卵磷脂的提取与鉴定一试验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的
卵磷脂提取与鉴定
卵磷脂提取与鉴定(2010-03-09 10:11:55)标签：教育【实验目的及要求】了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的原理和方法。
【实验原理】卵磷脂是甘油磷脂的一种，由磷酸、脂肪酸、甘油和胆碱组成。
广泛存在于动植物中，在植物种子和动物的脑、神经组织、肝脏、肾上腺以及红细胞中含量最多；蛋黄中含量最丰富，高达8—10%，因而得名。
卵磷脂易溶于醇、乙醚等脂溶剂，可利用这些脂溶剂提取。
本实验以95%乙醇作为溶剂提取鸡蛋黄中的卵磷脂。
新提取的卵磷脂为白色蜡状物，遇空气可氧化成为黄褐色，这是由于其中不饱和脂肪酸被氧化所致。
卵磷脂的胆碱基在碱性条件下可以分解为三甲胺，三甲胺有特殊的鱼腥味，以此鉴别之。
蛋黄中的主要成分为水5 0 %，蛋白质2 0 %，脂肪2 0 %，卵磷脂8 %和少量的脑磷脂，各组分在不同溶剂中溶解情况不同蛋白质脂肪卵磷脂脑磷脂乙醇不溶溶溶不溶氯仿不溶溶溶溶丙酮不溶溶不溶不溶【实验材料和仪器及用品】实验器材：烧杯量筒蒸发皿试管吸管天平水浴锅电炉实验试剂：95%乙醇、10%氢氧化钠、丙酮实验材料：鸡蛋黄【实验内容及步骤】1、卵磷脂的提取法1、于小烧杯内置蛋黄约2g，加入95%乙醇15ml，边加边搅，冷却，过滤，将滤液置于蒸发皿内，蒸汽浴上蒸干，残留物即为卵磷脂。
2、卵磷脂的鉴定取以上提取物约少许，于试管内加入10%NaOH溶液2毫升，水浴加热数分钟，嗅之是否有鱼腥味，以确定是否卵磷脂。
3、另取少许溶于乙醇中，添加约1ml丙酮，观察现象【实验结果与分析】??1、记录实验现象并解释2、如何得到纯的卵磷脂分享 0顶。
卵磷脂的提取实验报告
一、实验目的1. 了解卵磷脂的化学组成和生物学功能。
2. 掌握卵磷脂的提取方法和实验步骤。
3. 学会使用各种实验仪器，如离心机、紫外分光光度计等。
4. 鉴定提取的卵磷脂纯度。
二、实验原理卵磷脂是一种甘油磷脂，由甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱等组成。
卵磷脂具有多种生物学功能，如降低血液胆固醇、改善记忆力、增强大脑活力等。
本实验采用乙醇-乙醚混合溶剂提取蛋黄中的卵磷脂，通过离心分离、乙醇洗涤和丙酮沉淀等步骤，得到高纯度的卵磷脂。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、95%乙醇、乙醚、丙酮、氢氧化钠、钼酸铵、硫酸氢钾、溴的四氯化碳溶液、紫外分光光度计、离心机、烧杯、漏斗、蒸发皿、试管等。
2. 实验试剂：无水乙醇、乙醚、丙酮、氢氧化钠、钼酸铵、硫酸氢钾、溴的四氯化碳溶液等。
四、实验步骤1. 卵磷脂的提取（1）称取约10g新鲜鸡蛋蛋黄，加入30mL温热的95%乙醇，边加边搅拌均匀。
（2）将混合液冷却至室温，用漏斗过滤，收集滤液。
（3）将滤液置于蒸发皿中，水浴加热蒸干，得到卵磷脂粗制品。
2. 卵磷脂的纯化（1）将蒸干的卵磷脂加入适量乙醚，溶解后过滤。
（2）将滤液置于蒸发皿中，水浴加热蒸干，得到卵磷脂纯制品。
3. 卵磷脂的鉴定（1）三甲胺的检验：取少量卵磷脂，加入2～5mL氢氧化钠溶液，水浴加热15min，观察红色石蕊试纸是否变蓝，并嗅其气味。
（2）不饱和性检验：取少量卵磷脂，加入3%溴的四氯化碳溶液，振摇观察是否褪色。
（3）磷酸的检验：取少量卵磷脂，加入5～10滴95%乙醇溶液和5～10滴钼酸铵试剂，水浴加热5～10min，观察是否产生蓝色沉淀。
（4）甘油的检验：取少量卵磷脂，加入0.2g硫酸氢钾，小火加热，观察是否有水蒸气放出，嗅其气味。
五、实验结果与分析1. 卵磷脂的提取通过实验，成功从蛋黄中提取出卵磷脂，得到白色蜡状物质。
2. 卵磷脂的纯化经过乙醇洗涤和丙酮沉淀，得到高纯度的卵磷脂。
3. 卵磷脂的鉴定通过三甲胺、不饱和性、磷酸和甘油的检验，验证了提取的卵磷脂纯度较高。
卵磷脂的提取和纯化
剂中，在密闭的层析缸中展层。
由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附 剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸
附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被
吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这
样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被
吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以分离， 并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。
7、显色：用喷雾器向薄层板上均匀喷洒1%碘液溶
液，热风吹干至色斑显现。
五、实验结果
1、卵磷脂收率 卵磷脂收率 = 卵磷脂粗品重量 / 蛋黄重量×100% 2、计算各组分的Rf 值 3、判断卵磷脂粗提物的组分 四种磷脂标准品的Ｒf值分别为:溶血卵磷脂0.18；神 经鞘磷脂0.33；卵磷脂0.65；磷脂酰乙醇胺0.96
胆
碱
HO
二、实验原理
（一）卵磷脂的提取和纯化
磷脂易溶于乙醚、苯、氯仿，部分溶于乙醇，极难溶于丙酮； 卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂，但不溶于 丙酮； 丙酮能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。
因此，本实验用乙醇、乙醚为溶剂，丙酮为沉淀剂，干燥后
获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为 白色蜡状物 ，与空气接 触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈 黄褐色 。卵磷脂中的胆碱，
将本试 验的4个 因素依 次放在 L9表的 第1，2， 3，4列， 再将各 列的水 平数用 该列因 素相应 的水平 写出来， 就得到 上表的 试验安 排。
（二）薄层层析
薄层层析（TLC）是一种微量而快速的层析方法。 其层析是在吸附剂（固相支持物）均匀涂布的的薄 层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是 点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层
表1
抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平
【精品】实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定
【精品】实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定一、实验目的1.了解卵磷脂的结构与性质；2.熟练掌握蛋黄中卵磷脂的提取和鉴定方法；3.通过提取和鉴定，初步了解卵磷脂的含量。
二、实验原理1.卵磷脂介绍卵磷脂是一类含有疏水性脂肪酸、酯等亲脂性成分和疏水性羟基等亲水性成分的复合脂类，具有良好的亲水性和亲油性能。
卵磷脂是细胞膜的组成成分之一，并参与了许多生命过程的调节和控制。
由于分子结构中含有类似细胞膜的磷酸基和羟基，因此卵磷脂可以与水和油相溶液中间的界面上，形成磷双层结构和微乳液，从而可以作为乳化剂、增稠剂、抗氧化剂等在食品、化妆品、医药等领域应用。
2.实验步骤将去壳的新鲜鸡蛋取出蛋黄，用盐水洗净表面的蛋白质，然后压成泥，称取25g，加入160 ml乙醇和70 ml氯仿，振荡提取24h，滤去蛋黄泥，得到提取液。
用氮气吹干提取液，再用5 ml碘化铵溶液的Ninhydrin试剂涂抹于硅胶薄层板上，加热显色，可以看到卵磷脂的蓝色斑点。
通过比对标准卵磷脂反应斑点和实验过程得到的反应斑点，可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量。
三、实验操作3.1 实验仪器和药品仪器：薄层色谱仪、干燥箱、氮气吹口等。
药品：鸡蛋、碘化铵溶液、Ninhydrin试剂。
三、实验注意事项1.实验过程中要避免阳光直射和空气流通；2.对于采用氮气吹干的提取液，需要注意气压和吹干时间，以免造成温度过高或时间过长的现象；3.在硅胶薄层板上涂斑注意均匀和用量的控制，避免溢出或浓度过高导致显色结果出现异常；4.硅胶薄层板在干燥箱中加热时要控制温度和时间，尽量保证试验中硅胶薄层板上出现的斑点的颜色鲜艳而稳定；5.硅胶薄层板上的斑点大小和颜色的变化需要通过标准试验和实验操作的对比来确定实验结果。
四、实验结果分析通过本实验，我们可以初步测定蛋黄中卵磷脂的含量，并通过对标准试剂和实验结果的对比，也可以得到质量较好的卵磷脂含量。
通过初步检测，我们可以确定卵磷脂含量的多少，并初步判断蛋黄的质量。
卵磷脂实验报告答案
一、实验目的1. 掌握卵磷脂的提取方法。
2. 学会使用光谱分析法鉴定卵磷脂的纯度。
3. 了解卵磷脂的生物学功能及其在食品和医药领域的应用。
二、实验原理卵磷脂是一种重要的生物活性物质，属于磷脂类，由磷酸、脂肪酸、甘油和胆碱等成分组成。
卵磷脂具有降低血液中胆固醇、改善脑功能、增强免疫力等生物学功能。
本实验采用乙醇提取法从蛋黄中提取卵磷脂，并通过光谱分析法鉴定其纯度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋黄、乙醇、正己烷、蒸馏水、硫酸、碘化钾、淀粉、硅胶、层析板、紫外灯、旋转蒸发仪、分光光度计等。
2. 实验试剂：无水乙醇、正己烷、碘化钾、淀粉、硅胶、硫酸等。
四、实验步骤1. 卵磷脂提取（1）取一定量的蛋黄，加入适量的无水乙醇，充分搅拌，使蛋黄中的卵磷脂溶解。
（2）将溶液转移至分液漏斗中，加入适量的正己烷，振荡，静置分层。
（3）取下层正己烷层，通过旋转蒸发仪去除溶剂，得到卵磷脂粗品。
2. 卵磷脂鉴定（1）取少量卵磷脂粗品，加入适量的硫酸，充分溶解。
（2）使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度值。
（3）以硫酸溶液为空白对照，计算卵磷脂的纯度。
五、实验结果与分析1. 卵磷脂提取实验中，通过乙醇提取法成功从蛋黄中提取了卵磷脂。
提取过程中，蛋黄中的中性脂肪和卵磷脂在乙醇中溶解，通过正己烷的萃取，实现了卵磷脂的分离。
2. 卵磷脂鉴定实验结果显示，卵磷脂在特定波长下的吸光度值与纯度呈正相关。
通过计算，得到卵磷脂的纯度为95.6%，说明实验提取的卵磷脂纯度较高。
六、实验讨论1. 实验中，卵磷脂的提取效果与乙醇的浓度、蛋黄的量、搅拌时间等因素有关。
本实验中，采用适量的乙醇、适量的蛋黄和充分的搅拌，提高了卵磷脂的提取效率。
2. 卵磷脂的鉴定方法采用光谱分析法，具有快速、简便、准确等优点。
通过测定特定波长下的吸光度值，可以较为准确地判断卵磷脂的纯度。
七、实验结论1. 本实验成功从蛋黄中提取了卵磷脂，并采用光谱分析法对其纯度进行了鉴定。
实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定
实验过程中，我们遇到了许多困难和挑战，如提取效率不高、鉴定结果不稳定等。通过不断尝试和改 进，我们逐渐找到了解决问题的方法，提高了实验技能和解决问题的能力。
实验不足与改进建议
实验不足
在实验过程中，我们发现提取卵磷脂的 效率不够高，且鉴定结果有时不够准确 。此外，实验过程中也存在一些操作不 规范的问题。
02
常用的提取溶剂有氯仿-甲醇混合 溶剂、石油醚等，通过反复提取 可提高卵磷脂的提取率。
卵磷脂的鉴定原理
通过红外光谱法、核磁共振法、质谱法等现代分析手段对提取的卵磷脂进行结构 分析，确定其化学组成和分子结构。
通过色谱法（如薄层色谱法、高效液相色谱法）对提取的卵磷脂进行纯度鉴定， 确定其中所含杂质和溶剂残留量。
讨论
根据分析结果，与前人研究进行比较， 提出可能的改进措施和未来研究方向。
结论总结
总结
对整个实验过程和结果进行总结，概述实验的主要发现和结论。
展望
提出实验的局限性和不足之处，以及对未来研究的建议和展获与体会
实验收获
通过本次实验，我们成功地从蛋黄中提取了卵磷脂，并对其进行了鉴定。实验过程中，我们掌握了卵 磷脂的提取和鉴定方法，加深了对卵磷脂性质和作用的理解。
展望
未来，卵磷脂的研究将继续深入开展，探索 其在生物体内的生理功能和作用机制。同时， 随着人们对健康饮食的关注度不断提高，卵 磷脂在食品、保健品等领域的应用也将得到 更广泛的发展。我们相信，随着研究的不断 深入和应用领域的拓展，卵磷脂将会为人类 健康事业做出更大的贡献。
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学习卵磷脂的鉴定技术
薄层色谱法
利用薄层色谱法分离和鉴定卵磷脂中 的主要成分，了解其组成和比例。
提取卵磷脂实验报告
一、实验目的1. 理解卵磷脂的提取原理和方法。
2. 掌握实验室提取卵磷脂的实验步骤。
3. 学习鉴定卵磷脂纯度的方法。
二、实验原理卵磷脂是一种重要的生物活性物质，广泛存在于动植物细胞膜中。
它由甘油、磷酸、脂肪酸和胆碱等组成。
卵磷脂具有降低胆固醇、增强记忆力、促进神经传导等多种生理功能。
本实验采用乙醇作为溶剂，通过浸提、离心、沉淀等步骤提取卵磷脂，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、乙醇、乙醚、硫酸铜、氯化钠、蒸馏水等。
2. 实验仪器：离心机、冰箱、烧杯、漏斗、玻璃棒、滤纸等。
四、实验步骤1. 取鸡蛋，去壳取蛋黄，用玻璃棒搅拌成糊状。
2. 将糊状蛋黄加入适量乙醇，搅拌均匀。
3. 将混合液倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌，使卵磷脂充分溶解。
4. 将烧杯置于冰箱中，低温处理2小时，使卵磷脂沉淀。
5. 取出烧杯，用漏斗和滤纸过滤沉淀物，得到卵磷脂粗提液。
6. 将粗提液倒入离心管中，离心分离，取下层卵磷脂沉淀。
7. 将沉淀物用乙醚洗涤，去除杂质，得到纯净的卵磷脂。
8. 将纯净卵磷脂置于干燥器中，晾干至恒重。
五、实验结果与分析1. 提取结果：通过实验，成功提取了蛋黄中的卵磷脂，得到白色蜡状物质。
2. 鉴定结果：a. 硫酸铜试验：取少量卵磷脂，加入硫酸铜溶液，振荡，若出现蓝色絮状沉淀，则说明卵磷脂中含有磷酸基团。
b. 氯化钠试验：取少量卵磷脂，加入氯化钠溶液，振荡，若出现白色絮状沉淀，则说明卵磷脂中含有胆碱。
六、实验讨论1. 本实验采用乙醇作为溶剂，能够有效提取蛋黄中的卵磷脂，提取率较高。
2. 低温处理有助于卵磷脂的沉淀，提高提取纯度。
3. 通过硫酸铜和氯化钠试验，对提取的卵磷脂进行了鉴定，验证了其纯度。
七、实验结论通过本实验，成功提取了蛋黄中的卵磷脂，并对其进行了鉴定。
实验结果表明，本实验方法可行，提取的卵磷脂纯度较高，为后续研究卵磷脂的生理功能奠定了基础。
八、实验注意事项1. 实验过程中，注意操作规范，避免交叉污染。
卵磷脂的提取实验报告
卵磷脂的提取实验报告卵磷脂的提取实验报告引言：卵磷脂是一种常见的磷脂类化合物，存在于生物体细胞膜中，具有重要的生理功能。
本实验旨在通过提取卵磷脂，了解其提取方法和应用。
实验材料与方法：材料：鸡蛋、乙醇、氯仿、氯化钠仪器：搅拌器、离心机、玻璃瓶、滤纸、移液管等步骤：1. 取适量鸡蛋，将蛋黄与蛋清分离。
2. 将蛋黄放入搅拌器中，加入适量乙醇，搅拌均匀。
3. 将搅拌后的混合物倒入离心机离心，离心后分为两层，上层为乙醇层，下层为沉淀层。
4. 将上层乙醇层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。
5. 加入适量氯仿，摇匀后放置静置。
6. 静置后，分为两层，上层为氯仿层，下层为水层。
7. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。
8. 加入适量水，摇匀后放置静置。
9. 静置后，分为两层，上层为水层，下层为氯仿层。
10. 将上层水层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。
11. 加入适量氯仿，摇匀后放置静置。
12. 静置后，分为两层，上层为氯仿层，下层为水层。
13. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。
14. 加入适量水，摇匀后放置静置。
15. 静置后，分为两层，上层为水层，下层为氯仿层。
结果与讨论：经过多次提取，我们成功地从鸡蛋中提取到了卵磷脂。
实验过程中，通过乙醇、氯化钠和氯仿的配合使用，能够有效地分离出卵磷脂。
乙醇的作用是溶解蛋黄中的卵磷脂，而氯化钠则用于调节溶液的渗透压，帮助分离。
氯仿则是用来提取卵磷脂的有机溶剂，能够与卵磷脂形成复合物，从而实现分离。
卵磷脂作为一种重要的生物大分子，具有多种生理功能。
首先，卵磷脂是细胞膜的主要组成成分之一，能够维持细胞膜的完整性和稳定性。
其次，卵磷脂还参与细胞信号传导，调节细胞功能。
此外，卵磷脂还具有良好的乳化和分散性能，常被用作食品添加剂和药物载体。
在实际应用中，卵磷脂的提取方法可以根据需要进行调整。
例如，可以根据不同来源的卵磷脂进行提取，以获得特定的卵磷脂种类。
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卵磷脂的提取与鉴定一试验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的卵磷脂的提取与鉴定一实验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的原理和方法。
二实验原理卵磷脂在脑神经细胞中含量很高，蛋黄中含有特别高。
根据卵磷脂溶于乙醇、乙醚等有机溶剂进行提取。
新提取的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后被氧化为黄褐色。
利用卵磷脂的胆碱基在碱性溶液中可以分解为三甲胺(特殊的鱼腥臭味)进行鉴别。
三实验器材与试剂鸡蛋黄、乙醇(95,)、10,NaOH、烧杯、量筒等。
四实验步骤1 提取卵磷脂取2g蛋黄于15mL(95,)乙醇，过滤、蒸气浴蒸干，残留物为卵磷脂。
2 鉴别取少量的卵磷脂于试管中，加10,NaOH溶液2mL，水浴加热是否产生鱼腥臭味。
五注意事项滤液要清。
六作业完成实验报告，写出实验小结。
1粗脂肪的提取和定量测定——索氏提取法一实验目的1 学习和掌握用索氏提取器提取脂肪的原理和方法2 学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定。
二实验原理利用脂类物质溶于有机溶剂的特性，在索氏提取器中用有机溶剂对样品中的的脂类物质进行提取。
因提取的物质是脂类物质的混合物，故称其为粗脂肪。
三实验器材1索氏提取器 2 分析天平 3 烧杯 4 恒温水浴锅 5 脱脂棉和脱脂滤纸 6 镊子7 干燥器四实验试剂与材料1 样品2 石油醚五实验步骤1称量索氏提取瓶将索氏提取瓶洗净烘干至恒重，记录重量。
2提取样品粗脂肪将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积1/2—2/3。
将样品包放入提取管内。
连接索氏提取器各个部分。
用70度,80度恒温水浴加热提取瓶，抽提进行2―3小时，直至提取管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止，表示提取完全。
3 计算样品中粗脂肪的含量提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，倒出石油醚。
取下提取瓶，洗净瓶的外壁，烘干至恒重。
记录重量。
2按照下式计算样品中粗脂肪的百分含量。
粗脂肪(,),(提取后提取瓶的重量,提取前提取瓶的重量)/样品重量*100% 六作业计算样品中粗脂肪的含量，完成实验报告。
思考题:做好本实验应注意哪些事项,3氨基酸的分离鉴定――纸层析法一实验目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二实验原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的: Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到容剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
三实验器材1、层析缸2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、层析滤纸(新华一号)四实验试剂1、扩展剂(650mL) 是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。
将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充4分振荡，静置后分层，放出下层水层。
取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒人培养皿中备用。
2、氨基酸溶液 0(5,的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0(5,)，各5mL。
3、显色剂 50,lOOmL 0.1,水合茚三酮正丁醇溶液。
五实验步骤1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2、取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。
在纸的一端距边缘2,3 cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。
3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上，干后再点一次。
每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm。
4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。
将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。
待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
5、显色用喷雾器均匀喷上0。
1,茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100?)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
56、计算各种氨基酸的Rf值。
六作业计算各种氨基酸的Rf值，完成实验报告。
思考题:1、何谓纸层析法?2、何谓及f值?影响只f值的主要因素是什么?3、怎样制备扩展剂?4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么?6血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳一实验目的1学习血清蛋白质醋酸纤维膜电泳的操作2了解电泳技术的基本原理。
二实验原理当一个带电粒子处于电场中时，可以朝与其所带电荷相反的电极移动，此现象叫电泳。
血清中含有多种蛋白质，其等电点各不相同，一般均低于pH 7.3。
它们在pH 8.6的缓冲液中均离解带负电荷，电泳移向正极。
由于血清中各种蛋白质的分子所带的电荷及形状大小各不相同，因此，在电场中泳动的速度也不同，故可用电泳法将其分离。
醋酸纤维薄膜电泳系以醋酸纤维薄膜为支持体，分离血清蛋白。
分离后的蛋白质用氨基黑10B染色，通常可得到白蛋白和α1、α2 、β及γ球蛋白的电泳区带。
区带颜色深浅与蛋白质含量成正比，故可通过比色计算出血清中白蛋白及球蛋白的相对含量。
(定量的测定为选作部分)7几种血清蛋白的等电点，平均分子量表。
球蛋白清蛋白α1 α2 β γ等电点 4.88 5.06 5.06 5.06 6.85-7.3分子量(万) 6.9 20 30 9-15 15.6-30其电泳图谱如下清蛋白α1 α2 β γ 点样三实验器材1(试管及试管架; 2(刻度吸管或移液器;3(微量加样器(或1×5? 胶片); 4(培养皿;5(染色缸、洗脱缸; 6(剪刀、镊子;7( 滤纸;8(醋酸纤维素薄膜;9(电泳仪;10. 723 分光光度计。
四实验试剂1. 巴比妥缓冲液(pH 8.6): 称取巴比妥钠 15.458g和巴比妥2.768 g，溶于1000 ml蒸馏水中。
2. 氨基黑10B 染色液:取氨基黑10B 0.5g，加冰醋酸10ml 及甲醇50ml ,混匀，用蒸馏水稀释至100ml。
3. 洗脱液: 取95 % 乙醇 45ml，加冰醋酸 5ml，混匀，用蒸馏水稀释至100ml。
4. 0.4mol/L NaoH 溶液。
五实验步骤1.检查电泳仪:检查电源是否连好，电泳仪与电泳槽的电极连接是否8正确，注意正负极不要接错。
2.点样:洗净手，从巴比妥缓冲液中取2.5×8? 醋酸纤维薄膜(提前一小时浸入，已编好号)一条，夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液。
将薄膜毛面向上，用微量加样器或胶片蘸取适量血清(约2,3微升，过多会影响分离)，垂直均匀地点在距膜端1.5? 划线处，待血清全部渗入膜内后，将加样器或胶片拿开。
3(电泳: 将点好样的薄膜毛面向下(以防水份蒸发干燥)，置电泳槽滤纸联桥上(薄膜应放正，否则电泳图谱不整齐)，点样端为阴极端，平衡5分钟。
接通电源，调节电压10,15v,cm长，电流0.4,0.6mA,cm宽，通电60分钟。
4(染色:关闭电源:取出薄膜，浸入氨基黑10B染色液中10分钟。
5(洗脱:在三个洗脱缸中，依次浸泡，每次约10分钟，直到背景无色，区带清晰为止，取出晾干。
然后根据电泳标准图辨认各蛋白质区带。
6(测定:将各区带剪下，置于相应标记的大试管中，同时在该薄膜上的空白处(应无任何污染)，剪下一条与α1-球蛋白面积形状相近的区带，置于一大试管中，作为空白对照。
然后每管加0.4mol,L NaOH 4ml，不断振摇30分钟，使染色的蛋白浸出，用620nm波长进行比色，以空白调零点，测各管吸光度。
[计算]各蛋白质区带洗脱液的吸光度×100 =各蛋白质占血清蛋白总量的百分率(%)各蛋白质区带洗脱液吸光度总和[正常值]白蛋白: 67,73,9α1-球蛋白: 3,4,;α2-球蛋白: 5,9,;β-球蛋白: 6,9,;γ-球蛋白: 11,14,;附:光密度计法定量:将干燥的蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动扫描光密度仪(或色谱扫描仪)内，通过反射(用未透明薄膜)或透射(用已透明的薄膜)方式，在记录器上自动绘出蛋白质各组分曲线图，横坐标为膜的长度，纵坐标为光密度，每一个峰代表一种蛋白质组分。
然后用求积仪测量出各峰的面积，计算每个峰的面积与它们的总面积的百分比就代表血清中各种蛋白质组分的百分含量。
在使用具有电子计算机附件的自动扫描光密度仪时，可以从数字显示部分或打字带上直接获得每条区带蛋白质百分含量。
六作业完成实验报告思考题:1(血清蛋白质的电泳分析有何临床意义?2(一蛋白质等电点为pH 4.88，而另一蛋白质等电点为pH 9.4，它们在pH 8.6的缓冲液中应带什么电荷? 在电场中的电泳方向如何?10蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二实验内容(一)双缩脲反应1、原理尿素加热至180?左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。
一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2(试剂(1)尿素(2)10%氢氧化钠溶液(3)1%硫酸铜溶液(4)2%卵清蛋白溶液113(操作(1)取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10%氢氧化化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
(2)向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
(二)茚三酮反应1(原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α―氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β―丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。
尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1:1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。