枯草芽孢杆菌表达系统
枯草芽孢杆菌表达系统
基因工程中新型表达系统
-B.subtilis 表达系统
生物工程学院 生工1005
Diagram
宿主菌株
表达载体
存在问题
工业应用
宿主菌株—枯草芽孢杆菌
• B. subtilis属革兰氏阳性菌，细胞壁仅含肽聚糖和磷壁质。 • 非致病性的重要工业微生物，其全基因组测序已经完成。人们 对其遗传背景和生理特性的了解仅次于E.coli。 • 70年代后，随着DNA重组技术的发展，金黄色葡萄球菌抗性 标记质粒的应用，该表达系统发展更为迅速。 • 成功表达了多种外源基因，广泛应用于工业生产,发现了本系 统的许多特点，同时也暴露出本系统存在蛋白酶和质粒不稳定 等问题.
• 限制外源蛋白在枯草杆菌中高效表达的瓶颈。 • 质粒本身的不稳定性： 分离型不稳定：整个质粒丢失 结构型不稳定：质粒本身非常规重组 • 菌株特性引起的不稳定性 原噬菌体3区域中编码的基因使得重组质粒的转化 效率急剧下降，同时对外源基因有排斥性。 • 如何解决： 构建整合质粒，构建原噬菌体3区域的缺陷性菌株。
芽孢杆菌表达的外源蛋白1耐热性酶制剂如耐高温淀粉酶等淀粉加工酶系2多肽类药物如白细胞介素人表皮生长因子hegf胰岛素原等3杀虫蛋白如bt蛋白蛋白酶抑制剂植物凝集素很多都已经用于商业化生产全球最大的egf供应商北京百胜思生物工程有限公司中科院遗传研究所汤懋竑教授汤氏芽孢杆菌基因工程系统bsubtilis表达系统有着较多的优点相对于大肠杆菌表达系统研究较少存在问题也很多仍需要进行大量的实验对它的稳定性以及表达系统进行更好的了解其优势将逐步显现成为未来外源基因最具潜力的表达载体
B.subtilis表达系统有着较多的优点，相对于大肠杆菌 表达系统研究较少，存在问题也很多，仍需要进行大量的实 验对它的稳定性以及表达系统进行更好的了解 其优势将逐步显现，成为未来外源基因最具潜力的表达 载体。
枯草芽孢杆菌表达质粒的构建及其脂肪酶的表达的开题报告
枯草芽孢杆菌表达质粒的构建及其脂肪酶的表达的开题报告一、研究背景和意义随着生物技术的迅猛发展，表达系统逐渐成为制备高纯度、活性蛋白质的主要手段之一。
枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阳性细菌，又称为草枯菌，是一种常见的微生物。
它具有较高的代谢能力、能够在大气压下生长、具有广谱的载体兼容性和简单的培养条件，成为了一种常见的宿主表达系统。
同时，脂肪酶作为重要的生物催化剂，具有广泛的用途，如食品加工、制药、石油化工等领域，因此，研究枯草芽孢杆菌中脂肪酶的表达，对于开发新的生物催化剂有着重要的意义。
二、研究内容和目的本研究旨在构建一种可以高效表达脂肪酶的枯草芽孢杆菌表达质粒，通过分析不同培养条件下脂肪酶的表达情况，优化脂肪酶的表达效果，为后续生物催化研究提供基础支撑。
三、研究方法和步骤1. 构建质粒：设计脂肪酶基因的引物和连接酶切位点，并通过PCR扩增目标基因；将扩增的脂肪酶基因与表达质粒进行连接；将构建好的质粒进行酶切和测序验证。
2. 转化宿主细胞：将构建好的质粒转化到枯草芽孢杆菌中，并进行筛选得到表达脂肪酶的阳性克隆。
3. 分析脂肪酶的表达情况：通过酶活性检测、SDS-PAGE、Western blot等方法分析脂肪酶的表达情况。
4. 培养条件优化：在不同培养条件下测试脂肪酶的表达情况，如不同温度、不同基质、不同的培养时间等，通过比较脂肪酶的表达和酶活性，优化脂肪酶的表达条件。
四、预期结果和意义本研究将构建一种高效表达脂肪酶的枯草芽孢杆菌表达质粒，并优化脂肪酶的表达条件，预期在此基础上获得高效的脂肪酶表达体系。
此研究可以为生物催化领域的发展提供参考和支持，同时为生物技术研究的发展提供新的思路和方法。
蛋白分泌表达枯草芽孢杆菌来表达
枯草芽孢杆菌,学名Bacillus subtilis,是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌;与大肠杆菌不同,枯草芽孢杆菌没有外层膜,分泌的蛋白能直接释放到培养基中,是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株;那么作为一种潜能巨大的原核表达系统,它究竟强在哪些方面呢且让AtaGenix为您一一道来;枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的,收录于FDA的GRAS菌中,欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵;很多常用食品工艺中都能见到它的身影;与大肠杆菌相比,枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单,只含肽聚糖和磷壁酸,在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖内毒素等物质;该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步;同为原核生物界的明星,虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白;但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理,而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统,只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白,并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性;蛋白质组学研究表明,枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径,其中Sec 分泌途径是主要分泌途径;另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术,目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的;AtaGenix拥有的5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐上图就是真相,可满足各种大规模发酵的需求;虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限,但也有其短板,如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等;但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达,这主要得益于以下三个方面的优势：①丰富的表达宿主由于枯草芽孢杆菌没有明显的密码子偏爱性,表达外源蛋白时无需对DNA序列进行优化;在不同宿主中表达时,蛋白表达情况可能有差异;在AtaGenix拥有的多种枯草芽孢杆菌表达宿主中,1012 wild type宿主菌是最常用到的,可作为胞内和胞外表达的通用菌；168 Marburg遗传背景清楚,是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株,常用于表达外源蛋白;而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题;②给力的表达载体大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒,并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子;最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌,其结构不稳定并易丢失;现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体,可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆等遗传操作,然后转入枯草芽孢杆菌进行外源基因的表达;AtaGenix使用的pHT系列载体拥有枯草芽孢杆菌的σA-依赖性的强启动子,配以gro E启动子和lac操纵子,能够通过IPTG诱导来启动外源基因的表达;通过添加枯草芽孢杆菌中编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域,构成了能够将目标蛋白有效分泌至胞外的表达载体,如pHT43;③有效的转化手段枯草芽孢杆菌早期比较通用的转化方法是Spizizen转化法接合转化,但在枯草芽孢杆菌的生长周期中能自发形成感受态的菌株极少,并且感受态保存时间短暂;电转化法操作简单并且转化率相对较高,AtaGenix通过优化电转条件上图为AtaGenix实验室的电转仪实拍,将其用于枯草芽孢杆菌的转化,可以有效缩短转化时间并使转化阳性率达到90%以上;与大肠杆菌相比,枯草芽孢杆菌表达系统还不是很完善,相信随着对其研究的不断深入,它在今后的发展中一定会大放光彩;毕竟,相对于真核表达系统,枯草芽孢杆菌表达系统周期短、成本低、表达量较高这些优势还是很吸引人的;当然,AtaGenix也期待更多新的表达系统可以服务科研,造福人类;。
枯草芽孢杆菌表达系统及抗菌肽的表达综述-畜牧兽医论文-农学论文
枯草芽孢杆菌表达系统及抗菌肽的表达综述-畜牧兽医论文-农学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——由于抗生素药物的滥用，出现了越来越多的抗生素耐药菌株，传统抗生素替代药物的开发已成为目前研究热点。
在生物机体中分离出的抗菌肽被认为是一种最有潜力的抗菌类药物。
抗菌肽一般含有10 ~ 50 个氨基酸，整体带有2 ~ 9 个的正电荷，较大部分（30%）的疏水性氨基酸（Hancock 和Sahl,2006）。
抗菌肽具有抗菌谱广、抗菌活性高、不易产生耐药性、无毒副作用（仅少数种类具有溶血活性）、无残留与无污染等优点，符合畜产品安全生产的需要，适合在饲料生产中使用，具有作为新一代饲料添加剂的潜质（单安山等，2012）。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是广泛存在于土壤和动物胃肠道的一类革兰氏阳性菌，目前已作为重要的工业菌种被越来越多地应用于畜牧业生产中。
枯草芽孢杆菌具有易于分离培养、较清晰的遗传背景、良好的分泌性及无致病性等优点。
近几年来利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生菌成为热点研究领域。
本文对枯草芽孢杆菌表达系统及抗菌肽在其中的表达进行了简要的综述，以期为开发饲用型抗菌制剂提供参考。
1 枯草芽孢杆菌表达系统枯草芽孢杆菌属于芽孢杆菌属，是一类好氧型、内生抗逆性孢子的革兰氏阳性菌。
其细胞呈直杆状，大小为（0.8 ~ 1.2）m（1.5 ~ 4.0）m,广泛分布于土壤及腐败的有机物中。
因其培养简单快速，具有较强的分泌蛋白质的能力、非致病性及良好的发酵基础和生产技术，故枯草芽孢杆菌是目前生产各种工业用酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等的理想表达宿主，是微生物研究领域中的一种重要模式菌株。
枯草芽孢杆菌具有自己独特的生长规律：生长延滞期、对数期、稳定期、衰亡期及芽孢发育期。
其在不同的生长阶段基因表达不同，有多种不同时序性的因子来调节（Staroń 等，2009）。
饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展
饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展杨明明;陈玉林【摘要】枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌.随着现代生物技术的发展,利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生菌成为热点研究领域.枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心,论文对枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展与存在问题进行了简要综述.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)012【总页数】7页(P1-7)【关键词】枯草芽孢杆菌;表达系统;质粒载体;启动子【作者】杨明明;陈玉林【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S811.6枯草芽孢杆菌是广泛存在于土壤和动物胃肠道的一类革兰氏阳性菌,因其易于分离培养，具有较清晰的遗传背景和良好的分泌性，又无致病性等特点，已成为重要的工业菌种，被越来越多地应用于畜牧业生产中[1-3]。
近年来，随着分子生物学技术和基因工程技术的发展，利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生菌成为热点研究领域。
然而，本研究领域经过近十年的发展，虽然已有一些可用于枯草芽孢杆菌的表达系统，但仍存在如嵌合载体拷贝数低、转化方法效率低、启动子活性低、目标基因表达量低等问题，严重限制了枯草芽孢杆菌在饲用酶和益生菌工业生产中的应用和发展[4-6]。
本文将对枯草芽孢杆菌表达系统的载体和启动子元件作一简要综述，以期为饲用枯草芽孢杆菌的表达系统研究和应用提供基础材料。
1 枯草芽孢杆菌的表达系统概述枯草芽孢杆菌作为研究革兰氏阳性菌的模式菌，具有遗传和生理生化背景清晰、蛋白分泌性好和非致病性的特点，被认为是生物安全级别的微生物，目前作为重要的益生菌和饲用酶生产菌种，在饲料工业中被广泛利用[1-2]。
随着现代DNA重组技术的发展和枯草芽孢杆菌全基因组DNA测序的完成，枯草芽孢杆菌基因工程得到了进一步的发展。
枯草芽孢杆菌 原核表达
枯草芽孢杆菌原核表达枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢形成革兰氏阳性细菌，属于原核生物。
它具有广泛的应用价值，尤其在原核表达领域中发挥着重要作用。
枯草芽孢杆菌的原核表达是指利用该菌株进行蛋白质的表达和产生。
原核表达是一种常用的表达系统，用于生产大量蛋白质。
枯草芽孢杆菌作为一种优良的表达宿主，具有以下几个优点：枯草芽孢杆菌具有较高的生长速度和较简单的培养条件。
它可以在常见的培养基上生长，并且生长周期相对较短，可以在较短的时间内获得较高的细胞密度。
这为大规模的蛋白质表达提供了便利。
枯草芽孢杆菌的遗传工具相对完善，具有多种可供选择的表达载体和表达系统。
研究人员可以选择适合自己实验需求的表达载体，并通过基因工程手段将目标基因插入到载体中，实现目标蛋白的表达。
此外，枯草芽孢杆菌还具有多种启动子和信号肽，可以根据实验需要选择适合的启动子和信号肽，进一步提高目标蛋白的表达水平。
枯草芽孢杆菌的表达产物往往具有较高的稳定性和纯度。
由于其细胞壁较坚韧，可以保护内部表达产物不受外界环境的影响。
此外，枯草芽孢杆菌的分泌系统也可以将目标蛋白直接分泌到培养基中，减少了目标蛋白的提取和纯化步骤，从而提高了蛋白质的纯度。
枯草芽孢杆菌的原核表达系统还可以进行多种表达策略的组合应用。
例如，可以利用枯草芽孢杆菌同时表达多个基因，实现多蛋白质的协同表达。
此外，还可以通过调控表达载体中的启动子和信号肽的强度，实现目标蛋白在不同阶段的表达，从而满足不同实验需求。
枯草芽孢杆菌的原核表达系统具有许多优点，使其成为广泛应用于蛋白质表达和生产的重要宿主。
随着基因工程和蛋白质工程的发展，枯草芽孢杆菌原核表达系统还将进一步完善和优化，为科研人员和工业生产提供更多的选择和便利。
蛋白分泌表达,枯草芽孢杆菌来表达
蛋白分泌表达,枯草芽孢杆菌来表达Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。
与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。
那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。
枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。
很多常用食品工艺中都能见到它的身影。
与大肠杆菌相比，枯草芽孢杆菌的细胞壁组成简单，只含肽聚糖和磷壁酸，在分泌的蛋白质产品中不会混杂有类似革兰氏阴性菌细胞壁成分中的热源性脂多糖（内毒素）等物质。
该表达系统用于药用蛋白的表达纯化时还可省掉去除内毒素这一步。
同为原核生物界的明星，虽然大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都只需短时间就可表达和积累大量目标蛋白。
但大肠杆菌在后续发酵工艺中需要对收集的菌体进行破胞处理，而枯草芽孢杆菌得益于其本身所拥有的一套高效分泌信号肽及分子伴侣系统，只要简单处理发酵上清就能得到较纯的蛋白，并且表达的蛋白在多数情况下具有天然构象和生物活性。
蛋白质组学研究表明，枯草芽孢杆菌中至少有四种蛋白质分泌途径，其中Sec 分泌途径是主要分泌途径。
另外枯草芽孢杆菌拥有良好的发酵生产技术，目前大部分商业化的蛋白水解酶和淀粉酶都是由其发酵得到的。
AtaGenix拥有的 5 L、20 L、150 L及其他型号的发酵罐（上图就是真相），可满足各种大规模发酵的需求。
虽然枯草芽孢杆菌表达外源蛋白潜力无限，但也有其短板，如自身胞外蛋白酶对表达产物的降解、遗传操作相对困难、外源蛋白有时得不到有效的表达等等。
但AtaGenix却能成功避免以上问题使外源目标蛋白在枯草芽孢杆菌表达系统中有效表达，这主要得益于以下三个方面的优势：①丰富的表达宿主由于枯草芽孢杆菌没有明显的密码子偏爱性，表达外源蛋白时无需对DNA序列进行优化。
枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展
枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展余小霞;田健;刘晓青;伍宁丰【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】枯草芽孢杆菌作为一种革兰氏阳性细菌，由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础及生产技术，是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白的理想宿主，成为原核表达系统中的一种重要的模式菌株。
而实现外源蛋白的高效表达的关键因素之一是使用强并可控制的启动子。
目前，枯草芽孢杆菌中常用的启动子为组成型、诱导物诱导型、时期特异性及自诱导型。
详细介绍枯草芽孢杆菌表达系统以及其常用启动子的优缺点，并对克隆新的启动子的方法做了总结，旨为完善枯草表达系统和工业生产外源蛋白奠定基础。
%As a Gram-positive bacteria, Bacillus subtilis is an attractive host for the production of heterologous secretory proteins for several reasons:it is non-pathogenic and the capable of secreting functional extracellular proteins directly tothe culture medium, a great deal of vital information concerning large scale fermentation and production technology. One of the key factors for achieving high-level expression of heterologous proteins is the use of a strong and control promoter. In present, the promoters of Bacillus subtilis can be classified into three categories:constitutive promoters, inducer-specific promoters and autoinducible promoters. This paper described the advantages and disadvantages of Bacillus subtilis expression system and the classification of promoters. At the same time, we summarized themethods of the amplification of new promoters, which provided a foundation for improving Bacillus subtilis expression systems and the industrial production of heterologous proteins .【总页数】10页(P35-44)【作者】余小霞;田健;刘晓青;伍宁丰【作者单位】中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081;中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081;中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081;中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081【正文语种】中文【相关文献】1.食品级枯草芽孢杆菌表达系统的最新研究进展 [J], 王金斌;陈大超;李文;蒋玮;李鹏;张倩倩;唐雪明2.枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子的研究进展 [J], 熊海涛;韦宇拓3.饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 [J], 杨明明;陈玉林4.枯草芽孢杆菌表达系统研究进展 [J], 马平英;罗雯;詹怡昕;吴楚楚;熊雨顺;许小群;陈梅5.枯草芽孢杆菌信号肽依赖分泌表达系统研究进展 [J], 段春燕;井明博;宋曦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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-B.subtilis 表达系统
生物工程学院 生工1005
Diagram
宿主菌株
表达载体
存在问题
工业应用
宿主菌株—枯草芽孢杆菌
• B. subtilis属革兰氏阳性菌，细胞壁仅含肽聚糖和磷壁质。 • 非致病性的重要工业微生物，其全基因组测序已经完成。人们 对其遗传背景和生理特性的了解仅次于E.coli。 • 70年代后，随着DNA重组技术的发展，金黄色葡萄球菌抗性 标记质粒的应用，该表达系统发展更为迅速。 • 成功表达了多种外源基因，广泛应用于工业生产,发现了本系 统的许多特点，同时也暴露出本系统存在蛋白酶和质粒不稳定 等问题.
芽孢杆菌表达的外源蛋白
1、耐热性酶制剂 酶系 如耐高温α-淀粉酶等淀粉加工
2、多肽类药物 如白细胞介素、人表皮生长因子 （hEGF）、胰岛素原等 3、杀虫蛋白 集素 如Bt蛋白、蛋白酶抑制剂、植物凝
很多都已经用于商业化生产 全球最大的EGF供应商—北京百胜思生物工程有限公司 中科院遗传研究所 汤懋竑教授 “汤氏芽孢杆菌基因工程系 统”
优点：相对分子质量小，有唯一的酶切位点，较高的拷贝数，
适合筛选的抗性标记
以天然质粒为基础构建：双标记质粒，穿梭质粒，探针质粒等
2、整合质粒载体 在大肠杆菌质粒载体基础上构建，含有芽孢杆菌的抗
性标记以及待整合目的基因，能通过同源重组整合到宿
主染色体上。
3、噬菌体载体
例如φ105噬菌体：温和性噬菌体、应用较多 SPβ噬菌体：原噬菌体，B .subtilis 168菌株及 其衍生菌株均带有此噬菌体。 sppl噬菌体：毒性噬菌体。
表达载体
• 结构
a. 多σ因子：迄今，在枯草杆菌中发现了10多个σ因子。
多σ因子与营养体的繁殖和芽孢形成有关，也与重叠启动 子、非重叠启动子有关。
•种类
1、自主复制质粒载体
芽孢杆菌中的质粒一般不带抗性标记，只有极少数带抗性标记，
如pBC16。 带有抗性标记的载体质粒多来自于其他革兰氏阳性菌，特别是 金黄色葡萄球菌，例如pUB110，pC194，pE194等。
优点：
• 非致病微生物，安全性高，可用于食品、药物等工业 生产。 • 能直接将分泌蛋白释放到培养基中，利于分离纯化， 优于大肠杆菌。 • 具有高效的分泌目的蛋白的能力，其分泌的真核来源 的重组蛋白多数情况下都具有天然构象和生物活性。 • 生长迅速，培养条件简单，遗传背景了解清晰，而且 有较好的工业生产基础。
B.subtilis表达系统有着较多的优点，相对于大肠杆菌 表达系统研究较少，存在问题也很多，仍需要进行大量的实 验对它的稳定性以及表达系统进行更好的了解 其优势将逐步显现，成为未来外源基因最具潜力的表达 载体。
参考文献： 《枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展》 《枯草芽孢杆菌新型表达系统和遗传操作体系的建立和应用》 《枯草芽孢杆菌的研究与应用》
• 限制外源蛋白在枯草杆菌中高效表达的瓶颈。 • 质粒本身的不稳定性： 分离型不稳定：整个质粒丢失 结构型不稳定：质粒本身非常规重组 • 菌株特性引起的不稳定性 原噬菌体3区域中编码的基因使得重组质粒的转化 效率急剧下降，同时对外源基因有排斥性。 • 如何解决： 构建整合质粒，构建原噬菌体3区域的缺陷性菌株。
该表达系统存在的缺点：
• 分泌各种蛋白酶,会造成外源蛋白降解,有时甚至得 不到目标蛋白。
• 存在限制和修饰系统;质粒不稳定。 • 外源蛋白对细胞有毒时得不到有效的表达，有些 外源基因表达产物分泌到培养基中会影响细胞的 生长。 • 能自发形成感受态的菌株极少,感受态持续时间短 暂,分子克隆效率低
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
载体质粒的不稳定性