针对生物碱的成分检测及鉴别方法
实验二生物碱苷类的理化鉴别
3、Borntrager反应：取大黄粉末0.1g， 加1 ％NaoH溶液2ml，振摇可见碱液呈红色， 滤过，滤液加10％HCI酸 化 可见溶液转为黄 色，加入乙醚2ml振摇，醚液呈黄色,吸取 醚 层置另一试管中，另加1ml1％NaOH，振摇 可见碱液呈红色 （离子型恩醌）。
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三、作业 简述各种反应的（主
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2、黄酮苷类
材料：槐米
方法：取槐米细粉0.5g，加乙醇5ml，温浸（60℃
～70℃）约20分钟，滤过，滤液分装3支试管，1支做
空白对照，2支做以下实验。
①盐酸---镁粉反应：滤液加浓盐酸2～3滴，并漫漫加
入镁粉少许（5～6小粒），观察反应现象（有气泡生
成，呈樱桃红色）。
②三氯化铝反应：滤液加1％三氯化铝试剂1～2滴
，观察反应现象（鲜艳黄色）。
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3、恩苷类
材料：大黄 方法：①微量升华：游离蒽醌类化合物具有升华
性，（蒽醌苷无升华性，苯醌、萘醌有升华性）常压下 加热可升华而不分解。大黄酚、大黄素甲醚升华温度在 124℃左右，芦荟大黄素185℃左右，大黄酸210℃左右， 一般升华温度随酸性增强而升高。
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②取本品粉末的稀乙醇浸出液，滴于滤 纸上，再滴加稀乙醇扩散后呈黄色至淡棕 色环，置紫外灯光下观察，呈棕色至棕红 色荧光。（蒽醌衍生物→氧化蒽酚、 蒽二 酚、蒽酚、蒽酮）
实验二 生物碱、苷类的理化鉴别
一. 生物碱的理化鉴别 实验目的： 1. 掌握生药中生物碱类化学成分的理化 性质和鉴别反应； 2. 了解主要鉴别反应的反应原理；
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实验原理：
生物碱是一类存在于生物体内的含氮有 机化合物，有碱性，能与酸结合成盐。利用 能与某些化学试剂发生作用及产生的特殊气 味、颜色、沉淀、结晶等现象，从而鉴定中 药的质量与真伪。
第六节 生物碱的结构鉴定与测定
甾体生物碱的甾核多无特征性裂解，几乎所 有的主要裂解均涉及氮原子，呈现非常典型的 受氮原子支配的裂解规律。
F
＋N• H
HE
H
D
OH
F
N
H
H
D
OH
H
OH
H
浙贝甲素
H
OH
H
F
N +
m/e 112(100%)
3. 主要由RDA裂解产生特征离子：特点是
基峰为亚胺盐，该类生物碱主要由含四氢ß-
卡波林结构的吲哚类生物碱，四氢原小檗碱
小结
霍夫曼和范布朗降解反应对研究生物碱的 结构有何意义？
说明四大谱（紫外、红外、核磁共振、质 谱）在推断生物碱结构式中的意义？
霍夫曼降解对推断生物碱结构的意义
判断反应物是哪一级的胺：由于伯、仲和 叔胺引入的甲基数目不同，可通过引入的 甲基数目判断(即对CH3I的消耗量）。
判断氮原子在环外还是环内：氮原子在环 外的生物碱，只需通过1次降解（断裂一 个N-C键）即可得到三甲胺;氮原子在环内 的生物碱：需通过2-3次降解才能得到三 甲胺。
一、霍夫曼降解
大多数生物碱的氮原子形成杂环体 系，也有少数氮原子以脂肪族胺的 形式存在
因此在测定生物碱的结构时，通常 首先确定分子中氮原子的结构形式
➢ N原子是伯胺、仲胺或叔胺？ ➢ N原子在环外还是环内？
霍夫曼降解
第一步：彻底甲基化，生成季铵碱 第二步：降解（C-N键断裂）
第一步：彻底甲基化
- CH3
m/e 72 (100%)
m/e 332 (M-15)
2. 主要裂解受氮原子支配：主要裂解方式是以氮 原子为中心的-裂解，其特征是基峰为含氮基团 （亚胺盐）。该类生物碱主要有金鸡宁类、托品 类、石松碱类、甾体生物碱类等。
中成药中生物碱类成分的快速检验
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
z
生物碱类成分的理 化特性
盐酸麻黄碱类不能与 碘化铋钾试液显色， 但可用氨基酸的常用 显色剂茚三酮进行显 色。
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
z
生物碱类成分的理化特 性
z
有的生物碱类在紫外光 下，可显不同颜色的荧 光。
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
z
千柏鼻炎片（麻黄）：先在紫外光 灯（365nm）下检视参照物斑点， 定位，再喷2%茚三酮乙醇溶液， 热风吹至供试品斑点显色清晰。供 试品色谱在与参照物斑点相对应位 置的下方，应显一个红色斑点。
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
z
骨刺片（马钱子）：喷稀碘化 铋钾试液 —1% 三氯化铁乙醇 液（3：2）混合液显色：供试 品色谱中，在与参照物斑点相 对应位置的上方，应显1～2个 橙黄至橙红色的主斑点。
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
z
生物碱类成分的理 化特性
z
沉淀反应：可与碘 化铋钾、碘化汞 钾、碘-碘化钾等 试液反应，生成不 同颜色的沉淀。
益母草膏碘化铋钾沉淀反应
第四节 中成药中生物碱类成分的快速鉴别
生物碱的鉴定(精)
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四 沉淀反应
3. 沉淀反应条件 （1）通常在稀酸性水溶液中生物碱成盐状态下进行； （若在碱性条件下则试剂本身将产生沉淀） （2）在稀醇或脂溶性溶液中时，含水量>50%； （当醇含量>50%时可使沉淀溶解）
（3）沉淀试剂不易加入多量。
（如：过量的碘化汞钾可使产生的沉淀溶解）
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四 沉淀反应
4.结果的判断
碘化汞钾（Mayer试剂）HgI2×2KI 硅钨酸
3
红棕色沉淀
类白色沉淀
若加过量试剂，沉淀又被溶解
浅黄色沉淀
四 沉淀反应
1.沉淀试剂
酚酸类——苦味酸(Hager试剂) 2,4,6-三硝基苯酚黄色
复盐 —— 雷氏铵盐 (Ammoniumreineckate) 硫氰酸铬
铵试剂，生成难溶性复盐 紫红色
（1）鉴别时每种Alk需采用三种以上沉淀试剂；
（沉淀试剂对各种Alk的灵敏度不同）
（2）直接对中药酸提液进行沉淀反应，则
阳性结果——不能判定Alk的存在
阴性结果可判断无Alk存在
氨基酸、蛋白质、多糖、鞣质等 + 沉淀试剂——沉淀
6
The End
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第十章 生物碱
（Alkaloids）
1
四 沉淀反应
用途：
鉴别——试管、TLC或PPC显色剂；
提取分离——检查是否提取完全。
主要内容： 1.沉淀试剂 2.反应原理 3.反
1.沉淀试剂
金属盐类：
碘-碘化钾（Wagner）KI-I2 棕褐色沉淀
碘化铋钾（Dragendoff）BiI3×KI
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
生物碱的测定实验方案
红茂草中生物碱含量的检测一般生物碱都可以与一些特殊试剂（称为生物碱试剂，常系重金属盐类或分子量较大的复盐以及特殊无机酸如硅钨酸、磷钨酸，或有机酸如苦味酸的溶液）作用生成不溶于水的盐而沉淀。
利用这个性质可检查中红茂草中是否含有生物碱以及用以分离生物碱。
生物碱沉淀剂的种类很多，常用的有下面几种：（1）碘化汞钾试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成白色或淡黄色沉淀。
（2）碘化铋钾试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成桔红色沉淀。
（3）碘化钾碘试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成棕红色沉淀。
（4）硅钨酸试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成灰白色沉淀。
（5）磷钼酸试剂: 很灵敏，在中性或酸性溶液中与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀。
在试验时，通常选用三种以上不同的生物碱沉淀试剂进行试验，如均为正反应表示检液中可能有生物碱存在。
如须确证，则要进一步精制后，再行检验，如再次均成正反应，即可肯定有生物碱存在。
如第一次试验时就对三种沉淀剂呈负反应，即可肯定多无生物碱存在。
（6)有些生物碱能和某些试剂反应生成特殊的颜色，叫做显色反应，常用于鉴识某种生物碱。
但显色反应受生物碱纯度的影响很大，生物碱愈纯，颜色愈明显。
常用的显色剂有：①矾酸铵一浓硫酸溶液（Mandelin试剂）为1％矾酸铵的浓硫酸溶液。
如遇阿托品显红色，可待因显蓝色，士的宁显紫色到红色。
②钼酸铵一浓硫酸溶液（Frohde试剂）为1％钼酸钠或钼酸铵的浓硫酸溶液，如遇乌头碱显黄棕色，小檗碱显棕绿色，阿托品不显色。
③甲醛一浓硫酸试剂（Marquis试剂）为30％甲醛溶液0．2ml与10ml浓硫酸的混合溶液。
如遇吗啡显橙色至紫色，可待因显红色至黄棕色。
④浓硫酸如遇乌头碱显紫色、小檗碱显绿色，阿托品不显色。
⑤浓硝酸如遇小檗碱显棕红色，秋水仙碱显蓝色，咖啡碱不显色。
⑥5%没食子酸5g的没食子酸丙脂然后加乙醇到100ml，5%是质量百分浓度。
1.仪器与试剂1.1实验仪器：UV-2450紫外-分光光度计1.2试剂：红茂草生物碱对照品：实验室制备、保存，含量为20mg\ml.碘化铋钾（Dragen dorff试剂）：取碱式硝酸铋0.85 g ，加冰醋酸10 ml 与水40 ml 溶解后，即得。
生物碱——精选推荐
⽣物碱⽣物碱是⽣物界除⽣物体必须的含氮化合物（如氨基酸、蛋⽩质和B族维⽣素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原⼦上的未共享电⼦对⽽⼤多具有碱性。
⽣物碱绝⼤多数具有显著的⽣物活性，且活性是多⽅⾯的，因此中药制剂中有含有⽣物碱类成分的中药时，常选择该中药含有的⽣物碱成分作为定性定量的依据。
结构特征⽣物碱⼤多由C、H、N、O元素组成，极少数分⼦中尚含有其他元素；⼤多结构复杂，结构类型较多，主要有杂环类、⼤环类、萜类、甾类及有机胺类等。
结构中的氮原⼦有多种形式：脂氮、芳氮；季胺、叔胺、仲胺及伯胺；游离状态和与酸结合状态；还有以氮氧配位键形式存在的。
此外，结构中除烷烃、羟基取代外还有羧基、酚羟基等酸性官能团及酯键的取代。
理化性质--物理性状多数⽣物碱为结晶型固体，少数为⽆定型粉末，还有⼀些⼩分⼦⽣物碱为液体，例如槟榔碱、菸碱等；液体状的⽣物碱及个别⼩分⼦⽣物碱尚有挥发性甚⾄升华性，如⿇黄碱具有挥发性、咖啡因具有升华性等。
⼀般⽣物碱为⽆⾊或⽩⾊，但结构中具有较长共轭体系，并有助⾊团的，可显不同颜⾊。
⽣物碱结构中如有⼿性碳原⼦或为⼿性分⼦的具有旋光性，并⼤多与⽣物碱的⽣理活性有关，通常左旋体⽐右旋体⽣理活性强。
理化性质--溶解性由于⽣物碱结构复杂，⽣物碱的溶解性也是多样化。
⼤多数⽣物碱成分极性较⼩，游离状态下难溶于⽔，易溶氯仿、⼄醚、⼄醇、丙酮及苯等有机溶剂，与酸结合⽣成⽣物碱盐后⽔溶性增加，但与⽣物碱结合的酸不同，⽣成的盐⽔溶性也有差异，⼀般含氧⽆机酸及⼩分⼦有机酸的⽣物碱盐⽔溶性较⼤。
季铵型⽣物碱、有氮氧配位键的⽣物碱易溶于⽔，液体⽣物碱及⼀些⼩分⼦固体⽣物碱则既溶于⽔也可溶于有机溶剂。
含有酸性官能团或酯键的⽣物碱还可溶于⼀些碱液或热苛性碱液。
此外⼀些液体状态的⽣物碱和分⼦量较⼩的固体⽣物碱，如⿇黄碱等具有挥发性。
理化性质--沉淀反应⼤多数⽣物碱在酸性⽔溶液中可以与某些试剂⽣成不溶于⽔的复盐或分⼦复合物，这些试剂称⽣物碱沉淀试剂。
植物天然产物中的生物碱物质提取和鉴定
植物天然产物中的生物碱物质提取和鉴定植物天然产物自古以来就被人们广泛应用于食品、药品、化妆品等行业，其中包括了众多的生物碱物质。
生物碱是指一类含有氮杂环的含氮有机化合物，广泛存在于动植物中，其中以植物产生的生物碱最为丰富。
植物生物碱具有多样的生物学活性，如具有镇静、镇痛、抑菌、抗病毒、抗癌等多种作用。
因此，掌握植物天然产物中生物碱物质的提取和鉴定技术对于实现植物生物碱在不同领域的应用具有重要意义。
一、植物生物碱物质提取技术植物生物碱物质提取技术多样，如麻黄碱的提取，有沸水浸提法、超声波辅助浸提法、微波辅助浸提法、离子流动萃取法等。
而莨菪碱则采用有机溶剂提取法、加压萃取法、超声波辅助提取法、改良乙腈碘钾法等方法。
当然，不同物种的生物碱提取方法也有所不同。
无论是哪种提取方法，都要注意提取温度、提取时间、提取剂量等细节问题，从而获得高品质的生物碱物质。
二、植物生物碱物质鉴定技术植物生物碱物质鉴定是指对生物碱之间的成分进行定性、定量等检测分析的过程。
鉴定过程主要涉及分离制备、色谱分析、波谱技术等，其中常用的鉴定技术包括气相色谱-质谱联用技术、高效液相色谱技术、红外线光谱、核磁共振技术等。
鉴定过程中还需要考虑样品制备方式、不同生物碱物质之间的选择性分析问题等，以保证鉴定结果的准确性。
三、植物生物碱物质应用植物生物碱物质的应用随着科技的发展而不断扩展。
在医药领域，吗啡、阿托品、血栓通等药品中就含有大量的生物碱物质，用于镇痛、止泻、扩张血管等治疗功能。
此外，植物生物碱也广泛应用于植物保护领域，如尼古丁生物碱可用于杀虫，滴滴涕生物碱可用于防藤蔓。
而对于口腔保健、护肤、美容等行业，茶碱、辣椒素、多巴胺等天然植物生物碱也被广泛应用。
总的来说，植物天然产物中的生物碱物质由于其强大的生物学活性，成为了物种之间竞争、适应环境的重要因素之一。
随着科技的不断发展，各种生物碱物质提取和鉴定技术也正在不断地创新和完善，为生物碱物质的应用开发提供了有力的技术支持。
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针对生物碱的成分检测及鉴别方法
生物碱含量如何测定呢？
●分光光度法：通常用单波长光度法，要求干扰成分在测定波长基本无吸收。
样品分离，净化（化学法，柱色谱法，TLC,PC法等）
●化学分析法
下面森博检测给大家介绍一下生物碱类成分的鉴别：
★检品溶液的制备：
取粉碎的植物样品约2g，加蒸馏水20~30ml，并滴加数滴yansuan ，使呈酸性。
在60℃水浴上加热15分钟，过滤，滤液供作以下试验。
★生物碱类成分的鉴别：
生物碱类成分（除有少数例外）均与多种生物碱沉淀试剂在酸性溶液（水液或稀醇液）中产生沉淀反应。
操作如下：
（1）取上备酸水浸液四份（每份1 ml左右即可）,分别滴加碘-碘化钾﹑碘化汞钾试剂﹑碘化铋钾试剂﹑硅钨酸试剂。
若四者均有或大多有沉淀反应，表明该样品可能含有生物碱，再进行下项试验，进一步识别。
（2）取上备其余酸水浸液，加Na2CO3溶液呈碱性，置分液漏斗中，加入yimi 约10ml振摇，静置后分出醚层，再用yimi3ml，如前萃取，合并醚液。
将yimi液置分液漏斗中，加酸水液10ml振摇，静置分层，分出酸水液，再以酸水液5ml如前提取，合并酸水液，如此酸提液四份，分别作以下沉淀反应。
a．碘化汞钾试剂（Mayer试剂）：酸水提液滴加碘化汞钾试剂，产生白色沉淀。
b．碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂）：酸水提液滴加碘化铋钾试剂，产生桔红色或红棕色沉淀。
c．碘-碘化钾试剂（Wagner试剂）：酸水提液滴加碘-碘化钾试剂，产生棕色沉淀。
d．硅钨酸试剂：酸水提取液滴加硅钨酸试剂产生淡黄色或灰白色沉淀。
此酸水提液与以上四种试剂均（或大多）产生沉淀反应，即预示本样品含有生物碱。
（3）备注：以上（1）、（2）沉淀反应结果：沉淀的多少以“+++”，“++”，“+”表示，无沉淀产生则以“-”表示。
若（1）项试验全呈负反应，可另选几种生物碱沉淀试剂（可参考有关资料）进行试验，若仍为负反应，则可否定样品中有生物碱的存在，不必再进行（2）项试验。
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