糖尿病大鼠造模过程
糖尿病大鼠造模过程
糖尿病大鼠造模过程1 材料与方法1. 1 实验动物SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。
1. 2 试剂与高脂饲料配方STZ购自Sigama公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。
高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。
1. 3 动物分组与饲养SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。
模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。
STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。
正常组只注射等量的缓冲液。
72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。
一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。
糖尿病大鼠成模后给予要付治疗，分别是药物A+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）10只；药物B+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物C+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物A+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物B+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物C+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；正常对照组（5只），多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃，七叶皂甙钠组给予腹腔注射。
除正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。
1. 4 标本采集4周后，除取材组外，其他大鼠进行尾静脉取血，约300微升，30min 后用3000r /min 离心15min, 分离血清。
并且对糖尿病模型组3只，正常对照组1只进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），动物称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。
大鼠糖尿病造模成功的标准
大鼠糖尿病造模成功的标准大鼠糖尿病造模成功的标准糖尿病是一种常见的代谢性疾病，其特点是血糖水平异常升高。
为了更好地研究糖尿病的发病机制和寻找新的治疗方法，科学家们常常使用动物模型进行实验研究。
而大鼠作为一种常用的实验动物，其糖尿病模型的建立和评价就显得尤为重要。
大鼠糖尿病模型的建立主要有两种方法：化学诱导和基因突变。
化学诱导法是通过给予大鼠某些化学物质，如链脲佐菌素（STZ）或高脂饮食，来诱导其发生糖尿病。
而基因突变法则是通过基因工程技术改变大鼠体内某些基因的表达，使其模拟人类糖尿病的发生过程。
无论是哪种方法，大鼠糖尿病模型的建立都需要满足一定的标准才能被认为是成功的。
下面将介绍大鼠糖尿病模型成功的标准。
1. 血糖水平异常升高：大鼠糖尿病模型的核心特征就是血糖水平异常升高。
正常情况下，大鼠的空腹血糖水平应该在3.9-6.1 mmol/L之间，而糖尿病模型大鼠的空腹血糖水平应该明显高于正常范围。
2. 葡萄糖耐量异常：正常情况下，大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平会在一定时间内迅速上升，然后逐渐恢复到正常范围。
而糖尿病模型大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平上升明显较高，并且恢复较慢。
3. 胰岛功能异常：胰岛是调节血糖水平的重要脏器，而胰岛功能异常是导致糖尿病发生的主要原因之一。
在大鼠糖尿病模型中，胰岛功能异常表现为胰岛细胞数量减少、胰岛素分泌减少或胰岛素抵抗增加等。
4. 病理学变化：糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其发展过程中会引起一系列的组织和器官损伤。
在大鼠糖尿病模型中，可以观察到胰岛组织结构异常、肝脏脂肪变性、肾小球硬化等病理学变化。
5. 症状表现：大鼠在发生糖尿病后会出现一系列的临床表现，如多饮、多尿、消瘦等。
这些临床表现也是评价大鼠糖尿病模型是否成功的重要指标之一。
综上所述，大鼠糖尿病模型成功的标准主要包括血糖水平异常升高、葡萄糖耐量异常、胰岛功能异常、病理学变化和临床表现。
只有同时满足这些标准，才能认定大鼠糖尿病模型的建立是成功的。
干货分享糖尿病动物模型构建方法汇总「收藏起来慢慢看」
干货分享糖尿病动物模型构建方法汇总「收藏起来慢慢看」科研工具丨作图丨实验丨SCI丨统计分析丨国自然背景糖尿病（DM）是由遗传因素和环境因素共同作用而导致的慢性全身性代谢性疾病；由于胰腺产生不了足够的胰岛素或者人体无法有效地利用所产生的胰岛素，引起糖、脂肪、蛋白质、水及盐代谢紊乱，表现为高血糖及糖尿等。
随着时间的推移，会导致多种并发症，如心脑血管疾病（心肌梗死、心力衰竭、脑卒中）、肾病（肾衰竭、尿毒症）、失明、糖尿病足、多发性神经炎等。
糖尿病是目前全世界发病率和死亡率最高的5种疾病之一。
现有降糖药物无论是口服还是注射都只能减缓疾病大发展进程并不能治愈，且多数药物对患者血糖控制达标率不足40%，糖尿病药物研发仍然任重道远。
糖尿病动物模型是研究糖尿病发病机制及新型治疗药物的关键，建立合适的糖尿病动物模型对于研究糖尿病及其并发症的发病机制、治疗和预防等具有重要的作用。
目前，糖尿病的动物模型分为自发性、诱发性、基因工程糖尿病动物模型。
本篇将为大家介绍常见的糖尿病动物模型。
01 自发性动物模型自发性糖尿病动物模型是指动物未经过任何有意识的人工处置，在自然情况下发生糖尿病的动物模型。
该模型绝大多数采用有自发性糖尿病倾向的近交系纯种动物。
可分为两类：（1）I型糖尿病模型（胰岛素依赖型糖尿病）：BB 大鼠、LETL大鼠、NOD小鼠。
NOD小鼠自发性自身免疫Ⅰ型糖尿病模型。
NOD小鼠的糖尿病发生率与性别有关，雌鼠发病率显著高于雄鼠，且发病早。
BB大鼠从Wistar大鼠中筛选出来的一种自发性，遗传性Ⅰ型糖尿病动物模型。
BB大鼠在早期常表现胰岛炎症，但是晚期多发生严重的胰岛纤维化。
（2）Ⅱ型糖尿病模型（非胰岛素依赖型糖尿病）：KK小鼠、ob/ob小鼠和 db/db小鼠、ZDF大鼠、GK大鼠。
KK小鼠日本学者培育的一种轻度肥胖型Ⅱ型糖尿病动物。
ob/ob小鼠ob/ob小鼠是Ⅱ型糖尿病动物模型，属常染色体隐性遗传，是典型的肥胖高血糖小鼠。
糖尿病大鼠造模STZ
糖尿病大鼠造模（STZ）
STZ，-20℃保存。
使用前在冰浴中用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配置为2%的溶液，经0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。
注意:STZ溶液不稳定，保存及注射过程中要避光。
枸橼酸盐缓冲液
取2.949枸橼酸三钠溶于100ml蒸馏水中，得到枸橼酸三钠溶液；2.19枸橼酸溶于100ml蒸馏水中，得到枸橼酸溶液。
按1.32:1的比例混合二液，调PH 值到4.2，4℃预冷。
在临用时配制。
于造模前禁食12h，用构椽酸盐缓冲液 (PH4.2)将STZ配成1%浓度，糖尿病组及治疗组按60mg/kg的剂量一次性左下腹腔内注射。
0.lmol/L枸橼酸盐缓冲液
2.949枸橼酸三钠溶于1O0ml双蒸水中，配成0.lmol/L的枸橼酸三钠溶液；
2.19枸橼酸溶于10Oml双蒸水中，配成0.lmOI/L的构椽酸溶液。
取枸橼酸溶液和枸橼酸三钠溶液按照1:1.32的比例，配制成pH值4.5的枸橼酸盐缓冲液，现配现用。
造模前禁食12h，用0.lmol/L枸橼酸盐缓冲液配成浓度为0.45%的STZ溶液，
0.lmmol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液P(H值4.2-4.5)配制
取2.1g柠檬酸·H
20溶于ddH
2
O，定容至100ml，配成0.1mmol/L柠檬酸溶液。
取2.94g柠檬酸三钠·H
20溶于ddH
2
O，定容至100ml，配成0.lmmol/L柠檬
酸三钠溶液。
取0.1mmol/L柠檬酸溶液57ml和0.lmmol/L柠檬酸三钠溶液43ml，配成PH 值4.2-4.5的0.lmmol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液，现配现用。
2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证
ｍｏｄｅｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ
ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｌｏｏｄ
Ｓ１．ｅｏｓｅ，ｉｎｓｕｌｉｎ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｉｃｅｓ
ａｎｄ
ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ
ｔｈｅ
ｍｏｄｅｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｒａｔｅ ｉｓ
Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒａｔ
征，表现为胰岛素敏感性降低和胰岛素反应性降低№Ｊ。 临床和流行病学研究表明，通常胰岛素抵抗是启动２型 糖尿病发生的初始原因¨Ｊ。本研究将高糖高脂饲料喂 养和药物干预相结合，采用成年ＳＤ大鼠高糖高脂饲料 喂养一段时间后产生胰岛素抵抗，再给予小剂量的 ＳＴＺ，诱导出病理、生理改变都接近于人类２型糖尿病的 动物模型。
Ｍａｌｅ
ＳＤ ａｄｕｌｔ
ｒａｔｓ
ｆｅｄ
ｈｉｓｈ一
ｍｏｎｔｈ，ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔｅｓｔ
ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｇｉｖｅｎ
ｌｏｗ—ｄｏｓｅ
ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（ＳＴＺ，２５ ｍｇ／ｋｇ，ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ），ｓｅｔ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
ｕｐ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｓｕｇ－
具有高度的异质性（有许多不同的病因），因此无论是自 胰岛素 发性遗传性、诱导性还是转基因动物模型，都难以完全 模拟出人类２型糖尿病的复杂性。本模型具有很多与２
两组大鼠胰岛素敏感性、胰岛素水平
敏感指数（ＩＳＩ）结果显示模型组胰岛素降低，胰岛素
敏感性降低，与对照组相比，差异具有统计学意义。
见表３。
表３糖尿病模型大鼠与正常大鼠血清胰岛素 及胰岛素敏感指数｛；４－ｓ）
stz造模
链脲佐菌素(Streptozocin,STZ )诱发糖尿病动物模型的原理:STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。
国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。
1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的动物模型。
造膜前的喂养:Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模。
Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ。
造模前喂以高脂(高糖)饲料，诱发出胰岛素抵抗。
高脂(高糖)饲料：高脂(高糖)饲料成分：其中含10蔗糖，10猪油，5胆固醇。
由基础鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配制作高脂高糖饲料：其比例为猪油18 ,蔗糖20 ,蛋黄3 ,基础饲料59 。
预实验的重要性：很重要。
实验时STZ的给药量应参照预实验的结果，尽量不要盲目按照文献上或他人的给药量来直接使用，鼠均重和空腹(低糖状态)抗药力、禁食时长、注射选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不相同，通过预实验来确定符合自己实验鼠的给药计量，才是最科学的。
常用给药剂量：Ⅰ型糖尿病模型：大鼠剂量为70～65mg/KgⅡ型糖尿病模型：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/Kg 。
或参考文献（鼠均重不同，本剂量以200克均重为例）。
配置STZ液：柠檬酸缓冲液的配制：柠檬酸(FW:210.14) 2.1g加入双蒸水100mL中配成A液；柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液。
用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。
糖尿病大鼠模型的建立
糖尿病大鼠模型的建立101实验动物SD大鼠，体重200-250克，8周龄。
02实验试剂1）STZ(链脲佐菌素)无色固体2-8℃干燥避光保存，115℃可分解为气体水溶液不稳定，溶于双蒸水或盐溶液。
但在低温下pH4-4.5是较为稳定。
2）柠檬酸钠，柠檬酸用于调制缓冲溶液。
03实验器材1ml注射器，大鼠固定器。
04试剂配制1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5.0.1mol/L）配制0.1mol/L柠檬酸钠溶液，在用柠檬酸和氢氧化钠调节pH至4.5。
2）称量140mgSTZ溶解于10ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，配制成14mg/mlSTZ溶液。
05动物分组及造模1）大鼠自由摄食，饮水，动物房保持室温20-25℃，并维持一定的光照。
三天后，将大鼠随机分为实验组和对照组。
2）所有大鼠实验开始前12小时开始禁食但不禁水，禁食时间可根据情况顺延至18小时，但不要超过24小时。
3）将配置好的STZ溶液用锡箔纸包裹做避光处理并保存在冰水中，并在配制成功后30分钟内完整注射造模。
4）称量大鼠体重，采用腹腔注射给药进行造模，剂量为70mg/kg。
对照组注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。
06模型指标检测血糖测定：实验过程中腹腔注射STZ 48小时和72小时分段测定大鼠血糖并记录，采用剪尾采血法，使用血糖试纸进行检测。
※两次检测血糖浓度均高于16.8mmol/ml，即可认为造模成功。
07后期饲养糖尿病大鼠会有很明显的“三多一少”症状，所以尽量分笼饲养，勤换垫料，并保证足够的饲料和饮水供给。
糖尿病大鼠慢性溃疡伤口模型201实验动物SD糖尿病大鼠（八周以上大鼠，并糖尿病造模时间超过1周并少于2周）普通SD大鼠（八周以上，时间相近）。
02实验试剂1）水合氯醛（或戊巴比妥钠）用于麻醉实验大鼠。
2）医用酒精，表层消毒。
3）龙胆紫（或苦味酸，碘酊）创口标记染液。
4）试纸，标记创口，提前裁成直径为2cm的小圆片，并浸入标记染液中。
几种常见疾病的造模方法
几种常见疾病的造模方法1.血管性痴呆大鼠模型动物选取选用健康Ⅱ级SD雄性大鼠，体重280- 320 g，动物于安静环境下分笼饲养，室温控制在(22士1)℃的范围内，相对湿度60%，光线自动控制，明(07: 00- 19: 00)暗（19: 00-07）交替，给予充足清洁饮水、摄食。
处理大鼠10%水合氯醛腹腔注射(1 g/ kg)麻醉后，将其仰卧固定。
分离右颈总动脉（CCA）,颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA）并挂线备用，结扎ECA与CCA,用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分义处作一切切口，从切口处插入一端加热成光滑球形尼龙线(直径为0. 25 mm,距球端2cm处作标记)。
线插入ICA后，于入日处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段，然后松开夹闭ICA的动脉夹，继续插入尼龙线至稍有阻力后略回撤，至线插入深度为(18. 5士0. 5)mm左右，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。
再次结扎入口处，尼龙线外留约1缝合皮肤。
2h后轻轻提拉所留线头至有阻力，实现大脑中动脉再灌，则造模完成。
纳入动物入选的标准(按照Zea Longa 5级评分法取评分为2,3,4分的动物,动物于缺血2h后出现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧倒体征则纳入，动物无此体征或于缺血2h后仍不清醒者弃去。
2.大鼠酒精性肝病模型取材体重125- 155g雄性SD大鼠，环境温度18℃一20 0C,湿度70%左右，自由采食全价营养颗粒饲料，垫料为紫外线消毒后的卫生纸。
将酒精体积分数为0. 52的红星二锅头自酒(北京酿酒总厂生产)，按体积比分别稀释成400Io .450Io .500Io ( v/ v)备用。
处理按每周所测得的体重给子每日早晚白酒灌胃各1次。
第1周将稀释成40%的白酒按剂量4g/(kg.d)、每次0. 5m1/ 100g灌胃，第2周按剂量8g/(kg.d)、每次1. 0ml/ 100g,灌胃，第5周开始将稀释成45%的自酒按9g/(kg.d),每次1. 0m1/ 100g灌胃，第9周将稀释成50%的白酒按10g/（kg.d）、每次1. 0m1/ 100g灌胃，第11周起改用自由饮酒至第12周，以浓度50%白酒作为主要饮料，日供给量40ml，同时限制饮水。
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1 材料与方法
1. 1 实验动物
SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。
1. 2 试剂与高脂饲料配方
STZ购自Sigama公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。
高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。
1. 3 动物分组与饲养
SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。
模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。
STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。
正常组只注射等量的缓冲液。
72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。
一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。
糖尿病大鼠成模后给予要付治疗，分别是药物A+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）10只；药物B+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物C+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物A+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物B+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物C+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；正常对照组（5只），多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃，七叶皂甙钠组给予腹腔注射。
除
正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。
1. 4 标本采集
4周后，除取材组外，其他大鼠进行尾静脉取血，约300微升，30min 后用3000r /min 离心15min, 分离血清。
并且对糖尿病模型组3只，正常对照组1只进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），动物称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。
其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。
8周后正常对照组2只，糖尿病模型组3只进行尾静脉取血，约300微升，30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。
其余大鼠进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。
其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。
12周后对正常对照组2只和糖尿病模型组3只进行取材，称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。
其他组织分为两部分，一部分组织于-80°C冻存，另一部分组织生理
盐水清洗后，用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化，并进行光镜观察。
实验结束时将各组动物处死。