昆虫sf9细胞培养
昆虫细胞的培养综述
昆虫细胞培养及其应用进展摘要: 随着生命科学的迅速发展, 细胞工程愈来愈受到人们的重视。
以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值, 已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。
本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展, 包括昆虫细胞培养基研究开发, 昆虫细胞系的建立和组织培养, 利用生物反应器大规模培养昆虫细胞, 昆虫细胞2杆状病毒表达系统,构建基因工程细胞系及其稳定性表达, 以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。
关键词: 昆虫细胞系; 昆虫细胞培养; 基因表达;培养条件昆虫的组织培养最早始于1915 年, 直到1962 年Grace 才成功建立了世界上第一个细胞系, 此后昆虫细胞培养在世界范围内广泛开展, 不断有新细胞系建立的报道。
现在, 昆虫细胞培养已在细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、生物化学、遗传学等领域的研究工作中发挥着重要的作用。
1昆虫细胞培养基昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段. 天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液. 合成培养基最大的特点是各种成分已知.无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上, 在基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子, 能够保证细胞生长良好无须补加血清的培养基. 昆虫细胞培养基的发展主要是合成培养基的发展.[1] 体外培养昆虫组织的首创者是R ichard Ben2dict (1915), 但他当时没有合适的昆虫细胞培养基。
T rager 首次研究了培养基中昆虫细胞的生长条件, 目的是证明单个细胞能在体外存活几天, 并利用昆虫细胞培养基研究昆虫和哺乳动物病毒。
1956 年, Silver W yatt 改进了用于家蚕(B om byx m ori L innaeus) 蛹的培养基, 成功地使细胞存活了14d。
他的培养基含有浓度与家蚕血淋巴成分相应的21 种氨基酸、5 种盐、3 种有机酸、以及果糖、海藻糖和葡萄糖, 并相应调解了pH 值和渗透压, 这为昆虫细胞培养基的研究奠定了重要的基础。
sf9细胞冻存方法
sf9细胞冻存方法
SF9细胞是一种昆虫表达系统中常用的细胞系。
下面是一种常
见的SF9细胞冻存方法：
1. 在培养皿中培养SF9细胞至高密度（通常为培养皿80-90%
的细胞覆盖度）。
2. 用DPBS（无钙无镁的磷酸盐缓冲液）洗涤细胞一次，以去
除培养基和细胞碎片。
3. 使用酶解液（例如Trypsin-EDTA）将细胞从培养皿中解离。
根据细胞的密度，可以使用适当的溶菌酶/胰酶酶解细胞。
4. 加入同等体积的冻存培养基（通常为细胞培养基中含有20-50%的人血清、10%的二甲基亚砜（DMSO）和1-2%的低浓度抗生素的培养基）。
5. 轻轻混合并将混合液转移到冻存管中。
6. 使用-80℃冰箱或液氮罐冷却细胞冻存过程。
最好将细胞冻
存在气相中且不接触液氮。
7. 冻存细胞超过12小时后，将冻存管从液氮中转移到-150℃
以上的长期液氮储存罐中。
使用这种冻存方法，SF9细胞可以在-70℃至-80℃下保存6个
月至1年以上。
为了确保细胞质量，建议每6个月检查一次细胞的生长和表达能力。
请注意，在冻存细胞前，确保培养细
胞没有被细菌、真菌等污染，以避免污染的细胞冻存在长期储存中。
昆虫细胞培养基-sf-900 ii sfm 1x液体版 说明书
Sf-900™ II SFMDescriptionSf-900™ II SFM is a complete, serum-free, protein-free, ready-to-use insect cell culture medium developed for high cell-density growth and high-level recombinant protein expression using the Baculovirus Expression Vector System (BEVS). Sf-900™ II SFM has optimized amino acid, carbohydrate, vitamin, and lipid components, as well as a biologically active raw material providing significant improvement in cell growth, virus production and recombinant protein expression over other serum-free or serum-supplemented media. Sf-900™ II SFM supports long term growth (>20 passages) of Spodoptera frugiperda (Sf9, Sf21), Trichoplusia ni (Tn-368), and Lymantia dispar (Ld) cells in both suspension and monolayer culture.Product Catalog No. Amount Storage Shelf life*Sf-900™ II SFM (1X), liquid 10902-09610902-15310902-08810902-104500 mL10 × 500 mL1000 mL6 × 1000 mL2°C to 8°C; Protect from light 12 monthsSf-900™ II SFM (1X), liquid, Universal Bag 10902-16110902-17910902-187 5 L10 L20 L2°C to 8°C; Protect from light 12 monthsSf-900™ II SFM (1X), liquid w/out methionine or cysteine 21012-026 500 mL 2°C to 8°C; Protect from light 12 months * Shelf life duration is determined from Date of Manufacture.Product useFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. Important informationSf-900™ II SFM is a complete, ready to use medium. Do not addL-Glutamine or surfactants such as Pluronic® F-68.Safety informationRead the Safety Data Sheets (SDSs) and follow the handling instructions. Wear appropriate protective eyewear, clothing, and gloves.Culture ConditionsMedia: Sf-900™ II SFMCell line: Sf9, Sf21, Ld, Tn-368 cellsCulture type: Suspension or AdherentCulture vessels: Shake flask, spinner bottle or T-flask. Temperature range: 27°C to 28°CIncubator atmosphere: Non-humidified, air regulated non-CO2 atmosphere. Ensure proper gas exchange and minimize exposure of cultures to light.Recovery1.Rapidly thaw (<1 minute) frozen cells in a 37°C water bath.2.Transfer entire contents of the cryovial into theappropriately sized vessel so that the cells are seeded at3–5 × 105 cells/mL of pre-warmed Sf-900™ II SFM.3.Incubate at 28°C in a non-humidified, air regulated non-CO2atmosphere, on an orbital shaker platform rotating at120–140 rpm. Loosen flask caps to allow for gas exchange. 4.Subculture when cells reach >2 × 106 viable cells/mL. Werecommend subculturing cells a minimum of 3 passagesbefore using in downstream applications. Subculture suspension culturesInsect cells are sensitive to physical shearing. Ensure that impeller mechanisms rotate freely and do not contact vessel walls or base (adjust prior to autoclaving).1.Determine viable cell density using a Countess® AutomatedCell Counter or alternative automated or manual method. 2.Seed cells at 3–5 × 105 viable cells/mL in sterile culturevessels containing pre-warmed Sf-900™ II SFM. (30 mL per125-mL shake flask, 75–100 mL per 100-mL spinner bottle).3.Incubate at 27°C to 28°C in a non-humidified, air regulatednon-CO2 atmosphere. Loosen caps to allow for gas exchange.4.Rotate shake flask cultures on an orbital shaker platform at120–140 rpm, set impeller stirring rate to 85–95 rpm forspinner bottles (optimum impeller speed must be empirically determined for each spinner apparatus for robust cell growth and viability).5.Subculture cells when viable cell density reaches>2 × 106 viable cells/mL (about twice a week) into clean,sterile flask(s) with fresh pre-warmed Sf-900™ II SFM. Note: If cell debris is observed, gently centrifuge the cell suspension at 100 × g for 5–10 minutes and resuspend the cell pellet in fresh Sf-900™ II SFM to reduce accumulation of cell debris and metabolic waste by-products.Note: We recommend thawing a fresh low-passage vial of cells every 3 months or 30 passages.Subculture monolayer cultures1.Observe cell monolayer to ensure 80–90% confluence.Aspirate medium and floating cells from a confluentmonolayer.2.Add 4 mL (per 25 cm2) pre-warmed Sf-900™ II SFM to theflask and resuspend cells by repeatedly pipetting themedium across the monolayer.3.Observe cell monolayer to ensure cell detachment from thesurface of the flask. Firmly rap the side of the flask on thepalm of your hand or a hard flat surface if necessary.Publication Number MAN0007285 Rev. 1.002.4. Transfer entire cell suspension to a sterile conical tube; anycell clumps quickly settle to the bottom after 1–2 minutes. Pipet the clumps into a 10-mL pipette and gently break up the clumps by pressing the pipette tip against the bottom of the tube and gently expell the cells back into the medium, repeat if necessary to break up remaining clumps. Pipetting too harshly will decrease cell viability due to sensitivity of cells to shear force.5. Determine viable cell density using a Countess ® AutomatedCell Counter.6. Inoculate 2–5 × 104 viable cells/cm 2 into new culture flaskscontaining pre-warmed Sf-900™ II SFM (5 mL/25 cm 2). 7. Incubate at 27°C to 28°C in a non-humidified, air regulatednon-CO atmosphere. Loosen caps to allow for gas exchange. 28. Three days post-plating, aspirate medium from the cellmonolayer and re-feed the culture with an equal volume of fresh medium gently added to the side of the flask. Note: Sf9 cells are not anchorage dependent and may be transferred between monolayer and spinner/shaker culture repeatedly without noticeable change in viability, morphology, or growth rate.For additional technical information such as Safety Data Sheets (SDS), Certificates of Analysis, visit /support For further assistance, email ************************All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. Pluronic is a trademark of BASF Corporation. ©2014 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.DISCLAIMER - LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION AND/OR ITS AFFILIATE(S) DISCLAIM ALL WARRANTIES WITH RESPECT TO THIS DOCUMENT, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALLLIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) BE LIABLE, WHETHER IN CONTRACT, TORT, WARRANTY, OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF.Adapt cells to Sf-900™ II SFMIt is critical that cell viability be ≥90% and the growth rate be in mid-logarithmic phase prior to initiating adaptation procedures.Direct adaptationMonolayer cultures need only have the culture media exchanged with prewarmed Sf-900™ II SFM as described in Subculture monolayer cultures.Transfer suspension cultures into Sf-900™ II SFM as follows: 1. Centrifuge the cell suspension at 100 × g for 5–10 minutes.Aspirate and discard the supernatant.2. Resuspend the cell pellet in pre-warmed Sf-900™ II SFM at aviable cell density of >5 × 105 cells/mL and transfer to appropriate culture vessel.3.Return to incubator and monitor cell growth.Note: If suboptimal performance is achieved using the direct adaptation method, use the sequential adaptation method.Sequential adaptationFollow the procedures for subculture of suspension or monolayer cultures with the following modifications.1. During the adaptation procedure use a seeding density of>5 × 105 viable cells/mL.2. Subculture cells into stepwise increasing ratios of Sf-900™ IISFM to original medium with each subsequent passage (25:75, 50:50, 75:25, 90:10 followed by 100% Sf-900™ II SFM). Multiple passages at each step may be needed.After several passages in 100% Sf-900™ II SFM, the viable cell count should exceed 2–4 × 106 cells/mL with a viability exceeding 85% within 4–6 days of culture.Cryopreservation1. Prepare the desired quantity of cells, harvesting in mid-logphase of growth with viability >90%. Reserve theconditioned medium to prepare cryopreservation medium.Determine the viable cell density and calculate the requiredvolume of cryopreservation medium to give a final cell density of >1 × 107 cells/mL.3. Prepare the required volume of cryopreservation medium of92.5% Sf-900™ II SFM (50:50 ratio of fresh to conditioned media) + 7.5% DMSO on day of intended use, store at 4°C until use.4. Centrifuge cell suspension at 100 × g for 5–10 minutes.Resuspend the cell pellet in the pre-determined volume of 4°C cryopreservation medium.5. Dispense aliquots of this cell suspension into cryovialsaccording to the manufacturer’s specifications.6. Cryopreserve in an automated or manual controlled ratefreezing apparatus following standard procedures (1°C decrease per minute).7. Transfer frozen cells to liquid nitrogen, (vapor phase)°C to –125°C.storage at –200Related productsProductCatalog no. Sf9 Cells Adapted in Sf-900™ II SFM 12659 Sf21 Cells Adapted in Sf-900™ II SFM 12682 BaculoDirect ™ N-Term Expression Kit 12562-054 BaculoDirect ™ N-Term Transfection Kit 12562-062 BaculoDirect ™ C-Term Expression Kit 12562-013 BaculoDirect ™ C-Term Transfection Kit 12562-039 Bac-N-Blue ™ Transfection KitK855-01 Bac-to-Bac ® Baculovirus Expression System 10359 Bac-to-Bac ® Vector Kit10360Countess ®Automated Cell CounterC10227Explanation of symbols and warningsThe symbols present on the product label are explained below:Temperature LimitationManufacturerBatch codeUse By:Catalog numberCaution, consult accompanying documentsConsult instructionsfor useKeep away from lightSterilized using aseptic processing techniquesLimited product warrantyLife Technologies Corporation and/or its affiliate(s) warrant their products as set forth in the Life Technologies’ General Terms and Conditions of Sale found on Life Technologies’ website at /termsandconditions . If you have any questions, please contact Life Technologies at /support .Important licensing informationThese products may be covered by one or more Limited Use Label Licenses. By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.。
sf-9细胞培养2
血清中含有: 血清中含有: 多种蛋白质(白蛋白,球蛋白,铁蛋白等) ①多种蛋白质(白蛋白,球蛋白,铁蛋白等) ②多种金属离子 激素; ③激素; 促贴附物质,如纤粘蛋白,冷析球蛋白, ④促贴附物质,如纤粘蛋白,冷析球蛋白,胶 原等. 原等. ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
血清质量好坏是实验成败的关键. 血清质量好坏是实验成败的关键. 常用血清有胎牛血清,新生牛血清,小牛血清, 常用血清有胎牛血清,新生牛血清,小牛血清, 兔血清,马血清等,其中以胎牛血清质量最好. 兔血清,马血清等,其中以胎牛血清质量最好. 优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物, 优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物, 无细菌,支原体,病毒污染. 无细菌,支原体,病毒污染. 血清的灭活(消除补体活性): ):56 血清的灭活(消除补体活性):56 ℃ ,30 min 血清的消毒: 血清的消毒:过滤除菌
实验要求: 实验要求:
进实验室先洗手,签到.进细胞培养室要换鞋. 进实验室先洗手,签到.进细胞培养室要换鞋. 洗手 必须保持显微镜,试验桌,超净台以及其它用具 的清洁和整齐,各种药品,试剂按照规定的用量 进行使用.用完后要恢复摆放位置 进行使用.用完后要恢复摆放位置. 恢复摆放位置. 严格遵守显微镜使用的注意事项,否则损坏物镜, 同时也影响试验的进行. 离开实验室前,必须检查水龙头和电开关,避免 发生事故.
培养皿和培养板等表面消毒
超净台
超净工作台的工作原 理是利用鼓风机驱动 空气遁过高效滤器除 去空气中的尘埃粒, 使空气得到净化. 净化空气徐徐通过工 作台面,使工作台内 构成无菌环境.
生化培养箱
生化培养箱设定的条件为28 ℃ . 使用生化培养箱培养细胞时应注 意的问题: 1)保持培养箱内空气干净.定 期消毒 (90 ℃ ,14 h). 2)箱内灭菌蒸馏水3000ml蒸馏 水槽中以保持箱内湿度,避免培 养液蒸发.
配置Sf9细胞培养液方法
Sf9细胞培养液配置方法
1.消毒烘干下列用品
500毫升玻璃瓶：两个（其中一个灌装500 毫升高洁水备用）
玻璃烧杯：一个、玻璃量筒：一个
2.准备下列设备
天平、搅拌器、称量纸、量勺、75%酒精、酒精棉球、试验用手套
3.UV消毒
用清洁液擦净洁净台；工作区域用酒精拭擦一遍。
所有准备好的用品和设备预先放进
洁净台；UV消毒至少2个小时；工作前关闭UV灯，打开内置灯和风扇
4.称量
用称量纸称出相当于制备250毫升培养液的粉末(约11.7g)，倒入玻璃烧杯中
5.溶解、定容
将玻璃烧杯至于搅拌器上，缓缓加入约100-150毫升的清洁水。
将搅拌器调至低速，
缓缓搅拌；溶解过程中不能产生泡沫，产生泡沫意味着蛋白变性；将溶解后的培养液
加入到量筒内；必要时补充水量直至250毫升。
6. 调节pH
按4.7mL 7.5%NaHCO3/L培养液的比例加入NaHCO3，逐滴加入1N NaOH至pH值为
5.9。
过滤后培养液pH值为
6.2左右。
7.过滤
用无菌针筒将培养液缓缓通过0.22m的过滤膜过滤，必要时更换新的过滤器；过滤液
直接进入消毒玻璃瓶中。
8.加入双抗和FBS
按照相应比例，加入1%双抗和10%胎牛血清。
9.标记、保存
过滤后的培养液要标明制备日期。
根据使用需要可将培养液分别保存在4度或-20度。
4度保存的培养液使用不超过1周；-20度保存的培养液使用不超过一个月。
昆虫细胞培养手册
昆虫细胞系的生长和维持细胞系简介：本手册包括Sf9、Sf21和H5昆虫细胞以及提供相关昆虫细胞生长和维持的一般信息。
Sf9、Sf21和H5细胞系适于用杆状病毒或其他昆虫表达系统表达重组蛋白。
运输与储存：运输：置于干冰上。
储存和传代：置于液氮储存。
收到细胞即可开始，详见14页。
细胞系比较：下面的表格总结了Invitrogen细胞系一般特征。
订购信息见下页。
细胞 倍增时间 细胞外观 初始培养基Sf9 72h 规则的带有颗粒球形。
贴壁紧。
TNM-FHSf21 24h 不同大小带有颗粒球形。
贴壁紧。
TNM-FHH5 18h 不同大小带有颗粒球形。
贴壁松。
Express Five SFM重要事项：Invitrogen（生命技术部分）通过RT-PCR证实H5细胞藏匿有内生的野田病毒。
在一定条件下，H5产生野田病毒粒子。
如此产生的病毒粒子未表现出对内原蛋白表达的不利的影响，或着在限制使用证书66号下已延伸和提供对H5细胞其它研究应用（见35页）。
更多信息请联系技术支持。
用途：仅供研究使用。
禁止用于动物或人的疾病治疗和诊断。
Sf9和Sf21细胞系：来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。
此细胞系适用于InsectSelect系统。
这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。
特征：Sf9和Sf21有下列共同特征：易于形成单层和悬浮培养、适用无血清培养基。
大小不同：Sf9细胞系克隆分离于IPLBSF21-AE(Sf21)。
体积较小大小规则的使其易于形成单层和铺培养板。
Sf21在大小和形成单层以及铺板规则上有一些不同。
用途：两者都适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。
如果你是第一次使用杆状病毒，你会发现Sf9细胞易于从斑块中分离。
在一些结构上Sf21细胞可能比Sf9细胞表达蛋白量高。
SF9细胞的建立及生物学特性的鉴定
2020年第8期 吉林畜牧兽医97·经验交流·JingYan JiaoLiuSF9细胞的建立及生物学特性的鉴定李来旭1，刘鑫莹1、潘添博2，李 睿31.重庆永健生物制品有限公司，重庆市 400000；2.重庆市合川区合阳城街道办事处畜牧兽医站，重庆市 400000；3.东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150000摘 要：自菌种保藏中心引进1株SF9细胞系，扩大培养，保存于液氮，建立SF9细胞基础细胞库。
对细胞进行形态、生长曲线、纯净性、染色体分析及致瘤性等特性进行研究。
结果表明，细胞呈圆球形；细胞呈S 型生长曲线；无细菌、支原体及外源病毒污染；细胞的染色体数目主要分布在170～190之间；无致瘤性。
关键词：SF9细胞系；基础细胞库；生物学特性杆状病毒表达系统(BEVS)被广泛用于疫苗开发及外源蛋白表达。
BEVS 因其操作简便、安全性及适用于大规模生产等优势, 具有极大的应用前景。
杆状病毒表达的受体为昆虫细胞，目前应用较广的细胞系为SF9细胞。
目前兽用疫苗领域针对猪圆环病毒、禽流感病毒、猪瘟病毒及鸡新城疫病毒等多疫苗在SF9 细胞中表达，极大程度上缓解了畜牧业的养殖风险和生产成本。
本研究自菌种保藏中心引进SF9细胞系，进行细胞生物学特性研究，为开展SF9细胞系及及传染性法氏囊VP2疫苗的研究与开发提供细胞资源和理论依据。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 细胞SF9细胞，购自美国菌种保藏中心ATCC。
1.1.2 试验试剂：SF9无血清培养基，胎牛血清，DMSO 购自美国gibco 公司；无菌培养基，重庆永健生物制品有限公司制备。
1.2 方法1.2.1 细胞传代：取对数生长期的SF9细胞，以900 r/min 离心5 min，弃去上清，用SF9无血清培养基稀释细胞密度为0.8×106个/mL 分装到三角培养瓶中。
培养转速为150 r/min，置27 ℃培养箱中培养。
1.2.2 基础细胞库的建立 取生长状况良的好SF9细胞进行离心，加入冻存液，吹打混匀细，调节细胞密度为1.2×107个/m L ，每只冻存管分装1 mL。
Sf9细胞的培养及转染解析
超净台
超净工作台的工作原 理是利用鼓风机驱动 空气遁过高效滤器除 去空气中的尘埃粒， 使空气得到净化。
净化空气徐徐通过工 作台面，使工作台内 构成无菌环境。
生化培养箱
• 生化培养箱设定的条件为28℃ 。 • 使用生化培养箱培养细胞时应注
意的问题：
• 1）保持培养箱内空气干净。定 期消毒（90 ℃ ，14 h)。
转染基本步骤
• 1、接种细胞并使其贴壁 • 2、制备重组Bacmid与Cellfectin Reagent
（ ）复合物 Invitrogen公司转染试剂 • 3、加入复合物 • 4、去掉复合物混合液，加入完全培养基，
培养细胞直到细胞出现病毒感染迹象 • 5、取上清液分离纯化得目的蛋白
• 4）送入培养箱中继续培养。
细胞培养－换液
• 对于像Sf9这样的半贴壁的培养物，可按如 下步骤操作：
• 吸去或倾出（部分或全部）旧培养液。 • 加入新鲜的培养液。加入的量与换液前的
量相同。 • 放回原来的培养箱中继续培养。
转染
• 转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA 掺入而获得新的遗传标志的过程。
病毒重组，获得重组病毒（酶切酶连转化） 2、将重组的病毒纯化 3、感染昆虫细胞或虫体（转染） 4、外源基因随着病毒的复制而获得表达
*《人细小病毒B19- XA株VP1蛋 白在Bac- to-Bac系 统中的表达及其反应原性》 *《Bac-toBac® Baculovirus Expression System 实验流程》
• （2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10 倍以上。
• （3）低速离心10分钟。 （4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的 细胞。
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Sf9培养要点：
温度：27-28摄氏度
pH：，sf9最适的pH6.2，随培养时间的延长，Ph值会增加
传代时间：72h（三天左右）
细胞来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。
此细胞系适用于InsectSelect系统。
这两株细
（以上来自invitrogen）胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。
细胞特点：规则的带有颗粒球形。
贴壁紧。
标准条件的定义：
培养最低密度：0.6×106/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于90％。
活率低于90％细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）1×106/mL将出现对数生长状态
传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。
贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后1：5（细胞体积：最后培养基体积）稀释维持对数生长。
形成单层细胞可以传代培养
悬浮培养：在细胞密度达到2.0×106-2.5×106细胞/mL后将密度调整至0.7×106-1.0×106细胞/mL进行悬浮传代。
确保传代细胞密度不高于4×106个/mL或保持密度高于1×106个/mL以达到对数生长状态。
Sf9悬浮培养所需要的细胞数
培养基：sf-900 ⅢSFM（添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量）
培养瓶与培养体积：
冻存：一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。
细胞需达到90％活率和80-90％融合的要求（如：低代次）推荐冻存几管。
当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。
1. 用细胞计数板计数细胞。
需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。
细胞可是悬浮或贴壁培养；
2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记；
3. 室温400-600×g离心10min。
移除上清。
4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞；
5. 移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中；
6. 置于-20℃1h，然后移至-80℃24-48h；
7. 储存于液氮中。
转染的细胞：需要的是对数期的细胞＞95%发育能力，可以完成成功的转染。
载氧：对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。
积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50%
Sf900II和sf900Ⅲ的区别：一般推荐Sf900II来大量表达蛋白
Sf900II含有表面活性剂（剪切力保护剂（保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害））
当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。
细胞培养的一般顺序：复苏——传代——传代稳定——冻存
应当遵循的一般过程：复苏——贴壁培养——悬浮——悬浮扩大培养（产生目标蛋白）（也可不经过贴壁培养，直接悬浮培养）
贴壁时间：45min
悬浮的转速：80rpm
附：离心机rcf与g的换算：
无血清培养基可以选择性加入一定的抑菌剂防止细菌或者真菌污染：
培养基：GIBCO-SFM900
加青霉素链霉素抑制细菌生长两性霉素B抑制真菌生长。