临床检验——微生物 常见染色操作

临床检验微生物—常见染色操作

一、涂片制备

1、涂片

用接种环或接种针从肉汤增菌液、半固体斜面或平板上挑取适量菌液或菌落于洁净破片上（固体菌种先加1小滴或1环生理盐水于玻片上），将挑取的增菌液直接涂布于玻片上（菌落均匀涂片于盐水中），涂片要薄而均匀，临床标本如脓、痰、分泌物等可直接涂片。

2、干燥

涂片最好在室温下自然干燥，或将玻片涂菌面朝上，置于酒精灯火焰上方适当位置慢慢烘干，切不可放在火焰上直接烤干。

3、固定

涂片干燥后，在酒精灯火焰上迅速通过3次（涂菌面朝上），加热固定。固定的目的一是杀死细菌，二是使细菌附着于玻片上，不易被水冲掉。

1、初染：初染剂结晶紫，染色10秒钟，适量流水洗掉。

2、媒染：媒染剂碘液，染色10秒钟，适量流水洗掉。

3、脱色：脱色剂丙酮—酒精，脱色约10—20秒钟，至无紫色脱出为止，适量流水洗掉。

4、复染：复染剂复红，染色10秒钟，适量流水洗掉，自然干燥后镜检。

结果判断：革兰阳性呈蓝紫色，革兰阴性呈红色。

1、初染：加石碳酸复红染液，室温染色10分钟或更久，细流水冲洗，甩干。

2、脱色：酸性酒精脱色至无红色为止，细流水冲洗。

3、复染：亚甲基蓝复染30秒钟，细流水冲洗，待干镜检。结果判读：抗酸染色阳性呈红色，抗酸染色阴性呈蓝色。

1、标本处理：取脑脊液2ml经3000r/min离心10min。

2、涂片：取沉淀物1环涂布于洁净玻片上，然后加适量墨汁，加盖玻片后用暗视野镜检观察。

3、结果判读：镜下背景呈黑褐色，菌体为无色。