FDA菌落总数检测方法
菌落总数几种检测方法的介绍
菌落总数几种检测方法的介绍苗丽主要讲述以下几个问题：第一：澄清菌落总数概念第二：国标(GB)和行标(SN)的差异第三：实验操作中的一些注意事项第四：菌落总数3M快速方法介绍一、澄清菌落总数概念菌落总数是指食品检样经过处理在一定条件下培养后所得1ml（g）检样中所含菌落的总数。
我们知道单个细菌我们肉眼是看不到的，但在人为给它们提供一定条件如培养基，适宜的温度、时间、PH、需氧条件等。
在这样一个环境中，单个细菌不断分裂、繁殖，最后发展成为我们肉眼可见的菌落，所以我们说菌落总数可以作为判定食品被污染程度的标志，也是对检样进行卫生学评价时的一个重要依据。
二、国标和行标的差异1、培养基不同国标用的培养基是营养琼脂，行标用的培养基是平板计数琼脂，两者成分稍有差别，如下表所示：营养琼脂平板计数琼脂蛋白胨10 g 胰蛋白胨 5.0g牛肉膏3g 酵母浸膏 2.5g氯化钠5g 葡萄糖 1.0g琼脂15-20g 琼脂15g蒸馏水1000ml 蒸馏水1000ml 不同的方法要使用不同的培养基，目前这两种培养基都有现成的成品出售，大家可以不必再自己配制。
2、稀释方法不同国标做1：10稀释时是将1ml样液加到9ml稀释液中，而行标是将10ml样液加入到90ml稀释液中，同样是1：10稀释，大家应该很容易理解行标的稀释方法应该是更准确（10＋90→1＋9），所以说行标的要求比国标往往要高一些。
3、计数范围国标是将30―300个菌落作为合适范围，而行标是将25―250个菌落作为合适范围。
制订行标时之所以将25―250个菌落作为合适范围，主要是参照美国FDA（美国食品和药物管理局）的做法制订的，大家知道，因为美国是发达国家，FDA又是它们的权威机构，所以目前世界上很多国家都是以FDA颁布的一些方法作为标准，当然FDA规定25―250这个范围也是由他们的细菌学家经过反复论证才得出的。
从以上几点可以看出，行标比国标更严谨、更科学、更合理，更接近于国际标准。
菌落总数计数方法
菌落总数计数方法菌落总数计数是一种常见且重要的实验方法，用于评估菌落的数量和密度。
菌落总数计数方法有多种，常见的包括平板计数法、薄层计数法、过滤膜计数法等。
下面将详细介绍这几种方法的原理和步骤。
平板计数法是最常见的菌落总数计数方法之一。
它的原理是将待测菌液均匀涂布在含有固体营养培养基的平板上，通过菌落的生长扩散形成可见的单个菌落，再通过对菌落进行计数并乘以稀释倍数，最后得到待测菌液的菌落总数。
具体步骤如下：1. 准备固体培养基。
根据所要检测菌落的要求，选择适当的培养基并准备好。
固体培养基一般含有琼脂或明胶等物质，可以提供营养物质和支持菌落的生长。
2. 制备合适浓度的菌液。
将待测菌种培养在含有适宜营养物质的液体培养基中，利用培养箱或摇床进行恒温、恒湿的培养，待菌液呈现合适浓度时即可使用。
3. 稀释菌液。
根据待测菌液的预估浓度，将适量的菌液和无菌生理盐水按一定比例进行稀释，以获得合适浓度的菌液。
4. 涂布菌落。
取一定数量的稀释后的菌液，利用灌注器或鱼鳞划线法将菌液均匀涂布在固体培养基的平板上。
为了保证菌液的均匀分布，可以采取旋转、摇动等方法。
5. 培养菌落。
将涂布好的平板置于恒温、恒湿的培养箱中进行培养。
根据菌种的不同，一般在30-37的温度下培养24-48小时。
6. 计数菌落。
在培养好的平板上，通过肉眼或借助显微镜仔细观察菌落的形态、大小、颜色等特征，并使用菌落计数器或放大镜进行计数。
根据菌落的密度和分布情况，可以选择在整个平板上计数，或者在特定区域计数后进行推算。
7. 乘以稀释倍数。
由于菌液在进行稀释时常用不同倍数的生理盐水进行稀释，所以在计算菌落总数时需要将计数结果乘以稀释倍数，以获得准确的结果。
薄层计数法是另一种常见的菌落总数计数方法。
它的原理是将含有待测菌液的液体培养基均匀地倒入培养基皿中，使其能够覆盖整个底面。
待液体凝固后，菌落会在培养基表面生长，并且可以通过视觉或显微镜观察和计数菌落。
一篇文章吃透,菌落总数测定经验分享
一篇文章吃透，菌落总数测定经验分享一、菌落总数测定阅历共享(一)所用器皿及稀释液1．检验中所用玻璃器皿，如培育皿，吸管、试管等必需是完全灭菌的，并在灭菌前彻底洗涤洁净，不得残留有抑菌物质。
2．用作样品稀释的液体，每批都要有空白对比。
假如在琼脂对比平板上消失几个菌落时，要追加对比平板，以判定是空白稀释液，用于倾注平皿的培育基，还是平皿吸管或空气可能存在的污染。
3．检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水，但以用磷酸缓冲盐水特殊是0.1％蛋白胨水为合适，因蛋白胨水对细菌细胞有更好的爱护作用，不会由于在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。
假如对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释，则宜采纳蒸馏水。
(二)检样稀释1．检样稀释时，应以无菌称取(或量取)有代表性的液体样品25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成1:10的稀释液。
如系肉、鱼等固体样品，最好剪细于无菌均质袋与稀释液拍击匀称，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中，以8000~l 0000rpm速度搅拌1分钟，使做成匀称的1:10稀释液。
2．依据食品卫生标准要求或对标本污染状况的估量，将上述1:10的检样稀释液再做成几个适当的10倍递增稀释液。
即取1:10稀释液1mL与9mL稀释液混和做成1:100的稀释液，然后依次递增稀释，做成1:1000、1:10000等稀释液。
留意每递增稀释一次，必需另换1支1mL灭菌吸管，这样所得检样的稀释倍数方为精确。
3．从吸管筒内取出灭菌吸管时，不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分；而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；由于这些部分都可能接触过手或其他沾污物。
4．在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液面2.5cm；吸入液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。
菌落总数测定操作规程1
适用范围：食品检样经过处理，在一定条件下培养（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1m1（g）检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
操作内容：
1、检验程序：
2、操作方法：
2.1 以无菌操作，将检样25g（ml）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃
瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
2.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的
试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混均，做成1：100的稀释液。
2.3 另取1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即
换用1支1ml灭菌吸管。
2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在做10
倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做2个培养皿。
2.5 稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入培养皿约15ml，并转动培
养皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液灭菌培养皿内作空白对照。
2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±1h
3、菌落计数方法：
3.1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜，以防遗漏。
在记下各平板的菌落
后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
ISO4833-2003菌落总数的检测方法
ISO与美国FDA的不同处食品微生物检验方法（FDA与ISO对比）内容提要：l 菌落总数检测l 大肠菌群及大肠杆菌检测l 金黄色葡萄球菌检测l 沙门氏菌检测l 单核细胞增生李斯特氏菌检测菌落总数测定——菌落总数的概念l 菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
菌落总数测定——卫生学意义l 判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
l 及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供依据。
l 通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
FDA BAM 菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）35 ℃ 48 ± 2h菌落计数FDA BAM 菌落计数方法l 选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*dl 所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。
EAPC：estimated aerobic plate countl 所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。
l 所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞65*100* 1/d。
l 无法计数的平板报告LA（Laboratory Accident）。
l 最终结果保留前两位有效数字。
按照4舍6入，5是奇进偶不进。
食品微生物检验方法(ISOFDA)
所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml （g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度 。
所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm 的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应 平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞ 65*100* 1/d。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预 示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指 示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测 作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、 葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落 可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平 板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重 量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
•9
菌落总数测定几点要求
检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可 作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃ 放置，以便在计数检样时用作对照。
•10
大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼 性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学 方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为 食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些 细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步 的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗 称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和 阴沟肠杆菌等。
简要概括菌落总数检验过程
简要概括菌落总数检验过程
菌落总数检验过程主要包括以下步骤：
采样与稀释：首先进行采样，然后对样品进行十倍梯度稀释，得到系列浓度梯度的待检液。
接种：取适宜浓度的待检液1ml，注入培养皿后再倾注降温的卵磷脂-吐温80营养琼脂，同时做空白对照，然后转动培养皿使其混匀。
培养：待培养基冷却后，将平板倒置，置于36°±1°C培养箱内培养48h±2h。
注意不同产品可能需要不同的培养时间和温度。
计数与报告：培养完成后，选择平均菌落数在30~300之间的平皿进行计数。
报告单位为CFU/g或CFU/mL。
如果菌落数不在这个范围内，需要进行适当的稀释或浓缩后再进行计数。
请注意，整个过程需要在无菌环境下进行，并且从采样到倾注最后一个平皿所用的时间不宜超过20min，以防止细菌繁殖影响结果。
同时，为了确保结果的准确性，建议进行多次重复实验。
菌落总数的检测方法
菌落总数的检测方法一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
菌落总数的测定方法和步骤
菌落总数的测定方法和步骤
嘿，大家知道吗，菌落总数的测定可是非常重要的呀！这就像是一场对微生物世界的大探索。
首先说说测定的步骤和注意事项吧。
我们要先准备好培养基和无菌器材，这就好比战士上战场前要准备好武器一样重要呢！然后就是采样啦，一定要规范操作，可不能让其他杂菌混进来呀。
接着进行稀释，这一步要小心仔细，不能出一点差错。
再把稀释液接种到培养基上，要均匀分布哦。
之后就是培养啦，要在合适的温度和时间下进行，就像呵护小宝贝一样。
最后进行计数，可不能数错啦。
注意事项也不少呢，比如操作过程要严格无菌，不然结果就不准确啦，那可就白忙活一场啦！
再来谈谈过程中的安全性和稳定性。
整个过程都要确保安全，不能让有害菌跑出来危害我们呀。
而且实验条件要稳定，这样才能保证结果的可靠。
就好像走钢丝，必须稳稳当当的，不能有丝毫晃动。
那菌落总数的测定有啥应用场景和优势呢？哎呀，那可多啦！在食品行业，它能保证我们吃的东西安全卫生呀，难道你不想知道自己吃的食物里有没有太多细菌吗？在环境监测中也很重要，可以了解环境的卫生状况呢。
它的优势就是简单直观呀，可以快速了解微生物的情况。
我给大家说个实际案例吧。
有一次在一个食品厂，就是通过菌落总数的测定发现了问题，及时进行了整改，避免了产品出现质量问题。
这就像是给食品厂安装了一个“细菌警报器”，一有情况就能及时发现并解决呀！
所以呀，菌落总数的测定真的超级重要呀，我们一定要重视起来，把这个微生物世界探索得明明白白的！。
菌落总数检验步骤1很详细
菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法1 操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质 1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。
1.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。
1.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1： 10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
1.1.4 按1.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。
1.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。
同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。
1.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
1.2 培养1.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。
水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h.1.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
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菌落总数测定—菌落总数的概念
菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
λ
菌落总数测定—卫生学意义
判定食品被细菌污染的程度及其卫生质量。
λ
及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供依据。
λ
通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
λ
FDA BAM 菌落总数测定流程
1.检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）
2.适当十倍稀释样品
3.选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
（每个稀释度做两个平行）
4.每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）
35 ℃ 48 ± 2h
5.菌落计数
FDA BAM 菌落计数方法
1.选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*dλ
2.所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。
EAPC：estimated aerobic plate countλ
3.所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。
λ
4.所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞65*100* 1/d。
λ
5.无法计数的平板报告LA（Laboratory Accident）。
λ
6.最终结果保留前两位有效数字。
按照4舍6入，5是奇进偶不进。
λ
ISO4833-2003 菌落总数测定流程
1.检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）
2.适当十倍稀释样品
3.选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
（每个稀释度做两个平行）
4.每皿内加入适量（12~15mL）
平板计数琼脂（PCA），
30±1 ℃，72 ±3 h
5.菌落计数
ISO4833-2003菌落计数方法
1.选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如下：N=∑C/（n1+0.1*n2）*dλ
2.所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：NE=m 固体样品： NE=m×d-1λ
3.无菌生长：液体样品：less than 1; 固体样品：less than 1 ×d-1λ
4.最终结果保留前两位有效数字。
λ
菌落总数测定几点说明：
1.由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。
λ
2.鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
λ
菌落总数测定几点要求：
1.每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min，主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。
样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。
皿内琼脂凝固后，不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。
λ
2.检样过程中应用稀释剂做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。
同时，检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以了解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。
λ
3.检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃放置，以便在计数检样时用作对照。
λ。