高中生物(人教版)同步习题：5-3血红蛋白的提取和分离 规范训练(选修1)
血红蛋白的提取和分离规范训练(含答案)
课题3 血红蛋白的提取和分离 (时间：30分钟满分：50分)一、选择题(每小题4分，共20分)1．利用凝胶色谱法先洗脱出来的蛋白质是( )。
A．相对分子质量大的 B．溶解度高的C．相对分子质量小的 D．所带电荷多的2．将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是( )。
A．血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层C．脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层D．甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层3．下列关于电泳的说法不正确的是( )。
A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小4．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况如下图所示。
下列叙述正确的是( )。
A．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也保留在袋内B．若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度最快C．将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，若分子戊存在于沉淀中，则分子丙也存在于沉淀中D．若五种物质为蛋白质，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最近5．下面说法不正确的是( )。
A．在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸、碱对溶液pH的影响，维持pH 基本不变B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成C．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程D．透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内二、非选择题(共30分)6．(10分)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。
2020高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离练习 新人教版选修1
课题3 血红蛋白的提取和分离1．下列试剂可用于血红蛋白释放的是( )①0.9%的生理盐水②甲苯③磷酸缓冲液④蒸馏水⑤柠檬酸钠A．②④B．①④C．④⑤D．①③解析：0.9%的生理盐水是洗涤红细胞是应用的试剂，不能用于血红蛋白释放；甲苯的作用是溶解细胞膜的磷脂，加速血红蛋白的释放；磷酸缓冲液用于粗分离蛋白质，不能用于释放血红蛋白；蒸馏水作用是使红细胞吸水胀破，释放其中的血红蛋白；柠檬酸钠的作用是采血时，防止血液凝固，不能用于血红蛋白的释放。
答案：A2．在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是( )A．凝胶色谱柱的制作B．色谱柱的装填C．洗脱过程D．样品的处理解析：在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪曲、散乱、变宽，说明色谱柱制作不成功，可能是凝胶装填不紧密、不均匀，或者存在气泡，打乱了洗脱次序所致。
答案：B3．下列有关“血红蛋白提取和分离”实验的正确叙述是( )A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构解析：对红细胞洗涤时应该用生理盐水，不能用蒸馏水，A错误；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B错误；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解磷脂，加速血红蛋白的释放，C错误；整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持pH相对稳定，防止和血红蛋白的结构发生改变，D正确。
答案：D4．凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1.6 cm，有关说法中，不正确的是( )A．一般凝胶色谱柱直径的大小不会影响分离的效果B．凝胶色谱柱过高，超过1 m，不影响分离的效果C．凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大解析：一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果，但是直径过大会造成洗脱液体积增大，样品的稀释度过大，因此应选择直径不超过2 cm的色谱柱。
高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离练习 新人教版选修1
课题3血红蛋白的提取和分离蛋白质分离的原理和方法 1．蛋白质分离的理论依据2．分离的方法 (1)凝胶色谱法：①概念：也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
②凝胶⎩⎪⎨⎪⎧ 形态：微小的多孔球体组成：大多数由多糖类化合物构成结构：内部有许多贯穿的通道③原理：相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，通过凝胶的时间较长；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，通过凝胶的时间较短。
(2)电泳：①概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
②原理：在一定的pH 下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
③影响电泳速率的因素：1．透析法分离蛋白质的目的是除去小分子杂质。
2．利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的先洗脱出来，相对分子质量小的后洗脱出来。
3．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。
4．SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速率完全取决于分子的大小。
5．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理与粗分离、④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3．缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。
(2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
[跟随名师·解疑难]1．凝胶色谱法(1)凝胶：是一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道，具有多孔的凝胶，又称为分子筛。
(2)原理：项目相对分子质量大相对分子质量小直径大小大于凝胶颗粒空隙直径，被排阻在外面小于凝胶颗粒空隙直径，可以进入颗粒内部运动方式垂直向下移动无规则扩散进入凝胶颗粒运动速度较快较慢运动路程较短较长洗脱次序先从凝胶柱洗脱出来后从凝胶柱洗脱出来(1)琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子的带电性质差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。
2018-2019高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离练习 新人教版选修1
【金版学案】2018-2019高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离练习 新人教版选修1一、凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法1．概念凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，也称作分配色谱法。
2．原理(1)凝胶⎩⎪⎨⎪⎧形态：微小的多孔球体组成：大多数由多糖类化合物构成结构：内部有许多贯穿的通道(2)分离原理：①相对分子质量较小的蛋白质：容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，通过凝胶柱的时间较长。
②相对分子质量较大的蛋白质：无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，通过凝胶柱的时间较短。
二、缓冲溶液1．作用在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH 的影响，维持pH 基本不变。
2．配制通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH 范围内使用的缓冲液。
三、电泳——血红蛋白的分离或鉴定方法1．概念带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
2．原理(1)许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH 下，这些基团会带上正电或负电。
(2)在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
(3)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
四、蛋白质的提取和分离过程蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
一、选择题1．使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为下图中(B)解析：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。
2．使用SDS—聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于(B) A．电荷的多少 B．分子的大小C．肽链的多少 D．分子形状的差异解析：SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带的负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
人教版高中生物选修1-5.3《血红蛋白的提取与分离》课时训练
课题3 血红蛋白的提取和分离（时间：20分钟；满分50分）一、选择题（每小题4分，共32分）1.用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的蛋白质（）A.路程较长，移动速度较慢B.路程较长，移动速度较快C.路程较短，移动速度较慢D.路程较短，移动速度较快2.凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是（）A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C.将酶或细胞固定在凝胶中D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度3.相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的分离过程可表示为下图中哪一个？（）4.血红蛋白的提取和分离一般分为四步，符合要求的是（）A.粗分离→样品处理→纯化→纯度鉴定B.粗分离→纯化→样品处理→纯度鉴定C.样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定D.纯化→纯度鉴定→粗分离→样品处理5.样品的加入和洗脱的操作不．正确的是（）A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶柱内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面6.使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（）A.电荷的多少B.分子的大小C.肽链的多少D.分子形状的差异7.以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不．正确的是（）A.洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B.猪的成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C.血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D.在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢8.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是（）A.将样品装入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内，则分子丙也保留在袋内B.若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快C.若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊存在于沉淀中，则分子甲也存在于沉淀中D.若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远二、非选择题（共18分）9.（18分）蛋白质分子中，氨基酸的α－氨基和α－羧基虽然大部分都能结合形成肽键，但是蛋白质分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团，如肽链末端的α－氨基和α－羧基、天冬氨酸和谷氨酸残基中的羧基、赖氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团，所以蛋白质是两性电解质。
人教版高中生物选修1 血红蛋白的提取和分离练习题测试题
自我小测1．使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中（）2．电泳过程中，什么样的分子迁移速度最快？（）A．纤维状、大分子B．纤维状、小分子C．球状、大分子D．球状、小分子3．将人红细胞置于盛有下列液体的离心管中，10 min后离心，得到沉淀物和上清液，则上清液中K＋含量最高的离心管内盛有（）A．质量分数为10%的氯化钠溶液B．质量分数为20%的蔗糖溶液C．质量分数为0.9%的氯化钠溶液D．蒸馏水4．下列有关提取和分离血红蛋白的实验叙述错误的是（）A．该实验的材料必须选用鸡血B．通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取C．凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质D．电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离5．下列关于电泳的说法，不正确的是（）A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于它所带净电荷的多少D．用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质电泳迁移率完全取决于分子的大小6．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是（）A．防止血红蛋白被氧化B．血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能7．凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用都是（）A．改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B．吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C．将酶或细胞固定在凝胶中D．与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度8．将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是（）A．血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层C．脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层D．甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层9．下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是（）A．红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心B．血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌C．分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离D．透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h10．凝胶柱制作的顺序一般是（）①橡皮塞打孔②挖凹穴③玻璃管插入橡皮塞孔内④盖尼龙网⑤用尼龙纱将橡皮塞上部包好⑥将包好的橡皮塞插入玻璃管⑦连接尼龙管、装螺旋夹⑧柱顶部插入安装了玻璃管的橡皮塞A．①→③→④→⑤→⑥→⑧→⑦→②B．①→②→③→④→⑤→⑥→⑦→⑧C．①→②→③→④→⑥→⑤→⑧→⑦D．①→②→③→⑦→⑥→⑤→⑧→④11．关于凝胶色谱柱的装填，除哪项外均为正确解释？（）A．交联葡聚糖凝胶（Sephadex G75）“G”表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值B．色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，必须重装C．用300 mL物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12 hD．凝胶用自来水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液12．下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作，不正确的是（）A．加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐B．让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面C．打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱D．待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液13．血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。
高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离课时训练 新人教版选修1
课时训练·速提升【基础达标】1.用凝胶色谱法分离蛋白质时,相对分子质量大的蛋白质( )A.路程较长,移动速度较慢B.路程较长,移动速度较快C.路程较短,移动速度较慢D.路程较短,移动速度较快2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是( )A.蛋白质分子所带的电荷B.蛋白质分子的形状C.蛋白质分子的相对分子质量D.缓冲溶液的pH3.用凝胶色谱法分离蛋白质的实验中,相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中哪一个( )4.有关缓冲溶液的说法不正确的是( )A.缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变B.缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成C.调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液D.生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的5.(2013·临沂高二检测)血红蛋白的提取和分离中,将搅拌好的混合液转移到离心管中,离心后,可以明显看到试管中的溶液分为4层,其中第3层是( )A.无色透明的甲苯层B.脂溶性物质的沉淀层C.血红蛋白的水溶液D.其他杂质的暗红色沉淀物6.下列操作正确的是( )A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20 mmol/L的磷酸缓冲液,透析12 h7.通过样品处理和粗分离得到的血红蛋白溶液,还含有其他种类的蛋白质分子(如呼吸酶等)。
怎样将杂蛋白与血红蛋白分离开来呢?常用凝胶色谱法进行纯化。
以下做法、说法不正确的是( )A.凝胶色谱分离蛋白质包括:制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和电泳B.色谱柱的装填过程要注意:装填前凝胶需要充分溶胀、装填要均匀、尽量紧密,降低颗粒间隙;无气泡;洗脱液洗涤平衡不能断流C.样品加入和洗脱的基本过程是:调节缓冲液面→加入蛋白质样品(不能破坏凝胶面)→调节缓冲液面→洗脱→红色区带均匀地移动标志着成功→收集分装蛋白质。
人教版高中生物选修1-5.3《血红蛋白的提取和分离》高频精练
课题3 血红蛋白的提取和分离一、选择题1．用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（）A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快2．下列各项中，一般不影响在凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是（）A．层析柱的柱高B．层析柱的直径C．缓冲溶液D．样品的分布3．的蛋白质能进入凝胶内部通道（）A．相对分子质量大的B．吸附性高的C．相对分子质量小的D．溶解度低的4．SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是（）A．增大蛋白质的相对分子质量B．改变蛋白质的形状C．掩盖不同种蛋白质间的电荷差别D．减少蛋白质的相对分子质量5．在装填色谱柱时，不得有气泡存在的原因是（）A．气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果B．气泡阻碍蛋白质的运动C．气泡能与蛋白质发生化学反应D．气泡会在装填凝胶的时候使凝胶不紧密6．将释放出的血红蛋白以2000r/min的速度离心10min后，可以看到试管中的溶液分为4层，其中哪一层是血红蛋白水溶液（）A．第一层无色透明B．第二层白色C．第三层红色透明D．第四层暗红色7．利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来（）A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子量小的D．所带电荷多的8．下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中不正确的是（）A．血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过颜色来判断什么时候应该收集洗脱液B．用生理盐水重复洗涤红细胞C．血红蛋白释放后应低速短时间离心D．不断用磷酸缓冲液处理的目的是让血红蛋白处在稳定的PH范围内，以维持其结构和功能9．下列有关提取和分离血红蛋白实验的叙述，错误的是（）A．该实验的材料必须选用鸡血B．通过透析法可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，为此样品的粗提取C．凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质D．电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小差异分离蛋白质10．凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是（）A．改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B．吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C．将酶或细胞固定在细胞中D．与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速率。
生物人教版高二选修1成长训练：专题5课题3_血红蛋白的提取和分离_word版含解析
主动成长夯基达标1.凝胶色谱法中所用的凝胶的化学本质大多是（A.糖类化合物B.C.蛋白质D.核酸解析：凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些微小的球体，大多是由多糖类化合物构成的。
答案：A2.分离血红蛋白溶液时，离心后试管中的溶液分四层，血红蛋白在第层（A.一B.C.三D.四解析：答案：C3.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（A. B. C. D.相对分子质量的大小解析：凝胶色谱法分离蛋白质的依据是相对分子质量的大小。
相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内答案：D4.血红蛋白由条肽链组成（A.2B.4C.3D.5解析：血红蛋白由四条肽链组成，即两条α肽链和两条β答案：B5.将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（）A. B.C. D.其他杂质的暗红色沉淀物解析：试管中的第一层是有机溶剂，第二层是脂类物质，第三层是血红蛋白溶液，第四层是红细胞破碎物答案：C6. 的蛋白质能进入凝胶内部通道（A相对分子质量大的 B.C.相对分子质量小的D.溶解度低的解析：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道。
答案：C7.透析时取血红蛋白溶液装入透析袋内，放入缓冲溶液中（A.2 mLB.1.5 mLC.0.5 mLD.1mL解析：考查样品处理的操作。
透析时，取1 mL答案：D8.洗涤红细胞时，分离所用方法为（A.低速长时间离心B.C.高速长时间离心D.高速短时间离心解析：答案：B9.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是（A. B.C. D.减少蛋白质的相对分子质量解析：SDS（十二烷基硫酸钠）—聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入SDS的目的是使蛋白质完全变性，SDS所带负答案：C10.制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是（A.移液管头部5 cmB.移液管尾部 5 cmC.移液管头部 3 cmD.移液管尾部 3 cm解析：凝胶色谱柱制作时，将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴，将0.5 mL的移液管头部切下5 cm长的答案：A11.对血红蛋白的研究结果表明，血红蛋白实际上是由珠蛋白、原卟啉和二价铁离子（Fe2+）所组成的结合蛋白质。
人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》
你认为在血红蛋白整个实验中用的缓
冲液是什么？目的是什么？ 本实验使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液
模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构
和功能，便于观察（红色）和科学研究（活性）。
（三）电泳
1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移过程。 2、原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有 可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上 正电或负电。
3.分离血红蛋白 分离过程 红细胞 混合液
高速离心 10Βιβλιοθήκη in离心管脂类物质 有机溶剂
滤纸 过滤
烧杯
血红蛋白
（二）凝胶色谱操作
1、 凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管
2、凝胶色谱柱的装填
固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡
3、样品的加入和洗脱
调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→
D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液
退 出
3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的
移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分
离效果？ 若凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的 话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、 平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散 乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的
装填有关。
3、具体过程
（二）缓冲溶液
1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、
强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的溶液。
2、作用：能够抵制外界的酸或碱的对溶液的pH的影 响，维持pH基本不变。 3、配制：通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。 调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使 用的缓冲液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
课题3 血红蛋白的提取和分离
(时间：30分钟 满分：50分)
一、选择题(每小题4分，共20分)
1．利用凝胶色谱法先洗脱出来的蛋白质是
( )。
A．相对分子质量大的 B．溶解度高的
C．相对分子质量小的 D．所带电荷多的
解析 相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相
对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。
答案 A
2．将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后，离心管中的溶液
分为四层，从上到下的顺序依次是
( )。
A．血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层
B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层
C．脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层
D．甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层
解析 混合液经离心后，按密度大小排列，在离心管中从上到下的顺序依次是：第1层
为无色透明的甲苯层；第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质沉淀层；第3层为红色透
明液体，这是血红蛋白的水溶液；第4层为暗红色沉淀物，主要是红细胞破碎物沉淀。
答案 D
3．下列关于电泳的说法不正确的是
( )。
A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少
D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小
解析 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大
小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超
过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率
完全取决于分子的大小。
答案 C
4．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况
如下图所示。下列叙述正确的是
( )。
A．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也保留在袋内
B．若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度最快
C．将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，若分子戊存在于沉淀中，则分子丙也存在
于沉淀中
D．若五种物质为蛋白质，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则
分子甲和分子戊形成的电泳带相距最近
解析 透析的原理是相对分子质量小的物质能透过半透膜，相对分子质量大的物质不能
透过，乙保留在袋内，甲则不一定保留在袋内；凝胶色谱柱分离时，相对分子质量小的
物质路程长、移动慢；离心时相对分子质量大的物质先沉淀，戊沉淀，则乙、丁、丙均
已沉淀；用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时，电泳迁移率主要取决于分子大小。
答案 C
5．下面说法不正确的是
( )。
A．在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸、碱对溶液pH的影响，维持pH基本不
变
B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成
C．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
D．透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内
解析 透析袋一般是用硝酸纤维素(又叫玻璃纸)制成的。透析袋能使小分子自由进出，
而将大分子保留在袋内。透析可以除去样品中相对分子质量较小的杂质。
答案 D
二、非选择题(共30分)
6．(10分)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运
输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。
(1)将实验流程补充完整：A为________，B为________。凝胶色谱法是根据
______________________而达到蛋白质分离的有效方法。
(2)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤次数过少，无法除去________；离心速度过
高和时间过长会使________一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是
__________。释放血红蛋白的过程中起作用的是__________。
(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是
__________________。如果红色区带__________，说明色谱柱制作成功。
解析 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，在蛋白质分离与
提取过程中包括样品的处理、粗分离、纯化和纯度鉴定四步，每一步均应用了不同的操
作技术，需要注意。
答案 (1)血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小 (2)杂蛋白(血浆
蛋白) 血浆蛋白 白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯
(3)准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内一致 均匀一致地移动
7．(8分)蛋白质分子中，氨基酸的α氨基和α羧基虽然大部分结合成为肽键，但是蛋白质
分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团，如肽链末端的α氨基和α羧基、天冬氨酸和谷
氨酸残基中的羟基、赖氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团，所以蛋白质是两性电解质。
在酸性溶液中，碱性基团的解离增大，使蛋白质带正电荷；在碱性溶液中，酸性基团的
解离加强，使蛋白质带负电荷。当溶液到达某一pH时，蛋白质可因内部酸性和碱性基
团的解离相等而呈等电状态，这时的溶液pH叫做蛋白质的等电点。不处于等电点状态
的蛋白质分子的正、负电荷量是不相同的。试回答下列问题。
(1)多数蛋白质的等电点近于5，一般含碱性基团较多的蛋白质的等电点________(填“偏
高”或“偏低”)。
(2)根据等电点的不同，你能用________方法将不同种类的蛋白质分子分开。
(3)简述根据等电点分离不同种类的蛋白质分子的原理。
解析 本题深入到蛋白质内部，从蛋白质分子带电性质及数量的角度，引导学生理解电
泳法分离蛋白质的原理。含碱性基团较多的蛋白质溶液，在pH近于5时解离程度较大，
蛋白质带正电荷。要使蛋白质内部酸性和碱性基团解离相等呈等电状态，必须提高溶液
的pH，使酸性基团解离增加，故蛋白质的等电点提高。根据等电点不同，可以利用电
泳法将特定的蛋白质分离出来。
答案 (1)偏高
(2)电泳
(3)调节电泳槽中缓冲液的pH，使某种蛋白质处于等电点状态，而其他蛋白质带有电荷，
在电场作用下，带有正、负电荷的蛋白质分别移向两极，而不带电荷的蛋白质留在原处。