梅毒螺旋体抗体测定SOP
梅毒螺旋体检测标准操作规程
梅毒螺旋体检测标准操作规程【梅毒螺旋体检测标准操作规程】1. 引言梅毒作为一种性传播疾病，早期检测对于治疗和控制传播至关重要。
本操作规程旨在规范梅毒螺旋体检测的操作流程，确保检测结果的可靠性和准确性。
2. 实验器材与试剂准备（1）实验器材：显微镜、荧光显微镜、玻片、盖玻片、恒温水浴、离心机等。
（2）试剂准备：梅毒螺旋体检测试剂盒、PBS缓冲液、荧光素。
3. 实验操作步骤（1）准备标本：从患者体内采集组织液（如血液、脑脊液等）作为标本。
（2）制备玻片：将标本涂在多个玻片上，将玻片放入恒温水浴中，使组织液干燥。
（3）固定标本：将玻片置于甲醛固定液中浸泡15分钟，然后用PBS缓冲液洗涤。
（4）孵育标本：将固定的玻片置于荧光显微镜下，加入梅毒螺旋体检测试剂盒中的梅毒螺旋体特异抗体，孵育30分钟。
（5）洗涤标本：用PBS缓冲液洗涤玻片，去除非特异性结合的抗体。
（6）添加荧光素：加入荧光素作为可视化记号，孵育15分钟。
（7）洗涤标本：用PBS缓冲液洗涤玻片，去除未结合的荧光素。
（8）观察标本：将玻片置于显微镜下，观察是否有梅毒螺旋体的荧光信号。
4. 质量控制与结果判读（1）质量控制：每次实验需进行质控，使用已知梅毒阳性标本作为阳性对照，使用无感染标本作为阴性对照。
（2）结果判读：观察玻片下的荧光信号，有荧光信号则判定为阳性，无荧光信号则判定为阴性。
5. 结果报告与记录记录每次实验的梅毒螺旋体检测结果，包括标本信息、实验日期、操作人员姓名、实验结果等。
6. 问题与解决方法（1）标本准备不当：确保采集到的标本质量良好，避免污染或变质。
（2）实验操作不准确：按操作规程进行实验，避免操作中的误差。
（3）质量控制出现问题：检查质控过程是否严格按照规程执行，确保质量控制结果可靠。
7. 安全注意事项（1）遵守个人防护措施：在实验操作过程中，佩戴手套、口罩等个人防护装备。
（2）遵守实验室安全规范：实验室内保持清洁、整齐，并按规定处置废弃物。
性病实验室梅毒SOP
目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
NJKM-SOP0301.18 梅毒TPPA抗体检测作业指导 Edition2.0
梅毒TPPA抗体检测作业指导书1、试验原理：梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。
其原理如下：将梅毒(Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test;PA法），由此可检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。
2、样本收集和贮存：血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。
不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。
标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。
3、安全防范：3．1此试剂盒内含人血成分。
尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。
3．2移液过程禁止用口。
3．3在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。
3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。
使用后请彻底洗手清洁。
3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。
3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积.4、试剂：4．1 储存与稳定性：试剂应在2-10℃保存。
冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。
4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产）（1）溶解液（液体）8mL×1瓶用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
（2）血清稀释液29mL×1瓶用于样品的稀释。
（3）致敏粒子（冷冻干燥）调制浓度为1%的Treponema Pallidum(Nichols 株)致敏明胶粒子。
（4）未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
梅毒特异性试验( TPPA )标准操作程序SOP文件
[临床意义]
该试验用于检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体的存在与否，对评估受检人被感染人的机体中存在较长的时间（长达五年），故不适宜用于疗效的观察。
该试验用于检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体的存在与否对评估受检人是否曾经感染过梅毒螺旋体有较高的特异性
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-21
梅毒特异性试验( TPPA )
版序：ABCD
页码：第1页，共2页
[原理]
用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应。
[试剂厂家]
富士瑞必欧株式会社 日本东京
[试剂组成]
（1）“A”溶解用液
（2）“B”血清稀释液
（3）“C”致敏颗粒（冻干）：用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀
（4）“D”非致敏颗粒（冻干）：用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀
（5）“E”阳性质控血清
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
（3）离心2000rpmX 5分钟,吸取上清液50ul加入孔3.
（4）自孔4--孔10各加血清稀释液"B"25ul.
（5）自孔3吸25ul至孔4,混匀后吸入25ul至孔5......如此稀释至孔10,弃去25ul.
（6）按定量试验法加入"D"和"C",振荡30秒,置有盖湿盒室温2小时,观察结果.
[质量控制]
加致敏颗粒“C”(ul) ---------------25
血清最终滴度1：40 1：80
SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体SOP(181)
广西壮族自治区疾病预防控制中心SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验标准操作细则（日本富士，FUJIREBIO INC.）版号：第2003年版文件编号：GXCDC/Y16-13-1811、目的对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用进行必要的细化和补充，以规范本试剂的操作程序，正确使用本试剂,保证检测结果准确。
2、适用范围操作适用于采用SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂的所有操作。
3、职责科室负责人：负责对科室综合管理。
保管人员：负责对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用操作是否符合规范，并对SERODIA—HIV明胶凝集试剂进行使用效期记录。
使用人员：负责按照本细则对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用操作，并进行使用记录。
4、工作程序（一）、原理利用纯化的致病性梅毒螺旋体（Nichol株）抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合产生可见的凝集反应。
本试剂有如下优点：（1）操作简便，无需特殊设备。
即可对单个标本进行检测，也可用于大规模普查。
（2）反应时间短：孵育时间仅2小时，随后肉眼观察结果。
（3）高度特异性：本试验中所用的载体为人工制造的明胶颗粒，由富士公司独创。
与其它同类试剂中所用的生物载体相比（如TPHA 中的红细胞），最大限度地降低了非特异凝集反应。
（二）、试剂盒内容“A”溶解液（Reconstituting Solution）：用于溶解致敏颗粒“C”和非致敏颗粒“D”。
“B”标本稀释液（Sample Diluent）：用于标本的稀释。
“C”致敏颗粒（Sensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。
是包被有梅毒螺旋体抗原的明胶颗粒。
“D”非致敏颗粒（Unsensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。
梅毒检测操作规程
梅毒螺旋体抗体检测（乳胶法）作业指导书1.检测目的定性检测人血清或血浆样本中梅毒螺旋体抗体（TP）,可作为梅毒感染的辅助诊断。
2.测定原理采用高度特异性的抗体抗原反应原理及乳胶标记免疫层级分析技术，试剂含有预先固定于膜上检测区（T）的梅毒重组抗原盒包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。
3.标本要求1试剂适用于检测血清或血浆样本，检测时应使用未溶血的样本。
2.样本应收集于清洁、干燥的容器中，可采用肝素、EDTA或柠檬酸三钠作为抗凝剂。
3.样本收集后应尽可能马上使用，不可再室温长时间存放。
血清血浆样本可在2-8°C冷藏存放一周，长期保存需冷冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混均，样本禁止反更冻融。
4.试剂艾博生物医药（杭州）有限公司5.操作步骤5.1使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温。
从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温），在1小时内应尽快地使用。
5.2将试剂置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，垂直加入1滴（约25UI）试剂板的加样孔（S）中，然后加入2滴缓冲液。
5.3加样后立刻开始计时等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。
20分钟后读取的结果无效。
6.结果判定6.1阳性（+）：两条紫红色条带出现。
一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）。
6.2阴性（-）：近质控区（C）出现一条紫红色条带，在检测区（T）内务紫红色条带出现。
6.3无效（X）：质控区（C）未出现紫红色条带，标本不正确操作过程或试剂已变质损坏。
1湎血清/血桨∖υC2滴缓冲液—阳性阴性无效7.质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后15-20分钟左右读取，20分钟后读判定无效。
7.2质控区内（C区）一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。
质控内（C）所显现的红色条带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
8.注意事项8.1加样过多或过少可能导致结果出现偏差。
梅毒密螺旋体抗体测定
梅毒密螺旋体抗体测定1．样品的接收、登记和处理1.1 采血3-4ml，收集到促凝管中（可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝）1.2检查样品的状况，有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。
如果污染过重或者认为样品不能被接受，要将样品情况立即通知送样人。
1.3仔细核对样本与送检单,然后编号1.4样品为全血（抗凝），用3.000r/min离心15min，血清/血浆备用。
打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。
样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。
同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。
1.5 每天上午进行样品的检测。
节假日（短期1周内）进行检测的样品存放于2～8℃，需长期存放的样品，应置于-20℃以下。
2.检测方法和步骤2.1检测方法（一）酶联免疫吸附试验（ELISA）2.1.1 基本原理以珠海丽珠试剂股份有限公司的ELISA（双抗原夹心法）为例。
用纯化基因工程梅毒螺旋体抗原TP47（TmpA）和TP17包被的微孔板和辣根过氧化物酶标记基因工程梅毒螺旋体抗原，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。
2.1.2检测步骤实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18～23℃)，平衡30分钟后使用。
配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
准备实验原始记录表2.1.3 实验操作2.1.3.1装好所需使用数目的孔条,每孔均加入50μl样品稀释液。
留一孔作空白对照,暂不加任何液体。
另设3个阴性对照孔，阳性对照1孔，若需要可再设1个阳性对照孔。
2.1.3.2每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），加样时吹打混匀则效果更佳。
在反应板上加盖封板膜,振荡混匀,置37±2℃温箱或水浴锅中，孵育30min。
2.1.3.3置洗板机上洗涤6遍, 每次静置30～60S, 洗完后孔上方及底部不应残存液体。
SOP标准操作程序-艾博梅毒条
SOP标准操作程序TP梅毒螺旋体抗体【实验原理】梅毒试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测全血/血清/血浆中是否含有梅毒抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的重组特异性梅毒抗原和质控区（C）的相应抗体。
【标本】全血标本收集后应尽快使用，或尽快分离血清或血浆以避免融血，检测时只能使用未融血的标本，严重融血的标本必须重新采集血样。
样本收集后应尽可能马上使用，不能够在室温下长时间存放。
血清或血浆标本可在2 -8℃冷藏存放一周。
长期保存需冷冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混匀。
样本切忌反复冻融。
【注意事项】1.本产品是一种定性地检测梅毒抗体存在的试剂，不能确定标本中抗体的含量。
2.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为机体感染梅毒临床诊断的唯一依据。
3.本产品仅用于体外诊断，并适用于检测血清/血浆样本中的梅毒抗体。
4.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为确诊依据。
为了确保结果的准确性，可对样本用其他方法，例如ELISA，进一步确认。
5.同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。
6.如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。
阴性结果并不能排除感染梅毒的可能性。
【操作步骤】*实验前准备在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。
*实验步骤1．从原包装铝箔带中取出试剂条，粘附于记录卡上，平置桌面，在1小时内应尽快地使用。
2．吸取全血/血清/血浆标本50ul（或吸管2滴）置于加样区，再加1滴缓冲液。
3．等待红色条带的出现，在10分钟内读取测试结果。
关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的梅毒抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。
在30分钟后读取的结果无效。
【结果判定】阳性（+）：两条红色条带出现。
一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。
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梅毒螺旋体抗体测定标准操作程序（SOP）
【目的】
指导免疫项目梅毒螺旋体抗体的测定。
【适用仪器】
酶标仪ST-36O、洗板机ST-36W等。
【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【方法原理】
ELISA法：用HTP特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗TP抗体与包被抗原反应，再与酶标IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据OD值判定有无TP抗体的存在。
【标本要求】
种类：血清、血浆。
【试剂】
试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。
保存条件及有效期：2--8℃储存。
自生产日期起，有效期半年。
【质控品】
试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。
【操作步骤】
1.加样：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加
入HCV阴、阳性对照10微升。
除空白孔外，其余孔加入50微升样本。
2.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。
3.洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
4.加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。
5.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
6洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。
7.显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，
盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。
8.终止：每孔加入终止液50微升，混匀。
9.用酶标仪读值，零置酶标仪450nm或双波长450nm/630nm下测定OD 值。
结果判定
1.阴、阳性对照和被检样品的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
2.试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.120，阳性对照孔值≥0.300。
3．临界值（cut off值）的设定：cut off值=0.100+阴性对照OD均值
4．被检样品的OD值>=临界值应判为HCV抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。
注意事项
1．各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。
2．封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。
3．洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。
4．HCV抗体试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
5．微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。
6．不同批试剂不能混用。
7．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
8．请严格按说明书操作。
详见《珠海丽珠试剂有限公司的试剂盒说明书》。