酶免疫测定技术
酶免疫技术
酶免疫技术（Enzyme Immunoassay，EIA）了解：1.酶免疫技术中相关技术环节2.酶免疫测定的应用理解：1.酶免疫技术的分类、测定原理及主要类型2.酶免疫技术的特点掌握：ELISA的基本原理、主要类型、方法、步骤、结果判断一、酶免疫技术概述（一）基本原理：利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原-抗体反应的检测敏感性的一种标记免疫技术。
EIA：抗原抗体反应的特异性、酶高效催化的专一性（二）基本特点：1.①标记后保留酶和抗原(抗体)的活性2.②酶促反应专一性，保证特异性3.③底物反应放大作用，提高敏感性4.④酶标试剂保存稳定5.⑤操作简便，安全易行（三）主要试剂的制备与要求：1.酶与酶作用底物(1)用于标记酶的要求：①酶活性高②标记后酶活性稳定,不影响抗原抗体的免疫反应性③酶催化底物后信号易判定或测定④酶活性不受样品中其他成分的影响⑤酶、辅因子及底物理化性质稳定,安全无害、价廉2.酶标记抗体或抗原(1)通过化学反应或者免疫学反应，让酶与抗体或抗原形成结合物，也称酶标志物或酶结合物。
(2)酶结合物（conjugate）：①酶免疫技术的核心组成部分②直接影响酶免疫技术的应用效果③它的制备是酶免疫技术中非常关键的一个环节①戊二醛交联法②改良过碘酸钠法（直接法）3.固相载体目的：分离游离和结合的酶标志物(1)基本要求①结合容量高，结合稳定②可与抗原抗体复合物等大分子蛋白结合③生物大分子固化后仍保持活性④固化方法简便易行、快捷经济(2)固相载体的种类与选择1)塑料制品（聚苯乙烯）：材料经济，操作简便，易于自动化，最常用2)微颗粒（免疫磁珠）：结合容量大，反应迅速，普遍用于自动化分析3)膜载体（western-blot）：硝酸纤维素膜（NC）、尼龙膜等微孔滤膜，广泛应用于定性或半定量的斑点ELISA (3)包被与封闭1)包被（coating）：将抗原或抗体结合在固相载体上的过程，一般采用偏碱（pH 9.6）的碳酸盐溶液2)封闭（blocking）：1％-5％牛血清白蛋白或5％-20％小牛血清，再包被以消除固相载体未覆盖位点产生的非特异干扰二、酶免疫技术的分类（一）均相酶免疫测定基本原理利用酶标抗体结合抗原形成复合物后，标记酶的活性发生改变的原理，在不将复合物与游离酶标抗体分离的情况下，直接测定系统中总的标记酶活性的改变，进而推算出待检样品中的抗原量。
教学课件第六章酶抑制法和免疫测定技术
1、一般了解：农药残留生物检测技术的问题和展望。 2、一般掌握：生物传感器在农药残留检测中的应用。 3、重点掌握：酶抑制技术；酶联免疫技术；生物技术
等快速测定农药残留方法等。
第六章 酶抑制法和免疫测定技术
一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述 2、酶法检验原理 3、酶原 4、底物与显色剂 5、测定方法
（1）适用于常规方法无法测定的农药 （2）适用于环境监控 （3）适用于单一农考题
1、酶抑制法测定农药残留的基本原理是什么？ 2、免疫分析法应用于农药残留检测的关键问 题是什么？ 3、农药快速检测技术的检测原理是什么？
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3、酶联免疫吸附测定法
ELISA（Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) 原理：在测定过程中，样品提取液中的农药 与已知数量的酶联剂竞争有限数量的抗体吸 附位点。（加入显色剂）
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（1）、直接ELISA原理
Ag Ag *
Ab ：Ag S
二、免疫检测技术 1、免疫反应 2、免疫分析 3、酶联免疫吸附测定 法 4、农药抗体制备 5、ELISA法的特点
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一、酶抑制分析测定法
1、酶法概述
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2、酶法检验原理
真性胆碱酯酶与胆碱能神经的生理功能极为密切。 其生理功能是，当神经冲动到达胆碱能神经末梢 时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于 突触后膜的胆碱能受体，引起下一级神经元或效 应器的激发。在正常生理条件下，Ach完成传递 冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒 内水解，生成乙酸和胆碱。
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(1)神经性毒剂对AchE的抑制机理
酶免疫技术原理
酶免疫技术原理酶免疫技术是一种常用的实验技术，其原理是将酶标记的抗体与待检测物相互作用，通过检测酶标记的反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。
酶免疫技术可以用于检测抗体、蛋白质、核酸等生物分子，也可以用于定量或半定量分析。
酶免疫技术的步骤通常包括以下几个步骤：1.抗原或抗体的加样和固定将待检测物加入到试剂盒中的孔洞中，然后使其在盒子表面固定。
2.疫苗抗体的反应将已知的疫苗抗体加入到试剂盒孔洞中，使其与待检测物结合。
3.标记酶的加入将用于标记酶的物质加入到试剂盒孔洞中，使其可以与疫苗抗体结合。
4.洗涤用冷凝水或其他方式，将未结合的物质从孔洞中提取出来，以保证准确性。
5.色素反应加入染料或颜料，使得待检测物和标记酶协同反应，产生色素反应。
6.结果的读取和分析根据产生的颜色和染料的浓度，来分析待检测物的浓度和质量。
酶免疫技术通常有两种形式：1.间接ELISA间接ELISA是酶免疫技术中最常用的一种方法。
它利用酶标记的二抗与待检测物的一抗结合，通过检测酶标记反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。
间接ELISA具有灵敏度高、特异性好、反应快、操作简便等特点。
2.竞争ELISA竞争ELISA是利用酶标记的抗体与水相抗原或待测物相竞争结合的一种方法。
当待测物或水相抗原与标记抗体竞争时，标记抗体附着在固定物上的数量姗姗而后，细胞内的信号会变弱或消失。
通过测定标记抗体的数量，可以计算出被测物质的含量。
酶免疫技术是一种有效的生物分析技术，其通过简单的实验流程和基于酶反应的原理，可以快速准确地检测分析生物分子的存在和浓度。
酶免疫技术在生物医学、环境科学、食品质量检测等领域有广泛的应用。
1.免疫学研究酶免疫技术在免疫学研究中有着重要的作用。
利用酶免疫技术，可以检测和定量各种免疫球蛋白、细胞因子和细胞表面标志物，研究它们在疾病状态和治疗方案中的作用。
2.临床诊断酶免疫技术在临床诊断中也有很重要的应用。
可以用于检测肿瘤标志物、气道标志物和血液蛋白等，帮助诊断癌症、哮喘和重症肌无力等疾病。
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术
酶联免疫吸附测定与酶联免疫印迹技术1. 引言酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）和酶联免疫印迹技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称Western blot）是两种常用的免疫学实验技术。
它们在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
本文将对这两种技术进行详细介绍，并比较它们的优势和局限性。
2. 酶联免疫吸附测定（ELISA）2.1 原理ELISA是一种通过酶标记的抗体与待测物相互作用来检测目标分子的方法。
它主要包括固相吸附、特异性抗体结合、酶标记抗体结合和底物反应四个步骤。
首先，将待测物固定在微孔板上，形成固相吸附。
然后，加入特异性抗体与待测物结合。
接着，加入酶标记的二抗与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物。
最后，加入底物反应，酶催化底物反应产生可测量的信号。
根据信号的强度可以定量测定待测物的浓度。
2.2 应用ELISA技术在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
它可以用于检测病原微生物、肿瘤标志物、激素、抗体等多种生物分子。
在临床诊断中，ELISA可以用于早期筛查、疾病诊断和疫苗效果评估等方面。
在研究中，ELISA可以用于分析蛋白质相互作用、药物筛选和基因表达分析等。
2.3 优势和局限性ELISA的优势在于其灵敏度高、特异性强、操作简单、结果可定量等特点。
它可以同时处理多个样本，适用于大规模实验。
此外，ELISA的结果可以通过光学密度或荧光强度来定量，结果可靠。
然而，ELISA也存在一些局限性。
首先，ELISA只能检测已知的目标分子，无法发现新的生物标志物。
其次，ELISA的结果受到固相吸附和抗体选择的影响，可能存在交叉反应和误差。
此外，ELISA对样本的处理和保存要求严格，操作不当容易导致误差。
3. 酶联免疫印迹技术（Western blot）3.1 原理Western blot是一种通过检测目标蛋白在蛋白电泳分离后的特异性抗体结合来定性和定量目标蛋白的方法。
第八章酶免疫技术
酶放大免疫分析技术 示意图
克隆酶供体免疫分析示意图
克隆β-D半乳糖苷酶的两种片段： 酶受体（EA）和酶供体（ED）
二、异相酶免疫测定
与均相不同 之处
需分离游离与结合的酶标记物
分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定
Ag+Ab-E
AgAb-E+Ab-E
物、激素等）
1、已知抗体包 被于载体表面
1、已知抗体包 被于载体表面
+
竞争法测抗原
-
E
E
E
3、加酶作用 的底物不显色 或显色弱
E
E
E
2、加待检物 抗原与酶标抗 原竞争与抗体 结合
2、加待测物 和酶标抗原， 酶标抗原与抗 体结合
E
E
3、加酶作用 的底物显色
ELISA检测抗体的方法
间接法
方法
用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗 抗体或二抗）加底物显色。
底物显色
1、固相化抗人 IgM 2、加待测物 特异性IgM与 非特异性IgM 和抗人IgM结合
1、固相化抗人 IgM
2、加待测物 只有非特异性IgM 和抗人IgM结合
3、加特异性 抗原，与特异 性抗体结合
E E E
3、加特异性抗 原，不能与非 特异性IgM结合
+
E
E
4、加酶标抗体 与特异性抗原结 合，加底物显色
原理
酶标记物与相应的抗原或抗体结合后， 标记酶的活性会发生改变，不用分离结合 和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性 的改变，而确定抗原或抗体的含量。
均相酶免疫测定
最具代表性的两种技术
酶放大免疫测定法原理
酶放大免疫测定法原理酶放大免疫测定法（Enzyme Amplified Immunoassay，EAI）是目前广泛应用于生物医学领域的一种检测方法。
它的原理是利用酶的特异性和高效性，以及免疫学技术对抗体和抗原的强烈互作用，实现对生物分子的高灵敏度检测。
在EAI中，抗体和抗原的结合将会启动与酶的结合，从而使酶的活性得到放大。
这种放大效应的实现有两个重要步骤。
首先，选择合适的抗体和抗原可以使它们在试剂盒中形成稳定的和高度特异的互作用。
其次，在酶的选择和调节方面，需要特别注重它的基本性质，如稳定性、特异性和敏感性等。
这种放大效应的实现可以通过多种不同的酶进行，常见的有辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）、碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）和β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase，β-Gal）等。
此外，其检测原理也分为直接和间接检测两种方式。
在直接检测中，抗体或抗原会附着在表面或载体上，当待测物与它们结合，酶便进一步识别并与待测物发生互作用。
而在间接检测中，则是通过一系列特定步骤来实现。
如首先，当待测物与表面上的抗体或抗原结合时，与其结合的二抗或二元复合体被加入到其中，酶也在其中发挥作用进行信号放大，最终通过比色法或荧光法等检测方式，对待测物进行定性或定量分析。
由于EAI具有灵敏度、特异性和多样性等方面的优势，因此在生物医学领域中具有广泛的应用前景。
其中涉及到的内容可能包括疫苗研究、细胞学研究等方面。
比如，通过对疫苗通过EAI的检测，可以反映其在人体内的免疫反应情况，有助于疾病诊断和治疗；而在细胞学研究方面，EAI还可以用于对基因表达和蛋白质分布状况等进行定量分析。
总之，EAI的原理和应用内容非常广泛，它是一种高灵敏度和高特异性的检测方法，通过合适的酶放大效应，可以实现对生物分子的定性和定量检测。
酶免疫测定技术
酶免疫测定技术酶免疫测定技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的生物分析技术，用于检测样品中特定蛋白质或其他分子的存在和浓度。
该技术基于抗原与抗体之间的高度特异性反应，通过酶的催化作用来实现信号放大，从而实现对目标分子的灵敏检测。
一、ELISA的原理ELISA技术主要包括间接ELISA、竞争ELISA、直接ELISA和夹心ELISA等多种变种。
其中，间接ELISA是最常用的一种。
在间接ELISA中，首先将待检样品溶液加入到微孔板中，使得目标分子与固相抗体结合。
然后，通过加入与目标分子特异性结合的二抗，与固相抗体结合。
最后，加入酶标记的二抗，使其与二抗结合，形成“抗原-固相抗体-二抗-酶标记二抗”复合物。
接下来，通过加入底物，使酶催化底物发生可见的颜色反应。
最后，根据反应的颜色强度测定目标分子的浓度。
二、ELISA的应用ELISA技术具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，因此在医学、生命科学研究、药物开发等领域得到了广泛应用。
1. 医学诊断ELISA技术在临床医学中被广泛应用于疾病的诊断和监测。
例如，ELISA技术可以用来检测人体内的病毒、细菌或其他病原体引起的感染。
通过检测患者体液中的特定抗体或病原体抗原，可以确定疾病的存在和严重程度。
2. 生物学研究ELISA技术在生物学研究中被广泛用于分析细胞因子、激素、细胞表面受体等生物分子的表达和调控。
例如，科研人员可以利用ELISA技术来测定细胞培养液中特定蛋白质的浓度，从而研究其在细胞信号传导、细胞分化和细胞凋亡等生物过程中的作用机制。
3. 药物开发ELISA技术在药物开发过程中发挥着重要的作用。
通过ELISA技术，药物研发人员可以测定药物在体内的药物浓度和药物代谢产物的浓度。
这有助于评估药物的吸收、分布、代谢和排泄（ADME）特性，从而指导药物的优化设计和临床应用。
三、ELISA的优势和局限性ELISA技术具有以下优势：1. 高灵敏度：ELISA技术可以检测非常低浓度的目标分子，通常在纳克/毫升的水平上。
酶的免疫化学测定
(3)肝酶谱： 主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、 肝内外胆汁淤积等肝胆疾病。 (4)肿瘤酶谱： 具有器官特异性的有ACP及其同工酶、 ALP及其同工酶、γ-GT及其同工酶、AFU、 AMY及其同工酶、LPS等；非器官特异性的 有ALT、CK同工酶、ALD同工酶、LD同工酶 等。
(5)胰酶谱：
主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别
2．显色染料
常用显色染料有偶氮染料和四唑盐等。它们易 溶于水，难溶于一般的有机溶剂。 酶学中只是利用所进行的偶合反应，由所生成 不同颜色的偶氮色素进行同工酶谱检测，四唑盐起 着受氢体的作用，如将四唑盐及双四唑盐分别还原 成紫红色的甲躜(formazan)和紫蓝色的双甲躜。 常用的四唑盐有：硝基四唑蓝盐(NBT)，碘化硝 基四唑盐(INT)、甲基噻唑四唑盐(MTT)等。其中NBT 生成的色素难以溶解，在局部区域染色良好，使用 最多。
(三)临床意义
ALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临 床上主要用于肝脏疾病的诊断。 各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起 的急性肝损害时，血清ALT水平可在临床症状(如 黄疸)出现之前就急剧升高且ALT>AST。
急性肝炎时血清ALT高低与临床病情轻重相 平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶， 是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如 能同时测定AST，并计算AST／ALT之比，则对于 急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也 特别有价值。急性肝炎时比值<1，肝硬化时比值 ≥2，肝癌时比值≥30． 重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT 逐渐下降，而胆红素却进行性升高，出现所谓 “酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。
三、分析方法
临床同工酶的分析大致可分为两步，即 首先精确地分离出某酶的各同工酶组分，然 后测定酶的总活性和各同工酶或亚型组分的 活性。
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IgM1 IgM2
Ag1
酶免疫测定技术的应用
均相法 ELISA法
均相酶免疫测定主要应用于小分子激素和半 抗原（如药物）的测定。 E M IT 方法快速灵敏、准确、专一, 适合临床 上常规检验。药物滥用、药物中毒(包括误 服与有意识服毒) , 吸毒酗酒、麻醉药成瘾， 安眠药成瘾较严重, 此外还有众多的精神病 患者, 因此各种类型的药物中毒是比较多的。 除了医疗工作需要进行治疗药物监测之外, 在急症及中毒治疗方面也要了解与掌握体 内药物或毒物的品种和浓度。本方法能够 适应上述的需要, 除用于血药浓度测定之外, 还有药物滥用与药物中毒的检测。
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梅毒的早期诊断：检测梅毒螺旋体IgM抗体（Tp－IgM）在早期梅毒诊断中有 重要的意义。采用ELISA法，进行血清/ 脑脊液的梅毒螺旋体IgM抗体的检测。 在献血员中梅毒螺旋体抗体的筛查中也常用此法，有利于控制和减少梅毒的 输血传播。 定量检测内毒素： 临床上，细菌感染的患者常发生内毒素血症，死亡率高达 20％－30％，检测标本中的LPS 对早期诊断和防治有重要意义。 食品中有害成分残留的测定 检测食品中的毒素：采用辣根过氧化氢酶（HRP）标记高亲和力的黄曲霉毒素 Ｂ1 (AFTB1 )抗体，建立了直接竞争抑制ELISA 快速筛选法。大大缩短了检 测时间。 一些蛋白质即使经过了加工处理，也是一种潜在的过敏原，会让某些人产生 过敏反应。采用多克隆抗体间接竞争ELISA 法和抗体夹心ELISA 法，可测定 食品中的痕量花生蛋白和榛子蛋白。组胺既是鱼类食物中毒的主要原因，也 是“奶酪综合症”的病因。 测食品中的残留农药：迄今为止，应用ELISA检测食品中的残留农药主要是除 草剂、杀菌剂和杀虫剂。ELISA 法测定农药残留以其特异性强、灵敏度高及 快速准确而得到广泛的应用，尤其是现场控制水果、蔬菜、食品中的农药残 留，对发展无污染农产品，保障人体健康起到积极作用。 检测食品中的微生物：制备单克隆抗体分析食品中伤寒沙门氏菌，结果准确 可靠，比常规方法缩短了 3~4ｄ，而且与其它沙门氏菌交叉反应率很低，与 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌无交叉反应。 检测食品中其它成分：植物雌激素在植物中含量很低， 但它能帮助治疗一些 疾病。用ELISA 分析植物雌激素。牡蛎蛋白是牡蛎精粉的主要活性成分，可 采用斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)测定牡蛎蛋白的含量。另外，ELISA也 可以用来检测食品加工过程中的酶 (如磷酸丙糖异构酶、转谷氨酰胺酶 )含 量的变化。
酶免疫测定技术
组员：丁鑫鑫 刘璐 顾芯铭
何为酶免疫测定？
enzyme immunoassay,EIA
抗原抗体反应的特异性
+
酶催化反应的高效性
酶免疫增强测定技术EMIT 均相酶免疫测定
酶免疫测定技术
克隆酶供体免疫分析CEDIA 液相酶免疫测定 异相酶免疫测定 固相酶免疫测定 ELISA
酶免疫增强技术EMIT
• ELISA的应用存在的问题 ELISA应用于检测抗原、抗体及半抗原，在实际 应用中可作疾病临床诊断与监察、食品中有害成 分残留的测定、与基因工程合并使用等，但在 ELISA的应用中也存在一些问题，例如：其特异 性取决于抗原的制备，试剂半衰期长，这ELISA 的应用带来了很大的局限性，实际研究工作中应 克服这些点，为ELISA的应用提供更为广阔的应 用与发展空间.
• 一、治疗药物监测一药物血浓度测定 • 有地高辛、奎尼丁、利多卡因、双异丙、普鲁卡因酞胺、 N 一乙酞普鲁卡因酞胺(前者的有活性代谢物)、庆大霉素、 妥布霉素、丁胺卡那霉素、乙基西梭霉素、氨甲喋吟等。 • 二、药物滥用的尿检验— 半定量分析 • 有苯丙胺、巴比妥类、苯甲二氮草类、大麻类、可卡因、 乙醇、美沙酮、安眠酮、阿片类 、丙氧吩等。半定量分 析是以阴性、低、中等三种浓度的标准品为三点制作一条 标准曲线, 测定样品的光吸收值变化率与标准曲线比较, 可 以计算样本中存在的药物与代谢物总量。 • 三、血清三环类抗抑郁药的定性分析 • 阿米替林、去甲替林、丙咪啧、去甲丙咪嗦、氯丙咪嗦、 三甲丙咪嗓、多虑平、普鲁替林等及其4 种代谢物。 • 定性分析是应用一个一定浓度的标准品作对照, 如样品的 光吸收值变化率超过标准品, 即为阳性;否则算作阴性。据 此可作快速毒物鉴定。 • 四、血清巴比妥类及苯甲二氮草类的半定量分析 • 7 种巴比妥类及13 种苯甲二氮草类药物的半定量分析。测 定方法亦系以阴性、低、中等三种浓度的标准品作对照比 较, 以测算样本中存在的药物量。
ELISA法
• 酶 联 免 疫 吸 附 法（ ELISA）是1971 年由Engvall 等建立的一种生物活性物质微量测定新技术，以其灵敏度 高，特异性好等优点，在生命科学各领域得到广泛应用， 它已迈出医药、临床领域，步入农业、渔业、畜牧业和食 品加工业。 • 常规的 ELISA 测定法有：间接法、双抗体夹心法和抗原 竞争法。在实际应用过程中，该技术常不断改进，形成了 多种分析方法，并且在检测的灵敏度、特异性、操作简单 化以及实时、高效等方面都有很大提高，可以说ELISA 是 当前应用最广、发展最快的一项微量测定技术。 • ELISA原则上用于检测抗原、抗体及半抗原，在实际应用 中可作疾病临床诊断与监察、食品中有害成分残留的测定、 与基因工程合并使用等，为保障人类健康发挥着巨大的医 学与遗传学作用。
捕获法
• 此法用于血清中某种抗体亚型成分测定。以 IgM测定为例：
样本 抗人IgMμ链抗体 抗人IgMμ链抗体 （IgM1、2） 抗人IgMμ链抗体 IgM1
抗人IgMμ链抗体
IgM2
特异抗原（Ag1） 抗人IgMμ链抗体 抗人IgMμ链抗体 IgM1 IgM2 Ag1 Ab1*E Ab1*E
抗人IgMμ链抗体 抗人IgMμ链抗体
• 此法是测定抗体最常用的方法。
异相酶免疫测定类型
• • • • • 根据检测目的和操作步骤不同： 双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法
竟争法
• 此法可用于抗原和半抗原的定量测定， 也可用于测定抗体。
异相酶免疫测定类型
• • • • • 根据检测目的和操作步骤不同： 双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法
• 医学临床中的应用
• 医学中，检测各种抗原和抗体，为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提 供了特异性，敏感性强的试验基础。 • ELISA广泛应用于内分泌、血液、肿瘤、传染病、免疫化学等方面， 例如：用于检测雌性激素、胰岛素等，检查凝血因子、红细胞抗原等； 用于检查甲胎蛋白，其敏感性已达到放射免疫试验相当的水平。 • ELISA在抗体检测中优势突出，尤其对病毒检测明显优于常规检测方 法。例如：对流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒、狂犬病毒和脊髓灰 质炎病毒等的检测。同时用作自身免疫病抗体测定以及对过敏的诊断， 例如检测过敏原的抗体。 • 乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测：用血清学方法检测肝炎病毒的 抗原或抗体，一直受到高度重视。上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检 测方法， 绝大多数都是ELISA 法。80％ 原发性肝细胞癌患者的， 血 清甲胎蛋白（AFP）含量增高。临床借助对AFP的检测作为对原发性 肝细胞癌的辅助诊断。 • HIV 抗体初筛：抗体测定必须区分初筛和确认两个步骤, 目前常用的 初筛实验方法为第3 代ELISA试剂, 其敏感性和特异性均可达99%以上。 现已发展到抗原加抗体联合检测第四代试剂, 包被和标记的分别是 HIV1/2 O 抗原和HIV- l P 2 4 抗原的单克隆抗体, 可同时检测HIV抗原 和抗体, 检出时间提前大约七天。
• • • • • 根据检测目的和操作步骤不同： 双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法
双抗体夹心法
• 此法常用于测定抗原，适用于多价大分 子抗原的检测，而不能用于测定半抗原 等小分子物质。
异相酶免疫测定类型
• • • • • 根据检测目的和操作步骤不同： 双抗体夹CEDIA
均相酶免疫测定
• 测定快速、准确、专一、灵敏 • 试剂稳定
• 操作过程简便 • 数据处理简单
酶免疫增强测定技术EMIT 均相酶免疫测定
酶免疫测定技术
克隆酶供体免疫分析CEDIA 液相酶免疫测定 异相酶免疫测定 固相酶免疫测定 ELISA
酶免疫增强技术EMIT
异相酶免疫测定类型