2型糖尿病大鼠模型研究概况

【１１】赵堤，余洁，黄海波等．恶性血液病患者红细胞腺苷脱氨酶活・
观察【Ｊ】．临床内科杂志．１９９４，ｌ １（２）：７５． 【１２】万雄萍，詹蓓蓓，张抗．２，６一二氯酚吲哚酚还原法测定腺苷脱｛ 酶们．临床检验杂志．１９９８，１６（６）：３２３—３２６． 【１３］Ｂｏｈａｃｅｋ Ｊ，Ｈｏｓｅｋ
ｄｅａｍｉｎａｓｅ Ｂ，Ｂａｂｕｓｉｋｏｖａ
如给药剂量、给药方法、ＳＴＺ的不同溶剂≮大鼠品种因素等。 目前ＳＴＺ的剂量大小还没有统一认识，造模成功率报道也 不尽相同。 李桂云等［６］将４周龄ｓＰＦ级雄性ｓＤ大鼠高糖高脂饲 料喂养４周，分别按５０ｒａｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ体重剂量 腹腔注射ＳＴＺ建立Ｔ２ＤＭ大鼠模型，结果：４０ｍａｋｓ剂量组 大鼠的成模率最高（７３．３％），成模大鼠具有胰岛素抵抗、高 血糖、高胰岛素血症和血脂紊乱的Ｔ２ＤＭ ＩＩ缶床特征。认为短＋ 期高糖高脂饮食联合ＳＴＺ腹腔注射建立Ｔ２ＤＭ ＳＤ大鼠模 型的ＳＴＺ最佳注射剂量为４０ｍｇ／ｋｇ。 而宋立江等【７】研究了不同溶剂溶解ＳＴＺ对造模成功 率的影响。结果ｐＨ４．５柠檬酸ＰＢＳ造模成功率高达８６． ７％。认为ｐＨ ４．５柠檬酸ＰＢＳ可以作为理想的溶剂。郭学军 等［８１Ｗ ｉｓｔａｒ大鼠成模率和死亡率均高于ｓＤ大鼠。 １．４转基因大鼠模型转基因技术的应用极大地促进了 动物医学研究的发展，将人类的基因片段或者是多肽、蛋白 质等转到大鼠上，可以制备出Ｔ１ＤＭ或Ｔ２ＤＭ动物模型，且 相比以上的较稳定，容易繁殖培育，同时因与人类具有同源 性，更能反映基因作用的真实性，是目前较为先进的技术。 但这种方法的弊端有两个：第一，因人类的基因片段、 蛋白质对大鼠来说，都是外源蛋白，由于作用环境改变，可 能会造成相应的蛋白因差异而未能达到相应临床表型；第 二，在诱导过程中，还需要有比较合适可靠的载体，以使基
中国中医药咨讯
・８８・ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
２０１１年６月下第３卷第１８期
Ｊｕｎｅ
２０１ １
Ｖ０１．３
Ｎｏ．１８
２型糖尿病大鼠模型研究概况
娄伟成宣金吴赛华王芳芳 （浙江中医药大学第二临床医学院，浙江杭州，３１００５３） 【摘要】目的：综述近年来２型糖尿病Ｃｒ２ＤＭ）大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方
２．３
ＺＤＦ大鼠肥胖Ｚｕｃｋｅｒ大鼠其特征为肥胖、胰岛素
抗、高胰岛素血症、高血脂、高血糖、高血压，受常染色体。 性遗传基因影响，其隐性基因名称为ｆａ。有研究者发现其， 胖与血脑屏障上的瘦素载体减少有关，瘦素与中枢神经． 统受体结合能够启动调节摄食和机体能量平衡，此平衡； 打破可导致肥胖发生。肥胖Ｚｕｃｋｅｒ大鼠是研究糖尿病血。 病变的理想模型【１ｌ】。
【１５】张卓，张家俊，陈文为．应用高效液相色谱技术（ＨＰＬＣ）测定血ｉ
腺苷脱氨酶活性【Ｊ】．北京中医药大学学报．１９９４，１７（５）：６３—６５． ［１６】王伟．从抗氧化反应探讨“药食同源”的含义们．中西医结合ｊ 志．１９９１，１１０）：１５９． 【１７】徐顺清，陈志飞，舒柏华等．发光分析测定体液中腺苷脱氨酶【Ｊ 同济医科大学学报．１９９７，２６（６）：４３８－－４４１．
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
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超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死，胰岛的 功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的Ｔ２ＤＭ模型。鲁 瑾［１】等采用６１％的高脂饮食，饲养大鼠７周后，大鼠就出 现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十 分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋【２】等给予Ｗ ｉｓｔａｒ大鼠脂 肪热比为５９％的饲料，喂养４周，均出现胰岛素抵抗，多项 研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模
１．３
的优势鼠种。由美国Ｍｅｉｅｒ和Ｙｅｒ２９ａｎｉａｎ将黑线仓鼠通 近亲繁殖获得近交系，该类地鼠具有自发性、遗传性糖尿 特点，发病率可达９０％，雌性多于雄性。以中轻度高血糖 特征，血清胰岛素表现多样，胰岛细胞的病变程度不一， 似于人Ｔ２ＤＭ。 Ｇ／Ｋ大鼠Ｇ／Ｋ大鼠来源于日本，是一种常用的自 性非肥胖型Ｔ２ＤＭ实验动物模型，具有高血糖、高胰岛素
３总结
综上所述，我们发现不同类型Ｔ２ＤＭ模型各有其优Ｊ 和缺点，在选择临床Ｔ２ＤＭ动物模型的的过程中，应密切｛ 合课题要求、实验室条件和经费状况等具体现状进行确定 目前认为人工诱导产生的大鼠糖尿病模型具有价格｛ 宜、稳定性强、并且容易诱导的特点，较受推崇Ｏ但是也可Ｉ 看到，现阶段糖尿病动物模型的研究仍然处于一个发展目 段，许多技术还不成熟。有些指标还没有建立，各家有各ｉ 的说法，成功率的报道也是不尽相同，例如使用多少剂量自 ＳＴＺ合适等。具体我们列数如下：
０．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ
ｏｆ ａｄｅｎｏｓｉｌ
ｕｓｉｌ
ａｎｄ
ｐｕｆｉｎｅ
ｎｕｅｌｅｏｓｉｄｅ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ
ａｎｄ ｒａｄｉｏ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｃｈｏｒｍａｔｏｇｒ．１９８８，４３４（２）：４３９－４４５． 【１４】赵树铭．一种测定腺苷脱氨酶活性的方法叨．国际检验医学ｊ 志．１９８６Ａ：４３．
法：主要对Ｔ２ＤＭ大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：Ｔ２ＤＭ大鼠模型目前可以分为自发性Ｔ２ＤＭ和实验性 Ｔ２ＤＭ模型，且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性Ｔ２ＤＭ大
鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】２型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发 生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其Ｔ２ＤＭ占了较 高比例，大概占了糖尿病发病率的９０％。Ｔ２ＤＭ是因人体胰 岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发 糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患 者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴 有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究 糖尿病的良好途径，我们可以从中比较—些糖尿病药物的 作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套 治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床Ｔ２ＤＭ动物模型主要集中在大鼠上， 这可能是由于大鼠作为Ｔ２ＤＭ动物模型相对较稳定且与。 Ｔ２ＤＭ表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来ｌ 内外有关Ｉｆ缶床Ｔ２ＤＭ大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床Ｔ２ＤＭ研究的大鼠模型主要： 为两类，一类是自发性Ｔ２ＤＭ大鼠模型，另一类则是实验１ Ｔ２ＤＭ大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者Ｊ 多。 １实验性Ｔ２ＤＭ大鼠模型 １．１单纯高脂高糖引发的Ｔ２ＤＭ在试验中，通过较长ｌ 间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满： 的Ｔ２ＤＭ大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基石｝｜ 目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛Ｂ细Ｊ
型。
因片段能顺利移植到动物体内，进而克隆繁殖，这无论葙 间、经济上还是技术上成本都是比较高的。 ２自发性Ｔ２ＤＭ大鼠模型 自发性２型糖尿病大鼠目前主要有中国地鼠、Ｇ／Ｋ 鼠、ＯＬＥＴＦ大鼠、ＺＤＦ大鼠等，这类大鼠多数肥胖，有明 的高胰岛素血症，类似人Ｔ２ＤＭ的发病特征，国外研发口 抗糖尿病及并发症的新药多选用这类动物。【９】
．
寺－・—｛，・｛“夺・夺・・争・・争・÷・—争・—争・・争・牵・牵・幸・÷・・串・专・・争・・争・・争・夺・牵・夺・孛・争・争・夺・孛・・｝・孛・争・夺・孛・÷・｛－・÷・专・・争・夺・夺・夺・夺・・｛，・｛ 鲜健康人血清Ｏ．４ｍＬ，反应液终体积２．０ｍＬ，混匀，置３７。Ｃ 水浴内振荡温育３０ｒａｉｎ。取出后，分别向各管加入３％ ＨＣＩＯ，２．０ｍＬ，沉淀蛋白，离心１０ｒａｉｎ（３０００ｒｐｍ），分别取各管 上清液１．０ｍＬ，加２０％ＫＯＨ中和，４。Ｃ冰箱静置ｌＯｍｉｒ），使样 品中ＫＣｌ０４结晶析出。准确吸取上清液２０斗Ｌ进样测定， 用外标法定量。此法准确性好，灵敏度高，重复性好。另外， 该法还可用于检测血清中尿酸含量变化，有助于诊断肾脏 疾病和老年痛风症【１６】。此法灵敏度高、重现性好，但条件要 求比较严格，需要高效液相色谱仪及４９０型可变波长检测 器、，不适于临床应用。 化学发光法［１７１：此法中底物腺苷依次经ＡＤＡ、ＰＮＰ催 化反应后，生成次黄嘌呤，再经ＸＯＤ氧化生成尿酸和０ｚ－， ０扛与鲁米诺发生化学发光反应。其发光强度与次黄瞟呤含 量成正比，由此可测定ＡＤＡ活性即。此法需要发光测量仪， 虽然灵敏度高，但重现性和准确度不高。 随着生物酶检测技术研发的深入，现在越来越多的研 究者将此和化学发光技术结合起来，其中利用化学发光法 检测ＡＤＡ将可能成为以后研究的重点和热点，因为ＡＤＡ 经过生化反应后产生过氧化氢，利用化学发光技术检测过 氧化氢已见国内外文献有诸多报道，但大多数是在碱性体 系下测定过氧化氢的，而近中性条件多见于鲁米诺电致化 学发光，但都不大适合临床生化条件产生过氧化氢的检测， 所以研究一种抗干扰能力强、测定灵敏度高、重复性好、价 钱低廉，能真实反映ＡＤＡ活性并能并能适用于生化条件的 化学发光法检测ＡＤＡ产物过氧化氢，进而检测ＡＤＡ的技 术，对于提高ＡＤＡ检测的效率、结果的准确性、相关疾病的 确诊率都具有重要意义。 参考文献
［１］Ａｇｍｘｗａｌ Ｒｕｐｅｔａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ
生出版社．１９９１，９１７—４１９． 【３】叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程【Ｍ】．第二版．南京：东南１ 学出版社．１９９７，２３５—２３６．
【４蒯巧灵．腺苷脱氨酶活性的分光光度法测定们．湘潭师范学院‘
报．１９９９，２０（３）：１０５—１０８．
２．１
中国地鼠自发性模型
原为我国黄河以北一些省
１．２应用ＳＴＺ药物诱导产生的大鼠模型