积雪草质量标准及检验操作规程
积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用
积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC 的运用作者：许开玉来源：《科学与财富》2016年第03期摘要：目的：探究积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用。
方法：将流动相设定乙腈-水，应用C18柱，采用阶梯式进行脱洗，实施波长205nm检测。
结果：所选取的四组三萜类化合物，在回收率上，积雪草苷平均回收率为97.62%，羟基积雪草苷平均回收率为98.96%。
结论：将HPLC应用到积雪草中三萜类化合物含量的测定中，方法简单容易操作，得出的测定结果也较为精确，因此，该方法得到了普遍的认可，在积雪草药材以及制剂的质量控制上有着重要的应用价值。
关键词：积雪草；三萜类化合物；含量；测定；HPLC；运用所谓的积雪草就是一种伞状类的植物，其属于全草类型。
一般来说，积雪草中包含各种各样的三萜类化合物，其中主要有积雪草苷和羟基积雪草苷。
这种积雪草在实际的应用中，具有消毒解热以及消肿的作用。
这种积雪草在我国有着悠久的药用历史。
在临床中，积雪草中发挥药用价值的就是积雪草总苷。
本文就主要针对积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用进行了简要的研究分析，现将具体报道如下。
1 材料与仪器仪器型号：安捷伦1200高效液相色谱仪；G1311A四元梯度泵；G1314B紫外检测器。
材料：积雪草生药采自贵州、湖北、广西三省；积雪草苷、羟基积雪草苷对照品源自中检所。
液相的有机流动相为乙腈（LiChrosolv），水为桂林娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件选择C18作为色谱柱，而乙腈水则作为流动性，采用的梯度最好控制在0-40min的范围内，乙腈由原本的5%增长到100%，波长设定为205nm进行检测，将流动相的流速控制在为每分钟0.6ml，其中柱温要求控制为30℃，而需要将灵敏度控制为0.05Aufs。
2.2 选择吸收的波长选取一定分量的积雪草苷，将其作为对照品，然后加入乙腈进行充分融合，再利用光波长度在200-300nm之间的紫外线进行配置溶液扫描，所得的曲线图可以详见图1。
积雪草质量标准及检验操作规程
xxxxxxxxxxxx有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：积雪草1.2 汉语拼音：Jixuecao2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2020年版一部）。
6质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：乙醇、正丁醇、水、甲醇、积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品、三氯甲烷、硫酸、乙腈、倍他环糊精、盐酸、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂。
7.2 仪器与用具：显微镜、电子天平、硅胶G板、超声波清洗器、高效液相色谱仪、二氧化硫测定仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光线目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：取本品粉末lg，用乙醇25ml ，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml,合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水15ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。
另取积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每lml各含lmg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录7) 试验，吸取上述三种溶液各5～10µl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7 ：3 ：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.5 检查：7.5.1 水分不得过12.0% (附录15第二法）。
7.5.2 总灰分不得过13.0% (附录17 )。
7.5.3 酸不溶性灰分不得过3.5% (附录17 )。
7.5.4二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。
7.6 浸出物: 照醇溶性浸出物测定法（附录19)项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于25.0%。
7.7含量测定：照高效液相色谱法（附录8)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-2mmol/L倍他环糊精溶液（24 ：76）为流动相；检测波长为205nm。
HPLC_ELSD法测定积雪草药材及配方颗粒剂中积雪草苷的含量_曹金华
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北 和 上 海 华 宇 药业 产 地浙 江
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UV测定积雪草总苷的含量
样品。本实验还对提取溶剂进行了考察，将样品分别 用氨水及乙醚的混合液和氨水及氯仿的混合液提取， 测定延胡索乙素的含量。结果表明，采用氨水及乙醚 的混合液提取，样品中延胡索乙素的提取率最高，故 本实验采用氨水及乙醚的混合液作为提取溶剂。
参考文献：
［"］苗明三，李振国! 现代实用中药质量控制技术［ #］! 北 京：人民卫生出版社，$%%%：&’(!
#" 仪器与试药 日本岛津 /0—$+( 型紫外分光光度计。 积雪草 总 苷 对 照 品（ 上 海 医 药 工 业 研 究 院 提
供），积雪草总苷样品（+ 批，由广西百色 ; 企业提 供）。试剂乙醇、硫酸均为分析纯。
$" 试验方法与结果 $! #" 对照品溶液制备
精密称取积雪草总苷对照品适量，用乙醇溶解， 制成 " 35 6 37 的溶液。
作者简介：万陆兴方毅数（据"*1( , ），男，本科，主管药师，从事药品检验工作。
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现代食品与药品杂志9 ’"", 年第 #, 卷第 ’ 期
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量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试 品溶液。 !! #" 最大吸收波长的测定
积雪草提取物编制说明
《国际商务标准积雪草提取物》编制说明一、任务来源本标准的制定工作，是由中国医药保健品进出口商会提出而进行的，国际商务标准植物提取物编号为WM 。
本标准由桂林莱茵生物科技股份有限公司、中国医药保健品进出口商会等单位负责起草。
二、标准制定的意义积雪草提取物在国际市场上主要用于保健品及化妆品，国际上几家大保健品公司及化妆品公司均有用到此产品。
用到积雪草提取物的保健品上1000种，广泛应用于医药、食品、饮料、化妆品等工业。
每年国内该产品的出口额上千万美金，市场前景十分看好。
目前该提取物，在国内没有相应的国家和行业标准，因此无法对产品中有效成份积雪草苷、总苷的含量及污染物限量进行有效控制，各生产企业只能依靠自己制定的企业标准进行检测及质量控制，由于不同企业的提取工艺和质量控制水平不同，产品质量差异较大，又无统一标准，导致积雪草提取物在国内外销售市场很容易出现质量纠纷，并存在食品安全隐患，严重制约了积雪草深加工产业的发展，因此迫切需要制定积雪草提取物的出口商务标准。
制定本标准将使积雪草提取物的质量控制符合食品安全要求，同时能更好地满足国内外市场的质量控制要求，有助于提高积雪草提取物生产企业的质量控制水平和产品的市场竞争力，促进积雪草产业的发展。
三、标准编写规则本标准遵循GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》；GB/T20001.2-2001《标准化工作指南第2部分：采用国际标准的规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》[1] ～[3]规则编写。
还参照相关国家标准编写指南的要求。
四、标准的制（修）订与起草原则1、积雪草提取物广泛应用于食品、化妆品、药品等领域，由于没有现行的积雪草提取物质量标准，本标准在制定过程中，仅参照和引用了国内外相关食品、药用植物等标准。
2、积雪草提取物应用广泛，规格也较多，本标准中选取最常规的25%积雪草总苷制定标准。
滴定法测定积雪草中积雪草总苷元含量
限公 司出品） 积雪 草总苷元样 品（ ； 本公司产品） 积雪草 酸、 ； 羟
含有三萜酸和三萜皂 苷等成 分 ， 在 印度传 统草 药 中被广泛 其 用于精神病 、 及癔症 的治 疗。积 雪草 总苷 元 除含 有积雪 癫痫
４８６ ： ８ ．８ 积雪草总苷元平均分子量
该方法 简单 、 准确、 快捷 ， 适用于积雪草总苷元的产品质量控制 。
【 关键词 】 滴定 法； 雪草 ； 雪草总苷元 ； 雪草 酸； 积 积 积 羟基积雪草酸
【 中图分类号 】 Ｒ２４２ ． ８
【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 ０５ － ０ （０９ ０ ２５ ２ ２３ ３４ ２０ ）８１０－ ４ ０
计， 不得少于 ０２ ｇ ．０ｒ 。 ａ 参 考 文 献
３ １ 流动相 的选择 ．
（０：０ 、４ ５ ） 不 同 比例 ， ４ ６ ） （５： ５ 等 以及 甲醇 －． ％ 磷 酸溶 液 ０１
（ ０： ０ 等不同 比例作 为 流动相 测定 ， 品中二苯 乙烯 苷与 ３ ７） 样 其 他杂质 峰均 不能较好 地分 离 ， 故有文 献 对 流动相进 行摸 索， 结果按正文拟 定 的色谱 条件测 定 能将二 苯 乙烯苷 与其 他 杂质峰较好地分离 ， 故选用此 流动相 。
重的邻 苯二 甲酸氢钾基准 ０ ６ ００ｇ 精密称定 ， １０ｍ 三角 ．０ ， 置 ０ ｌ
锥瓶 ， 加新沸过的冷水 ５ ｌ振摇 ， Ｏｒ ， ｎ 使其溶解 ， 加酚酞指示液 ２ 滴， 用配好的氢氧化 钠乙醇溶液滴定至 溶液显 红色 ， 同时做空 ２ １ 精 密度 ． 苷元样 品 ０ １０ｇ各 ５份 ， １ ３样 品测定 项 目下 的方 法测 ．０ 按 ． 定 ， ５次重 复 测定 ， 果 见表 １ 做 结 。样 品的 平均 相对 标 准偏 差 ＝１９ ％ ， 明本 法测定 精密度较好。 ．２ 说
积雪草片质量标准研究
中药园地积雪草片质量标准研究310000 浙江大学药学院 寿 旦 曾 苏 董晓烨310007 浙江省中医药研究院 孙静芸 摘 要 目的:建立积雪草片的质量标准。
方法:采用TL C对处方中积雪草进行鉴别;用H PL C测定积雪草苷的含量。
结果:在TL C色谱中能检出积雪草;积雪草苷含量测定方法的线性范围为2～10ug,平均回收率为97171% (R SD=1102%,n=5)。
结论:所建立的方法准确可行,重复性好,可作为积雪草片质量控制标准。
关键词 积雪草片 积雪草苷 质量标准积雪草片是由积雪草为主的多种中药组成的中成药制剂。
经多年临床应用,治疗外伤、手术创伤、烧伤、疤痕疙瘩及硬皮病的疗效确切。
现将其开发为新药,可以进一步提升其科技含量,并服务于更多的患者。
为有效控制其质量,采用TL C对其主要药味积雪草进行定性鉴别,并采用H PL C对积雪草苷进行含量测定,建立的方法简单,容易操作。
1 仪器和试药111仪器:日本岛津L C-10A tvp高效液相色谱仪,SPD-10A vp紫外-可见检测器。
112对照品:积雪草苷对照品由中国药品生物制品检定所(供鉴别用)及上海医工所(供含量测定用)提供。
113试剂与样品:甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯,积雪草片由中药所制备提供。
2 积雪草片中积雪草的定性鉴别取样品4g,加甲醇20m l,超声提取10分钟,滤过,滤液挥干。
因残渣量较大,残渣加水10m l溶解,再依次用20、20、10m l水饱和正丁醇萃取3次,合并正丁醇,用氨试液10、10m l洗,弃去氨液,将正丁醇挥干,残渣加水10m l溶解后上D101大孔树脂(孔径11511供试品 21积雪草苷31空白对照品图1.积雪草片的薄层层析色谱×18c m),用水120m l洗,弃去,用40%乙醇60m l洗脱,70%乙醇150m l洗脱,将70%乙醇洗脱液挥干,残渣用甲醇溶解,定容至2m l,作为供试品溶液。
30381积雪草饮片生产工艺规程
江西臻药堂药业股份有限公司1.产品概述1.1 品名：积雪草，成品代码CP30381。
1.2 性状: 本品呈不规则的段。
气微，味微苦.1.3 性味与归经：苦、辛，寒。
归肝、脾、肾经。
1.4 功能主治：清热利湿，解毒消肿。
用于湿热黄疸，中暑腹汚' 石淋血淋，痈肿疮毒，跌扑损伤1.5 用法用量：9〜30g;1.6 规格与包装规格：1kg/包、2kg/包、5kg/包。
1.7贮存：置干燥处2.处方依据及制法2.1 依据：《中国药典》2015年版一部；《江西中药炮制规范》（2008年版）。
2.2 处方积雪草2.3 批量每批按100kg进行换算物料消耗定额。
2.4制法除去杂质，洗净，切段，干燥。
3.生产工艺流程图4.饮片批过程、工艺条件及质量风险控制点和风险控制措施4.1生产准备4.1.1 文件准备4.1.1.1中药饮片批生产指令明确了饮片批品名、批号、生产批量、炮制加工基本流程、原药材进厂编号及检验单号、投料量等。
4.1.1.2中药饮片批包装指令明确了包装品种名称、规格、批号、包装规格、包装批量、包材用量等。
4.1.1.3生产品种应有质量标准、工艺规程、岗位标准操作程序等相关文件。
4.1.1.4生产场所应有卫生要求的文件规定和卫生清洁标准操作程序。
4.1.1.5使用设备应有相应的设备操作、维护保养、清洁标准操作程序。
4.1.1.6容器具清洁应有相应的标准操作程序。
4.1.1.7应有岗位所需生产记录（含清场），工序运行状态标志、设备运行状态标志、物料领料单、工序操作记录等空白表格。
4.1.1.8其他有关执行文件。
4.1.1.9上述文件均应为现行文件。
4.1.2物料准备4.1.2所用物料与中药饮片批生产指令或中药饮片批包装指令或工艺规程相符。
4.1.2.1核对领（配）料单或物料标签等内容，如物料名称、批号、检验报告书（检验单号）等，应准确无误。
4.1.2.2检查物料外包装或容器，应完好、清洁、物料无污染，并称量、复核。
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XXXXXXXX有限公司原料质量标准及检验操作规程
1 品名：
1.1 中文名：积雪草
1.2 汉语拼音：Jixuecao
2 代码：
3 取样文件编号：
4 检验方法文件编号：
5 依据：《中国药典》（2020年版一部）。
6质量标准：
7 检验操作规程：
7.1 试药与试剂：乙醇、正丁醇、水、甲醇、积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品、三氯甲烷、硫酸、乙腈-2mmol/L倍他环糊精。
7.2 仪器与用具：显微镜、电子天平、烘箱、硅胶G板、药典筛、马弗炉、超声波清洗器、高效液相色谱仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光线目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：
7.4.1 取本品制片置10×10显微镜下做显微观察。
7.4.2 取本品粉末lg，用乙醇25ml ，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水15ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。
另取积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品，加甲醇制成每lml各含lmg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录7) 试验，吸取上述三种溶液各5～10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲垸-甲醇-水（7 ：3 ：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.5 检查：
7.5.1水分不得过12.0%(附录15 第二法)。
7.5.2总灰分不得过13.0%(附录17)。
7.5.3酸不溶性灰分不得过3 . 5%(附录17)。
7.5.4二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得
过150mg/kg。
7.6含量测定：照高效液相色谱法（附录8)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-2mmol/L倍他环糊精溶液（24 ：76）为流动相；检测波长为205nm。
理论板数按积雪草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml各含0. 2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末（过二号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇20ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率180W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10µ1与供试品溶液10～20µ1，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含积雪草苷（C48H78019)和羟基积雪草苷（C48H78020）的总量不得少于0.80%。