葛根中总黄酮的测定以及葛根片剂的压制

葛根中总黄酮的测定以及葛根片剂的压制
一，葛根简介
葛根是常用的传统中药，异黄酮类化合物，淀粉和膳食纤维是葛根中所含的三种主要成分。

根据国内现代医学研究表明：异黄酮类化合物在增强免疫力、预防心血管疾病、降低血糖等方面有显著效果，对冠心病、心绞痛、突发性耳聋、中老年骨质疏松症和妇女更年期综合征等也有特殊功效。

国内外学者从葛根中分离鉴定出许多化学成分，主要包括异黄酮类、三帖类及芳香类化合物。

二，葛根黄酮及其苷类化合物
葛根的药用成分研究较多的是野葛，食用成分研究较多的是粉葛。

葛根中主要有效成分是异黄酮类化合物以及少量的黄酮类物质，包括：：大豆苷元(daidzein) 、大豆苷(daidzin) 、葛根素(puerarin) 、金雀花异黄素(genistein) 、鹰嘴豆芽素A (biochanin A) 、染料木素苷( genistin) 、芒柄黄花素( formononetin) 、芒柄花苷(ononin) 、3′- 羟基葛根素(PG1) 、葛根素木糖苷(PG2 ) 、3′- 甲氧基葛根素(PG3) 、大豆黄素4′,7-双葡萄糖甙、葛根素芹菜糖苷(mirificin) 、异甘草素( isoliquiritigeni n)、3′- Methoxydaidzin等30余种异黄酮。

在葛根的有效成分中,最受关注的是葛根素、大豆苷元等。

葛根素能扩张冠状动脉血管,降低血脂,增强心肌收缩力,降低血压,防治高血压头晕、头痛、颈项疼痛。

大豆素具有抗乙酰胆碱作用,被认为是葛根主要功效之一解痉作用的有效成分。

大豆素、大豆苷、葛根素都能抑制人体对酒精的吸收,而前两者效果更加显著。

大豆素、大豆苷、葛根素、金雀花异黄素、鹰嘴豆芽素A 具有抗氧化、抗癌及抗炎作用。

体外试验表明它们的糖配基抗氧化活性比糖甙强,同时鹰嘴豆芽素A 显示了非常强的抗癌活性。

葛根总异黄酮含量随产地和品种而变化,野葛中总黄酮含量一般为7. 6 % 。

三，葛根中总黄酮的提取与含量测定
总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。

在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。

黄酮参与了磷酸与花生四烯酸的代谢、蛋白质的磷酸化、钙离子的转移、自由基的清除、抗氧化活力的增强、氧化还原作用、螯合作用和基因的表达。

它们对健康的好处有：抗炎症、抗过敏、抑制细菌、抑制寄生虫、抑制病毒、防治肝病、防治血管疾病、防治血管栓塞、防治心与脑血管疾病、抗肿瘤、抗化学毒物等。

天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能时入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。

葛根总黄酮提取法有醇回流法、醇渗漉法、浸渍法、超声辅助萃取法等,但利用超声辅助提取中药有效成分具有生产周期短、效率高、设备简单、成本低的优点。

1，超声波辅助提取法
工艺流程
葛根→破碎→超声提取→过滤→减压浓缩→过柱→水洗脱→乙醇洗脱→减压
浓缩→真空干燥→总黄酮提取物。

称取葛根干燥粗粉25 g ,加入溶剂,设定超声提取的时间、温度和超声处理次数进行提取。

提取完成后纱布过滤(多次超声提取时,合并滤液) ,然后常压滤纸过滤,减压浓缩至100 mL ,加入适量蒸馏水,加CaCl 2 1 g ,静置过夜,次日离心。

分别收集上清液,用氨水调p H 至7～8 ,过大孔吸附树脂, 蒸馏水洗去水溶性杂质, 然后用80 %乙醇洗脱, 分别收集洗脱液,减压浓缩,真空干燥,即得葛根总黄酮粗品。

对该法的评价对葛根总黄酮的提取率有直接影响的因素分别为乙醇浓度、乙醇用量、超声处理次数、提取时间、提取温度，各因素影响强弱顺序：乙醇浓度> 提取温度> 乙醇用量> 超声处理次数> 提取时间。

其中,乙醇浓度、提取温度、乙醇用量是决定浸出液浓度的主要因素,超声提取时间和处理次数是次要因素。

结果与理论相符,因超声处理只是一种辅助手段, 与经典的提取方法相比, 它可加快提取过程。

用95 %乙醇比用水做溶剂提取率高.超声波法提取时间25 min ,温度5 ℃,提取率高. 连续提取1 ,2 ,3 次,提取率增加幅度较大;连续提取4 ,5 次,提取率虽然增加,但增加幅度很小,表明连续提取3 次已基本将总黄酮从葛根中提取完毕.因此,超声波连续提取3 次即可
2，醇提法
提取工艺流程
工艺条件: 鲜葛根300g; 溶媒采用甲醇或95% 乙醇, 每次用量750m l, 回流2 次, 每次2h; 再用Ca (OH) 2 乳300m l 提取1 次; 减压浓缩控制温度≤70℃。

对该工艺的评价使用甲醇与使用95% 乙醇的提取效果较接近; 使用65% 乙醇的提取效果要差些。

考虑到甲醇有一定的毒性, 故工业上建议选用95% 乙醇作为葛根总黄酮的提取溶媒
四，总黄酮含量对比。

可用提取出的总黄酮与中国药典中葛根总黄酮的含量进行对比。

五，葛根粉末压制片剂工艺
方案一
葛根粉末量不少于总质量的百分之四十。

初步拟定以下辅料：淀粉。

糊精，白糖粉末，食品添加剂（山梨糖醇、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁）
稀释剂：
1，淀粉：比较常用的是玉米淀粉，它的性质非常稳定，与大多数药物不起作用，价格也比较便宜，吸湿性小、外观色泽好，在实际生产中，常与可压性较好的糖粉、糊精混合使用，这是因为淀粉的可压性较差，若单独使用，会使压出的药片过于松散。

2，糖粉：糖粉系指结晶性蔗糖经低温干燥粉碎后而成的白色粉末，其优点在于粘合力强，可用来增加片剂的硬度，并使片剂的表面光滑美观，其缺点在于吸湿性较强，长期贮存，会使片剂的硬度过大，崩解或溶出困难，除口含片或可溶性片剂外，一般不单独使用，常与糊精、淀粉配合使用。

3，糊精：其化学式为（C6H10O5）n·XH2O，其水溶物约为80%，在冷水中溶解较慢，较易溶于热水，不溶于乙醇。

习惯上亦称其为为高糊（高粘度糊精），即具有较强的粘结性，使用不当会使片面出现麻点、水印或造成片剂崩解或溶出迟缓；同理，在含量测定时如果不充分粉碎提取，将会影响测定结果的准确性和重现性，所以，很少单独大量使用糊精作为填充剂，常与糖粉、淀粉配合使用。

粘合剂：
1，羟丙基甲基纤维素：羟丙甲纤维素（Hydroxypropylmethyl cellulose，HPMC）是一种最为常用的薄膜衣材料，因其溶于冷水成为粘性溶液,故亦常用其2%～5%的溶液作为粘合剂使用。

制备HPMC水溶液时，最好先将HPMC加入到总体积1/5～l/3的热水（80℃～90℃）中，充分分散与水化然后在冷却条件下，不断搅拌，加冷水至总体积。

本品不溶于乙醇、乙醚和氯仿，但溶于10%～80%的乙醇溶液或甲醇与二氯甲烷的混合液。

润滑剂：
1，硬脂酸镁，硬脂酸镁为疏水性润滑剂，易与颗粒混匀，压片后片面光滑美观，应用最广。

用量一般为0.1%～1%，用量过大时，由于其疏水性，会造成片剂的崩解（或溶出）迟缓。

另外，本品不宜用于乙酸水杨酸、某些抗生素药物及多数有机碱盐类药物的片剂。

2，聚乙二醇：PEG4 000、PEG6 000是片剂中水溶性润滑剂的典型代表，在片剂处方中可直接加入适量聚乙二醇进行整粒，也可将其先配成醇溶液、混悬液或乳液进行制粒，润滑效果不变。

利用聚乙二醇制得片剂的崩解和溶出不受影响，可提高主药在胃内的溶解性，最终有助于增加生物利用度。

近年来，聚乙二醇在片剂中的使用越来越广泛，它们不仅可用作润滑剂，还可作为粘合剂，以PEG4 000最为常用。

矫味剂与粘合剂：
1，山梨糖醇：山梨糖醇可压性好，一般作为咀嚼片的矫味剂、粘合剂。

初步准备做葛根粉压片糖果，总量70克，片重0.7克，压制100片。

主料葛根粉40g，硬脂酸镁0.5g，干淀粉3.5g，糊精适量（500g每升）（暂定7g），糖粉3g，羟丙甲纤维素2g，山梨糖醇10g，聚乙二醇4g。

方案二
将葛根总黄酮原料药与辅料在 50℃干燥 1h，过 100 目筛后混合均匀，加入适量
的黏合剂，过 24 目筛制粒，50℃干燥 30min，40 目筛筛出细粉与润滑剂混合，后再
与颗粒混合均匀，最后使用直径为 10.0mm 的浅圆冲模压片。

由于制剂原料为葛根总黄酮粉末，黏性较强，制剂不易成型，预实验显示加入微
粉硅胶可减少原料药的黏性，压片能达到所需的硬度。

故采用单因素水平法，对作为
吸收剂的微粉硅胶的用量进行筛选。

固定填充剂为 MCC，崩解剂为 PVPP，
L-HPC:CCNa(2:1)，润滑剂为硬脂酸镁，黏合剂为 85%乙醇溶液，矫味剂为阿斯巴甜，
微粉硅胶为吸收剂，崩解剂的加入方式均采用内加法，按照“3.1”项制备方法压片，
片质量为 0.3g/片，用2.5%微粉硅胶进行吸收剂的用量，考察制剂的分散均匀性、制粒及压片情况。