西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选

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抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定

抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定罗弋;庞华;李少林;曹辉;李淑杰;王树斌;樊春波【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2009(029)011【摘要】目的构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体.方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv).将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库.以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能.将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测.结果成功构建噬菌体单链抗体库.经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍.随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%.SDSPAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体.结论成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体.【总页数】6页(P1155-1160)【作者】罗弋;庞华;李少林;曹辉;李淑杰;王树斌;樊春波【作者单位】重庆医科大学放射医学教研室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院核医学科,重庆,400016;重庆医科大学放射医学教研室,重庆,400016;重庆医科大学放射医学教研室,重庆,400016;重庆医科大学放射医学教研室,重庆,400016;包头市中心医院肿瘤科,内蒙古包头,014040;重庆医科大学放射医学教研室,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 [J], 周艳红;祭芳;丁衬衬;史建荣2.抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定 [J], 李铁军;李德全3.抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定 [J], 段朝晖;毛越苹;罗晓红;李民友;劳伟思;王英;朱振宇4.鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 [J], 裴世春;孙大庆;郭德军;宋薇;蒋琛5.全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库的构建及筛选鉴定 [J], 谢平丽;李官成;李艳东;周国华;李跃辉;郭锋杰;王甲甲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

西维因人工抗原的合成与鉴定

西维因人工抗原的合成与鉴定帅丽芳;赵勇;银涛;黄桂通;蒋昀;李代波【摘要】[目的]制备西维因农药小分子的抗体,为建立免疫分析方法提供保障.[方法]制备6-(1-萘氧基甲酰胺基)己酸及其活化酯,将其与生物大分子偶联得到人工免疫抗原和包被抗原.[结果]通过对CN H及其活化酯的偶联物进行质谱、核磁共振、红外线鉴定,证实合成的产物为目标人工标原.[结论]成功制备了西维因人工抗原,为西维因农药残留免疫分析的方法研究奠定了基础.%[Objective]To establish immunoassaymethod ,the antibody of carbary pesticide wasprepared .[Methods]6-(1-naphthyloxy methanamide)hexanoic acid was synthesized and activated ,and then coupled with the biological macro-molecules to obtain the artificial antigen .[Results]The synthesized product was confirmed as the target artificial antigen by massspectrometry ,nuclear magnetic resonance and infrared spectroscopy detection .[Conclusion]The artificial anti-gen was synthesized successfully ,and it laid the foundation for the preparation of carbaryl antibody and establishing immunemethod .【期刊名称】《山西农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(037)010【总页数】6页(P749-753,760)【关键词】西维因;人工抗原;合成【作者】帅丽芳;赵勇;银涛;黄桂通;蒋昀;李代波【作者单位】广州军区疾病预防控制中心 ,广东广州 510507;中山大学生命科学学院 ,广东广州 510006;广州军区疾病预防控制中心 ,广东广州 510507;广州军区疾病预防控制中心 ,广东广州 510507;广州军区疾病预防控制中心 ,广东广州510507;广州军区疾病预防控制中心 ,广东广州 510507【正文语种】中文【中图分类】S482.3+4农药是用来防治农作物虫害、病害及草害的化学物质，在农业生产上广泛使用，按化学组成可分为有机磷、氨基甲酸酯类等[1]。

【国家自然科学基金】_单链抗体库_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731

2008年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
科研热词推荐指数单链抗体 8 噬菌体抗体库 3 肺腺癌 2 抗独特型抗体 2 噬茵体抗体库 2 三肽囊素 2 食管癌 1 食品安全 1 重链 1 轻链 1 苦马豆素 1 粘体动物 1 米尔比霉素肟化物 1 筛选 1 生物淘选 1 模拟表位 1 核糖体展示 1 构建 1 大容量噬菌体抗体库 1 圆形碘孢虫 1 噬菌体展示抗体库 1 噬菌体展示技术 1 噬菌体单链抗体 1 可变区重链和轻链基因 1 可变区 1 单链可变区抗体 1 单克隆抗体 1 免疫原性 1 sw hsa 1 mrna-核糖体-蛋白质三聚体 1 dna依赖蛋白激酶催化亚单位 1
2012年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
科研热词单链抗体噬菌体展示重组抗体西维因表达胃癌筛选磁珠生存素时间分辨免疫分析微囊藻毒素lr 大容量抗体库噬菌体抗体库噬菌体抗体噬菌体展示技术可溶性抗体单链抗体库兔源抗体库人源性亲水突变亲和力成熟乳腺癌 vegfr2
推荐指数 4 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
科研热词细菌噬菌体噬菌体抗体库单链抗体随机突变pcr 重组系统逆转录聚合酶链反应蛋白相互作用肽类破伤风毒素破伤风狂犬病病毒g蛋白流式细胞仪筛选抗原抗体共表达抗体库筛选抗体库抗体宿主菌定点突变pcr 噬菌体次级抗体库噬菌体展示周质空间单链抗体(scfv) 单克隆伏马菌素b1 中和活性

骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定

骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定周景明;翟圆君;耿玥;祁艳华;刘红亮;王爱萍【摘要】构建骆驼非免疫噬菌体抗体库,完成抗体库的鉴定.从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA后,特异性扩增骆驼重链抗体可变区(VHH)片段,将其与噬菌粒载体 pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠埃希菌TG1后获得 VHH 抗体基因库,并分析其库容量及多样性.结果表明,经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与莱克多巴胺人工抗原特异性结合的噬菌体展示纳米抗体.构建的骆驼天然重链单域抗体库的库容量为107,多样性良好,独立克隆所占比例为90%,筛选出针对莱克多巴胺人工抗原的噬菌体颗粒.已成功构建骆驼天然噬菌体重链抗体库,并筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和莱克多巴胺的免疫学检测奠定基础,并为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础.%A native camel variable heavy chain phage display antibody library was constructed and was au-thenticated.Total RNA was purified from peripheral blood lymphocytes of the healthy non-immune camel and the VHH coding sequence was amplified,then the PCR products were cloned into a phagemid vector pCANTAB5E.By electroporation of E.coli TG1,the primary library was obtained.The library capacity and diversity were analyzed.The phage display nano-antibodies specific binding ractopamine artificial antigens were selected by adsorption-elution panning.The results showed that a native camel single-domain antibody phage display library containing more than 107individual colonies and functional clones above 90% and having good diversity was obtained.And anti-ractopamine phage particles were selected.A native camel sin-gle-domain antibody phagedisplay library was constructed,and anti-ractopamine phage particles were se-lected.This would lay the foundation for expression of anti-ractopamine nanobody and immunological de-tection of ractopamine,which would be useful for generating VHHs with specific binding affinity.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】7页(P61-67)【关键词】纳米抗体;噬菌体抗体库;莱克多巴胺;骆驼;噬菌体展示【作者】周景明;翟圆君;耿玥;祁艳华;刘红亮;王爱萍【作者单位】郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;郑州大学生命科学学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】S852.4;Q7891993年，Hamers-Casterman C等发现骆驼免疫系统内存在一种仅由重链单一的折叠单元组成的抗体，将其称为单域重链抗体(variable domain of heavy-chain of heavy-chain antibody,VHH)或纳米抗体(nanobody,Nbs)[1]。

构建诱导型CRISPRCas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究

Vol.41No.3Mar.2021上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究赵艳娜1*，邱荣2*，沈南1，唐元家11.上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科，上海市风湿病学研究所，上海200127；2.中国科学院上海营养与健康研究所，上海200031［摘要］目的·结合Dox 诱导型单链导向RNA （single guide RNA ，sgRNA ）表达载体和Cas9转基因小鼠，构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究。

方法·根据四环素诱导表达系统原理，基因合成U6-TetO-sgRNA 和EF1α-T2A-Puro-BFP-T2A-TetR 片段。

通过同源重组将2个片段组装进反转录病毒载体骨架，获得Dox 诱导型sgRNA 反转录病毒载体。

为了验证系统有效性，分离Cas9转基因小鼠骨髓细胞并诱导其向巨噬细胞方向分化。

设计对照（non-targeting control ，NC ）组和实验组（靶向F4/80）的sgRNA ，利用反转录病毒感染细胞，分化条件设置添加Dox 组（Dox +）和不添加Dox 组（Dox -）。

通过流式细胞术和T7核酸内切酶Ⅰ（T7endonuclease Ⅰ，T7E Ⅰ）实验检测基因敲除效果。

结果·①成功构建Dox 诱导型sgRNA 反转录病毒表达载体和Cas9转基因小鼠。

②流式结果显示，在NC Dox -组、NC Dox +组和F4/80Dox -组中，几乎无F4/80阴性细胞群体；而在F4/80Dox +组中，F4/80阴性细胞群体高达50%。

③T 7E Ⅰ结果显示，在F4/80Dox -组中，DNA 条带完整，而在F4/80Dox +组中发生基因突变，DNA 条带被切开。

药学概论论文2000字

药学概论论文2000字对社会药学的初步认识摘要:药物与社会中的每一个人，男人与女人，老人与小孩，病人及其家庭以及社会医疗保障系统均有着密切的关系，同样药物与国家的预算，立法与执法管理也有着密切的关系，并与社会经济发展，科技术进步产生相互影响。

药物在使用过程中出现的不按医嘱使用，误用，滥用所引起的不良反应，中毒，药源性疾病以及药物非医学使用所带来的不仅是生物现象，更多是造成严重的社会问题:如药源性疾病造成的致畸、致聋、致残，吸毒引起的犯罪，酗酒引起的暴力和车祸伤人，吸烟造成的心血管疾病和呼吸系统疾病将消耗大量的卫生资源等，所以这些涉及社会的问题，仅从药和药学的角度考虑是无法解决的，必须与社会学、人文科学密切结合才能获得满意的解决，因此发展起了社会药学这门科学。

它是应用社会学观点和方法研究药学，是社会科学和自然科学相结合的边缘学科，是综合应用社会学与人文科学和基础与临床医药学以及自然科学等学科的最新知识来改善病人的药物治疗。

社会药学有社会学，当然也离不开药学。

药又分为传统药和现代药，传统药一般指各国历史上流传下来的，主要是动1物、植物和矿物药，最博大精深的应书中国的传统药，即中药。

早在商周时期，中医药学便有了萌芽，在已出图的殷商甲骨文中，便有大量疾病的名称。

大约成书于春秋战国时期的《黄帝内经》，是我国现存最早的医学典籍之一，东汉末期的药物学专著《神农本草经》，是我国现存最早的药物学专著，为中药学的发展奠定了一定基础，明代伟大医学家、药学家李时珍的《本草纲目》，载药1892种，附图1109幅，附方11000多首，该书综合了16世纪以前动物学、植物学、矿物和冶金学等多学科知识，其影响超出了本草学范围，并于17世纪末，先后以多种文字译本传至海外。

中药的应用涉及到各医学领域，如常见的感冒，则可用麻黄、桂枝等配伍;清热泻火则用石膏、知母、栀子等;风湿引起的各种疾病则用独活、防己，威灵仙等;安神理气用酸枣仁、柏子仁、陈皮、枳实等;另外还有补虚药，如人参、党参、当归、黄芪、地黄、沙参、麦冬等。

人源乳腺癌噬菌体抗体库的构建及初步筛选

ＭＣ＿结合活性癌噬菌体抗体库中筛选到６特异性噬菌体抗体，下一步进行单链抗体的株为
乳腺癌放射性核素显影及治疗奠定了基础。
关键词：腺癌；菌体抗体库；乳噬筛选；链抗体单中图分类号：７７９Ｒ３．４Ｒ３．；７０４文献标识码：Ａ文章编号：６１８４（ＯＯ０ —５６Ｏ１７－３８２１）５０１一３
ＴＡＮＧｈ — ｉ，ｈｏｌｎ，ＳｕｂｎＬＩＳａ —ｉＰＥＮＧｅｅ１Ｊｉ，ｔ．ａ
．
（．ｅａｔｎｏｃｌｙ，ｉｓＰｏｌｓｓｉｌｆＮｅｉｎＮｅｉｎＳｃｕｎ６１０，ｌｎ；１ＤｐｒｍｅｔｆＯｎｏｇＦｒｔｅｐｅｐｔｉａｇ，ｉａｇ，ｉａ４００Ｃ￣ａｏＨｏａｏｊｊｈｉ２ＤｅａｔｎｆＮｕｌｒｄｃｅＣｌｇｆＢｓｄｃｅＣｏｇｉｇＭｅｉｌｎｖｒｉＣｏｇｉｇ４０１，ｈｎ）．ｐｒｍｅｔｃａｏｅＭｅｉｉ，ｏｌｅａｉＭｅｉｉ，ｈｎｑｎｄｃｉｅｓｔｈｎｑｎ００６ＣｉａｎｅｏｃｎａＵｙ，
ＥＬＳＲｅｕｔＡｈｇｎｉｏｙｏ．ＩＡ．ｓｌｓｐａｅａｔｄｆ４２× １ｗａｂａｎｄａｄｓｘａｔｖｌｎｓａａｎｔｂｅｓａｃｒｅｌＭＣＦ７ｗｅｅｇｉｅｂ０ｓｏｔｉｅｎｉｃｉｅｃｏｅｇｉｓｒａｔｃｎｅｅｌ－ｒａｎｄｆｏｔｅＳｆｉｒｒ．ｏｃｕｉｎＳｘａｔｏｙｂｎｉｇｔｒａｔｃｎｅｅｌｒｔｏｇｙｗｅｅｉｅｔｉｄｆｏｈｍａｉｅｐａｅａ — ｒｍｈｃｖｌａｙＣｎｌｓｏｉｎｉｄｉｄｎｏｂｅｓａｃｒｃｌｍｏｅｓｒｎｌｒｄｎｉｅｒｍｕｎｚｈｇｎｂｂｆｔｏｙｌｒｒ．ｉｗｏｋｐｏｉｅｓｔｅｂｓｓｆｒｒｄｏｕｌｅｉｇｎｎｈｒｐｏｒａｔｃｎｅ．ｉｄｉａｙＴｈｓｂｂｒｒｖｄｓｕｈａｉｏａｉｎｃｉｍａｉｇａｄｔｅａｙｆｒｂｅｓａｃｒｄ

抗体库的构建过程

抗体库的构建过程一、引言抗体库是指收集、保存和管理大量的抗体样本，可以应用于生物医学研究、药物研发等领域。

抗体库的构建过程包括样本采集、抗体制备、筛选和管理等多个环节。

本文将详细介绍抗体库的构建过程。

二、样本采集1.确定采集对象：根据研究目的和需求，确定采集对象。

常见的采集对象包括动物（如小鼠、大鼠、兔子等）、人类血清和细胞系等。

2.采集条件：在保证样本质量的前提下，选择合适的采集条件。

例如，在动物实验中应注意麻醉方式和剂量，避免对动物造成伤害；在人类血清采集中应注意消毒和针头选择等。

3.样本处理：对于不同类型的样本，需要进行不同的处理方法。

例如，对于血清样本需要离心分离血清，去除红细胞等。

三、抗体制备1.免疫原选择：根据研究目的和需求，选择合适的免疫原。

常见的免疫原包括蛋白质、多肽、细胞表面分子等。

2.免疫程序：根据免疫原的特性和抗体制备的需求，选择合适的免疫程序。

常见的免疫程序包括单次免疫、多次免疫等。

3.抗体纯化：通过蛋白A/G亲和层析、离子交换层析等方法纯化抗体。

四、筛选1.ELISA筛选：通过ELISA方法对抗体进行筛选。

将免疫原包被在96孔板上，加入抗体样本，然后加入二抗进行检测。

2.流式细胞术筛选：通过流式细胞术对抗体进行筛选。

将细胞表面分子作为免疫原进行免疫，然后用荧光标记的二抗进行检测。

五、管理1.样本存储：将制备好的抗体样本存储在低温冰箱或液氮罐中，保证其质量和稳定性。

2.信息管理：建立完整的信息管理系统，记录每个样本的来源、制备过程和特性等信息。

六、总结抗体库是生物医学领域中重要的资源之一，其构建过程需要经过样本采集、抗体制备、筛选和管理等多个环节。

在每个环节中，都需要注意细节，保证样本的质量和稳定性。

建立完整的信息管理系统，有助于提高抗体库的效率和可靠性。

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生物工程
食ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ研究与开发
ＦｏｓａｃｄＤｅｅｏｍｅｔｏｄＲｅｅｒｈＡｎｖｌＤｎ
２１０２年７月第３３卷第７期
西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选
王硕，刘昕煜，吴懿娜，杜欣军，朱超，张洁
（品营养与安全教育部重点实验室，食天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津３０５）０４７
ｉｈｂｔｏａｅｏｅｉｎｉｉｎｒｔｆｔｍｍｕｅｓｒｍｅｃｅ５０ｎ６％ｒｓｅｔｅｙＴｏａｉｈｎｅｕｒａｈｄ２４００ａｄ２ｅｐｃｉｌ．ｔｌｖＲＮＡｓｅｔａｔｄｆｏｔｅｗａｘｒｃｅｒｍｈ
分别由１８和ｌ２个氨基酸构成，链可变区分别由１７和ｌ２个氨基酸构成。０１重１１
关键词：维因；茵体展示；组抗体西噬重
ＣｏｓｒｃｉｎｏｎｔｕｔｏｆＰｈａｅＳＦｖＬｉａｙＡｇｉｓｒｒｌａｌｃｉｎｏｐｅｉｃＰｈａｅＣｌｎｓｇｃｂｒｒａｎｔＣａｂａｙｎｄＳｅｅｔｏｆＳｃｆｉｇｏｅ
单链抗体基因。经过Ｅｏ和ＨｉｃＲＩｎｍ酶切后，ｄ连入１７噬菌体臂，构建西维因特异性的抗体库，体库原始滴度为抗
１４１ｆ。西维因一Ｖ．￣０ｐｕ以７ＯＡ为配体对抗体库进行淘选，经过４轮淘选后，用直接ＥＩＡ对获得噬茵体克隆进行特利ＬＳ异性检测，维因对克隆Ａ — 西４７和Ａ — ６的抑制率分别达到５．％和６．４１４１６４％。过序列测定，克隆的轻链可变区经２个
摘要：计算机辅助下，计并合成西维因半抗原，载体蛋白ＫＨ连接后免疫Ｂｔ／鼠，过５次免疫后，在设与ＬａＣ小ｂ经最
高效价和特异性抑制率分别达到２４０５００和２％；取免疫后小鼠脾脏总ＲＡ，６提Ｎ纯化ｍＮＲＡ后反转录获得ｃＮ利ＤＡ．用设计的兼并引物获得长度约为４０ｂ０ｐ的轻链可变区和重链可变区基因片段，重叠延伸后获得长度约为７０Ｄ的８ｂ
ＷＡＧＳｕ，Ｉｉ－ｕＷＵＹ— ａＤｉ－ａ，ＨＵＣａ，ＨＮｅＮｈｏＬＵＸｎｙ，ｉｎ，ＵＸｎｊｎＺｈｏＺＡＧＪｉ（ｅａｏａｒｏｏｕｒｉｎａｔＭｎｓｙｆｄｃｔｎＴａｊｎｖｒｔｏｉｃｎｅｈｏｇ，ｉｊＫｙｂｒｔｙｆｏｄｔｔｎｄｆｙｉｉｒｕａｏ，ｉｉＵｉｓｙｆｃｅｅｄｃｎｌｙＴａｉＬｏＦＮｉｏａＳｅ，ｔｏＥｉｎｎｅｉＳｎａＴｏｎｎ
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ＡｂｔａｔＣａｂｒｌｈｐｅ，ｗｈｃｗａｄｓｇｅｕｉｇｏｕｅｓｆｒｓｎｓｎｈｓｚｄｙｈｍｉａｓｒｃ：ｒａｙａｔｎｉｈｓｅｉｎｄｓｎｃｍｐｔｒｏｔｅａｄｙｔｅｉｅｂｃｅｃｌｗａｓｎｈｓｚｄｍｅｈｄｓｙｔｅｉｅｔｏ，ｗａｏｎｃｅｔａｒｅｒｔｉＨ．ｅｌ／ｃｒｍｍｕｉｅｓｎｈｓｃｎｅｔｄｗｉｃｒｉｒｐｏｅｎＫＬｈＴｈｎＢａｂＣｍｉｅｗｅｅｉｎｚｄｕｉｇｔｅｃｎｅｔｄｐｏｕｔｓｈｉｏｎｃｅｒｄｃａｔｅｍｍｕｏｅ．Ａｆｅｒｕｄｏｍｍｕｉａｉｎｈｉｈｓｉｒａｄｈｓｅｉｃｎｇｎｔｒ５ｏｎｓｆｉｎｚｔ，ｔｅｈｇｅｔｔｔｎｔｅｐｃｆｏｅｉ
ｈａｙｃａ（Ｈｗｒａｏｔ０ｐｉｌｇ．ｅｅｉｇ－ｈｉａｔｏｙｇｎ（Ｆ）ｂｕ７０ｂａｅｖｉＶ）ｅｅｂｕ４０ｂｎｔＴｎｈｎｌｃａｎｎｂｄｅｓｖａｏｔ８ｐｓｈｎｎｅｈｈｔｓｅｉｅｃｗ