类的方法,具有广泛的应用前景。
在未来的研究中,我们可以进一步探索其在不同领域的应用,以推动其在实践中的发展和应用。
层析原理的应用有哪些内容

层析原理的应用有哪些内容1. 简介层析原理是一种物理分析技术,通过对样品进行分离和测量,获取样品内部的结构和成分信息。
在各个领域都有广泛的应用,以下是层析原理在不同领域的应用。
2. 药学•药物研发:层析原理可用于药物分析,通过对药物样品进行分离和检测,了解药物的成分和结构。
•药物质量控制:层析原理可用于药物批量生产中的质量控制,确保药物的质量符合标准。
3. 化学•化学分析:层析原理是一种常用的分离和测量方法,可用于化学分析中对样品中各种成分的分离和检测。
•化学反应监测:层析原理可用于监测化学反应的过程和产物,帮助了解反应机制和优化反应条件。
4. 食品科学•食品质量检测:层析原理可用于食品中有毒和有害物质的分离和检测,确保食品的质量和安全性。
•食品添加剂分析:层析原理可用于食品添加剂的分离和检测,监控食品中添加剂的含量和种类。
5. 环境科学•水质分析:层析原理可用于水质样品中各种有机物和无机物的分离和检测,了解水质的污染程度和污染源。
•大气污染监测:层析原理可用于大气样品中各种有害气体和颗粒物的分离和检测,了解大气污染程度和来源。
6. 生物科学•分子生物学研究:层析原理可用于生物样品中各种生物分子(如蛋白质、核酸)的分离和检测,帮助了解生物分子的结构和功能。
•药物代谢研究:层析原理可用于药物代谢产物的分离和检测,了解药物在体内的代谢途径和代谢产物。
7. 材料科学•材料表征:层析原理可用于材料样品中各种成分和结构的分离和检测,了解材料的性质和组成。
•材料改进:层析原理可用于材料研发过程中对样品中不同成分的分离和检测,优化材料的性能和组成。
8. 质量控制•层析技术广泛应用于质量控制领域,包括药物制造、化学品生产、食品加工等行业,用于检测样品中的杂质和成分,确保产品质量符合标准。
9. 其他应用•法医学:层析原理可用于法医学的毒物分析,检测尸体或生物体内是否含有毒性物质。
•地质学:层析原理可用于地质样品中各种成分和结构的分离和检测,了解地质样品的特征和成因。
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层析技术的应用与发展2010-04-26 09:43:32| 分类:电泳资料| 标签:|字号大中小订阅本文引用自linmingjun《层析技术的应用与发展》更多相关资料请查看层析技术的应用与发展,对于植物各类化学成分的分离鉴定工作起到重大的推动作用。
如中药丹参的化学成分在30年代仅从中分离到3种脂溶性色素,分别称为丹参酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。
但以后进一步的研究,发现除丹参酮Ⅰ为纯品外,Ⅱ、Ⅲ、均为混合结晶。
此后通过各种层析方法,迄今已发现15种单体(其中有4种为我国首次发现)。
目前新的层析技术不断发展,随着层析理论和电子学、光学、计算机等技术的应用,层析技术已日趋完善。
一.层析法的基本原理:层析过程是基于样品组分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差(分配层析),组分对吸附剂吸附能力不同(吸附层析),和寓子交换,分子的大小(排阻层析)而分离。
通常又将一般的以流动相为气体的称为气相层析,流动相为液体的称为液相层析。
一、吸附层析法(AdsorptionChromatography)(一)吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系:液一固吸附层析是运用较多的一种方法,特别适用于很多中等分子量的样品(分子量小于1,000的低挥发性样品)的分离,尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分离。
吸附层析的分离效果,决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。
1.吸附剂:常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等。
(1)硅胶:层析用硅胶为一多孔性物质,分子中具有硅氧烷的交链结构,同时在颗粒表面又有很多硅醇基。
硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关。
硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分,因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低。
若吸水量超过17%,吸附力极弱不能用作为吸附剂,但可作为分配层析中的支持剂。
对硅胶的活化,当硅胶加热至100~110℃时,硅胶表面因氢键所吸附的水分即能被除去。
当温度升高至500℃时,硅胶表面的硅醇基也能脱水缩台转变为硅氧烷键,从而丧失了因氢键吸附水分的活往,就不再有吸附剂的性质,虽用水处理亦不能恢复其吸附活性。
所以硅胶的活化不宜在较高温度进行(一般在170cC以上即有少量结合水失去)。
硅胶是一种酸性吸附剂,适用于中性或酸性成分的层析。
同时硅胶又是一种弱酸性阳离子交换剂,其表面上的硅醇基能释放弱酸性的氢离子,当遇到较强的碱注化台物,则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。
(2)氧化铝:氧化铝可能带有碱性(因其中可混有碳酸钠等成分),对于分离一些碱性中草药成分,如生物碱类的分离颇为理想。
但是碱性氧化铝不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离。
因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应,如异构化、氧化、消除反应等。
除去氧化铝中绚碱性杂质可用水洗至中性,称为中性氧化铝。
中性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴,本适用于酸性成分的分离。
用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝,不仅可中和氧化铝中含有的碱性杂质,并可使氧化铝颗粒表面带有NO3一或CI一的阴离子,从而具有离于交换剂的性质,适合于酸性成分的层析,这种氧化铝称为酸性氧化铝。
供层析用的氧化铝,用于拄层析的,其粒度要求在100~160目之间。
粒度大子100目,分离效果差:小于160目,溶浓流速大慢,易使谱带扩散。
样品与氧化铝的用量比,一般在1:20~50之间层析柱的内径与柱长比例在1:10-20之向。
在用溶剂冲洗柱时,流速不宜过快,洗脱液的流速一般以每半~1小时内流出液体的毫升数与所用吸附剂的重量(克)相等为合适。
(3)活性炭:是使用较多的一种非极性吸附剂。
一般需要先用稀盐酸洗涤,其次用乙醇洗,再以水洗净,于80℃干燥后即可供层析用。
层析用的活性炭,最好选用颗粒活注炭,若为活性炭细粉,则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱,以免流速太慢。
活性炭主要且于分离水溶性成分,如氨基酸、糖类及某些甙。
活性炭的有为吸附作用,在水溶液中最强,在有机溶剂中则较低弱。
故水的洗脱能力最弱,而有机溶剂则较强。
例如以醇-水进行洗脱时,则随乙醇浓度的递增而洗脱力增加。
活性炭对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物,对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。
利用这些吸附性的差别,可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开,单糖与多糖分开,氨基酸与多肽分开。
2.溶剂:层析过程中溶剂的选择,对组分分离关系极大。
在柱层析时所用的溶剂(单一剂或混合溶剂)习惯上称洗脱剂,用于薄层或纸层析时常称展开剂。
洗脱剂的选择,须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时,当被分离物质为弱极性物质,一般选用弱极性溶剂为洗脱剂;被分离物质为强极性成分,则须选用极性溶剂为洗脱剂。
如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂(如以硅藻土或滑石粉代替硅胶),则洗脱剂的极性亦须相应降低。
在柱层操作时,被分离样品在加样时可采用于法,亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。
溶解样品的溶剂应选择极性较小的,以便被分离的成分可以被吸附。
然后渐增大溶剂的极性。
这种极性的增大是一个十分缓慢的过程,称为“梯度洗脱”,使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。
如果极性增大过诀(梯度太大),就不能获得满意的分离。
溶剂的洗脱能力,有时可以用溶剂的介电常数(ε)来表示。
介电常数高,洗脱能力就大。
以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂,如硅胶、氧化铝。
对非极性吸附剂,如活性炭,则正好与上述顺序相反,在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用,较在脂溶性溶剂中为强。
3.被分离物质的性质:被分离的物质与吸附剂,洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素,彼此紧密相连。
在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下,各个成分的分离情况,直接与被分离物质的结构与性质有关。
对极性吸附剂而言,成分的极性大,吸附住强。
当然,中草药成分的整体分子观是重要的,例如极性基团的数目愈多,被吸附的住能就会更大些,在同系物中碳原子数目少些,被吸附也会强些。
总之,只要两个成分在结构上存在差别,就有可能分离,关键在于条件的选择。
要根据被分离物质的性质,吸附剂的吸附强度,与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑。
首先要考虑被分离物质的极性。
如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯,或虽含氧但非极性基团,则需选用吸附性较强的吸附剂,并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱。
但多数中药成分的极性较大,则需要选择吸附性能较弱的吸附剂(一般Ⅲ~Ⅳ级)。
采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增,或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况。
此外,能否获得满意的分离,还与选择的溶剂梯度有很大关系。
现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。
如有多组分的混合物,象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。
当以硅胶为吸附剂时,使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱,油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗脱。
又如对于C-27甾体皂甙元类成分,能因其分字中羟基数目的多少而获得分离:将混合皂甙元溶于含有5%氯仿的苯中,加于氧化铝的吸附柱上,采用以下的溶剂进行梯度洗脱。
如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝,由于硅酸镁的吸附性较弱,洗脱剂的极牲需相应降低,亦即采用苯或含5%氯仿的苯,即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来。
这一例子说明,同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时,需用不同的溶剂才能达到相同的分离效果,从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。
(二)簿层层析:薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。
一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上,形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。
其原理与柱层析基本相似。
1.薄层层析的特点:薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。
2.吸附剂的选择:薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。
主要区别在于薄层层析要求吸附剂(支持剂)的粒度更细,一般应小于250目,并要求粒度均匀。
用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高,以Ⅱ~Ⅲ级为宜。
而展开距离则随薄层的粒度粗细而定,薄层粒度越细,展开距离相应缩短,一般不超过10厘米,否则可引起色谱扩散影响分离效果3.展开剂的选择:薄层层析,当吸附剂活度为一定值时(如Ⅱ或Ⅲ级),对多组分的样品能否获得满意的分离,决定于展开剂的选择。
中草药化学成分在脂溶性成分中,大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。
但在实际工作中,经常需要利用溶剂的极性大小,对展开剂的极性予以调整。
4?特殊薄层:针对某些性质特殊的化合物的分离与检出,有时需采用一些特殊薄层。
①荧光薄层:有些化合物本身无色,在紫外灯下也不显荧光,又无适当的显色剂时,则可在吸附剂中加入荧光物质制成荧光薄层进行层析。
展层后置于紫外光下照射,薄层板本身显荧光,而样品斑点处不显荧光,即可检出样品的层析位置。
常用的荧光物质多为无机物。
其一是在254nm紫外光激发下显出荧光的,如锰激洁的硅酸锌。
另一种为在365nm紫外光激发下发出荧光的,如银激化的硫化锌硫化镐。
②络合薄层:常用的有硝酸银薄层,用来分离碳原子数相等而其中C一C双键数目不等的一系列化合物,如不饱和醇、酸等。
其主要机理是由于C一C键能与硝酸银形成络合物,而饱和的C一C键则不与硝酸银络合。
因此在硝酸银薄层上,化台物可由于饱和程度不同而获得分离。
层析时饱和化合物由于吸附最弱而Rf最高,含一个双键的较含两个双键的Rf值高,含一个三键的较含一个双键的Rf 值高。
此外,在一个双键化台物中,顺式的与硝酸银络合较反式的易于进行。
因此,还可用来分离顺反异构体。
③酸碱薄层和PH缓冲薄层:为了改变吸附剂原来的酸碱性,可在铺制薄层时采用稀酸或稀碱以代替水调制薄层。
例如硅胶带微酸性,有时对碱性物质如生物碱的分离不好,如不能展层或拖尾,则可在铺薄层时,用稀碱溶液0.1~0.5NNa0H溶液制成碱性硅胶薄层。
例如猪屎豆碱在以硅胶为吸附剂时,以氯仿-丙酮一甲醇(8:2:1)为展开剂Rf<0.1,采用碱性硅胶薄层用上述相同展开剂,Rf值增至0.4左右。
说明猪屎豆碱为--碱性生物碱。
5.应用:薄层层析法在中草药化学成分的研究中,主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。
用薄层层析法进行中草药化学成分预试,可依据各类成分性质及熟知的条件,有针对性地进行。
由于在薄层上展层后,可将一些杂质分离,选择性高,可使预试结果更为可靠。
以薄层层析法进中草药化学成分鉴定,最好要有标准样品进行共薄层层析。
如用数种溶剂展层后,标准品和鉴定品的Rf值、斑点形状颜色都完全相同,则可作初步结论是同一化合物。
但一般需进行化学反应或红外光谱等一种仪器分析方法加以核对。
用薄层层析法探索柱层分离条件,是实验室的常规方法。
在进行柱层分离时,首先考虑选用何种吸附剂与洗脱剂。