实验三_水及食品中微生物的检测
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
基础生物学实验精品课程实验三一滴水中的微小生物
一滴水(池塘水)中可以含有众多的微小生命，它们大多因 个体微小而无法用肉眼判明正身，必须借助显微镜才能观察清 楚。镜下可见，水中微小生物种类繁多，或单细胞植物和动物 ，或低等多细胞生物。它们是水生生物的重要组分，也是池塘 生态系统食物链的重要一环。
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实验三 一滴水中的微小生物
【仪器、材料与剂】
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实验三 一滴水中的微小生物
【方法与步骤 】
(一)浮游生物的采集与制备临时装片
在天然水体，离岸边lm以外地方，手持长竹杆，将浮游 生物网放入水面下0.5 m 处，作"a"字形摆动，经10～20 min 后，提取浮游生物网，将网底控系的塑料瓶解下，浓集液摇 匀一分为二，各分装到另外的两个塑料瓶内。1瓶按100毫升 样品加入1.5毫升鲁哥氏液的比例进行固定，另1瓶不固定， 采样后立即观察（一般不能过夜，因为时间延长，藻类植物 越来越少，浮游动物种类也越来越少，但优势种明显，而且 个体越来越大）。
用滴管吸取水样一滴于载玻片中央，慢慢盖下盖玻片， 制成临时装片，置显微镜下观察。
【方法与步骤 】 (二) 池塘水中的藻类植物 (三)池水中的微小动物
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实验三 一滴水中的微小生物
注意事项
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实验三 一滴水中的微小生物
对于活体生物的显微观察，特别是可以游动的生 物，要边观察边通过不停地用移动和调焦来“追踪”观 察对象。
基础生物学实验精品课程实 验三一滴水中的微小生物
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实验三 一滴水中的微小生物
【目的要求】
在显微镜下观察水中的各种微小生物，认识一些常见 的水中微生物，初步理解生命的多样性。 重点观察草履虫、绿眼虫、衣藻等，掌握其相关结构 特点。 进一步巩固和应用生物显微镜，学习简单的临时装片 方法。
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（一)实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
（二)实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。
这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
食品微生物学实验报告
实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。
2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。
[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。
2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。
3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。
4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。
经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。
少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。
有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。
二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。
三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。
其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。
把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。
一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。
灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。
干热灭菌法也叫热空气灭菌法。
实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。
此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。
其优点是灭菌器皿保持干燥。
但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。
水的微生物检验
水的微生物检验一、器材：1 •培养基：PCA、灭菌双料5支、单料10支/每个样品（乳糖蛋白胨）2．仪器或其他用具：灭菌三角烧瓶（带塞）且加入稳定剂，灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌镊子、灭菌棉球、灭菌10 ml 生理盐水（灭菌9 ml 生理盐水）、酒精灯（打火机、酒精棉球）、样品筐二、水样的采集：1 • 用灭菌棉球将水龙头擦干（钢铁管口用酒精灯烧灼消毒水龙头周围 3 分钟）2. 完全打开水龙头使水流2-5分钟后，将水龙头关小，以灭菌三角烧瓶接取水样。
方法二：1. 流1-2分钟2. 关上，擦水龙头四周3. 打开水龙头，流2-5 分钟4. 接水注意：1.加硫代硫酸钠的量：500 ml水加1.5%硫代硫酸钠2ml或每500 ml加0.4ml硫代硫酸钠。
2. 样品瓶必须专瓶专用，灭菌后须干燥。
3. 人手和手套不得与样品瓶内壁或瓶塞接触。
4. 采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上，注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。
5. 运送水样应避免瓶摇动（充满容器并密封，除冷冻样品），以免水样溢出后又回流瓶中增加污染。
6. 取样后2 小时内检验，冷藏4小时内检验7. 做样在无菌间做。
三、细菌总数、大肠菌群测法参照GB5750-85 （2001 版）水的余氯检测程序一、器材：配好的比色管10 支，洁净的50ml 比色管1 支，三角锥瓶2个（带塞）二、水样采集：打开水龙头流水1-2 分钟后，以三角烧瓶接取水样，涮洗3 次，接取200ml 左右，迅速送到实验室比色。
三、操作：准确吸取2.5ml 邻联甲苯胺溶液于50ml 比色管中，加水样至50ml 刻度处。
当接近刻度时，改用滴管加至刻度处，以与眼平行时，凹液面与刻度相平为准。
（盖上瓶塞，颠倒混匀2-3 次），迅速比色，然后审核并做记录。
四、注意事项：1. 抽取时间：车间上班30 分钟后。
2. 每天三角锥瓶、比色管用完后刷洗并控干。
3. 5ml 吸管每月换1（或2）支。
4. 抽取按编号顺序抽取。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物检验是一种重要的实验室技术，用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具，并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质，比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息，包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后，需要尽快进行处理，避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行，使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释，以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行，以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存，确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前，需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上，避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行，避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养，促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况，记录生长的数量和形态，用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时，需要进行鉴定和分析，确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准，进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读，判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
实验三 水中细菌总数的测定
实验三水中细菌总数的测定实验目的：1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.理解水质检测的原理和意义。
实验原理：在水体中存在着大量的微生物，其中包括细菌、藻类、真菌、原生动物等。
其中，细菌是最常见的一种。
水中细菌的检测可以对水质进行评估。
水中细菌的测定方法有多种，其中最常用的是悬浮液涂片法。
具体步骤如下：1.样品采集：准备好采集样品的器具，比如采样瓶。
在采集水样之前，要仔细洗手，并戴上手套。
2.处理样品：将样品过滤筛，去除水中的大颗粒。
然后用吸头从样品瓶中吸取适量的水样，放入卡片内。
3.制作涂片：将取出的水样涂在普通菌落计数板上。
涂片的方式要均匀，涂抹的厚度要适中。
制片完成后，可将板在37℃恒温条件下培养24小时。
4.统计菌落数目：待培养时间结束后，统计平板上的菌落数目。
实验步骤：1.准备实验药品和器具，保持清洁卫生，避免造成污染。
3.取出一片净化涂片，并用酒精灯或消毒灯消毒。
4.用吸头从采样瓶中取出适量的水样，均匀地涂在净化涂片上。
5.将制片好的涂片在恒温器中培养，待24小时后取出观察。
统计涂片上菌落的数目，计算出水样的细菌总数。
6.实验结束后，将药品和器具进行清理和消毒。
实验注意事项：1.实验过程中要注意保持清洁卫生，防止污染；2.涂片的制作要均匀，厚度不要过薄或过厚；3.涂片不要碰触手指等其他物体，否则影响菌落生长；4.待菌落计数板培养后不要翻盘，以免影响菌落的计数。
实验结果分析：通过实验，我们可以了解到水中细菌总数的检测方法，并从中得出有关水质的检测数据。
水中细菌总数越高，说明水质越差，这意味着我们在使用这种水源时需要更加谨慎和严格。
因此，水质检测对于保障人们的健康和生命安全非常重要，需要时常进行检测和监控。
食品的相关实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握测定食品中维生素C含量的原理和方法。
2. 熟悉实验操作过程，提高实验技能。
3. 分析食品中维生素C含量的影响因素。
二、实验原理维生素C（抗坏血酸）是一种水溶性维生素，对人体健康具有重要意义。
本实验采用2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中维生素C的含量。
该方法基于维生素C具有还原性，能将2,6-二氯靛酚（氧化剂）还原成无色物质，通过滴定计算样品中维生素C的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：苹果、梨、柑橘等富含维生素C的食品。
2. 试剂：2,6-二氯靛酚标准溶液、碘化钾溶液、醋酸缓冲溶液、淀粉指示剂等。
3. 仪器：酸式滴定管、锥形瓶、电子天平、烧杯、玻璃棒、滴定管夹等。
四、实验步骤1. 样品处理：将苹果、梨、柑橘等食品洗净，去皮去核，切成小块，用组织捣碎机捣碎，取适量匀浆，用醋酸缓冲溶液定容至100 mL。
2. 标准溶液的配制：准确称取2,6-二氯靛酚标准品0.1 g，用醋酸缓冲溶液溶解并定容至100 mL，配制成0.1 mg/mL的标准溶液。
3. 滴定实验：准确吸取10.0 mL样品匀浆，置于锥形瓶中，加入2 mL醋酸缓冲溶液，滴加几滴淀粉指示剂，用2,6-二氯靛酚标准溶液滴定至溶液变为蓝色，记录消耗标准溶液的体积。
4. 计算维生素C含量：根据标准溶液的浓度和消耗体积，计算样品中维生素C的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）苹果中维生素C含量：5.28 mg/100 g（2）梨中维生素C含量：4.32 mg/100 g（3）柑橘中维生素C含量：3.76 mg/100 g2. 分析（1）实验结果表明，苹果、梨、柑橘等水果中均含有较高的维生素C。
（2）样品处理过程中，捣碎程度和匀浆的浓度对实验结果有一定影响。
（3）实验过程中，滴定速度、指示剂加入量等因素也会影响实验结果。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了测定食品中维生素C含量的原理和方法，分析了实验过程中可能影响结果的因素。
食品化学实验教案
食品化学实验教案一、实验目的1. 理解食品中各种成分的化学性质和作用。
2. 学习食品化学实验的基本操作技能。
3. 培养学生的实验观察能力和科学思维。
二、实验原理1. 食品中的营养成分：碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等。
2. 食品腐败变质的原因：微生物的生长和繁殖，食品的化学变化等。
3. 食品保存的方法：低温保存、高温杀菌、干燥保存、腌制等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、牛奶、面包、水果、蔬菜等。
2. 实验仪器：天平、量筒、烧杯、试管、滴定管、pH计等。
四、实验内容与步骤1. 实验一：食品中碳水化合物的测定步骤：(1) 准备样品，如面包、水果等。
(2) 采用滴定法测定样品中的碳水化合物含量。
(3) 记录数据，进行分析。
2. 实验二：食品中蛋白质的测定步骤：(1) 准备样品，如鸡蛋、牛奶等。
(2) 采用凯氏定氮法测定样品中的蛋白质含量。
(3) 记录数据，进行分析。
3. 实验三：食品中脂肪的测定步骤：(1) 准备样品，如肉类、植物油等。
(2) 采用酸价法或皂化法测定样品中的脂肪含量。
(3) 记录数据，进行分析。
4. 实验四：食品中维生素C的测定步骤：(1) 准备样品，如水果、蔬菜等。
(2) 采用碘量法测定样品中的维生素C含量。
(3) 记录数据，进行分析。
5. 实验五：食品中矿物质的测定步骤：(1) 准备样品，如面包、牛奶等。
(2) 采用原子吸收光谱法测定样品中的矿物质含量。
(3) 记录数据，进行分析。
五、实验报告要求2. 实验报告包括实验目的、原理、材料与仪器、实验步骤、实验结果和分析等内容。
3. 实验报告要求条理清晰，数据准确，分析深入。
六、实验六：食品添加剂的使用与检测1. 实验目的了解食品添加剂的种类、作用及限量标准。
学习食品添加剂的检测方法。
2. 实验原理食品添加剂包括着色剂、防腐剂、甜味剂、香料等，它们可以改善食品的色泽、口感、保质期等。
但过量使用对人体有害，需掌握其检测方法。
微生物检验实验报告
微生物检验实验报告微生物检验实验报告一、引言微生物检验是一项重要的实验室技术，用于检测食品、水源、环境等中的微生物污染情况。
本次实验旨在通过对不同样本的微生物检验，了解微生物在不同环境中的存在情况以及对人体健康的影响。
二、实验目的1. 掌握微生物检验的基本原理和方法；2. 分析不同样本中的微生物存在情况；3. 了解微生物对人体健康的影响。
三、实验方法1. 样本采集：从不同环境中采集样本，如食品、水源、空气等；2. 样本处理：将样本分别进行过滤、培养和培养基涂布等处理；3. 培养：将处理后的样本接种于适当的培养基上，并进行培养；4. 观察和记录：观察培养基上的微生物生长情况，并记录结果。
四、实验结果与讨论在本次实验中，我们采集了来自不同环境的样本，并进行了微生物检验。
以下是我们的实验结果和讨论：1. 食品样本我们采集了市场上的鸡肉样本，并进行了微生物检验。
结果显示，鸡肉样本中存在大量的大肠杆菌和沙门氏菌。
这表明鸡肉可能受到了粪便污染，存在潜在的食品安全隐患。
因此，在食用鸡肉时，应注意烹饪充分，以杀死潜在的致病菌。
2. 水源样本我们采集了自来水和河水样本，并进行了微生物检验。
结果显示，自来水样本中微生物数量较少，符合卫生标准。
而河水样本中存在大量的肠道致病菌和其他细菌，这表明河水受到了污染。
因此，我们在户外活动时应尽量避免直接饮用河水，以防止疾病传播。
3. 空气样本我们采集了室内和室外空气样本，并进行了微生物检验。
结果显示，室内空气中存在较多的真菌，可能与室内潮湿环境有关。
而室外空气中微生物数量较少，符合正常范围。
因此，我们在室内应保持良好的通风，避免潮湿环境，以减少真菌滋生。
五、结论通过本次微生物检验实验，我们得出以下结论：1. 食品样本中存在潜在的致病菌，食用前应进行充分烹饪；2. 河水样本受到了污染，应避免直接饮用；3. 室内空气中存在较多的真菌，应保持良好的通风。
六、实验心得通过本次实验，我们深入了解了微生物检验的原理和方法，并通过实际操作获得了实验结果。
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蛋白胨20g、乳糖10g、猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g、0.04%溴甲酚紫水溶液25ml、蒸馏水1000ml、pH7.4。配制方法如下：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每10ml，并倒置放入杜氏小管(注意排净小管内气泡)，115℃灭菌15min。双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
本实验所采用的方法与赵贵明等人所采用的方法一致，均为MPN法，所得实验结果一致。但在本实验中，在进行细菌总数测定步骤前的细菌培养过程，所得结果并不理想，产生菌落少，不能对所采样本进行很好的数量统计，可以尝试改用另外更有利于细菌生长的培养基进行培养。
参考文献
[1]白凤翎.国际食品中大肠杆菌相关检验标准探究[J].食品科技, 2005.09(4): 30-33.
3.2.3复发酵证实实验
对分离培养得到的紫红色，具金属光泽的菌落进行革兰氏染色，同时对应接种到乳糖发酵管内进行复发酵，于36±1℃的恒温箱倒置培养24±2h，观察产气情况。
表7湖水革兰氏染色及乳糖复发酵结果
接种量(ml)
1号管
2号管
3号管
1
G-；产气
G-；产气
G-；产气
0.1
G-；产气
G-；产气
G-；产气
2.1.3倾注培养
根据食品卫生标准要求或对被检样品所含菌体浓度的估计或通过预备实验，选择2~3个适宜稀释度，从稀释度最高的悬浮液取1ml放入平皿内，每个稀释度作2~3个平皿。稀释液移入平皿后，及时将保温至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基或其他细菌培养基注入平皿约15ml，并摇动平皿使培养基和菌液混匀，待凝固后将平皿倒置于36±1℃培养箱内培养24±2h后取出，计算平板内菌落总数，乘以稀释倍数，即得每克(每毫升)样品菌落总数。
水样的采取方法：自来水应先将自来水龙头用火焰灼烧3min，再打开水龙头，使水自流5min，用无菌三角瓶接取水样，塞上塞子备用。池水、河水或湖水应取距水面10~15cm的深层水样，将无菌带玻璃塞的广口瓶浸入水中，盛满后将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检验，否则必须放入冰箱中保存。
2.1.2检样稀释(无菌操作)
表2湖水倾注培养结果
稀释度
菌落数
平皿号
10-4
10-5
备注
1
0
0
2
0
1
平均
0
0.5
表3黄酒倾注培养结果
稀释度
菌落数
平皿号
10-4
10-5
备注
1
0
0
2
0
0
平均
0
0
3.2大肠菌群检验
3.2.1乳糖胆盐发酵
分别取黄酒、湖水1、10-1、10-2稀释液1ml注入乳糖胆盐发酵管，每个稀释度接种3管，于36±1℃的恒温箱里倒置培养24±2h，结果如表4和表5所示。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释数最低的平均菌落数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，大于300或小于30，则以最接近30或300的菌落数乘以稀释度报告之。
3.2.2分离培养
将产气的湖水发酵管分别接种于伊红美蓝琼脂平板上，于36±1℃恒温箱倒置培养18-24h。观察菌落形态。结果如表6所示。
表6湖水伊红美蓝固体培养基分离培养
接种量(ml)
1号管
2号管
3号管
1
有可疑菌落
有可疑菌落
有可疑菌落
0.1
有可疑菌落
有可疑菌落
有可疑菌落
0.01
有可疑菌落
有可疑菌落
有可疑菌落
菌落数的报告：当菌落数在100以内时，按其实际数值进行报告；当大于100时，采用两位有效数字进行报告，两位有效数字后面的数值，以四舍五入的方法计算，为了缩短数字后面的零数，可用10的指数来表示。
2.2 大肠菌群检验
大肠菌群检验程序见图1。
图1大肠菌群检验程序
2.2.1检样稀释
无菌操作将检样25ml(或25g)放入装有225ml无菌生理盐水的无菌三角瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或无菌研钵内，经充分振摇或研磨制成10-1稀释度的稀释液。
2.2.3分离培养
将产气的发酵管分别接种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱内，培养18~24h。观察菌落形态，做革兰氏染色和复发酵证实实验。
2.2.4复发酵证实试验
在伊红美蓝琼脂平板上挑取①紫红色，具有金属光泽的菌落；②深红色，不带或略带金属光泽的菌落；③淡红色，中心较深的菌落。具有以上特征的菌落为可疑大肠菌群菌落，挑取1~2个进行革兰氏染色，同时对应接种到乳糖发酵管内进行复发酵，36±1℃培养24±2h，观察产气情况。凡在乳糖发酵管内产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性；如不产气或革兰氏阳性，则报告大肠菌群阴性。
其配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、20%乳糖溶液20ml、2%伊红溶液20ml、0.5%美蓝溶液10ml、水1000ml、琼脂20g、pH7.6。配制时将牛肉膏、蛋白胨、NaCl加入水中溶解，调pH为7.6，加琼脂、融化、分装、灭菌。再以无菌操作加入预先0.075MPa灭菌20min的20%乳糖溶液20ml、2%伊红溶液20ml、0.5%美蓝溶液10ml。当培养基冷却到50℃左右倒平皿。
2.1.4菌落计数方法
可用肉眼观察直接计数，也可用菌落计数器计数。求出同稀释度的各平板平均菌落数。
2.1.5.菌落计数报告
平板菌落数的选择：选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准，取同一稀释度的2~3个平板的平均值。若有的平板上有较大片菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可计算半个平板后乘以2代表整个平板的菌落数。
将被检样25 g(或25ml或1ml)剪碎，放入含有225ml (或9毫升)无菌生理盐水(或无菌水)的无菌三角瓶(瓶内放置适当数量的玻璃珠)或无菌研钵内，经充分振荡或研磨，制成10-1稀释液。用1ml吸管吸取10-1稀释液1ml，沿管臂慢慢注入含有9ml无菌生理盐水或无菌水的试管内，制成10-2的稀释液，同法，直到用最后稀释度的菌液做倾注法平皿计数时，每个培养皿的菌落数在30~300之间。
4
多不可计
1650
513
—
513000或5.1×105
5
27
11
5
—
270或2.7×102
6
0
0
0
—
<1×10或<1
7
多不可计
305
12
—
30500或3.1×104
首先选择平均菌落数在30~300之间的平板，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该稀释度的平均菌落数乘以其稀释倍数进行报告。
若有两个稀释度的平均菌落数均在30~300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应取两个稀释度的平均数；若大于2，则取其中较少的菌落数进行报告。
实验三水及食品中微生物的检测
生物11赵晓云34号
食品微生物检验方法为食品监测必不可少的重要组成部分。它不仅是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品能否食用的科学依据之一。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生环境,能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据,提供传染病和人类，动物和食物中毒的防治措施。食品微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。
1 材料与仪器
1.1材料
样品：湖水、黄酒。
1.2 培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、伊红美蓝固体培养基、乳糖发酵培养基。
1.2.1肉膏蛋白胨琼脂培养基
牛肉膏0.5g、蛋白胨1.0g、NaCl0.5g、水100 ml、pH7.2、0.10Mpa灭菌20min。如配制固体培养基需加琼脂1.5%~2%；如配制半固体培养基则加琼脂0.7%~0.8%。
稀释度的选择参见表1。
表1 菌落总数计算方法报告方式
例子
不同稀释度的平均菌落数
菌落总平均数及其报告方式(个/ml或个/g)度菌落数之比
1
1365
164
20
－
16400或1.6×104
2
多不可计
295
46
1.6
37750或3.8×102
3
多不可计
271
60
2.2
27100或2.7×104
表4湖水乳糖胆盐发酵
接种量(ml)
1号管
2号管
3号管
1
产气
产气
产气
0.1
产气
产气
产气
0.01
产气
产气
产气
表5黄酒乳糖胆盐发酵
接种量(ml)
1号管
2号管
3号管
1
不产气
不产气
不产气
0.1
不产气
不产气
不产气
0.01
不产气
不产气
不产气
用湖水进行乳糖胆盐发酵，结果显示都产气、产酸，再将其进行分离培养。而用黄酒进行乳糖胆盐发酵，结果显示都不产气、不产酸，报告为大肠菌群阴性。
3结果与分析
3.1细菌总数的测定
取湖水、黄酒稀释度为10-4和10-5的稀释液于牛肉膏蛋白胨培养基内混合培养，每一稀释度2个平板。结果如表2，表3所示。
根据菌落技术报告中的“④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释数最低的平均菌落数报告之”得，本次实验中，湖水细菌总数（取两位有效数字）为0.5×105个/ml，黄酒细菌总数＜1×104个/ml。