综合设计性实验

药理学综合设计性实验

各位领导与老师:

根据药理学的实验特点及现有的实验条件，初步拟定了４个具有可行性的综合设计性实验，开设对象主要为护理本科生，也适用于专科生。但具体开设的内容还需各位领导与老师的商榷。

由于实验项目比较复杂，每次实验所需课时均比较多，且单一教师辅导困难比较大，至少需要双教师辅导（比如采血、插管、实验准备等），请各位领导与老师理解。

课程设计：王鹏

基础教研室

2005年1月9日

实验一氯丙嗪的降温作用（设计性实验，4学时）

实验简介：本实验使学生掌握实验设计的基础理论和方法（包括动物选择、实验分组、对照原则、处理因素的标准化等多方面知识），并通过观察氯丙嗪的降温作用，掌握其降温特点，联系临床应用。

实验辅导：至少双人辅导

【实验目的】掌握实验设计的基础理论，通过观察氯丙嗪的降温作用，掌握其降温特点，联系临床应用。

【实验器材】小鼠、注射器、体温计、冰箱、氯丙嗪等。

【实验过程】

一、首先介绍实验设计的基础理论

（一）实验设计是科学研究计划中关于研究方法与步骤的一项内容，是实验研究所涉及的各项基本问题的合理安排。严密合理的实验设计是顺利进行研究工作的保证，同时也能最大限度地减少实验误差以获得精确可靠的实验结论，甚至可以使研究工作事半功倍。

药理学实验设计的三大要素，即处理因素、实验对象与实验效应。

1.处理因素

(1)处理因素实验中根据研究目的确定的由实验者人为施加给受试对象的因素称为处理因素，如药物、某种手术等。

一次实验涉及的因素不宜过多，否则会使分组增多，受试对象的例数增多，在实际工作中难以控制。但处理因素过少，又难以提高实验的广度和深度。

(2)明确非处理因素：非处理因素虽然不是我们的研究因素，但其中有些因素可能会影响实验结果，产生混杂效应，所以这些非处理因素又称混杂因素。设计时明确了这些非处理因素，才能设法消除它们的干扰作用。

(3)处理因素的标准化：处理因素在整个实验过程中应做到标准化，即保持不变，否则会影响实验结果的评价。如实验设计中处理因素是药物时，则药物的剂型、给药途径、质量(成分、出厂批号等)必须保持不变。

2.实验对象

实验对象的选择十分重要，对实验结果有着极为重要的影响。药理学实验主要实验对象包括整体动物(正常动物、麻醉动物和病理模型)、离体器官、组织及细胞等。

3.实验效应

实验效应是指受试对象在处理因素作用后呈现的反应或受到的影响，其具体表现形式是指标。这些指标包括计数指标(或定性指标)和计量指标(或定量指标)等。指标的选定需符合特异性、客观性、重复性、灵敏性、精确性、可行性等原则。

(二)药理学实验设计的基本原则

为了提高研究效率，控制误差和偏倚，药理学实验设计同其它科学研究一样必须遵循三大基本原则，即对照、随机和重复原则。

1.对照原则

对照是比较的前提。在生物学实验中存在许多影响因素，为消除无关因素对实验结果的影响，实验中必须设立对照组。对照应符合齐同可比的原则，除处理因素不同外，其他非处

理因素尽量保持相同，从而使实验误差尽可能缩小。如实验动物要求种属、性别、年龄相同，体重相近；实验的季节、时间和实验室的温度、湿度也要一致；操作的手法前后要相同等。

根据实验研究的目的和要求不同，可选用不同的对照形式，常用的对照形式有：空白对照(正常对照)、实验对照(阴性对照)、标准对照(阳性对照)、自身对照、相互对照(组间对照)等。

2.随机原则

即所研究总体中的每一个研究对象都有同等的机会被分配到各组中去，随机的目的是将样本的生物差异平均分配到各组。实验中凡可能影响结果的一切非研究因素都应随机化处理，使各组样本的条件尽量一致，消除或减小组间人为的误差，从而使处理因素产生的效应更加客观，实验结果更为可靠。

3.重复原则

重复是指实验中受试对象的例数或实验次数要达到一定的数量，它包含有两方面的意思：即重复性和重现性。若样本量过少，可能把个别现象误认为普遍现象，把偶然或巧合事件当作必然规律，其结论的可靠性差。如样本过多，不仅增加工作难度，而且造成不必要的人力、财力和物力的浪费。所以，在进行实验设

计时要对样本大小作出科学的估计，以满足统计处理的要求

二、氯丙嗪的降温作用设计部分：

每台面4只小鼠，体温计1只，A、B两种药水（分别为氯丙嗪和生理盐水）由同学们自己设计实验分组、实验步骤，通过实验结果来判断A、B药水各对应的药品并总结实验所用原理，并掌握氯丙嗪的降温特点。

三、临床护理联系：

氯丙嗪与阿司匹林在解热方面的异同，联系两药在临床上的不同应用。

实验二利尿药的利尿作用（综合性实验，4学时）

实验简介：本实验综合了药理学、外科学（固定、备皮、消毒、手术等）、护理学（静脉注射法）及临床病例分析等多学科多方面的知识

实验辅导：至少双人辅导

【实验目的】初步掌握外科手术和外科结的操作，观察呋喃苯胺酸的利尿作用，并通过病例分析，联系其临床应用。

【实验器材】白兔、注射器、导尿管、解剖台、剪刀、呋喃苯胺酸

【实验方法】

1．外科基本操作：兔背位固定，耳静脉麻醉后，备皮，局部消毒后，剪开腹部皮肤和肌肉，找到膀胱，将膀胱剪一小口，插入导尿管，用线将膀胱与导尿管结扎在一起（外科结结扎），将原有尿液弃去后，收集尿液10min，记录体积。

2．经兔耳静脉注射呋喃苯胺酸1ml，连续收集尿液3次，每次10min，记录体积，分析结果。观察呋喃苯胺酸的利尿效果。

3．病例分析：a、急性水肿患者的抢救及护理。

b、高血压患者或慢性心功能不全患者的抢救、治疗与护理。

C、急性药物中毒患者的抢救及护理。

实验三磺胺嘧啶半衰期的测定（综合性实验，4学时）

【实验简介】本实验综合了基础药理学、临床药理学、计算机、分析化学、护理学等多方面的知识，为学生今后参与临床药物监测（TDM）打下基础。

【实验辅导】至少双人辅导

【实验目的】通过磺胺嘧啶钠(SD-Na)血浓测定实验，掌握临床药理药物动力学方面的一些基本操作方法，了解药物时量关系曲线的变化及药品说明书中涉及的一些主要参数，并为临床药物监测（TDM）打下基础。

【实验器材】白兔、注射器、试管、移液管、721分光光度计、肝素、0.5%亚硝酸钠、20％三氯醋酸、0.5%麝香草酚

【实验原理】磺胺嘧啶钠在酸性环境下其苯环上的氨基(－NH2)离子化生成铵类化合物(－NH3+)，与亚硝酸钠发生重氮化反应生成重氮盐，该化合物在525 nm波长下比色，其光密度与药物浓度成正比。

【实验方法】

1、取兔1只，静脉注射1000 U/ml肝素1 ml/kg，并取空白血0.5 ml。对侧耳缘静脉注射20％SD-Na 2 ml/kg，并准确计时。分别于给药后5、10、15、20、30、60和90 min 自耳缘静脉(注射肝素侧)取血0.5 ml。

耳缘静脉注射1000 U/ml肝素1 ml/kg，并取空白血0.5 ml。对侧耳静脉注射20％SD-Na 2 ml/kg，并准确计时。分别于给药后5、10、15、20、30、60和90 min自耳缘静脉(注射肝素侧)取血0.5 ml。将血0.2 ml与20％三氯醋酸2 ml、蒸馏水3.8 ml混匀后，2500转/分离心10 min。取上清3.0 ml，先加0.5%亚硝酸钠1.0 ml，再加0.5%麝香草酚2.0 ml，混匀，于721分光光度计525 nm波长处测定光密度值(OD525)，将光密度值代入标准曲线方程计算SD-Na血药浓度(mg/ml)。

各样本OD值代入标准曲线回归方程求得值为SD-Na含量(mg)，除以血体积0.1 ml，即得SD-Na血药浓度(mg/ml)。

2. 药时曲线及药代动力学参数的计算：

(1) 消除速率常数：K (min-1)= － 2.303 B

(2) 血浆半衰期：t1/2 (min) = 0.693/K

(3) 初始浓度：C0 (mg/ml) = lg-1A

(4) 表观分布容积：V d (ml/kg) = D0/C0 (D0为给药剂量)

3.临床护理联系：了解决定药物给药间隔的主要因素，保证临床用药的安全有效。了解药物时量关系曲线的变化及药品说明书中涉及的一些主要参数。

实验四普鲁卡因的LD

测定（综合性实验，4学时）

50

【实验简介】本实验综合了实验设计、统计学、计算机应用、药理学及毒理学等多方面的知识，为以后学生论文写作和设计打下基础。

【实验辅导】至少双人辅导

【实验目的】通过实验，学习测定药物LD50的方法、步骤和计算方法，了解急性毒性试验的常规方法。

【实验器材】小鼠、注射器、普鲁卡因溶液等。

【实验方法】

1、预试验取小鼠8～10只，以2只为一组分成4～5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围（至少应找出引起20%～80%死亡率）。（参考剂量：LD100为250mg/kg, LD 0为164mg/kg）。

2、正式试验在预初验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般选4～5个剂量），每组10只小鼠，动物的体重和性别要均匀分配，完成动物分组和剂量计算后按腹腔注射给药。

3、LD50测定中应观察纪录的项目

⑴实验要素：实验题目，实验日期，药物的批号，动物品系，来源，性别，体重，给药方式及剂量、给药时间等。

⑵给药后各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，末只死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。

⑶尸解及病理切片：对死亡的小鼠及时进行尸解，观察内脏的变化（心、肝、脾、肺、肾），记录病变情况。若肉眼可见变化时则需进行病理检查。观察结束时对全部存活动物称体重，尸解，同样观察内脏病变与中毒死亡鼠比较。当发现有病变时同样进行病理检查，以比较中毒后病理变化及恢复情况。

【实验结果计算】

实验完毕后，清点各组死亡鼠数和算出死亡率（P），按改良寇氏法公式进行计算：LD50= ㏒-1[X m–i (∑P–0.5)]

其中：

X m：最大剂量的对数值

i ：相邻两组剂量对数值之差

P：各组动物死亡率，用小数表示（如死亡率为80％应写成0.80）

∑P：各组动物死亡率之总和

【实验报告要点】

将实验资料填入下表，并按公式计算。

组别动物数剂量对数剂量动物死亡数死亡率LD50

（只）（g/kg）（X）（只）（%）

1

2

3 ……