林蛙卵粗提物改善迟发型变态反应性肝损伤
林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展
林蛙皮、卵活性成分提取方法及药理作用的研究进展刘洋;赵鹤鹏;张扬【摘要】林蛙皮、卵中含有多种对人体有益的活性成分,对其深入研究有利于林蛙资源的综合利用.本文对林蛙皮、卵的主要活性成分提取方法及药理作用进行综述,为其在药品、保健品、化妆品等大健康领域的开发利用提供参考.【期刊名称】《吉林化工学院学报》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P15-20)【关键词】林蛙皮;林蛙卵;活性成分;提取方法;药理作用【作者】刘洋;赵鹤鹏;张扬【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院党政办公室,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022【正文语种】中文【中图分类】R931.6中国林蛙(Rana chensinensis)又称哈士蟆，主要生长在我国吉林、辽宁和黑龙江三省，现已形成规模化养殖，是一种集食药用于一身的经济蛙种[1,2].林蛙油是雌性林蛙的干燥输卵管，具有补肾益精、养阴润肺等功效，是一种补益类传统中药材，1985年收录中国药典至今[3].由于林蛙油市场价格昂贵，多数养殖户是为了获取林蛙油，在取油同时，多数林蛙皮和卵作为废物白白丢弃.近年来，研究人员发现林蛙皮、卵同样富含多种活性成分，具有广泛的药理作用，这引起了广泛关注，对其研究也逐渐深入.本文综述了林蛙皮和卵的主要成分和药理作用，为进一步开发提供参考.1 活性成分提取方法1.1 蛋白郑淼等[4]利用羟脯氨酸法提取林蛙皮中胶原蛋白，在温度37 ℃，胃蛋白酶30 mg条件下浸提72 h后，经盐析、透析和真空冷冻干燥，得林蛙皮胶原蛋白，收率15%，蛋白含量54.1%.吕玲玲等[5]利用木瓜蛋白酶提取林蛙皮中胶原蛋白，在pH 5.5，料液比120，加酶量1%，室温条件下浸提36 h，林蛙皮胶原蛋白提取率为 24.71%，纯度72.03%.相比于羟脯氨酸法，木瓜蛋白酶辅助提取法的得率和纯度都有所提高，可作为林蛙皮胶原蛋白的制备方法.李永政等[6]对东北林蛙卵蛋白的酶解工艺和抗疲劳活性进行了研究.结果表明，在pH 8.0，温度55 ℃，料液比 15.5(m/V)，加酶量3 000 U/g条件下提取5 h，所得粗产品中蛋白质的含量为80.07%.在抗疲劳试验中，林蛙卵酶解物可显著延长小鼠负重游泳时间、降低血乳酸含量，显示良好的抗疲劳作用.季晓枫等[7]应用响应面法优化酶法制备林蛙卵蛋白.研究表明，在pH 8.8，温度58 ℃，料液比15，加酶量1.9%的条件下浸提4 h，林蛙卵蛋白提取率为9.63%.陶凤云等[8]对林蛙卵蛋白进行分离纯化，得到一种具有选择性细胞毒性的小分子核糖核酸酶，为肿瘤的治疗提供了新的候选蛋白分子.1.2 多糖Wang等[9]采用响应面法优化提取林蛙皮多糖，在温度100 ℃，料液比160，提取时间4.96 h，多糖得率2.03 0.14%，经分离纯化得到RCSP Ⅱ，该组分具有较强的体外抗氧化活性.酶辅助提取是是制备天然多糖的重要手段之一，赵玉红等[10]应用超声波-双酶法提取林蛙皮多糖，在料液比140(g/mL)，功率600 W条件下提取25 min，多糖得率1.18%.在此基础上，在pH 9.0，温度45 ℃，碱性蛋白酶添加量2.3%，胰蛋白酶添加量2.8%条件下酶解4 h，多糖得率升至2.286%.陈大勇等[11]应用木瓜蛋白酶从林蛙卵中提取多糖，并对其抗氧化活性进行研究.在pH 6.0，料液比120(g/mL)，酶添加量70 mg/g的条件下浸提2.5 h，林蛙卵多糖提取率2.67%，该条件下得出的林蛙卵多糖对DPPH自由基的半数清除率为1.81 mg/mL，说明其具有明显的抗氧化作用.1.3 生物活性肽生物活性肽是一类分子量小于6 000 Da，且具有特殊生理和生化功能的肽类化合物[12].许多来自两栖动物皮肤的抗菌肽已被分离、纯化并进行了结构表征，为新型药物的研究提供了思路.林蛙皮肤分泌物中含有大量的生物活性肽，Zhang等[13]从林蛙皮中分别得到了酸法提取物(ARPs)和酶法提取物(ERPs)，通过UV、FT-IR、HGLC、MS、MTS和流式细胞技术等方法对两者的理化性质进行了鉴定，并对其促增殖和抗凋亡作用进行了研究.结果表明，ARPs和ERPs的提取率分别为0.65%和0.52%；ARPs(1.6 g/L)和ERPs(0.8 g/L)抗HACAT细胞的增殖率分别为1.6倍(P<0.001)和2.1倍(P<0.001)；在UVB刺激下，细胞凋亡率分别下降2.6倍(P<0.001)和3.4倍 (P<0.001).杨闯等[14]比较了甲醇提取法、超声波辅助酶解法和超声波提取法制备林蛙皮生物活性肽，并对其抗菌活性进行研究.结果表明，超声波辅助酶解法提取效果较好，在加酶量为1.5 mg/g，温度40 ℃，提取时间4 h，提取率7.51%，且抗菌活性较高.Shang等[15]对来自林蛙皮肤分泌物的一种富含精氨酸/组氨酸的抗菌肽-香豆素缀合物进行了制备和的抗菌活性研究.结果表明，该缀合物具有选择性的抗菌作用，对革兰氏阳性菌有抑制作用，对阴性菌活性较差，安全性较高，对人红细胞无溶血作用.在此基础上，Shang等[16]研探索了林蛙蛋白肽的抗菌构效关系，发现：用5～6个赖氨酸取代α-螺旋亲水表面的中性和非极性氨基酸残基，提高其抗菌活性；用D-赖氨酸代替L-赖氨酸时，在保持净电荷和平均疏水性值的同时，对其抗菌活性影响较小，但能显著降低溶血活性. 1.4 透明质酸透明质酸是一种酸性粘多糖，对维持机体水分、保持皮肤水分有良好的效果.袁海恋等[17]利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法优化双酶水解法制备林蛙皮透明质酸的方法，在温度为50 ℃，加酶量55 000 U/g的条件下酶解14 h，透明质酸平均提取得率达27.683 9 mg/g.1.5 林蛙卵油林蛙卵油能抑制自由基的产生，降低高脂血症血清胆固醇的含量和过氧化脂质含量，能够有效预防心血管疾病[18].金莉莉等[19]将林蛙卵经石油醚和超临界CO2流体萃取制备林蛙卵油，并分析其中脂肪酸成分，研究表明，林蛙卵油中主要富含十六碳烯酸、亚油酸、油酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸等.赵超等[20]应用微波辅助法提取林蛙卵油.将林蛙卵浸泡3.33 h后，在料液比19.82(g/mL)，微波功率600 W条件下微波30 min，提取率为20±0.67%.1.6 氨基酸李妍妍等[1]采用高效液相色谱法测定了林蛙皮、卵中氨基酸的种类与含量见表1.结果表明，林蛙皮中氨基酸总量高于林蛙卵，但林蛙卵中必需氨基酸含量高于林蛙皮.表1 林蛙皮、卵氨基酸含量(单位:g/100 g，色氨酸单位:mg/100 g)氨基酸AspThr∗SerGluProGlyAlaCysVal∗Met∗ Ile∗林蛙皮6.473.024.2810.395.9210.946.301.622.691.38 2.31林蛙卵 5.563.724.687.92 1.732.042.381.122.441.393.47氨基酸Leu∗TyrPhe∗His Lys∗ArgTrp∗氨基酸总量必需氨基酸量林蛙皮4.942.222.61 1.404.035.0430.4 75.5921.01林蛙卵5.093.432.16 2.153.563.5287.2 56.4521.922 药理作用2.1 蛋白林蛙卵蛋白具有抗疲劳和调节免疫的作用.张肃[21]等对东北林蛙卵蛋白的抗疲劳活性进行了研究.结果表明，东北林蛙卵蛋白对小鼠体重增长无显著影响，可降低运动后小鼠血乳酸含量，增加小鼠负重游泳时间及肝糖原含量.这表明，东北林蛙卵蛋白具有增加小鼠抗疲劳的活性作用.李永政[22]等分别口服给予小鼠林蛙卵蛋白和其酶解物，测定小鼠的负重游泳时间、肝糖原及血乳酸含量.结果表明，两者均能显著延长小鼠负重游泳时间，增加肝糖原含量，且酶解物在延缓疲劳和加速消除疲劳方面作用效果更明显，这说明，林蛙卵蛋白及其酶解物均有明显的抗疲劳功效，且酶解物作用更强.Shen等[23]研究了中国林蛙在冬眠前输卵管中c-kit受体的免疫反应，从林蛙卵中提取总蛋白进行Westernblotting分析.结果表明，在冬眠前期林蛙卵组织中检测到c-kit受体和PCNA的阳性信号，这说明c-kit受体可能在林蛙卵中起到免疫调节作用.2.2 多糖多糖提取物具有不同程度的清除超氧阴离子、羟基自由基和DPPH自由基的能力，由此判断林蛙皮具有一定的抗氧化功效[24].Wang等[25]对从中国林蛙皮中分离得到的多糖组分RCSPⅡ进行了表征及体内外抗氧化活性研究.结果表明，RCSPⅡ由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成，摩尔比为87.822.771.54，分子量为12.8 kDa.体外抗氧化活性测定表明，在2.5 g/L的浓度下，RCSPⅡ对DPPH自由基的清除率为75.2%；在4.0 g/L时，对亚铁离子的鳌和率为85.1%.体内抗氧化结果进一步表明，RCSPⅡ能提高抗氧化酶的活性，降低丙二醛的含量，提高D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝脏和血清的抗氧化能力.2.3 生物活性肽生物活性肽具有一定程度的抗肿瘤，调节免疫和促进细胞增值作用.Temporin-1CEa是从林蛙皮分泌物中分离得到的一种抗菌肽，Wang等[26]采用MTT法、电镜观察、荧光染色和流式细胞术分析研究了Timein-1CEa对人乳腺癌细胞株Bcap-37的细胞毒性.MTT分析表明，Timein-1CEa暴露1 h可导致细胞迅速死亡，但对其是否存在浓度依赖有待进一步研究.电镜观察提示，Timein-1CEa暴露可导致Bcap-37细胞发生显著的形态学改变.荧光成像和流式细胞仪分析表明，Timein-1CEa具有以诱导细胞表面磷脂酰丝氨酸暴露为特征的膜破坏特性、质膜透性和快速跨膜电位去极化.这表明，Timein-1CEa通过膜破坏和线粒体参与的胞内机制，在Bcap-37细胞中触发了快速的细胞毒性.该发现有利于进一步研究抗菌肽在哺乳动物癌细胞中的作用机制.Wang等[27]进一步探讨了Timein-1CEa对两种人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的快速细胞毒作用机制.结果表明，Timein-1CEa暴露1 h，可导致细胞毒性，并与剂量成依赖性.电镜形态学观察表明，Timein-1CEa暴露1 h后，MDA-MB-231和MCF-7细胞均发生了明显的形态学改变.Timein-1CEa的膜破坏特性进一步表现为磷脂酰丝氨酸在细胞表面的暴露，提高质膜透性和快速去极化跨膜电位.此外，Timein-1CEa还可诱发细胞内钙离子和活性氧升高以及线粒体膜电位的紊乱.这说明，Timein-1CEa可快速引发乳腺癌细胞死亡，这种快速的细胞毒作用可能是由膜破坏和细胞内钙机制共同介导的. 巢警殳[28]等研究了林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能的影响，将小鼠随机分为阳性对照组、空白对照组和低、中、高剂量组.结果表明，林蛙皮生物活性肽可明显促进Con A 诱导的淋巴细胞增值，增加抗体生成细胞数量，增强血清溶血素抗体效价水平，这说明林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用.李俊峰[29]等研究发现，林蛙卵中含有的孕酮和雌二醇也具有调节人体内分泌，促进身体的生长发育的功能.张鑫等[30]研究了林蛙皮多肽对HaCaT 细胞增殖及其凋亡的影响.结果显示，在50 mg/mL～800 mg/mL浓度范围内，随着浓度升高，林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖作用效果增强；当浓度为800 mg/mL时，细胞凋亡率比正常对照细胞降低了(2.7±0.3)%(P<0.01)，说明林蛙皮活性多肽对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用，并对其凋亡有显著的抑制作用.Zhang等[31]制备了含有林蛙皮肽(RCSPs)的聚L-丙交酯(PLLA)/醇溶蛋白(Zein)纳米纤维垫.在电纺纳米纤维中加入RCSPs能显著改善材料的力学性能.人包皮成纤维细胞的细胞通透性实验结果表明，PLLA/Zein-RCSPs纳米纤维垫的细胞生长明显高于PLLA/Zein纳米纤维垫.结果表明，含RCSPs的纳米纤维垫有望成为创面敷料的候选材料.2.4 林蛙卵油彭飞[32]等采用离子对反相液相色谱-电化学检测法，以士的宁为致惊厥剂，评价林蛙卵油抗惊厥活性的时效和量效关系.结果显示，在灌胃给药30 min时其抗惊厥作用效果最好，且效果与剂量成良好的线性关系.佟岩[33]等对林蛙卵油的抗焦虑活性进行了研究.结果表明，林蛙卵油能显著延长大鼠在十字迷路开放通路中的连续停留时间，增加大鼠进入开放通路次数，而对封闭通路连续停留时间和进入封闭通路次数无明显影响，小鼠站立数明显减少而爬梯数无显著差异.苑春莉等[34]探究林蛙卵油对成年大鼠妇科内分泌激素水平的影响.结果显示，模型组子宫及卵巢重量明显低于正常组(P<0.001)，而林蛙卵油各剂量均可明显增加子宫及卵巢的重量(P<0.001)，高剂量组增加的最为明显；模型组卵巢体重比明显低于正常组(P<0.001)，而林蛙卵油各剂量均可明显增加卵巢体重比(P<0.001)，高剂量组增加的最为明显.这说明林蛙卵油可以发挥保护卵巢的作用，进而调节妇科内分泌功能.尹云厚等[35]探究了东北林蛙卵油脂肪酸的体外抗氧化作用和保湿作用.抗氧化试验结果表明林蛙卵油脂肪酸对DPPH自由基清除作用的IC50为5.08 mg/m L，最大清除率为95.91%，对ABTS+自由基清除作用的IC50为9.84 mg/mL，最大清除率为98.58，;对羟自由基清除作用的IC50为7.87 mg/mL.其还原力也随着林蛙卵油脂肪酸的溶液浓度的增加而增加.保湿性试验结果为0～12 h，林蛙卵油脂肪酸保湿性极显著低于透明质酸、甘油和1，2-丙二醇,而24 h时,其保湿性与甘油和1，2-丙二醇差异不显著，说明东北林蛙卵油脂肪酸具有持久的保湿效果.根据这两个性能，可以进一步将其应用到抗氧化和保湿型化妆品当中.沈雪等[36]研究表明林蛙油口服液在D-半乳糖诱导的氧化损伤模型小鼠体内具有良好的抗氧化的作用.2.5 核糖核酸酶林蛙卵核糖核酸酶具有抗肿瘤功效.赵丹玉等[37]从林蛙卵中提取RNase,并用酶谱分析进行鉴定，结果表明，林蛙蛙卵RNase对鼠S180肿瘤细胞株生长和淋巴细胞转化具有较强的抑制作用，并随着林蛙卵RNase浓度的增加，对S180肿瘤细胞生长率和淋巴细胞转化率的抑制作用随之增加，呈现剂量依赖性.说明林蛙卵RNase对S180肿瘤细胞的生长率和淋巴细胞转化率具有明显的抑制作用.2.6 黑色素吴世玉等[38]对林蛙卵黑色素的抗氧化活性实验表示.林蛙卵黑色素在紫外区域都有强烈的吸收，并且伴随波长的逐渐增加，吸光度呈现下降的趋势；元素分析表明林蛙卵黑色素的S∶N为0.05；红外光谱表明林蛙卵黑色素含有OH、NH2、C=C、C=N、C=O、C-N和苯环.体外抗氧化试验表明林蛙卵黑色素对DPPH自由基的IC50为0.404 mg/mL，对超氧阴离子的IC50为1.250 mg/mL，对羟自由基的IC50为0.662 mg/mL，这说明林蛙卵黑色素是真黑色素,并且具有较强的抗氧化活性.3 结论林蛙作为集食用药用为一身的经济动物，在我国已经显现出越来越大的价值.东北地区林蛙产量逐年递增，除了林蛙油外，林蛙皮、卵等同样具有很高的营养价值，然而由于深入开发不够，大多被白白浪费掉，不能发挥其最大价值.相信在不久的将来，随着对林蛙全身活性成分的深入探究，林蛙皮、卵的价值会被充分的利用，相信二者的同样具有巨大的开发前景.【相关文献】[1] 李妍妍,郑卫星,王昕,等.林蛙营养成分的多元分析[J].食品科学,2007,28(12):472-475.[2] 沈雪,崔浩,杨秀东,等.林蛙油水溶性蛋白质的制备与相对分子量测定[J].吉林化工学院学报,2016,33(9):11-14.[3] Zhang Y,Liu Y,Zhu K,et al.Acute Toxicity,Antioxidant,and Antifatigue Activities of Protein-Rich Extract from Oviductus ranae 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林蛙皮生物活性肽对小鼠免疫功能的影响
林蛙皮生物活性肽对小鼠免疫功能的影响周涌杜鹃（吉林医药学院公共卫生学院，吉林吉林132013）〔摘要〕目的探讨林蛙皮生物活性肽对小鼠免疫功能的影响。
方法将雄性昆明小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和林蛙皮活性肽低、中、高剂量组，每组10只；连续灌胃给药28d 后，通过NK 细胞活性、SRBC 诱导的迟发性变态反应和碳廓清实验，评价林蛙皮活性肽对小鼠的免疫调节作用。
结果林蛙皮生物活性肽中剂量组和高剂量组可明显增强小鼠NK 细胞活性（P ＜0.05或P ＜0.01）；高剂量组可增强羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应（P ＜0.01）；高、中和低剂量组均可提高小鼠碳廓清吞噬指数（P ＜0.05或P ＜0.01）。
结论在一定剂量范围内，林蛙皮活性肽对小鼠的细胞免疫功能（SRBC 诱导的DTH ）、单核-巨噬细胞吞噬能力（碳廓清实验）和NK 细胞活性均有明显的增强作用，可提升小鼠的非特异性和特异性免疫功能。
〔关键词〕林蛙皮；生物活性肽；免疫功能〔中图分类号〕R282.74〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）10-2107-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.10.051第一作者：周涌（1963-），男，教授，硕士生导师，主要从事预防医学的研究。
生物活性肽是重要的生物活性物质，在自然界中广泛存在，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老以及免疫调节等多种生理功能〔1 3〕。
林蛙皮是林蛙的副产品，价格低廉，含有丰富的蛋白质、微量元素以及维生素，林蛙皮生物活性肽（bio-active peptides from the skin of rana chensinensis ，BPSRC ）含量高达10%以上〔4，5〕。
本实验拟研究BPSRC 对小鼠免疫功能的影响，为林蛙皮多肽功能性食品的开发利用提供实验依据。
1材料与方法1.1仪器和试剂实验用RE-52AA /RE-52A 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、EN-500A 型高速中药粉碎机（长沙市岳麓区中南制药机械厂）、LGJ-50F 型方仓冷冻干燥机（北京松源华兴科技有限公司）和WD-9417A 型酶标仪（北京六一仪器厂）。
林蛙产品功效解析 (林蛙)
1、物种由来在几亿年前，地壳稳定后，原始海洋形成，地球生命体出现。
地球有了生物菌群，其中水中不同菌群经过单细胞到多细胞，从无脊椎到有脊椎形成有前肢或后肢鱼型壮体，后经过不断分化和进化而形成林蛙具有四肢两栖习性等特征。
中国林蛙与东北林蛙系同物异名。
在动物分类学属脊索动物门，两栖纲、无尾目、蛙科。
1875年，PereDavid提出将林蛙作为一个独立种。
1997年谢锋对中国林蛙不同亚种，即不同居群的DNA指纹分析结果表明：从遗传方面有某些差异。
于是1999年谢锋根据中国林蛙不同亚种的形态、生态、遗传和生理的差异，提出中国林蛙的东北居群，其分类阶元应为有效物种级——即东北林蛙。
1998年，朱志明经对黑龙江、吉林、辽宁及内蒙和河北部分地区多个亚种近几百种子代品系林蛙进行从生物体外观形态并对其细胞基因比较，目前，发现有9个品系林蛙细胞核均有同等染色体m，染色体有的6对，有的7对，其细胞核型C带、银染与东北林蛙未有明显差异。
为此，朱志明指出：“这些地区分布的一些林蛙应为东北林蛙一个共同母本物种其子代系分化而来”。
该物种以吉林区域分布居多，黑龙江、辽宁、内蒙及河北承德区域均有少量分布。
朱志明认为：“在我国部分地区所分布的其中9个林蛙品种从其形态、习性和染色体及遗传基因方面均与东北林蛙无较大差异，此品系为同一母本物种级子代分化而来”。
所以，把具有明显东北林蛙特征分布在东北区域的林蛙和东北林蛙分化的物种应统划为“中国林蛙”亚种较为贴切规范。
因中国东北林蛙所分化的同类物种（分支）其习性和基因与母本体均有共性。
在与中国吉林具有同样的山水、气候的邻近省份，（辽宁、内蒙、河北、俄罗斯、朝鲜）其部分地区有它分化的物种也就必然存在。
2、食蛙起源在我国食届推崇林蛙的历史可追溯到满族居民入关之前，当时满族人就已学会了提取林蛙油。
清代杨同桂著的《辽海丛书·沈故篇》，其卷三中有“蛤蟆形似田鸡，腹有油如粉条，有子如鲜蟹黄，取以作羹极肥美，然惟兴京一带有之，满洲人用祭祖”的描述。
东北林蛙卵蛋白抗疲劳活性研究
东北林蛙卵蛋白抗疲劳活性研究张肃;胡春晓;金莉莉;王秋雨;牟藤【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2010(032)001【摘要】东北林蛙卵蛋白含量丰富,是林蛙产业中尚待开发利用的副产品.本试验研究了东北林蛙卵蛋白的抗疲劳活性.取雄性昆明小鼠,体重18～22g,随机分为审白对照组、林蛙卵蛋白(低、中、高)剂量3组,连续灌胃35d,分别测馈小鼠的体重变化情况、负重游泳力竭时间、肝糖原和血乳酸的含量.结果表明.东北林蛙卵蛋白对小鼠体重增长无显著影响,可降低运动后小鼠血乳酸含量,增加小鼠负重游泳时间及肝糖原含量.研究显示,东北林蛙卵蛋白具有增加小鼠抗疲劳的活性作用.【总页数】3页(P7-9)【作者】张肃;胡春晓;金莉莉;王秋雨;牟藤【作者单位】沈阳体育学院冰雪项目重点实验室,辽宁,沈阳,110102;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036;辽宁大学生命科学院,辽宁,沈阳,110036【正文语种】中文【中图分类】S966.3+5【相关文献】1.东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性 [J], 李永政;胡春晓;王铮;金莉莉;王秋雨2.弱氦-氖激光对东北林蛙卵孵化和蝌蚪生长速度的影响 [J], 何晓燕;张庆增;乔淑芬;赵玉敏;杨丽娟3.东北林蛙卵活性成分及药理活性研究进展∗ [J], 李梁;范宁;刘少华;李慧萍;卫功庆4.东北林蛙(Rana dybowskii)卵油脂肪酸体外抗氧化性和保湿性研究 [J], 尹云厚;陈宁宁;常雷;岑欣桉;卫功庆5.东北林蛙卵油脂肪酸化妆品的研制 [J], 陈宁宁;卫功庆;常雷;岑欣桉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
林蛙保健功能及作用
中国林蛙的功能性作用摘要：林蛙是主要分布在我国东北山区的重要药用经济动物。
雌性林蛙的输卵管俗称“蛤士蟆油” 既林蛙油，是强壮滋补佳品。
林蛙油是我国传统的名贵滋补品，具有抗氧化、抗衰老、提高机体免疫力等多种保健功能。
林蛙肉含有丰富的营养, 尤其人体必需氨基酸种类齐全，含量高，属低脂肪、低胆固醇的肉类。
现今，对林蛙油的开发利用取得了巨大的进展。
市售的林蛙油产品主要有林蛙油软胶囊、林蛙油乳及林蛙油口服液、林蛙油罐头、林蛙油硬胶囊、林蛙油凉果、林蛙油软胶囊和林蛙油冲剂等。
林蛙皮主是用于提取林蛙皮抗菌肽，有企业使用林蛙皮抗菌肽生产了林蛙皮美容胶囊。
林蛙肉或是林蛙骨主要作为食品食用。
关键词：林蛙；功能性；林蛙油、林蛙皮中国林蛙(Rana Chensinensis David)，俗称田鸡、哈什蟆，主产于黑龙江、辽宁、吉林三省，尤以吉林省居多，主要分布在长白山区，是一种珍贵的两栖类药用、食用经济动物。
林蛙油(Oviduetus Ranae)为雌性林蛙输卵管的干制品，含有多种营养成分及保健功能因子。
[1-2]林蛙肉含有丰富的营养，尤其人体必需氨基酸种类齐全，含量高，属低脂肪，低胆固醇的肉类。
林蛙的肉质细嫩，适口性好，是长白山特产的珍贵美味食品。
现代医学、营养学和养生学等研究表明，经常食用林蛙，可增加人体优良蛋白质、氨基酸和矿物质的摄入量，增强人体免疫力，延缓人体衰老，增强人体对恶劣环境的抵抗力，尤其在人体必需氨基酸的补充上具有良好的保健功效。
现代医学研究表明，林蛙油中含有多种生理活性物质，如雌醇、孕酮、睾酮等激素。
具有明显的药理保健作用。
据初步研究认为，林蛙油有促进卵泡早熟及卵泡增殖作用，对性周期有明显的影响，可延长兴奋期，有良好的强精作用。
同时有补虚、增精、退热之功效，可治精血不足，体虚气弱、肺虚咳、神经衰弱、记忆减退、产后无乳、乳汁不足以及肺结核、肝炎等消耗性疾病，特别对老年人、久治失调的康复作用更佳[3]。
林蛙油_林蛙卵油的成分及开发利用
林蛙油、林蛙卵油的成分及开发利用杜景新王丽李春慧邬纯鑫吴兴业(吉林省通化市中心医院#通化#134000)燕杰(吉林省通化市科学技术协会#通化#134001)摘要林蛙油已广为人知,畅销国内外,而林蛙卵油尚未被人所认识,其某些营养成分的保健价值显著高于林蛙油。
分析其成分,为林蛙油、林蛙卵油的开发和深加工提供了依据。
关键词林蛙油林蛙卵林蛙卵油成分开发中国林蛙(Rana temporaria chensinesis Davia)俗称哈士蟆。
分布于东北的长白山区。
其雌蛙的干燥输卵管称为林蛙油,是继人参、鹿茸之后的又一珍贵的滋补保健品,具有补肾益精,润肺养阴之功效,一直畅销国内外,而其取蛙油剩余的卵及由卵提取的卵精油的保健价值更高。
经研究证明:林蛙卵油有显著的抑制血小板聚集、调节血脂、清除自由基、保肝、健脑、改善便秘、延缓更年期等多种功效,它是集食用、保健、药用为一体的新型绿色保健品。
1成分林蛙卵含有18种氨基酸,其必需氨基酸的总量为28.93%、林蛙油含25.92% (见表1);富含雌二醇孕酮(见表2);微量元素Zn/Cu的比值,林蛙油的比值为2. 66,林蛙卵油的比值为0.15;林蛙卵油富含磷脂成分,含有维生素A、D、E、C等及人体必需的微量元素。
表1林蛙卵和林蛙油中各种氨基酸的百分含量(g/100g)天冬氨酸谷氨酸丝氨酸甘氨酸苏氨酸脯氨酸丙氨酸精氨酸缬氨酸蛋氨酸林蛙卵2.75 2.63 1.02 4.31 2.95 2.368.03 1.25 5.45 1.08林蛙油5.86 3.91 1.14 2.00 2.43 4.35 3.56 2.60 4.89 1.86胱氨酸异亮氨酸亮氨酸苯丙氨酸组氨酸赖氨酸酪氨酸色氨酸必需氨基酸总量林蛙卵 2.548.59 2.37 1.29 2.22 3.19 1.530.5428.93林蛙油 3.23 3.16 2.14 2.18 3.20 2.96 3.010.5025.92基金项目:吉林省科技三费基金项目。
林蛙油小鼠免疫调节作用的实验研究
进行各项免疫指标的测定。结果 林蛙油剂量组与阴性对照组 比较能促进小 鼠脾淋 巴细胞增殖 、转化作用 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 促进小鼠的迟发 型变态反应 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 促进 小鼠的抗体生成细胞增加及 提高小 鼠的血清溶血素水平 （ ０ ． ０ ５ ） ， 增强小鼠的单核一 巨噬细胞吞噬能力（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 提高小 鼠的 Ｎ Ｋ细胞活性（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。结论 林蛙油具有增强
ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍｌ ｙ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ６ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｏ ｆ ｉ ｍｍｕ ｎ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ， ｅ ａ ｃ ｈ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｈ ａ ｄ ４ ０ ｍｉ ｃ ｅ ， ｅ ａ ｃ ｈ ｉ ｍｍｕ ｎ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｗａ ｓ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｌ ｏ ｗ，
・
论
著 ・
中 国 当 代 医 药２ ０ １ ７ 年１ 月 第 ２ ４ 卷 第３ 期
林蛙油小鼠免疫调节作用的实验研究
王彦 武 赵 鹏 覃光 球 何 励 傅伟 忠 张 陆娟
广西壮族 自治 区疾病预防控制中心， 广西南宁
５ ３ ０ ０ ２ ８
【 摘 要】 目的 探讨林蛙 油对小 鼠的免疫调 节作用 。 方法 将 ２ ４ ０只小 白鼠随机 分为 ６ 个 免疫群组 ， 每个免 疫群组 ４ ０ 只。 每个 免疫 群 组根 据 人 口服推 荐 剂量 （ ５ 、 １ ０ 、 ２ ０ 倍） 设林 蛙 油 低 、 中、 高 剂 量组 【 分别为 ３ ３ ４ 、 ６ ６ ７ 、 １ ３ ３ ４ ｍ ｇ ／ （ ｋ ｇ ・ Ｂ Ｗ） 】 和阴性 对照组 ， 每组 １ Ｏ只动物 按 Ｏ ． ２ ｍ Ｙ （ １ ０ ｇ ・ Ｂ ｗ） 的体 积经 口给予小 鼠灌 胃 ， 每天灌 胃 １ 次， 连续灌 胃 ３ ０ ｄ 后，
林蛙卵卵磷脂对大鼠四氯化碳所致的肝损伤的影响
林蛙卵卵磷脂对大鼠四氯化碳所致的肝损伤的影响作者：邬纯鑫,王丽,吕集,杜景新,翟丽红【关键词】 ,林蛙卵卵磷脂；四氯化碳；肝损伤［摘要］目的探讨林蛙卵卵磷脂对肝功能的调节。
方法以中国林蛙卵提取物为主要原料制成的林蛙卵卵磷脂软胶囊，进行动物实验，利用CCl4作为肝脏毒物造成急性肝损伤模型，观察对动物体重、血清ALT、AST、TG的影响。
结果林蛙卵卵磷脂软胶囊高剂量组的ALT、AST及TG均低于阳性对照组，差异有显著性（分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01）；中剂量组的ALT、AST均低于阳性对照组，差异有显著性（分别为P＜0.01、P＜0.05）。
高剂量组、中剂量组肝细胞病变程度较阳性对照组轻，差异有显著性（分别为P＜0.01、P＜0.05）。
结论林蛙卵卵磷脂软胶囊对肝损伤具有保护作用。
［关键词］林蛙卵卵磷脂；四氯化碳；肝损伤林蛙卵卵磷脂（lecithin of wood drug egg）软胶囊以中国林蛙（Rana temporaria chensinensis davia）卵提取林蛙卵油的副产品林蛙卵卵磷脂为主要原料。
用林蛙卵卵磷脂软胶囊进行动物实验，考察其对大鼠化学性肝损伤的保护作用。
有关专家已研究证实林蛙卵油具有抑制血小板聚集和降脂作用［１］及抗脂质过氧化作用［2］，前期已对林蛙卵油进行了同课题研究实验，证实林蛙卵油对化学性肝损伤具有保护作用［3］，本文对林蛙卵提取的林蛙卵卵磷脂所制成的制剂对化学性肝损伤的保护进行探讨，并与林蛙卵油（前期实验）相同方法。
证实林蛙卵卵磷脂与林蛙卵油皆具有保护化学性肝损伤的作用。
1 材料与方法1.1 药品由通化市林蛙研究所提供林蛙卵卵磷脂软胶囊，棕褐色；多烯磷脂酰胆碱胶囊（易善复胶囊，批号：27361，228 mg/片，由通化市中心医院提供）。
1.2 肝损伤模型建立健康Wistar大鼠100只（由中国医科大学动物部提供，批准号：辽实动物第010号，体重180.6～212.5 g，雄性）。
林蛙卵油软胶囊对肝损伤影响的实验研究
林蛙卵油软胶囊对肝损伤影响的实验研究
吕集;杜景新;王丽
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2003(023)011
【摘要】目的探讨林蛙卵油对肝损伤的影响.方法以中国林蛙卵提取物为主要原料制成的林蛙卵油软胶囊,利用CCl4作为肝脏毒物造成急性肝损伤动物模型,观察林蛙卵油软胶囊对动物体重、血清ALT、AST、TG的影响.结果林蛙卵油软胶囊高剂量组的ALT、AST及TG均低于阳性对照组(分别为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01);中剂量组的ALT、AST均低于阳性对照组差异有显著性(分别为P＜0.01,P＜0.05).高剂量组、中剂量组肝细胞病变程度较阳性对照组轻,差异有显著性(分别为P＜
0.01,P＜0.05).结论林蛙卵油软胶囊对肝损伤具有保护作用.
【总页数】2页(P785-786)
【作者】吕集;杜景新;王丽
【作者单位】通化市中心医院,吉林,通化,134001;通化市中心医院,吉林,通
化,134001;通化市中心医院,吉林,通化,134001
【正文语种】中文
【中图分类】Q819
【相关文献】
1.林蛙卵油软胶囊调节血脂作用的实验研究 [J], 高松;毛焕新;程光惠;尤秀新;高峰
2.中国林蛙体重与油重、卵重、卵粒数之间的关系 [J], 郝锡联
3.林蛙卵油软胶囊对高脂血大鼠的降脂效果初步研究 [J], 朱立夫
4.中国林蛙卵油中的激素成分及卵油对血小板聚集和血脂的影响 [J], 李成义;陈光荣;孙文伟
5.中国林蛙卵、卵油及输卵管对红细胞SOD活性的影响 [J], 金莉莉;刘德文;范文今;王秋雨
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绵羊红细胞诱发迟发型变态反应机制致肝损伤的动物模型
绵羊红细胞诱发迟发型变态反应机制致肝损伤的动物模型
王蓉;徐强;徐丽华;蒋洁云;杭秉茜
【期刊名称】《中国药科大学学报》
【年(卷),期】1994(25)5
【摘要】用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）ｉｐ小鼠致敏，５ｄ后用ＳＲＢＣ在肝脏攻击，诱发肝脏的迟发型变态反应（ＳＲＢＣ－ＤＴＨ），２４ｈ后可见肝脏重量增加，血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平升高；组织镜检见肝细胞坏死及弥漫性水样变性，嗜酸性变性等；而用生理盐水攻击的对照组则未出现上述现象。
肝损伤小鼠肝重量的增加及血清ＡＬＴ水平的上升均在攻击２４ｈ后达到峰值。
致敏前用环磷酰胺处理，增强了肝损伤。
上述结果提示，该肝损伤系肝脏局部发生的ＳＲＢＣ－ＤＴＨ所引起，其成立与ＤＴＨ的强度有关。
【总页数】4页(P293-296)
【关键词】迟发型变态反应;肝损伤;动物模型;绵羊红细胞
【作者】王蓉;徐强;徐丽华;蒋洁云;杭秉茜
【作者单位】中国药科大学中药药理学教研室,江苏省中药学校
【正文语种】中文
【中图分类】R593.1;R575
【相关文献】
1.迟发型变态反应机制致肝损伤的动物模型的建立 [J], 徐强;王蓉
2.林蛙卵粗提物改善迟发型变态反应性肝损伤的作用机制 [J], 王丽;邬纯鑫;吕集;
杜景新;翟丽红
3.抗结核药物致肝损伤动物模型建立的研究进展 [J],
4.抗结核药物致肝损伤动物模型的探讨 [J], 张冬; 胡宝翠; 王小红; 吕博松; 周灏微; 韦丽琴
5.2,4,6—三硝基氯苯诱发小鼠迟发型变态反应肝损伤模型的复制及某些中药的保护作用观察 [J], 赵军宁;彭龙玲;杨亚斯;温志坚;胡尧碧;薛米伦
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・医学研究・林蛙卵粗提物改善迟发型变态反应性肝损伤的作用机制王丽,邬纯鑫,吕集,杜景新,翟丽红[摘要]目的研究林蛙卵粗提物对迟发型变态反应性肝损伤的作用机制。
方法采用林蛙卵粗提物作用于四氯化碳(CCl4)作为肝脏毒物所致的迟发型变态反应性肝损伤模型,在肝损伤12h分离的肝实质细胞和肝细胞共培养体系中,林蛙卵粗提物预处理肝非实质细胞;采用CCl4所致的脾淋巴细胞转化,制备脾细胞悬液与不同浓度的林蛙卵粗提物共培养,测定脾细胞的刺激指数。
结果林蛙卵粗提物预处理肝非实质细胞明显地阻断了上清液中谷丙氨酸氨基转移酶的释放,作用呈量效关系和时效关系;而预处理肝细胞则无影响。
同样,林蛙卵粗提物对CCl4引起的脾淋巴细胞增殖无抑制活性,诱导相给药对肝损伤具有保护作用。
结论林蛙卵粗提物不仅能有效地对肝细胞膜起保护作用,而且对清除或减轻引起肝毒性的因素起到重要的治疗作用。
改善迟发型变态反应性肝损伤,林蛙卵粗提物能有效地改善肝损伤的作用主要与选择性地抑制肝损伤时肝非实质细胞的功能有关。
[关键词]林蛙卵;迟发型变态反应;肝损伤[中图分类号]R512１6 [文献标识码] A [文章编号]1681-6676(2007)02-0139-03保护肝细胞不受损害对预防和治疗肝炎病十分重要,这些保护包括经典的细胞膜保护[1],但更重要的是清除或减轻引起肝毒性因素作用。
目前已知,T细胞介导的细胞免疫反应是许多肝病中引起肝细胞损坏的主要原因之一[2～4]有关研究已模拟这种细胞免疫机制建立了迟发型变态反应诱导的肝损伤动物模型,证实其主要效应细胞为CD4+T、CD8+T细胞,而特异性细胞免疫的效应细胞主要是Th1型CD4+T细胞和CD8+CTL细胞[5],并证实肝损伤小鼠肝内浸润T淋巴细胞释放谷丙转氨酶的能力而对正常肝细胞并无影响,这种杀伤能力在肝损伤后12h达到高峰,但从正常小鼠中分离的肝非实质细胞不具有这种能力,表明肝损伤时非实质细胞中浸润的T淋巴细胞是造成肝细胞损伤的主要因素之一。
为此,本文拟运用肝实质细胞与肝细胞相互作用的实验体系,从影响非实质细胞的功能,消除造成肝细胞损伤的免疫因素角度探讨进行药物治疗的可能性。
鉴于前期研究已发现林蛙卵粗提物对迟发型变态反应肝损伤有显著改善作用[6],本研究进一步探讨了其改善肝损伤的作用机制。
1材料与方法1１1药品及试剂林蛙卵(wood frug egg)购于长白山区通化集安清河林蛙生态沟,经我院林蛙研究所吕集教授鉴定为中国林蛙长白山亚种。
用95%的乙醇浸渍48h(4倍量)提取2次,过滤,合并滤液,回收乙醇,得粗提物,收率为15%,实验中所用的林蛙卵粗提物均以此计算。
CCl4(分析纯,由通化市中心医院化验室提供);胶原酶(通化市中心医院化验室提供,182units/mg);戊巴比妥钠(通化市中心医院提供);血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所);无钙镁Hank s液的配制:NaCl8１175g、KCl0１403g、Na2HPO40１114g溶于作者单位:134001吉林通化,通化市中心医院950ml注射用水,加HEPES调pH至7１4,定容至1000ml。
Hank s液的配制:KCl0１403g、MgCl20１102g、NaCl8１00g、D２glucose1１110g、0１02%phenol red溶于950ml注射用水中,加HEPES调pH值至7１4,定容至1000ml。
RPMI２(GIBCO)培养液:用注射用水溶解,加入100u/ml青霉素和100u/ml的链霉素,过滤灭菌,临用前加入10%灭活除菌的新生牛血清(new born serum,NBS)即为RPM I-1640-10%NBS液。
1１2实验动物4～6周龄[体重(25±1)g]的健康雌性昆明种小鼠,由吉林大学实验动物部提供。
1１3肝损伤模型CCl4致迟发型变态反应(CCl4-DTH)诱发小鼠肝损伤:取昆明小鼠,刮去小鼠腹毛,用1%(W/ V)CCl4的乙醇溶液100μl致敏,5天后再次同样致敏,再5天后,用0１2%CCl4的花生油溶液10μl肝内注射,于注射后18h采血,血清用于测定丙氨酸氨基转移酶及天门冬氨酸氨基转移酶的活力。
或于注射后12h按下述方法分离肝实质细胞和非实质细胞。
药物于诱导相给药时,从CCl4首次致敏起,连续10天。
1１4肝实质细胞和非实质细胞的分离采用修改的两步灌流法分离肝损伤12h后小鼠的肝实质细胞与非实质细胞。
即给小鼠腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉开腹,肝门脉插管,先用无钙镁Hank s内含0１5mmol/L,EDTA25 mmol/L,HEPES,pH7１4灌流至肝脏中血被冲洗干净,再换用0１1%的胶原酶液继续灌流至几分钟,然后摘出肝脏置冰冷的RPM I-1640-10%NBS液中,分散肝细胞,100目筛网过滤,离心2min,得肝细胞(HC),上清于300g离心5 min,得肝非实质细胞(NPC)。
肝细胞、肝非实质细胞经两次洗涤后,以台酚蓝按下述方法分离肝染色,计算存活率分别为80%和90%,通常在分离后立即用于培养。
1１5细胞培养与转氨酶释放实验采用肝损伤12h时分离得到的细胞。
肝细胞经计数调成1１08×105cells/ml,在96孔板上接种细胞悬液0１2ml/well,至37℃,5%CO2下预培养3h,弃上清液,用RPMI-1640培养液洗两次后,加入1１0×106cells/ml的肝非实质细胞0１1ml或0１1mlRPMI-1640培养液,共同培养前,用林蛙卵粗提物与肝细胞或非实质细胞在37℃培养1h,洗去药液,再进行上述共培养。
1１6CCl4致小鼠脾淋巴细胞转化试验取正常小鼠无菌摘除脾脏,于5ml Hank s液中制备获得脾细胞悬液1000r/ min离心5min后,用0１17mol/L Tris-0１75%氯化钠去除红细胞,再用RPMI-1640-10%NBS培养液洗涤两次,调成107cells/ml。
置96孔培养板中,在5μg/ml CCl4及不同浓度的林蛙卵粗提物的共存下于37℃,5%CO2,培养72h。
然后加入MTT的培养基溶液20μl、37℃、5%CO2,再培养4h,吸去上清,每孔加入0１2ml DNSO振荡,使沉淀完全溶解,540nm处测吸光度。
将加CCl4时的吸光度除以不加CCl4时的吸光度作为CCl4对脾细胞的刺激指数。
1１7统计学方法实验数据应用SSPS9１0统计软件处理,进行方差分析。
各组间比较应用LSD法,P<0１05为差异有显著性。
血清丙氨酸氨基转移酶及天门冬氨酸氨基转移酶的水平以均数±标准差(珋x±s)表示。
2结果2１1林蛙卵粗提物对迟发型变态反应性肝损伤小鼠肝非实质细胞杀伤肝细胞的影响与肝细胞的自动释放值相比,肝非实质细胞显著增加了上清中丙氨酸氨基转移酶的水平。
对于这种增加,用10-7、10-6、10-5、10-4g/ml的林蛙卵油粗提物预处理肝非实质细胞剂量依赖性抑制了丙氨酸氨基转移酶的释放,其抑制率分别为33１5%、55１0%、67１8%、85１0%,见表1。
同样,用10-4g/ml林蛙卵粗提物预处理非实质细胞15min、30min、60min和120min,其抑制率分别为29１6%、49１8%、70１0%、99１7%,见表2。
2１2林蛙卵粗提物于诱导相结合对迟发型变态反应性肝损伤的影响见表3。
与模型对照组相比,林蛙卵粗提物的两剂量组经口给药对肝损伤几无影响,而环磷酰胺腹腔注射则使血清丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶水平显著降低。
表1 不同剂量的林蛙卵粗提物对肝非实质细胞中的丙氨酸氨基转移酶提影响(珋x±s)组别剂量(mg/ml)实验动物(只)丙氨酸氨基转移酶抑制率(%)模型组10实验组10-71033１5实验组10-61055１0实验组10-51067１8实验组10-41085１0注:与对照组比较,P<0１01表2 林蛙卵粗提物不同时间的抑制率(珋x±s)组别剂量(mg/ml)实验动物(只)时间(min)丙氨酸氨基转移酶抑制率(%)模型组10实验组10-4101529１6实验组10-4103049１8实验组10-4106070１0实验组10-41012099１7注:与对照组比较,P<0１01表3 林蛙卵粗提物对动物血清ALT、AST的影响(珋x±s)组别例数实验前ALT(u/L)实验后ALT(u/L)实验前AST(u/L)实验后AST(u/L)正常组101245±4571253±4951108±411237±55模型组101148±4781011±5021237±5121116±497实验1组101321±285835±334a1246±136464±166#实验2组101359±477641±363b1104±279832±262３注:３P<0１05,#P<0１012１3林蛙卵粗提物对CCl4所致的淋巴细胞增殖的影响CCl4对脾细胞的刺激指数为6１57,与其相比,林蛙卵粗提物各浓度对CCl4所致的淋巴细胞转化均无抑制作用。
3讨论我们的前期研究已发现林蛙卵粗提物能治疗CCl4所致的化学性肝损伤,与阳性对照比较,差异具有显著性[6]。
进一步于效应相给药能显著改善迟发型变态反应性肝损伤。
本研究探讨了林蛙卵粗提物改善肝细胞的机制。
结果发现林蛙卵粗提物对肝损伤12h肝非实质细胞的预处理能显著抑制肝非实质细胞对肝细胞的杀伤作用,并具有时效及量效依赖关系。
提示其能改善肝损伤。
但是,林蛙卵粗提物处理肝细胞并不影响肝非实质细胞的杀伤作用,对四氯化碳所致的正常肝细胞毒作用亦具有改善作用(实验数据未给出),表明其具有肝细胞膜保护作用,其对肝损伤的改善是从免疫反应的角度来实现的,后者主要体现在对已激活过程,对CCL4所致的脾淋巴细胞增殖无影响以及于诱导相给药对迟发型变态反应性肝损伤无改善作用的结果证实了这一推测,我们的前期实验已证实,肝损伤12h肝组织有大量炎性细胞浸润,肝非实质细胞的组成发生了改变,进一步用Percoll梯度离心法纯化后,证实其具有杀伤肝细胞活性的组分中主要含有51１2%的CD4+T细胞和26１1%的CD8+T细胞,而正常的肝非实质细胞并不具有这样的活性,这种杀伤作用还与肝损伤时肝非实质细胞表面的淋巴细胞功能相关抗原-1及肝细胞表面的细胞间黏附分子的表达增加密切相关。
因此,林蛙卵粗提物对肝损伤的改善作用主要通过抑制肝损伤时肝非实质细胞的活化,增殖过程则无影响。