蛋白质分子印迹论文综述
蛋白质分子印迹技术的研究进展及应用前景
蛋白质分子印迹技术的研究进展及应用前景孙寅静, 罗文卿, 潘俊*(复旦大学药学院, 上海 201203)摘要: 分子印迹技术是在聚合物材料的合成过程中构建与模板分子在大小、形状和结构功能上都互补的特异性结合位点, 这样的材料对其模板具有选择性结合能力。
尽管小分子印迹技术近年来发展迅速, 蛋白质分子印迹却由于蛋白质的体积庞大、结构灵活、构象复杂成为既有意义又具挑战性的研究领域。
本文总结了近五年来蛋白质分子印迹技术的研究报道, 综述了其技术特点、最新进展和应用前景。
关键词: 分子印迹; 蛋白质; 制备; 表征; 应用前景中图分类号: R943 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2011) 02-0132-06Recent advances and perspective in the study of the molecularimprinting of proteinsSUN Yin-jing, LUO Wen-qing, PAN Jun*(School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 201203, China)Abstract: Molecular imprinting technique (MIT) involves the synthesis of polymer in the presence of a template to produce complementary binding sites in terms of its size, shape, and functional group orientation. Such kind of polymer possesses specific recognition ability towards its template molecule. Despite the rapid development of MIT over the years, the majority of the template molecules that have been studied are small molecules, while molecular imprinting of proteins remains a significant yet challenging task due to their large size, structural flexibility and complex conformation. In this review, we summarize the research findings over the past five years, and discuss the characteristics of the technique, the most recent progress and the perspective in the field of molecular imprinting of proteins.Key words: molecular imprinting; protein; preparation; characterization; perspective分子印迹就是将模板分子与功能单体通过共价、非共价或金属协同作用形成预聚合物, 在交联剂的作用下功能单体发生聚合, 将模板分子固定于聚合物中, 最后脱除模板分子, 即在聚合物材料上留下与模板分子在大小、形状和官能团的方向上都互补的空穴结构。
蛋白质分子印迹论文综述
电化学聚合
直接在电极传感器的 识别元件的表面进行 MIPs的制备
传感器
荧光探针
是否有一种荧光修饰基团 可以标记在蛋白质上，进 行，通过信号的转换，将 模板蛋白的响应信号进行 放大和优化。
ECL
是否需要将羧基罗丹 明与ECL相结合,是仿生传感器 人工酶催化剂 抗体模拟酶 药物手性拆分 药物控制释放 药物筛选 …
蛋白质分子印迹
手性药物分离 农残痕量分析 小分子、离子 金属离子 分 子 印 迹 模板 多数有机物… 蛋白质
多肽
大分子 相比于小分子 分子印迹的快 速发展，蛋白 质等大分子的 研究却显得有 些停滞了 病毒 DNA…
存在的一些困难
Why？
蛋白质分子的尺寸
Problem
功能基团及构象的复杂性
蛋白质的溶解性
发展/Development
电聚膜？在线检测？更低的检出限？ 更好的稳定性？
To be continue..
将蛋白暴露部分的一小段多肽序列作为 模板分子进行印迹, 得到的材料不仅能 识别这段序列, 还能与整个蛋白相结合。
抗原决定簇（Epitope imprinting）
印迹模材 核-壳结构微球 两亲性印迹纳米粒 印迹纳米丝
表面分子印迹（Surface imprinting）
溶胶-凝胶 金属配位
3D整体印迹（Bulk imprinting）
以多孔阳极氧化铝膜为结构模板合成表面印迹纳米丝
核-壳结构微球/纳米粒
Molecularly imprinted polymer grafted on polysaccharide microsphere surface by the sol-gel process for protein recognition.
蛋白质免疫印迹技术的实验研究_张燕婉(1)
3 蛋白质印迹实验技术的研究与讨论
蛋白质印迹技术实验不涉及复杂的仪器 , 但需 要熟练的实验技术 , 积累经验非常重要。就我们多 年从事这项技术工作积累的经验和体会进行讨论。 3 . 1 电转印中转膜缓冲液的选择和转膜效率 W estern 方法成败的关键是首先必须将分离的 蛋白很好 地从 SDS- PAGE 凝胶 上 转 印到 固 相 膜 上
随着人类基因组测序工作的完成 , 人们开始关 注由这些基因编码的蛋白质的功能, 即目的基因是 否发挥其特异表型效应, 这方面只能通过其表达产 物 蛋白质是否能被合成以及该蛋白质的生物学 功能来阐明。蛋白质印迹 ( w estern b lottin g) 技术 是目前进行蛋白质表达、分析研究中应用最多的一 种实验技术 , 它是将传统的高分辨率的 SDS ( 十二 烷硫酸钠 ) 聚丙烯酰胺 ( PAGE ) 电泳和灵敏度 高、特异性强的免疫探测技术相结合 , 最有效地分 析目的蛋白的表达, 在分子生物学中发挥着重要的 作用。 蛋白质印迹技术是蛋 白电泳技术的 延深和发 展。研究表明 : 聚丙 烯酰胺电泳分离蛋 白质具有 很好的分辨率和实用性 , 但要对各种蛋 白质作进 一步分析 ( 如表达信号的强弱 ) 就受到限制 , 因 为电泳后大部 分蛋白 质分子 被嵌在 凝胶 介质 中, 探针很难通过凝胶到达目标蛋白 , 且探 测过程中
作者简介 : 张 燕婉 ( 1957
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实
验
技
术
与
管
理
的膜上。电转印速度快, 转移效率高 , 条件容易控 制 , 重复性好, 可保持胶的分辨率。 ( 2) 封闭: 蛋白质分子从胶上转移到膜上后 , 为减少探针的非特异结合 , 用非反应活性分子封阻 转移膜上未吸附蛋白质的区域 , 以降低检测的背景 信号。 ( 3) 免疫结合反应: 用目的蛋白的抗体与转移 膜上的目的蛋白 (靶蛋白 ) 进行特异性免疫结合 反应, 再用标记过的二抗与膜上的一抗反应。 ( 4) 检测: 根据连接二抗标识物的检出, 如 : 化学发光、显色和放射性同位素测定等, 间接检测 出目的蛋白的存在。目前常用的的检测方法是化学 发光法
牛血清蛋白分子印迹聚合物的制备及分子识别性能
（ Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ ， Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｙ ｔ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｔ ｉ ｎｊ ａ ｉ ｎ ３ ０ ０ ４ ５ ７ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
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Ｓ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ Ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｉ ｔ ｓ Ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ Ｒｅ ｃ ｏ ｇ ｎ ｉ ｉｏ ｔ ｎ Ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ０ ｎ
Ｙ ＵＡＮ Ｓ ｈ ｉ － ｆ ａ ｎ ｇ ， ＷＡ ＮＧ Ｓ ｈ ｕ ｏ ， Ｄ Ｅ ＮＧ Ｑｉ ｎ ｇ － ｌ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｆ Ｎ Ｇ Ａ Ｇｕ ｏ － ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ
现 代 食 品 科 技
Ｍｏ ｄ ｅ ｒ ｎ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ９ ， Ｎｏ 。 １
牛血清蛋 白分子印迹聚合物 的制备及分子识别性 能
袁士芳 ，王硕 ，邓启 良，方 国臻
选择 陛的新型分子印迹聚合物。 通过对合成 的聚合物进行平衡结合 ， 吸 附动 力学和选择性 的三个表征 实验发现 ， 该聚合物对 Ｂ Ｓ Ａ 具有选择性 高、传质速度和 结合平衡速度快等诸 多优点 ，并通过 Ｌ ａ ｎ ｇ ｍｕ ｉ ｒ 方程分析 ，证 明平衡结合中吸附容量（ 与初始浓度（ ｃ ） 的一致性 ，并呈 良好的线性关系，印迹聚合物的饱和吸附容量 Ｑ ｔ 为 ２ ８ ． ９ ８ ｍｇ
蛋白质印迹技术的研究进展
蛋白质印迹技术的研究进展摘要：蛋白质印迹技术是生物化学领域中一种重要的技术，用于分离、检测和鉴定蛋白质样品中的特定蛋白质。
近年来，随着生物技术的不断发展，蛋白质印迹技术也不断取得新的研究进展。
本文将介绍蛋白质印迹技术的概念、研究现状、研究方法、研究成果以及未来研究方向。
引言：蛋白质印迹技术是一种通过特异性抗体与目标蛋白质结合，进而将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来的方法。
该技术可以用于研究蛋白质的功能、表达和相互作用，是生物学、医学、农业等多个领域中的重要研究工具。
本文将重点蛋白质印迹技术的发展趋势、研究方法和最新研究成果，以及该技术在相关领域的应用。
研究现状：蛋白质印迹技术的研究和应用已经涉及多个领域。
在医学领域，蛋白质印迹技术被广泛应用于疾病诊断、病因研究和药物筛选。
在农业领域，蛋白质印迹技术则被用于研究植物抗逆性、品质改良和病虫害防治等方面。
蛋白质印迹技术在食品科学、环境科学、生物技术等领域也有广泛的应用。
研究方法：蛋白质印迹技术的主要研究方法包括免疫印迹技术和质谱印迹技术。
免疫印迹技术利用特异性抗体与目标蛋白质结合，通过显影和检测实现蛋白质的分离和鉴定。
质谱印迹技术则是将蛋白质样品加载到质谱仪中，通过离子化、裂解和检测，获得目标蛋白质的序列和性质信息。
蛋白质印迹技术的最新研究进展还包括多维蛋白质印迹技术和蛋白质相互作用印迹技术等。
研究成果：近年来，蛋白质印迹技术在多个领域取得了显著的研究成果。
在医学领域，蛋白质印迹技术成功应用于肿瘤标记物和药物靶点的发现与研究，为肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路和方法。
在农业领域，蛋白质印迹技术为作物抗逆机制和品质改良提供了有益的帮助，为提高农作物的产量和品质提供了新的途径。
蛋白质印迹技术在食品科学、环境科学等领域也取得了重要的应用成果，为食品安全、环境污染等方面的研究提供了有力的技术支持。
蛋白质印迹技术作为生物化学领域中的重要技术，在多个领域的研究和应用中发挥着越来越重要的作用。
分子印迹技术综述论文资料
分子印迹技术基本原理及应用[摘要]：分子印迹是制备具有分子特异识别功能聚合物的一种技术.本文介绍了分子印迹技术的基本原理和特点，综述了该技术在色谱、固相萃取、药物分析、生化分离、生物传感器技术以及生物催化方面的研究与应用，具体介绍该技术的几个应用实例。
[关键词]分子印迹技术；基本原理；特点；综述；应用实例目录分子印迹技术基本原理及应用 (1)[摘要] (1)1.分子印迹技术的基本概念、基本原理和特点 (1)1.1分子印迹技术的基本概念 (1)1.2分子印迹技术的基本原理 (2)1.3分子印迹技术的特点 (2)2.分子印迹技术的应用范围和应用实例介绍 (4)2.1分子印迹在色谱分离技术中的应用 (5)2.2分子印迹技术在固相萃取中的应用 (8)2.3 分子印迹技术在药物分析中的应用 (9)2.4 分子印迹技术在模拟酶催化中的应用 (9)2.5 分子印迹技术在传感器中的应用 (10)3.总结 (11)参考文献 (12)1.分子印迹技术的基本概念、基本原理和特点1.1分子印迹技术的基本概念分子印迹，又称为分子烙印(molecular imprinting)，是源于高分子化学、材料化学、生物化学等学科的一门交叉学科技术。
分子印迹技术(molecular imprinting technique，MIT)也叫做分子模版技术，属于超分子化学研究范畴，是指某以特定的目标分子（模版分子、印迹分子或烙印分子）为模版，植被对该分子具有特异选择性的聚合物的过程，通常被描述为制备与识别“分子钥匙”的人工“锁”技术。
[1]1.2分子印迹技术的基本原理分子印迹技术原理如图1所示。
当印迹（模版）分子与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合过程这种作用就会被记下来，当印迹分子去除后，聚合物就形成与印迹分子空间构型相匹配的、具有多重作用点的空穴，这样的空穴就对印迹分子极其类似物具有选择性特性。
图1 分子印迹技术原理MIPs的制备过程主要由以下三步构成：①在适当的介质中，具有适当功能基的功能单体通过与印迹分子间的相互作用聚集在印迹分子周围，形成主客体配合物；②通过功能单体与交联剂共聚，将主客配合物固定；③通过一定的物理或化学方法洗脱印迹分子，得到印迹聚合物，其中含有与印迹分子形状和功能基团排列相匹配的空穴。
文献综述 免疫印迹法
免疫印迹法近年发展综述摘要：简述了免疫印迹法的原理和方法，并对近年来的应用作了简要概括，使读者能对免疫印迹法的近年发展有一定的认识，并对其未来的发展作展望。
关键词:免疫印迹法小分子蛋白间接疫荧光法 HIV抗体糖尿病前言：蛋白免疫印迹法自发明以来，发展迅猛，本文对其近年来的发展作了简要概述。
正文：1原理蛋白免疫印迹技术(Westernblot)由美国斯坦福大学的乔治·斯塔克发明，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的蛋白样品进行着色，再通过分析着色的位置和深度获得目的蛋白在样品中的表达情况信息[1-3]。
蛋白免疫印迹技术集凝胶电泳、蛋白转印和免疫学标记等三部分于一体，在现代生物医学中广泛应用[4,5]。
2方法简述该项技术通过聚丙酰胺凝胶电泳分离目的蛋白质标本，并将其转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜，聚偏二氟乙烯膜等）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的单克隆或者多克隆抗体起免疫反应，再与酶标记的二抗起反应，经过底物显色检测电泳分离的特异性目的蛋白成分与含量[6-8]。
3应用蛋白免疫印迹法自发明以来被广泛应用于现代生物学研究中的蛋白质定性和半定量分析[9]。
3.1免疫印迹法、酶联免疫法及放射免疫法对胰岛自身抗体检测的比较采用免疫印迹法测定81例糖尿病患者胰岛自身抗体,将结果与酶联免疫法测定的GAD-A、ICA,放射免疫法测定IAA结果进行比较。
结论是放射免疫法检测IAA、酶联免疫法检测ICA阳性率均高于免疫印迹法,免疫印迹法检测GAD-A阳性率则高于放射免疫法[10]。
3.2检测小分子蛋白的实验条件优化研究探讨免疫印迹法不同参数对小分子蛋白检测效果的影响，从而优化并获得最佳实验条件。
方法：比较不同转膜电压和时间、转移缓冲液甲醇含量、不同化学发光剂对小分子蛋白的检测效果。
结论是选用高电压、短时间组合，选择含20%甲醇转移缓冲液和飞克级化学发光剂信号均有助于小分子蛋白免疫印迹检测[11]。
蛋白质分子印迹聚合物的研究进展
蛋白质分子印迹聚合物的研究进展摘要：现阶段内所使用的最新型的分离技术就是分子印迹技术。
这其中对于蛋白质分子印迹聚合物的识别有着很大的价值贡献，这一项研究同时有着很强的挑战行。
越来越多的学者对于这方面加大了重视。
本文主要是在最近几年内该项目研究基础上进行分析，为以后发展做出简单阐述。
关键词：蛋白质印迹；分子印迹技术；分子识别1、分子印迹聚合物相关内容1.1分子印迹聚合物发展过程所谓的分析印迹聚合物指的是一种通过人工合成的分子识别能力的高分子材料。
这样技术所具备的最大的特点就是能够对于特定的分子实现预期性的选择。
在上世纪40年代，人们在研究免疫学的时候发现了分子印迹，诺贝尔学者对于合成抗体提出这样的理论依据：生物体释放出的物质和外来物质之间所产生的结合位置；所出现的结合位置和外来物质的空间是不是能够相匹配。
1.2 分子印迹聚合物的特点分子印迹聚合物具有其独特的优势，主要表现在以下方面：（1）结构刚性，能有效定位印迹孔穴的构型和互补官能团；（2）空间结构具有柔韧的特点，能完美保证实现动力学；（3）容易接近亲和位点，保证知识分子的识别；（4）机械稳固顽强，即便在重力高压的状态也能实现分子印迹聚合物；（5）热稳定、高温适用的特点。
在所有产品聚合物的家族中，分子印迹聚合物越来越受到青睐，总体说来是由于其显著特性：（1）构效预定性（predetermination）。
在自组装结构过程中，模板分子进行聚合形成，功能单体也是如此，人们会根据自身的目的需要进行压制不同的分子印迹聚合物。
（2）特异识别性（specific recognition）。
印迹分子有其特定的位点，并能利用识别功能实现印迹分子的定做。
（3）广泛实用性（practicability）。
印迹分子聚合物和抗原、抗体、激素、受体进行对比，可以发现其通过化学合成后，能有效抵御恶劣的天气环境，保证非常稳定的状态，寿命时间也比较长。
另一方面，印迹分子聚合物还能辨别一些含剧毒的化合物，而且可循环使用、花费成本低，没有蛋白质分子识别系统的高昂代价。
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抗原决定基法
暴露于蛋白质分子表面的抗原决定簇短肽链为模 板用类似印迹小分子化合物的方法合成MIPs
优势： 小段多肽与单体材料有更强和更具特异性的相 互作用, 以此减少非特异性吸附并增强材料对 模板的亲和力。其次, 小段多肽在有机试剂中 相对稳定, 因而有机试剂也可作为聚合的介质。
一种新型的蛋白质分子印迹电化学传感器
蛋白质分子印迹检测方法综述
马雄辉
蛋白质分子印迹
分子印迹技术（MIT）：
优势： 1、构效的预定性 2、特异性识别 3、高度的稳定性，环境耐 受性，成本低廉
应用领域： 化合物分离与富集 仿生传感器 人工酶催化剂 抗体模拟酶 药物手性拆分 药物控制释放 药物筛选 …
蛋白质分子印迹
手性药物分离 农残痕量分析 小分子、离子 金属离子 分 子 印 迹 模板 多数有机物… 蛋白质
电化学聚合
直接在电极传感器的 识别元件的表面进行 MIPs的制备
传感器
荧光探针
是否有一种荧光修饰基团 可以标记在蛋白质上，进 行，通过信号的转换，将 模板蛋白的响应信号进行 放大和优化。
ECL
是否需要将羧基罗丹 明与ECL相结合,是否 会有信号响应
多肽
大分子 相比于小分子 分子印迹的快 速发展，蛋白 质等大分子的 研究却显得有 些停滞了 病毒 DNA…
存在的一些困难
Why？
蛋白质分子的尺寸
Problem
功能基团及构象的复杂性
蛋白质的溶解性
发展/Development
电聚膜？在线检测？更低的检出限？ 更好的稳定性？
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以多孔阳极氧化铝膜为结构模板合成表面印迹纳米丝
核-壳结构微球/纳米粒
Molecularly imprinted polymer grafted on polysaccharide microsphere surface by the sol-gel process for protein recognition.
将蛋白暴露部分的一小段多肽序列作为 模板分子进行印迹, 得到的材料不仅能 识别这段序列, 还能与整个蛋白相结合。
抗原决定簇（Epitope imprinting）
印迹模材 核-壳结构微球 两亲性印迹纳米粒 印迹纳米丝
表面分子印迹（Surface imprinting）
溶胶-凝胶inting）