猪伪狂犬病毒原阳株gE全基因的克隆与序列分析
陕西省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析
陕西省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析方琳;朱辉;李烨;张思远;彭特;叶贺佳【摘要】为了解2015年陕西省猪伪狂犬病(PR)流行情况和病毒遗传变异特点,采集不同地区28份疑似PR发病猪场的病料进行PCR检测,采用鸡胚绒毛尿囊膜接种和BHK-21细胞培养分离PRV,应用生物信息学方法分析主要毒力基因gE遗传变异特征.结果显示,从28份PRV疑似病料中检测出7份PRV阳性样品,分离出7株PRV地方株.陕西分离毒株与目前国内的流行毒株同源性较高,且在同一进化分支内,与欧美分离株同源性较低,亲缘关系相对较远.其中4个分离毒株具有变异株的典型分子特征,即773 bp～775 bp CGA的特征性插入,另3个分离毒株则与经典参考毒株Ea株和GDSH株位于1个相对独立的分支;SX01株和SX03株抗原表位发生改变,SX03株O-GalNAc糖基化位点缺失,SX04株在1个抗原表位增加了1个潜在的O-GalNAc糖基化位点.表明陕西省PRV gE基因在分子水平上发生了变异,核酸演化上发生了相对独立的进化,氨基酸序列的突变对其抗原表位和糖基化位点产生了影响.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2016(037)008【总页数】7页(P24-30)【关键词】猪伪狂犬病病毒;gE基因;遗传变异;生物信息学【作者】方琳;朱辉;李烨;张思远;彭特;叶贺佳【作者单位】广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300;广州市华南农大生物药品有限公司,广东广州511300【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1;S858.28猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies，PR) 是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的传染病，临床症状以新生仔猪腹泻及神经症状,妊娠母猪流产、死胎等繁殖障碍,成年猪隐性感染，长期带毒排毒为特征[1]。
伪狂犬病毒上海株糖蛋白G(gG)基因的克隆及序列
伪狂犬病毒上海株糖蛋白G (gG )基因的克隆及序列分析黄伟坚1,2,姜焱1,陈德胜1,芦银华1,张雪莲1,陈溥言13(11南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室,江苏南京210095;21广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005)摘要:应用PCR 方法从PRV SH (上海株)病毒培养物扩增了gG 基因,克隆入pcDNA3质粒,并进行了序列测定。
结果表明,扩增的gG 基因片段长1719bp ,包含一个1491bp 的开放阅读框(ORF ),在起始密码子上游有TA TAAAA 盒,在终止密码子下游有AA TAAA 的poly (A )尾,编码由496个氨基酸组成的蛋白质。
与Rice 株相应的gG 片段相比,核苷酸序列同源性达9711%。
但推导的氨基酸序列同源性仅有8716%,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸,出现了突变和移码,导致氨基酸序列同源性降低。
gG 具有膜蛋白的结构特点。
关键词:伪狂犬病毒;gG 基因;PCR 扩增;核苷酸序列;氨基酸序列中图分类号:S852165+911 文献标识码:A 文章编号:10002030(2003)01010704Cloning ,sequence analysis of the gG geneof Pseudorabies virus SH strainHUAN G Wei 2jian 1,2,J IAN G Yan 1,CHEN De 2sheng 1,L U Y in 2hua 1,ZHAN G Xue 2lian 1,CHEN Pu 2yan 13(1.Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology ,Ministry of Agriculture ,Nanjing Agric Univ ,Nanjing 210095,China ; 2.College of Animal Scienceand Technology ,Guangxi Univ ,Nanning 530005,China )Abstract :The gG gene of PRV SH strain was am plified by PCR technique and cloned into pcDNA3,moreover ,it was sequenced by Sanger ′s sequencing technique 1The amplified DNA fragment was 1719bp included an ORF which encoded a protein of 496amino acids with a characteristics of TA TAAAA box in u pstream and AA TAAA poly (A )in downstream of codon 1Compared with gG gene of Rice strain ,the homology of nucleotides sequence was 9711%,however ,because of inserts or deletion in the nu 2cleotides sequence of ORF ,the homology of the deduced amino acids between PRV SH strain and Rice strain was onl y 8716%1The gG was one of membrane proteins 1K ey w ords :Pseudorabies virus ;gG gene ;PCR amplification ;nucleotide sequence ;amino acids sequence伪狂犬病毒(PRV )又称猪疱疹病毒Ⅰ型,引起多种家畜及野生动物的伪狂犬病,对猪的危害最为严重。
gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化规律
株） 、 Ｂ ｕ ｃ ｈ ａ ｒ ｅ ｓ ｔ 株 以及 鄂 Ａ株 和 闽 Ａ株 灭 活 疫苗 。 《 国家中长期动物疫病 防治规划 （ ２ ０ １ ２ －２ ０ ２ ０ 年） 》 将 猪伪狂 犬病 列为重点疫病 ， ２ ０ ２ ０年全 国所有 的种 猪 场需要达到净化标准 。在此背景下本试验开展 了相
疱疹病毒 １ 型ｆ １ ＿ 。 在我 国， １ ９ ４ ７ 年 时刘永纯 首次在 上 海分离到 Ｐ Ｒ Ｖ， １ ９ ５ ６ 年 国营宝泉岭农场暴发猪伪 狂 犬病 ， １ ９ ５ ７年 四川华 阳出现此病 ， 此后 Ｐ Ｒ Ｖ一直 在 我 国流 行 。近年来猪伪 狂犬病 呈现新 的流行趋 势 ， 新流行 的 Ｐ Ｒ Ｖ致病 力强于经典流行毒株 ， 通过 分子 流行病学对其主要致病力和免疫保护相关基 因进行 分析 ， 结果发现新流行 的 Ｐ Ｒ Ｖ毒株具有 多个 新的变 异位点［ ２ － ５ ］ 。变异伪狂犬病病毒 的流行给我 国生猪养 殖业造成 巨大 的经济损失 。 疫苗免疫是防止传染性疾病 的最有效手段 。 目 前 国内广泛使用的伪狂犬病疫苗主要有弱毒活疫苗
Ｓ Ａ ２ １ ５株 、 Ｈ Ｂ ９ ８株 、 Ｈ Ｂ ２ ０ ０ ０ 株、 Ｂ ａ ｒ ｈ ａ （ 或Ｂ ａ ｒ ｈ ａ Ｋ ６ １
室制各提供。
１ ． ４ 试 验 方 法
１ ． ４ ． １ 试 验动物 筛选 采集 ｇ Ｅ抗 体阳性 的种 猪所 产断奶仔 猪血清 ，使用 ｇ Ｅ抗体 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测试剂盒 测试所 有待检血清 的 ｇ Ｅ抗体 ， 选择 ｇ Ｅ抗 体阳性 的
１ ． ４ ． ２ 分组和 免疫 将 ３ ０头仔猪 随机分 为 ３ 组， 每 组１ ０ 头， 分别标 记为 １ 、 ２ 、 ３组 ， 其 中第 １ 组 为扑伪 优组 ， 免疫猪伪狂犬病活疫苗 Ｓ Ａ ２ １ ５株 （ 使用 Ｉ Ｍ Ｉ Ｏ １ 稀释液 稀释该疫苗） ； 第 ２组对 照疫苗组 ， 免疫对 照 国产 疫苗 （ 使 用疫苗 配套 稀释液稀 释该疫 苗） ； 第 ３ 组为 空 白对照组 ， 仅注 射 Ｉ ＭＩ Ｏ １ 稀释液 。免疫方式 均为肌 肉注射 ， 免疫剂量均为 ２ ｍ Ｌ ／ 头。 １ ． ４ － ３ 抗 体检测和 数据 分析 分别 在免 疫 时 （ ４ 周 龄） 、免疫后 １ 、 ２ 、 ３ … ４ ５ ６ … ７ ８ ９ 、 １ ０周采 集血清 ， 按 照伪狂犬病病 毒 ｇ Ｅ抗体检测试剂盒和 抗体检测 试剂盒说 明书进行 ｇ Ｂ和 抗体的检测并计算相应 的Ｓ ／ Ｎ值 。如 果 Ｓ ／ Ｎ≤Ｏ ． ６ 判 定为阳性 ， ０ ． ６ ＜ Ｓ ／ Ｎ≤０ ． ７ 判定为可疑， 应重新检测 ， Ｓ ／ Ｎ ＞ ０ ． ７ 判定为 阴性 。 根据 判定结果计算不同采血 时间点的抗体 阳性率 。 ２ 试验结果 ２ ． １ 免疫后 ｇ Ｂ抗体 变化规律 本 次试验选择 的均为 ｇ Ｅ阳性仔猪 ， 免疫前测 定 所 有试 验猪 ｇ Ｂ抗体 也均为阳性 。４周龄 时免疫 ， 然 后每周 采集 血清 使用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检 测试剂 盒测 定所 有 仔猪 的血清抗 体。结果发现 ，在免疫后 ｌ ～ ４周对 照 疫苗组和空 白对 照组 Ｓ ／ Ｎ轻微升高 ，免疫 ４周 以后 迅速 升高 ， 在免疫后 ７周 时全 部升高至 ０ ． ７以上 ， 此 时对 照疫苗组和 空 白对照组所 有猪 邸 抗体均变 为 阴性 。随着 Ｓ ／ Ｎ的升 高，对照疫苗组和空 白对照 组 抗 体 阳性 率持 续下 降 ， 在 免疫 后 ７周 （ １ ０周龄） 时， 对照疫苗 组 ｇ Ｂ抗体 阳性率下 降至 ６ ０ ％， 空 白对 照组下 降至 ５ ０ ％。对照 疫苗组于免疫后 ８周 ｇ Ｂ抗
猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析
猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析马震原;曹伟伟;李宁;闫若潜;班付国;王淑娟;赵雪丽;谢彩华;王东方;王华俊【摘要】In order to learn the situation of pig pseudorabies virus (PRV) variant in this study, tissue samples such as lymph nodes which were collected from clinical pigs with suspected PRV infection were identified by PCR.PRV positive sample were inoculated on PK-15 cells after grinding and degerming, with further experiment including virus isolation, plague purification, PCR and IFA identification, TCID50 confirmed by Reed-Muench method, inoculation test and observation of clinical symptoms in mice.The gE gene of purified PRV and brain tissue samples of dead mice were identified by sequencing analysis.The results showed that the virus grown on PK-15 cells could produce typical cytopathic effect (CPE) after 24 h;After three rounds of plaque purification,the isolate was PRV positive identified by PCR and IFA, and nominated as HeNZK-2014;The TCID50 of the isolate was 10-9.77/0.1 mL;The virus in 1×108 TCID50 inoculation was able to cause itching, tearing, death in infected mice, and PRV could be detected in tissues of dead mice;The molecular genetic variation analysis of gE gene by PCR amplification and clone sequencing indicated that the gE gene from brain tissue of infected mice shared 100.0% homology with HeNZK-2014, and located in a relatively independent branch with newly pandemic isolates in recent years after 2011, but was far from the classical strains before 2011, and both had two insertion of aspartic acid (D) at sitesof 48 and 496 amino acids, which were considered to be the typical characteristics of PRV variants.This study successfully isolated a PRV variant, which laid a foundation for further research on vaccine development, prevention and control against PRV variants.%为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR 鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析.结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24 h后出现典型细胞病变(CPE),经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1 mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22 h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征.本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)007【总页数】10页(P2086-2095)【关键词】猪;伪狂犬病病毒;变异毒株;分离;鉴定;gE基因;遗传变异分析【作者】马震原;曹伟伟;李宁;闫若潜;班付国;王淑娟;赵雪丽;谢彩华;王东方;王华俊【作者单位】河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;广东永顺生物制药股份有限公司,广州 510000;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008;河南省动物疫病预防与控制中心,郑州 450008【正文语种】中文【中图分类】S852.65伪狂犬病(pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)感染引起的可致多种动物发病的疫病，其中仔猪受到的危害最为严重。
四株猪伪狂犬病毒株的分离鉴定与主要毒力基因分析
PK-15细Biblioteka 分离岀4个毒株，对毒株传代培养，进行TCIC5占LD50测定，对主要毒力基因g*6EgC 和TK进
行扩增测序后分析,确定该4株病毒为PRV株，分别命名为FJ01株、FJ03株、YK株和MS2018株，滴度分别
为 10_ 6-63 * 10 - 7-08 * 10 - 8-10 * 10 - 7-18 TCID50u - 0. 1mL_1,对 BWb// 小鼠的 LD50 分别为 10217*10272、10344、10351
DOC 10. 3969/j. issn. 1004-1524. 2019. 09. 05
四株猪伪狂犬病毒株的分离鉴定与主要毒力基因分析
' 易可可S阴文奇2,周远成3,蒋金蓁S张白玉S李中银 ，颜其贵1!**
（1-四川农业大学动物医学院，四川成都611130 ;2-四川省畜牧科学研究院，四川成都610066 ;3-四川华神兽用生物制品有限公司，四
川成都610200 ；4-四川伊禾动物药品有限公司，四川成都610066）
摘 要潴伪狂犬病毒（PRV）的流行对中国养猪业造成巨大损失，而2011年后许多已免疫PRV疫苗的猪场
频繁岀现g抗体转为阳性现象，感染猪岀现PRV的临床症状，并岀现所谓的“流产风暴”，学者们怀疑PRV
的重新流行与病毒毒力增强和基因变异有关。为了解PRV变异情况，从各地疑似PRV阳性病料中，通过
TCIC50u,可见FJ01株的毒力最强。对4个毒株的毒力基因与其他PRV毒株进行同源性比对并建立进化化，
FJ01株、FJ03株、MS2018株与中国近几年流行的变异毒株如HNX株、HNB株、JS-2012株等在一个大进化分
支上，亲缘性较近，而与疫苗株BwthwK61、SA215等,国际经典毒株Becker*Kaplan等亲缘性较远，变异较大。
福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、 gE基因遗传变异分析
福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、 gE基因遗传变异分析魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【摘要】为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律.本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE 基因进行遗传变异分析.结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状.PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)003【总页数】4页(P15-18)【关键词】伪狂犬病病毒;分离鉴定;gD基因;gE基因;变异【作者】魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【作者单位】龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物的一种高度接触性传染病，可导致怀孕母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，哺乳仔猪出现神经系统症状，死亡率达90%以上，并有从单一感染向混合感染扩大的趋势，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。
伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究
伪狂犬病病毒贵州分离株gE基因主要抗原表位区真核表达研究郝飞;汤德元;李春燕;曾智勇;罗险峰【摘要】收集贵州省思南县某猪场送检的哺乳仔猪病料,采用Vero细胞盲传、核酸鉴定及测序分离到1株伪狂犬病病毒贵州分离株.扩增其gE基因主要抗原表位区,构建pcDNA3.1(+)-gE重组真核表达质粒,将其转染Ve-ro细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测基因在Vero细胞中的表达,同时将重组质粒免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价.结果表明:gE基因主要抗原表位区在Vero获得瞬时表达,转染的Vero 细胞呈特异性绿色荧光;将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性.【期刊名称】《山地农业生物学报》【年(卷),期】2013(032)006【总页数】5页(P484-488)【关键词】伪狂犬病病毒;贵州分离株;真核表达【作者】郝飞;汤德元;李春燕;曾智勇;罗险峰【作者单位】贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州省动物疫病预防控制中心,贵州贵阳550008【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1猪伪狂犬病(PR)又称Aujeszky氏病，是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病［1］。
该病属于典型且极难防疫的自然疫源性疾病之一，且易与其他疫病混合感染，给养猪业造成的损失仅次于猪瘟和口蹄疫［2－4］。
伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒1型)属于疱疹病毒目疱疹病毒科α－疱疹病毒亚科水痘病毒属［5］双股线性DNA病毒，基因组大小约150 kb，具有疱疹病毒共有的一般形态特征，现已被广泛用于研究疱疹病毒侵袭机制和形态发生的模型［6］。
PRV含有11种糖蛋白，分别为gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN蛋白，其中gE基因是PRV的一个重要的毒力决定基因，其编码的gE蛋白属于典型的Ι型跨膜蛋白［7］，是PRV的主要毒力因子和促进细胞融合的糖蛋白，在介导细胞的感染融合、病毒在细胞间的扩散、病毒粒子的释放及病毒的嗜神经性等方面发挥着重要作用［8－9］。
(动物传染病学)猪伪狂犬病
猪伪狂犬病病毒接种家兔后表现奇痒症状。
猪伪狂犬病病毒接种小鼠后表现神经症状。
上图：伪狂犬病LAT诊 断试剂盒
下图：LAT检测猪伪狂 犬病血清抗体
阳性反应
阴性反应
伪狂犬病乳胶凝集试验（LAT）
全病毒抗原 致敏乳胶
gG 基因
缺失疫苗 免疫血清
全病毒 疫苗免 疫血清
基因gg和ge在伪狂犬病病毒prv基因组中的位臵伪狂犬病的基因标志疫苗是在tk基因主要毒力基因缺失的基础上将病毒的非必需糖蛋白基因ge或gg进行缺失得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白但又不影响病毒在细胞上的增殖与免疫原性
(动物传染病学）猪伪狂犬病
1.概述
由伪狂犬病毒引起的家畜和多种野生动物的 急性传染病。猪是其贮存宿主和传染源。
人对伪狂犬病毒无易感性。
2. 历史
伪狂犬病在全世界广泛分布。 早在1813年美国就有学者描述该病。 直到1902年匈牙利微生物学家Aladar Aujeszky
才第一次较为详细的描述了该病，提出由一种病 毒引起，并将其与狂犬病区分开来。故本病也称 为Aujeszky氏病。
二十世纪前半叶以来，伪狂犬病已成为东欧及巴尔 干半岛如匈牙利、前捷克斯洛伐克、保加利亚、前 南斯拉夫等国家养猪业的重要疾病。
伪狂犬病的PCR诊断方法
伪狂犬病病毒不同毒株感染动物
家兔接种野毒后表现奇痒，死亡。 家兔接种gG缺失株后表现搔痒，但不死亡。 家兔接种gE缺失株后不表现搔痒，也不死亡。 犬接种gE单缺失株后死亡。 天然弱毒株Bartha株对犬安全。
野毒自然感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断 ➢ 随着伪狂犬病基因缺失疫苗的应用，在临床上
组织学病变
➢ 组织学变化主要见中枢神经系统呈现弥漫性非化脓性脑膜炎， 有明显血管套和胶质细胞坏死。
猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用
猪 伪 狂 犬 病 病 毒 gE 抗 体 胶 体
金免疫层析 检测方法的建立及应用 廖文 军1 , 吴健敏1* , 谭 攀2 , 覃绍敏1, 陈凤莲1, 马 玲1 , 张 伟3
1 材料与方法
1. 1 材料 1. 1. 1 主 要试剂 与仪 器 氯金 酸( AuCl3 H Cl 4H 2 O) 、柠檬酸三钠( C6 H 5 Na3 O7 2H 2 O) 、牛血清
* 收稿日期: 2010 02 06 基金项目: 广西科技攻关项目( 桂科攻 0537008 3A3; 桂科攻 0632002 1 2) 作者简介: 廖文军( 1983- ) , 男, 湖北仙桃人, 实习研究员, 硕士, 主要从事分子免疫学与传染病学研究。* 通讯作者
( 1. 广西兽医研究所 , 广西南宁 530001; 2. 深圳三方圆生物科技有限公司, 广 东深圳 518102; 3. 广西博白县动物疾病预防控 制中心, 广西博白 537600)
摘 要: 以纯化的抗人红细胞单链抗体( ScF v) 猪伪狂犬病病毒( PR V) gE 蛋白双功能融合蛋白为诊断 抗原和胶体金标记物, 以羊抗猪 IgG 包被硝酸纤维膜作为质控带, 制作检测猪伪狂犬病毒 gE 抗体的双抗原 胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为 17. 6 g, 检测线诊断抗原最佳标记量 为 1. 76 g, 血清最佳稀释度为 1 10, 作用时间 15 min, 与猪瘟病毒( CSFV ) 、猪细小病毒( P PV) 、猪繁殖与 呼吸综合征病毒( P RR SV) 、猪乙型脑炎病毒( JEV) 、猪布鲁菌 ( Br ucell a ) 阳性血清和 PR VgE 缺失疫苗接种 的猪免疫血清检测线均不出现红色条带, 与 P RV 标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简 单, 肉眼于 15 min 内可判定结 果; 试纸 条在室温保存 6 个月, 其特异性和 敏感性没有明 显变化; 与美国 IDEXX 和法国 LSI gE ELISA 抗体检测诊断试剂盒检测结果比较, 1 164 份猪血清的符合率均为90. 55% 。 制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点, 可用于 PR V 野毒感染的快速筛查。
猪伪狂犬病毒安徽株gE基因的克隆和序列分析
占松鹤 ，殷冬冬 ，姜安安 ，郭 浩 ，朱 良强 ，范红结 ，王桂军
（ １ ． 安徽 省动物 疫 病预 防与 控制 中心 ，合肥 ２ ３ ０ ０ ３ １ ；２ ． 安 徽农 业大 学动 物科 技 学院 ，合肥 ２ ３ ０ ０ ３ ６ ；３ ． 南京 农 业 大学 动物 科技 学 院 ，南京 ２ １ ０ ０ ０ ９ ）
中国动物传染病 学报
２ ０ １ ３ ， ２ １ （ ５ ） ： ６ ３ — ６ ７
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａＤ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ
・
简报 ・
猪伪狂犬病毒安徽株 基因的克隆和序列分析
９ ７ ． ０ ％～ ９ ９ ． ７ ％，氨基酸序列 同源性 为 ９ ７ ． ４ ％－ １ ０ ０ ． ０ ％。进化树分析表 明 ，安徽分 离株 与 目前 国 内流行 的毒株在 同一进化分 支内，
与 国外 分 离株 有 一 定差 异 。
关键词 ：猪伪狂 犬病病毒 ； 中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． １
２ １ ０ ０ ０ ０ Ｃｈ ／ ｈ ａ ）
Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｒ ａ ｂ ｉ ｅ ｓ ｖ ｉ ｕｓ ｒ （ Ｐ Ｒ Ｖ） ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｒ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ ｆ ｒ ｏ ｍ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｐ ｉ ｇ ｓ ｉ ｎ Ａｎ ｈ ｕ ｉ ａ ｒ ｅ ａ ． Ｔ ｈ ｅ 萨 ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｒ Ｖ