苏丹红ELISA快速检测试剂盒使用说明书
苏丹红Ⅰ和对位红残留检测ELISA试剂盒的研制
１ ４ ３ ２ 测 定 步骤 ． ．． 包 被 液 ： ． ５ ｍ Ｌ Ｌ碳 酸 盐 ０ ０ ｏ／
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［ 作者简介 ］ 何 方洋 （ ９ ９ ） 男 ， １６ 一 ， 博士 ， 主要从事 药物残 留方
面 的 研究 。 Ｅｍ ｉ：ａ ｎｎ９ １ ６ ．Ｏ ［ 通讯作者 ］ 万 字 平 ， －ａｌｎ ｎａ２ ４ ＠ １３ ＣＢ。
畜牧 兽 医杂 志
０Ｈ
第３ ０卷
第 ３期
２ １ 年 ０１
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ELISA检测试剂盒操作流程
ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本：例如血清、尿液、细胞上清液等。
-ELISA试板：根据样本数量选择96孔或384孔的板。
- 试剂盒：包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。
2.样本处理-对于血清等生物液体样本，可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。
-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。
3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出，将不需要的孔进行盖膜封闭。
- 根据试剂盒说明书，添加适量的板液（Coating Buffer）到每个孔中，使其充分覆盖孔内壁。
-封闭板液的孔，将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。
4.样本添加-倒掉盘液，用PBS或TBST洗板3次，去除残留物。
-将样本加到每个孔中，根据需要添加正样本、负样本和待测样本。
-注意每个样本的剂量和添加的体积，通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。
5.抗体添加-清洗步骤同上，将洗板缓冲液加到孔中，重复3次。
-加入检测抗体，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。
6.洗涤-洗涤步骤同上，用洗涤缓冲液洗板，重复3次。
-每次洗涤时，将洗液完全加满孔，静置1分钟，然后倒出洗液。
-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制，以将非特异性结合物质彻底清除。
7.底物添加-清洗步骤同上，将洗液加到孔中，重复3次。
-加入底物，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-底物液体应完全覆盖孔底，防止反应过程中氧化。
8.反应停止-根据试剂盒说明书，将反应停止液加入到孔中，停止底物的反应。
-注意反应停止液的体积和浓度，以保证反应的准确停止。
9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。
-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。
-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。
总结：ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
elisa试剂盒实验说明书
PRRSV N蛋白抗体检测间接ELISA方法的建立1 材料：1.1 蛋白、血清、酶标二抗原核表达PRRSV N蛋白；标准阳性血清和阴性血清，待检血清；自制HRP标记兔抗猪IgG；1.2 主要试剂和溶液包被液（50 mmol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液）Na2CO3 1.59 gNaHCO3 2.93 g准确称取后，溶于950 mL的蒸馏水中，调pH值为9.6，定容到1 L；PBS-T洗涤液1000 mL 10 mmol/L pH7.4的PBS中加入0.5 mL Tween-20；封闭液和血清稀释液含10%小牛血清的PBS-T缓冲液，10%马血清的PBS-T缓冲液，含5%BSA的PBS-T缓冲液，含10%BSA的PBS-T缓冲液，含5%脱脂奶的PBS-T缓冲液；底物溶液100 mmol/L的柠檬酸溶液（21 g柠檬酸C6H6O7•H2O溶于去离子水，定容至1 L）24.3 mL，200 mmol/L Na2HPO4•12H2O（71.6 g Na2HPO4•12H2O溶于去离子水，定容至1 L）25.7 mL混匀，加入50 mg的四甲基联苯胺（TMB），临用前加入50 μL的30% H2O2；终止液（2 mol/L H2SO4）每200 mL终止液，由蒸馏水177.8 mL和浓硫酸22.2 mL 混和而成。
1.3 主要仪器设备电热恒温培养箱；4℃冰箱；酶标仪。
2 步骤：2.1抗原包被浓度和二抗稀释度的确定将原核表达的N蛋白分别作2.0 μg/mL，1.0 μg/mL，0.5 μg/mL，0.25 μg/mL，0.1μg/mL，0.05 μg/mL连续稀释6个稀释度，每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，4℃包被酶标反应板过夜。
将自制HRP标记的兔抗猪二抗分别做1:50、1:100、1:200和1:400一系列倍比稀释，南京金益柏生物技术有限公司Tel:025-********Fax*************每个稀释度重复两孔，100 μL/孔，组成方阵确定重组蛋白的最佳包被浓度和二抗稀释度。
有毒有害物质的快速检测
第二十页，编辑于星期五：十点 十一分。
（3）消毒液有效氯的快速测定
消毒液在食品加工过程中使用广泛，控制消毒液的有效浓度是一个重要的环节。 目前使用较多的是含氯消毒液，测定有效氯的方法有两种试纸法。
方法：于盛有2mL牛乳的试管中加入2mL玫瑰红试剂，乳中无碱性物质则呈黄色，有碱性物质时呈玫瑰红色，其碱性物质的存在量与反应颜色的深浅成正比。
0.00 0.03 0.06 0.09
相当于掺入碳酸钠的百分含量
第五页，编辑于星期五：十点 十一分。
5、牛乳中淀粉和麦芽糊精的快速检测
意义：牛乳掺水后乳密度会降低，很容易检出，加入淀粉和麦芽糊精后乳密度会升高，但营养成份并未增加。检测淀粉和麦芽糊精是否存在，主要是检测牛乳是否掺假。 方法：取5mL牛乳注入试管中（有条件时稍稍煮沸，待冷却后），加入数滴淀粉检测试液，如有淀粉和麦芽糊精存在时，则有蓝色或青蓝色沉淀物出现。
第十七页，编辑于星期五：十点 十一分。
三、 食品加工贮藏安全度的快速测定
食品中心温度、食品加工和贮藏温度 消毒间紫外线辅照强度 消毒液有效氯 游离性余氯
第十八页，编辑于星期五：十点 十一分。
（1）食品中心温度、加工和贮藏温度的快速测定
细菌生长最适宜的温度在10～60℃范围之内。因此,食品的储存温度应控制在10℃以下。食品加工应当烧熟煮透其中心温度应在70℃以上并保持一定的时间才可杀灭细菌。 在烹饪后至食用前超过2小时的食品，应当在高于60℃或低于10℃的条件下存放。需要冷藏的熟制品，应当放凉后在0～10℃之间冷藏。 煎炸食品时，油温最高不得大于250℃，一般不得超过190℃。 温度对于食品的质量起着重要作用。国家卫生部《餐饮业食品卫生管理办法》中对各环节的温度控制有明确的规定 。采用食品中心温度计和红外线瞬时测温仪可有效加以监控。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。
本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。
1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。
-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。
确保样本的质量和浓度满足实验要求。
-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。
-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。
2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。
-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。
-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。
-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。
洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。
-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。
-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。
-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。
-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。
终止剂的选择需符合试剂盒的要求。
-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。
3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。
薄层色谱法测定苏丹红
薄层色谱法测定苏丹红1.试剂和仪器苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液，乙醚，正己烷，0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，硅胶G，7.5cm*2.5cm玻璃板、毛细管、250mL广口试剂瓶、尺子和铅笔等。
2.苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液的配制（提前配制）分别称取苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ各0.5mg，用乙醚溶解后用正己烷定容至50mL，相当于100μg/mL的苏丹红。
3.展开剂的配制正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）4.薄层板的制备（至少提前一天准备）取7.5cm*2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液8mL，调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置于干燥器中备用。
5.点样取1块用上述方法制好的薄层板。
分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。
取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起始线上点苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液和混合液4个样点。
样点间距0.5-0.8cm。
如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行。
样点直径不应超过2mm。
6.展开用正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250mL广口瓶中进行展开。
点样一端应浸入展开剂0.5cm。
盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的，比较样点的R f值的大小。
7.数据处理计算公式：比移值：R f = R1/ R2R1：原点至样品斑点中心之间的距离，cmR2：原点至展开剂前沿的距离，cm相对比移值：R is=R f（i）/R f（s）R f（i）是试样至原点的距离，cmR f（s）是标样至原点的距离，cm数据结果记录表8.思考题（1）在一定的操作条件下为什么可利用R f值来鉴定化合物？（2）在混合物薄层谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？（3）展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？。
苏丹红快速检测试剂盒使用说明
苏丹红快速检测试剂盒使用说明一、本方法适用于非食用色素苏丹红（1、2、3、4号）的现场快速检测。
二、样品处理：1、取约1克样品于试管中，加入2～5ml乙酸乙酯，振摇提取1分钟，静置5分钟，2、取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个+字线或点五个小点。
3、用四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许（毛细管尖端不多于0.5厘米容积距离）点在层析纸1、2、3、4号+字线上，另取1支毛细管沾取静置后已经染色的乙酸乙酯样品溶液（体积不限），将其点在层析纸5号+字线上。
（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米内。
三、测定：取一个约200ml的烧杯，加入约5ml展开剂，将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。
四、判断：在本实验条件下，如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。
五、说明：1、本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。
注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。
2、苏丹红对照液的点样量不要太多，否则会产生拖尾现象。
在用毛细管沾取对照液后，可在棉花球或一张废弃的层析纸上沾弃多余的溶液，使毛细管尖端留有不超过0.5厘米距离的溶液，将其一次性点到层析纸+字线上。
3、展开剂的使用应适量，液面高度应控制在斑点以下，展开过程中层析纸不能倾倒，每展一张层析纸最好更换一次展开剂。
4、环境温度会影响斑点的展开距离。
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苏丹红ELISA快速检测试剂盒
使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号：CSB-E12032f
检测范围：0.312 ng/ml-10 ng/ml
最低检测限：0.2 ng/ml
特异性：本试剂盒可用于快速检测苏丹红。
与对位红有一定交叉反应
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定鸡蛋，辣椒粉，辣椒酱等样品中的苏丹红残留。
说明
1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验
结果造成任何影响。
实验原理
本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测苏丹红。
微孔板上包被有苏丹红偶联物。
加入苏丹红抗体和苏丹红标准品或样品，游离苏丹红与微量反应板上的苏丹红结合物竞争结合抗苏丹红抗体，没有结合的抗体被洗去，再向微孔中加辣根过氧化物酶标记二抗，与结合在反应板上的抗体作用一定时间，洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。
再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的苏丹红呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.已包被苏丹红偶联物的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：6×250ul/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记二抗稀释液（HRP-anti-antibody Diluent）：1×20ml/瓶。
5.苏丹红单克隆抗体：1×60μl/瓶（1：100）
6.辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody ）：1×120μl/瓶（1：100）
7.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
9.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.超声清洗器
5.离子交换小柱（PCX）
6.氮气吹干仪
7.干净的试管和Eppendof管
8.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
9.蒸馏水，容量瓶等
标准品：6瓶，浓度分别为10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。
稀释的过程中，应做好详细的记录。
最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗的稀释原则：
临用前分别以样品稀释液稀释苏丹红抗体，以二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶标记二抗，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（苏丹红抗体每孔50ul，辣根过氧化物酶标记二抗每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10ul苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗加990ul样品稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.酶联板使用前用洗液洗板2-3次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，甩干。
2.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100ul，
余孔从高到低分别加标准品或待测样品50ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul苏丹红抗体工作液。
尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟（为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液）。
3.温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，
甩干。
4.所有孔中加入100 ul辣根过氧化物酶标记二抗工作液。
尽量不触及孔壁，轻
轻晃动混匀。
酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟。
5.温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，250ul/每孔，
甩干。
6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，一般10-15分钟内，
此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度蓝色，前3-4孔颜色不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
终止液的加入
顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在加终止液后15
分钟以内进行检测。
注：
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管
底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液
及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖
或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
标准品、苏丹红抗体和辣根
过氧化物酶标记二抗工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、苏丹红抗体和辣根过氧化物酶标记二抗工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍
数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
9.本产品适用于大量样本的快速筛查。
由于生物试验存在人为及不可预知的影
响因素，本试剂盒得到的检测结果仅为参考，不能据此做出任何结论。
本公司不承担由此引起的任何责任。