欧蒙抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒酶联免疫吸附法说明方案完整版
酶联免疫吸附试验流程
酶联免疫吸附试验流程介绍酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验室技术，用于检测生物样本中的特定蛋白质或其他分子。
ELISA技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
本文将详细介绍ELISA的流程及其相关要点。
一、试剂准备在进行ELISA实验之前，需要准备一系列试剂和材料，包括涂板、标准样品、检测抗体、辅助试剂等。
下面是一份常用的试剂列表：1.涂板：通常使用96孔的微孔板，常见的材料有聚苯乙烯或聚碳酸酯。
要确保涂板的表面是光洁的，没有污染或缺损。
2.标准样品：用于构建标准曲线，测定待测样本中目标分子的浓度。
标准样品的浓度应该覆盖到待测样本的浓度范围。
3.抗原或抗体：用于偶联到涂板表面或用作检测物。
抗原可以是待测分子，抗体可以是单克隆或多克隆抗体。
4.阻断剂：用于阻止非特异性结合，并降低背景信号的产生。
常用的阻断剂包括牛血清白蛋白（BSA）或干酪蛋白。
5.洗涤缓冲液：用于洗涤涂板，去除非特异性结合物。
6.辅助试剂：如辅酶、辅酶底物等，用于增强信号或催化染色反应等。
二、典型的ELISA流程下面是一个典型的ELISA流程，包括固相吸附、孔洗涤、抗原或抗体结合、检测抗体结合和信号发生等步骤。
具体流程如下：1. 固相吸附1.将待测样本加入涂板中，使目标分子与涂板表面相互作用；2.孵育一段时间，使待测分子与涂板表面结合；3.倒掉涂板中的待测样本，洗涤孔洞以去除未结合的物质。
2. 孔洗涤1.向涂板中加入洗涤缓冲液，使孔洞充分浸润；2.轻轻倾斜涂板，将洗涤缓冲液倒出，去除未结合的物质；3.重复以上洗涤步骤2-3次，以确保洗涤干净。
3. 抗原或抗体结合1.向涂板中加入检测抗体，与目标分子结合；2.孵育一段时间，使检测抗体与目标分子发生特异性结合；3.倒掉涂板中的检测抗体，洗涤孔洞以去除未结合的物质。
4. 孔洗涤请参考步骤2中的孔洗涤步骤。
人免疫球蛋白 D（IgD）酶联免疫吸附测定试剂盒说明书
人免疫球蛋白D（IgD）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中IgD含量。
实验原理用纯化的IgD抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的IgD抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IgD 呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000ug/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成1,000ug/ml，500ug/ml，250ug/ml，125ug/ml，62.5ug/ml，31.2ug/ml，15.6ug/ml，样品稀释液直接作为空白孔0 ug/ml。
如配制500ug/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1,000ug/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8、底物溶液：1×10ml/瓶。
欧蒙抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明方案
抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）说明书【产品名称】抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）【通用名称】Anti-CardiolipinELISA(lgG)【包装规格】【预期用途】用于体外定量或半定量检测人血清或血浆中抗心磷脂抗体lgG。
适应症：抗磷脂综合症临床意义：与抗心磷脂抗体相关的临床并发症统称为抗心磷脂综合症：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、自发性流产、死胎和早产、中枢神经系统症状（包括头痛到大脑血栓形成等各种症状）、骨坏死的早期体征、肺高压。
抗心磷脂抗体见于50%的系统性红白狼疮患者和约5-40%的其他系统自身免疫异常患者（类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合症、夏普综合症等）。
抗心磷脂抗体阳性的患者有发展为静脉和动脉血栓的危险（高浓度抗心磷脂抗体的患者发病风险约为80%）。
自发性流产、死胎和早期患者经常可检抗心磷脂抗体，与是否存在自身免疫性疾病的征状无关。
但系统性红白狼疮患者更容易出现孕期并发症（达77%），可能的原因包括静脉血栓形成所致子宫内梗死。
心肌或大脑死后检测出高浓度的抗心磷脂抗体预示出现其他血管并发症的危险率增高，也是梗死后病情和预后监测的指标。
抗心磷脂抗体可有lgA、lgG或lgM亚型，诊断价值最高的是高浓度的lgG抗体，但很多患者血清中可检测出lgA和lgM型抗心磷脂抗体。
才外，有证据表明高浓度的抗心磷脂lgG型抗体与血小板减少症高度相关，而高浓度的抗心磷脂lgM型抗体和溶血性贫血高度相关。
【检验原理】试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有心磷脂的微孔。
第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。
在很多情况下，抗心磷脂抗体识别抗原需要血浆蛋白（β2-糖蛋白1）作为辅助因子，为此，反应体系必含有这一辅助因子，如果样本阳性，特异性lgG（包括lgA和lgM）与抗原相结合，为了检测结合的抗体，可加入发生颜色反应的酶标抗人lgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。
酶联免疫吸附试验(ELISA)的程序精选全文完整版
精选全文完整版酶联免疫吸附试验（ELISA）的程序第一节间接ELISA试验一用可溶性抗原的ELISA：1、纯化抗原：用包被液稀释至1—20ug/ml；2、以50—100ul/孔量加入酶标板孔中；3、置4（度）过夜或37（度）吸附3h；4、PBST洗三次；5、每孔200ulPBS/NCS 4（度）过夜封闭或37（度）封闭3h；6、PBST洗5次，每次1min（包被板可—20（度）或许（度）保存备用）7、每孔加50—100ul第一抗体，同时设阳性、阴性对照。
若杂交瘤筛选，每孔加杂交瘤培养上清；8、37（度）孵育2h9、PBST洗5次，每次5min10、每孔加50—100ul酶标第二抗体；若杂交瘤筛选，每孔加HRP 标记的抗小鼠（IgG+IgM）抗体；11、37（度）孵育2h12、PBST洗5次，每次数5分钟；13、每孔加OPD 或TMBS底物100ul14、37（度）避光作用；（OPD为10—20）分钟，TMBS为40分钟）；15以50ul2MH2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值（OPD底物选用490nm滤光片，TMBS底物选用450nm滤:光片）；16结果判定：（1）P/N≥2.1 为阳性(2) P≥N+3SD 为阳性成功范例:NDV单抗检测，粘附素单抗检测，H单抗检测亚类鉴定和鸡白痢检疫等。
二、用全菌抗原的ELISA法（一）GA法1、新鲜培养的细菌用蒸馏水悬浮，光密度法或比浊法调整细菌浓度至1X10（6）个/ml。
注意：沙门氏菌等人畜共患病原体，使用前必须灭活或采用市售的灭活诊断菌液；2、酶标板中加200ul/孔，5%戊二醛（GA）溶液（0.1M NaHCO4 95ml+25%DNY戊二醛溶液5ml）;37(度);2小时3、蒸馏水洗5次;4、加细菌悬浮液,50ul/孔;5、37(度)温箱内过液,干燥吸附(20—24h)6、加PBS/NCS 220ul/孔37（度）封闭3小时或4（度）过夜封闭；7、PBST洗5次（—20（度）或4（度））存放备用；8、以下步骤同一。
抗心磷脂体抗体检测
抗心磷脂体抗体检测1. 检验目的用于体外定性检测人血清或血浆中抗ACA-IgG、IgM、IgA的水平。
2. 方法原理包被纯化的心磷脂抗原与待测样品中的ACA-IgG、IgM结合，加入酶标抗体后，形成复合物，后者与底物作用呈显色反应，在450nm处测定其吸光度（OD）值，反映样品中ACA-IgG、IgA、IgM水平是否正常。
3性能参数阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检测限符合最低检出限的检出要求，精密度CV（%）不高于15%，37℃放置6天产品性能稳定。
4.始样品系统4．1标本类型：血清或血浆4．2采血严格按照静脉采血的通用规则。
4．3样本在离心前，须凝固充分。
4．4不能使用在室温下放置超过8小时的样本。
4．5如果检测不能在8小时内完成，要将瓶盖紧闭，并存于2—8℃保存。
4．6如果样本在48小时内不检测，将样本血清冻存于-20℃。
4．7样本只能冻融一次。
4．8加样前样本须无纤维、气泡及其它物质。
4．9标本的拒收：严重溶血、脂血、血量不够、三查三对不合格者拒收。
5容器和添加物的类型5.1无抗凝剂的红色或黄色胶头真空试管。
5.2EDTA、肝素抗凝的紫色、绿色胶头真空试管。
6设备和试剂6.1分析仪器：酶标分析仪：TECAN公司移液器：5μl～450μl移液器恒温水浴箱：上海一恒公司的CU420微孔振荡器：分析试剂: ASKI ELISA法检测试剂盒6.2 组成：6.2.1 纯化抗原包被反应条：室温平衡30分钟方可拆开包装6.2.2 酶结合物：用于酶联反应6.2.3 阳性对照：用于阳性对照反应6.2.4 阴性对照：用于阴性对照反应6.2.5 样本稀释液：用于稀释样本6.2.5 浓缩洗涤液：用前以蒸馏水作30倍稀释6.2.6 底物A：用于显色反应6.2.7 底物B：用于显色反应6.2.8 终止液：用于终止显色反应6.3 试剂保存与有效期6.3.1 新购试剂保存于2-8℃，勿冷冻，在有效期内使用。
QuicKey-人免疫球蛋白 G(IgG)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）QuicKey-人免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书QuicKey Human IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit产品货号：E-TSEL-H001196T/48T/24T使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
QuicKey系列与传统ELISA试剂盒相比，在实验时间节省至少1小时的同时，获得更加灵敏和精确的实验结果。
Elabscience 自主开发的新技术，旨在帮助客户以更为高效的方式进行科学研究。
用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、尿液、唾液中IgG 浓度。
其它相关生物液体请咨询技术支持。
灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.64ng/mL。
●检测范围：1.56-100ng/mL。
●特异性：可检测样本中的人IgG ,且与其它类似物无明显交叉反应。
●重复性：板内，板间变异系数均<10%。
背景介绍免疫球蛋白G（IgG）是一种存在于所有体液中的免疫球蛋白。
它们是体内最小但最常见的抗体(75%到80%)。
IgG抗体是由4个肽链组成的大分子，约150 kDa，包含2个相同的约50 kDa的γ重链，和两个相同的约25kDa的轻链，由此形成一个四聚体的结构。
IgG抗体在对抗细菌和病毒感染方面非常重要,而且是唯一一种能够通过孕妇胎盘帮助胎儿的抗体。
如果机体有特定的症状，IgG的测量可以作为诊断某些疾病的工具，如自身免疫性肝炎。
在临床上，检测到的IgG抗体水平通常被认为是个体对特定病原体的免疫状态的指示物。
这一做法的一个常见例子是，为了证明对麻疹、腮腺炎和风疹(MMR)、乙型肝炎病毒和水痘等的血清学免疫力而绘制的滴度图。
欧蒙抗核抗体谱IgG检测标准操作规程精编WORD版
欧蒙抗核抗体谱I g G检测标准操作规程精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。
2.适用范围检验科免疫组工作人员。
3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。
5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。
6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。
可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。
在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。
因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。
[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C保存，不要冷冻。
欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程完整
抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。
2.适用围检验科免疫组工作人员。
3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A〔天然 SS-A 和 Ro-52〕、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。
5.适应症：夏普综合征〔MCTD〕，系统性红斑狼疮〔SLE〕，枯燥综合征，进展性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进展性系统性硬化症〔CREST 综合征〕，原发性胆汁性肝硬化。
6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分〔细胞核的生化成份〕[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白与核糖蛋白。
可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。
在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。
因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病确实认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。
[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征〔混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮〔SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—枯燥综合征〔原发性枯燥综合征〕[5],—系统性硬化症〔系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症〔CREST 综合征〕 [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件与有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。
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欧蒙抗心磷脂抗体L g G 检测试剂盒酶联免疫吸附法说明方案集团标准化办公室：[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）说明书【产品名称】抗心磷脂抗体LgG检测试剂盒（酶联免疫吸附法）【通用名称】Anti-CardiolipinELISA(lgG)【包装规格】【预期用途】用于体外定量或半定量检测人血清或血浆中抗心磷脂抗体lgG。
适应症：抗磷脂综合症临床意义：与抗心磷脂抗体相关的临床并发症统称为抗心磷脂综合症：静脉和动脉血栓形成、血小板减少症、自发性流产、死胎和早产、中枢神经系统症状（包括头痛到大脑血栓形成等各种症状）、骨坏死的早期体征、肺高压。
抗心磷脂抗体见于50%的系统性红白狼疮患者和约5-40%的其他系统自身免疫异常患者（类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合症、夏普综合症等）。
抗心磷脂抗体阳性的患者有发展为静脉和动脉血栓的危险（高浓度抗心磷脂抗体的患者发病风险约为80%）。
自发性流产、死胎和早期患者经常可检抗心磷脂抗体，与是否存在自身免疫性疾病的征状无关。
但系统性红白狼疮患者更容易出现孕期并发症（达77%），可能的原因包括静脉血栓形成所致子宫内梗死。
心肌或大脑死后检测出高浓度的抗心磷脂抗体预示出现其他血管并发症的危险率增高，也是梗死后病情和预后监测的指标。
抗心磷脂抗体可有lgA、lgG或lgM亚型，诊断价值最高的是高浓度的lgG抗体，但很多患者血清中可检测出lgA和lgM型抗心磷脂抗体。
才外，有证据表明高浓度的抗心磷脂lgG型抗体与血小板减少症高度相关，而高浓度的抗心磷脂lgM型抗体和溶血性贫血高度相关。
【检验原理】试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有心磷脂的微孔。
第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。
在很多情况下，抗心磷脂抗体识别抗原需要血浆蛋白（β2-糖蛋白1）作为辅助因子，为此，反应体系必含有这一辅助因子，如果样本阳性，特异性lgG（包括lgA和lgM）与抗原相结合，为了检测结合的抗体，可加入发生颜色反应的酶标抗人lgG抗体（酶结合物）进行第二次温育，然后加入酶底物，发生颜色反应。
【主要组成成分】1、不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。
【储存条件及有效期】2-8℃保存，不要冰冻。
未开封前，除非特别说明，试剂盒中各成分自生产之日起可稳定1年。
1、包被有抗原的微孔板：自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8℃的环境中保存至少4个月。
2、酶结合物：稀释后的酶结合物必须在稀释后的4小时内试用。
3、清洗缓冲液：稀释后的缓冲液于2-8℃最多可稳定一个月。
【样本要求】样本：人血清或EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆。
稳定性：待测样本在2-8℃可以保存14天，已稀释的样本必须在当天检测。
样本稀释：血清和血浆样本用样本缓冲液1:201稀释，例如，可取5ul血清用1.0ML样本缓冲液稀释并混均（加样枪不适合混均）。
注意：标准品和对照品已经稀释，请勿在稀释。
【检验方法】试剂准备和稳定性注意：所有试剂在使用前均在室温（18-25度）平衡30分钟。
从第一次使用起，实际在2-8℃保存并无污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。
-抗原包被微孔：直接使用，在外包装密封线咬合部的上段剪开保护袋，为防止板条受潮，只有当微孔板平衡到室温后才可以打开包装。
剩余的孔应立即放回保护袋并封好（保存干燥剂）、从第一次打开保护带起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8℃的环境中至少保存4个月。
-标准品和对照血清:直接使用，使用前应充分的混匀。
-酶结合物：10倍浓缩，使用前应充分混匀，用干净的吸管吸取需要量的酶结合物用样本缓冲液1:10稀释，如：需温育一条微孔板条。
则可取0.1ml浓缩酶结合物用0.9ml样本缓冲液稀释。
已稀释的酶结合物必须在4个月内使用。
-样本缓冲液：直接使用-清洗缓冲液：10倍浓缩。
如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37度并充分混匀溶解。
用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:10稀释（1份浓缩清洗缓冲液加9份蒸馏水）。
如：需清洗一条微孔板，则可取5ml浓缩液清洗缓冲液用45m蒸馏水稀释。
稀释后的缓冲液于2-8℃最多可稳定一个月。
-色原/底物液：直接使用。
因内容物对光明感，试用后应立即盖好瓶盖。
色原/底物液应为无色澄清，如果变蓝，则不要使用。
-终止液：直接使用。
操作流程半定量检测时，标准品2与阳性对照，阴性对照及患者样本一起温育，定量检测时，标准品1、2、3与阳性对照，阴性对照及患者血清一起温育。
样本温育：按加样方案向相应的微孔分别加100ul标准品、阳性对照、阴性对（第一步）照或稀释后的样本，室温（18-25℃）温育30分钟。
清洗：手工：倒掉微孔板内的液体，用稀释后的清洗液洗3次，每次300ul。
自动：用稀释后的清洗缓冲液清洗三次，每次450ul程序设定：如TECAN洗板机可设置为“OVERFLOWMODUS”每次清洗时缓冲液在微孔中至少保留30-60秒，然后在倒掉。
清洗后（包括人工和自动）应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残留的清洗液。
注意：清洗后遗留在微孔中的残夜（＞10ul）可干扰底物反应而导致吸光度值偏低。
清洗不充分（如少清洗少于3次，清洗液太少或清洗液清洗时间太短）可能导致吸光度值偏高。
微孔反应板条上的空位应添上与测定的微孔反应同规格的空反应微孔。
酶结合物温育：滴加100ul酶结合物至每一个微孔，室温（18-25℃）温育30分钟。
清洗：倒掉微孔板内的液体，如上述步骤清洗。
底物温育：滴加100ul色原/底物液至每一微孔，室温（18-25℃）避光温育15分钟。
终止反应：以与加色原/底物液相同速度和顺序滴加100UL终止液至每一微孔。
比色：450nm比色，参考波长620-650nm，加完终止液后30分钟之内比色，比色前，轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。
加样方案1-4微孔板条加样方案是对24份患者样本（P1-P24）进行半定量检测的示例。
7-10微孔板条加样方案是对24份患者样本（P1-P24）进行定量检测的示例。
标准品（C1-C3）、阳性对照（POS）、阴性对照（NEG）和患者样本（P1-P24）各在孔中温育。
没分样本复孔检测可提高实验性的可靠性。
每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少试剂的浪费。
阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次试验都必须做。
【参考范围】用本检测系统检测了406份健康献血员工血清中国抗心磷脂lgG抗体水平，以12PL-lgG-U/ml作为临界值，所有献血员工血清抗心磷脂lgG抗体阴性。
【检验结果的解释】半定量：按照以下公式计算对照血清或者患者样本吸光度值和标准品2吸光度值的比值，通过比值半定量的判断结果：比值=对照或者患者样本的吸光度值标准品2的吸光度值欧蒙建议按照以下原则稀释结果：比值＜1.0：阴性比值≥1.0：阳性定量检测：分别以3份标准血清的浓度（相对单位数）和气吸光度为横纵坐标（线性/线性）以点对点的方式做标准线，并根据标准曲线点对点以求出患者血清中的抗体浓度。
下图仅为一典型标准曲线的示例，不能用于计算患者样本中抗体浓度。
曲线图如果患者样本的吸光度超出了标准品1的值（120PL-lgG-U/ml），结果为大于120PL-lgG-U/ml，建议将样本1:800稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为赝本中的抗体的浓度。
欧蒙推荐的正常范围的上限（CUT-OFF）为12PL-lgG-U/ml。
欧蒙推荐对实验结果做如下解释：＜12PL-lgG-U/ml：阴性≥12PL-lgG-U/ml：阳性复孔检测应取两孔检测结果的平均值进行计算。
如果两孔间的值相差过大，应重做试验。
应结合病人的临床症状和血清学检查结果进行诊断。
【产品性能指标】定标：标准品采用国际人标准血清（LouisvilleAPLDiagnostics,USA）订标，标准品单位为PL-lgG-U/ml。
1PL-lgG-U/ml定义为经亲和层析从标准血清（Harriset.al1987）纯化得到的1ug/ml 抗心磷脂lgG抗体结合心磷脂的活性。
每一组实验，标准品的吸光度和阳性对照、阴性对照的单位和/或比值必须在相应批号试剂的参考范围内，试剂盒附有靶值参照表。
如果实验结果超出额定范围，则说明实验结果不准确，应重做。
所用酶的活性与温度有关，如果不使用恒温器，吸光度值会有所不同。
底物温育时室温（18-25℃）越高，吸光度值越高。
温存时间不同也会引起同样的差异。
但因标准血清会收到同样的影响，这种差异在计算结果时会在很大程度上得到补偿。
心磷脂为带负电磷脂，呈高浓度位于线粒体内膜（在九种已经线粒体抗原分型中属M1型），磷脂包含磷酸酯，一侧为甘油衍生物，另一侧为丝氨酸、胆碱、乙醇氨、肌醇或甘油。
甘油衍生物包含二个带有不同数目或长度的双结合键脂肪酸。
甘油衍生物与脂化磷酸共同行程磷脂酸。
心磷脂的两个磷脂酸可与另一个甘油份子连接。
抗心磷脂抗体可能是一类密切相关但亲和力不同的抗带负电磷脂（如心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇）抗体的一个亚型。
抗心磷脂抗体的一个亚群（约75%）识别抗原需要一种血浆蛋白（β2-糖蛋白I,GPI）作为辅助因子。
到目前为止还不清楚这类抗体是只识别GPI表位还是心磷脂表位，但已明确GPI只与带负电的磷脂反应，而不与中性的磷脂（如磷脂酰乙醇胺）反应。
2120lgG-PL-U/ml曲线图滴度。
本检测系统的最低检出限为0.8lgG-PL-U/ml。
磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱）反应，没有其他交叉反应。
0.4mg/ml的黄疸对检测结果没有干扰。
复性。
批内检测的CV基于20次检测的结果，而批间的CV则基于不同6天、每天4次检测的结果。
阳性发生率和特异性：21份APS患者血清中抗心磷脂抗体lgG的阳性发生率为67%。
对照血清盘（HIV/HBV或者HCV患者血清n=247:健康献血者血清n=406）检测结果显示：本检测系统的特异性为100%。
【注意事项】警示：（1）本检测试剂仅用于体外诊断。
（2）标准品和对照品的HBsAg、抗HCV、HIV-1和HIV-2抗体均为阴性。
但是，试剂盒中所有的组分都应被视作潜在传染源小心处理。
其中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。
废物处理：样本、标准品、对照品和温育过的微孔板条必须作为潜在传染源处理，试剂盒中所有试剂的处理必须遵循官方规定。
【参考文献】1、AshersonR.A:A”primary”2、AshersonR.A,Khamashta,M,A,Gil,A,et,al:Cerebrovasculardieaseandantiphospholipida ntibodierinsystermiclupuserythematosus,lupus-likediease,andtheprimaryantiphospholipidsyndrome.Am,J,Med,86:391-299(1989).3、:35:83-88(1991).4、ncet:113-115(1986).5、ncet: 1211-1214(1983).6、umatol.2:47-51(1984).7、Peti,M.,Rhenschmidl,M,.8、hancescardiolipinbindingactivitybutisnottheantigenforantiphosphlipidantibodies. B4.J.Haematol.82:565-570(1992).9、10、[生产企业]11、生产企业名称：欧蒙医学试验诊断股份公司12、Manufacturer`snamen:EUROIMMUNMedizinischeLabordiagnostikaAG13、地址：德国，吕贝克，D-23560,Seekarnp?3114、Address:D-23560,Lubeck,Seekamp31,Germany15、电话：（Tel）：0451-5855-0?传真（Fax）：0451-5855-59116、E-Mail：网址：17、18、售后服务单位名称：北京欧蒙生物技术有限公司19、地址：北京市朝阳区北辰东路8号院1号楼19层1901-1907?邮政编号：10010120、电话：传真：21、E-Mail：网址：22、23、[医疗器械注册证书编号]国食药监械（进）字2011第2401856号24、25、【产品标准编号】YZB/GEM?1095-201126、27、【说明书批准及修改日期】28、版本号：EA_1621G_A_CN_C03。