生化测试胆红素的原理是啥
总胆红素、间接胆红素、直接胆红素、总胆汁酸作用及指标意义
总胆红素、间接胆红素、直接胆红素、总胆汁酸作用及指标意义临床上生化报告单中常见的总胆红素、间接胆红素、直接胆红素、总胆汁酸等指标可反映肝脏分泌、排泄的功能。
胆红素间接胆红素和直接胆红素是两者总量的合称。
机体TBI1的来源绝大部分是由于衰老红细胞自我裂解或者破坏后释放的血红蛋白。
1、TBI1增高的原因:（1）肝前性黄疸：导致总胆红素来源增多超过正常肝脏代谢能力的疾病，如溶血型黄疸、血型不合的输血反应、新生儿黄疸等。
(2)肝性黄疸：急性黄疸型肝炎、急性黄色肝坏死、慢性活动性肝炎、肝硬化等肝脏本身疾病导致胆红素不能被代谢处理。
(2)肝后性的黄疸：胆道梗阻，胆石症等肝脏排泄胆红素受阻或能力下降导致黄疸。
2、TBI1偏低原因：主要见于缺铁性贫血，锌缺乏等情况。
高胆红素血症新生儿存在胆道排泄功能障碍，且TBI1越高其对胆道损伤越严重；高胆红素血症导致肾损伤的主要病理改变为肾锥体、肾髓质及肾小管内胆红素结晶出现，且病理变化严重程度与血清胆红素水平呈正相关；高胆红素血症对心肌有一定损伤，但心肌的损伤常是可逆的。
肝衰竭血清总胆红素越高，提示肝细胞破坏程度越重，预后越差。
间接胆红素未结合胆红素，主要由红细胞破坏而来，未在肝内经过葡萄糖醛酸化，为脂溶性。
当体内红细胞大量破坏，产生大量的间接胆红素，超过了正常肝脏代偿能力或肝脏病损不能最大限度代谢掉正常量的胆红素，血中间接胆红素含量升高，因间接胆红素为脂溶性的，可透过细胞膜，对细胞有毒害作用。
间接胆红素升高，常常是肝前性、肝性疾患导致。
儿新生儿甲减常导致新生儿黄疸消退延迟，原因是患儿基础代谢率减低，肝脏不能充分维持高能量磷酸盐去结合胆红素，由于甲减肌张力低、肠蠕动慢导致粪便排出延迟，增加肠肝循环而加重黄疸。
婴儿母乳性黄疸：母乳性黄疸的发病机制主要是新生儿胆红素肠肝循环增加和尿甘二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶活性异常等学说。
新生儿的β-葡萄糖醛酸酥酶主要来自母乳，分解胆红素-葡萄糖醛酸酯链产生未结合胆红素。
胆红素的临床意义
一、胆红素是什么？尿胆红素是红细胞破坏后的代谢产生。
胆红素可分为未经肝处理的未结合的胆红素和经肝与葡萄糖醛酸结合形成的结合胆红素。
未结合胆红素不溶于水，在血中与蛋白质结合不能通过肾小球滤膜。
结合胆红素分子量小，溶解度高，可通过肾小球滤膜，由尿中排出，称为尿胆红素。
由于正常人血中结合胆红素含量很低，滤过量极少，因此尿中检不出胆红素，如血中结合胆红素增加可通过肾小球膜使尿中结合胆红素量增加，胆红素检测呈阳性。
二、胆红素的临床意义胆红素检测主要用于黄疸的诊断和黄疸类型的鉴别诊断。
1. 肝细胞性黄疸肝细胞损伤时其对胆红素的摄取、结合、排除功能均可能受损。
由于肝细胞摄取血浆中未结合胆红素能力下降使其在血中的浓度升高，所产生的结合胆红素又可能由于肝细胞肿胀、毛细胆管受压，而在肿胀与坏死的肝细胞间弥散经血窦进入血循环，导致血中结合胆红素亦升高，因其可溶于水并经肾排出，使尿胆红素试验呈阳性。
此外经肠道吸收的粪胆原也因肝细胞受损不能将其转变为胆红素，而以尿胆原形成由尿中排出，故肝细胞黄疸时尿胆红素与尿胆原均呈明显阳性。
在急性病毒性肝炎时，尿胆红素阳性可早于临床黄疸。
其它原因引起的肝细胞黄疸，如药物、毒物引起的中毒性肝炎也可出现类似的结果。
2. 阻塞性黄疸胆汁淤积使肝胆管内压增高，导致毛细胆管破裂，结合胆红素不能排入肠道而逆流入血由尿中排出，故尿胆红素检查阳性。
由于胆汁排入肠道受阻，故尿胆原亦减少。
可见于各种原因引起的肝内、外完全或不完全梗阻，如胆石症、胆管癌、胰头癌、原发性胆汁性肝硬化等3. 溶血性黄疸红细胞破坏上升，因而血中间接胆红素上升，肝脏加工成直接胆红素也上升，因此有大量直接胆红素排到肠腔形成大量的尿（粪）胆素原，但尿胆红素不升高，使尿、粪颜色加深。
溶血性黄疸可见于各种溶血性疾病、大面积烧伤等。
三、胆红素偏高怎么办？胆红素偏高一般反应肝功能问题，检测发现胆红素偏高，建议您在饮食多注意，忌烟酒，少吃辛辣、油腻食物，多吃水果；不能熬夜，注意休息。
总结总直接胆红素的检测方法
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：一、实验原理血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法（一）器材试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
胆红素指标的解读
胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBTL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。
Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多，如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。
Be：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Be形成后，即通过肝胆系统排泌。
生理状态下，Be不应出现在血液中，只有在Be排泌受阻的情况下，Be才可能出现在血液中。
所以，通常情况下，Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
6胆红素(DELB)：生理状态下，血液中不存在6胆红素，如果Be排泌受阻，导致血液中Be升高，Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸，最终生成6胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Be迅速下降，TBIL也随之下降，而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此，要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。
NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。
DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Be相当；病理情况下，DBIL为Be与6胆红素之和。
血清胆红素
血清胆红素血清胆红素是体内衰老红细胞裂解而释放出的血红蛋白而产生的，包括间接胆红素和直接胆红素。
间接胆红素通过血液运至肝脏，通过肝细胞的作用，生成直接胆红素。
简介血清胆红素机理肝在胆红素代谢中具有摄取、结合和排泄功能，其中任何一种功能障碍，均可引起黄疸。
检查胆红素情况不仅能反映肝脏损害的程度，尤其对黄疸的鉴别具有重要意义。
胆红素包括总胆红素，直接胆红素(又称结合胆红素)和间接胆红素。
前者是后二者之和。
正常范围总胆红素为4~20μmol/L，直接胆红为0~7μmol/L，二者之差即为间接胆红素正常值。
检测意义胆汁淤积引起的黄疸以直接胆红素升高为主，间接胆红素升高主要是溶血(红细胞破坏过多)、Gilbert病的旁路胆红素血症。
而肝细胞损害引起的黄疸，因为同时有摄取、结合、排泄的障碍，因此直接和间接胆红素均可升高，但一般直接胆红素升高比间接胆红素升高的幅度大。
肝在胆红素代谢中具有摄取、结合和排泄功能，其中任何一种或几种功能障碍，均可引起黄疸。
检查胆红素代谢情况对测定肝功能，尤其是黄疸鉴别具有重要意义。
胆红素测定包括总胆红素和直接胆红素，正常值:总胆红素4~19μmol/L、直接胆红素0~7μmol/L，二者之差为间接胆红素。
肝脏疾病时胆红素浓度明显升高，常常反映较严重的肝细胞损害。
胆汁淤积性黄疸时，由于直接胆红素不能由肝细胞和胆管排出，以致血清直接胆红素明显升高，在总胆红素中所占比值升高显著;而肝细胞性黄疸时，由于同时有肝细胞摄取、结合、排泄障碍，以致血清直接胆红素/总胆红素比值升高，但升高不如胆淤积性黄疸明显;临床上引起间接胆红素升高的疾病主要有溶血、Gilbert病和旁路胆红素血症。
胆红素偏高应注意什么胆红素偏高患者应饮食宜清淡，且富有营养。
如豆类制品，鱼类、蔬菜、水果等，含有大量的维生素A、B、C、E、有较好的抗氧化功能且易消化吸收。
宜多食香菇、芝麻、核桃、大枣、瘦肉及动物肝脏等食物，但胆红素偏高患者应不宜食用动物肝脏类食物。
尿液生化检查
尿液生化检查一、尿干化学法评价生化检查包括蛋白、糖、酮体、胆红素和尿胆原、隐血试验、白细胞、亚硝酸盐试验、尿比密检验、尿酸碱度（ pH ）检验和维生素 C 。
尿十项（—），排除泌尿系统疾病；尿蛋白、隐血、WBC 、亚硝酸盐中任一项（ + ），需显微镜检查等确认。
尿干化学法是泌尿系统疾病的过筛试验。
二、尿蛋白检验（一）干化学法1 ．检验原理测定基于“指示剂蛋白误差”原理，即蛋白可以改变某些酸性指示剂的颜色而不会改变 pH 值。
溴酚蓝（指示剂）经缓冲后 pH 值为 3 ，在没有蛋白存在的溶液中为黄色。
蛋白质能与溴酚蓝起颜色反应，如果尿液中有蛋白，则颜色根据浓度情况变为绿色或蓝色，蛋白质含量的多少与颜色深浅成正比。
2 ．方法学评价该方法对白蛋白比球蛋白敏感，测量球蛋白的敏感性仅是白蛋白1/100 ～ 1/50 ，尿液中球蛋白常不易被检测，因此如果是以球蛋白为主的蛋白尿，如非选择性蛋白尿和本周蛋白尿可出现假阴性结果。
这时最好使用磺柳酸法和双缩脲法进行定性试验或定量测定。
试纸法测定尿蛋白操作简单快速、敏感性高，但在使用中应注意：①尿液必须新鲜，变质的尿液产生 pH 变化影响试验结果，可能产生假阳性；②病人服用奎宁和嘧啶等药物引起的强碱性尿时，会出现假阳性结果。
鉴别方法是用稀醋酸将尿液 pH 值调至 5 ～ 7 ，再行实验，借以区别是否由于强碱性尿而导致的假阳性；③许多药物可影响尿蛋白检查的结果，例如大剂量青霉素可使之产生假阴性结果；④标本内含有其他分泌物或含有较多细胞成分时，可引起假阳性。
所以， NCCLS 建议磺柳酸法作为模块检测尿蛋白的参比方法。
（二）传统尿蛋白检验1 ．定性试验常用的有加热醋酸法和磺基水杨酸法等。
（ 1 ）加热醋酸法：原理是加热煮沸使蛋白变性、凝固，然后加酸使尿 pH 接近蛋白质等电点（ pH4.7 ），有利于已变性蛋白下沉，同时可消除尿液中某些磷酸盐因加热析出所致的混浊。
此方法干扰因素少，但如加酸过少或过多，都会导致远离等电点，使阳性减弱。
生化检验实验DB TB LDH
实验十二实验名称：DB/TB的测定实验目的与要求：掌握测定血清总胆红素和结合胆红素的基本原理实验仪器、试剂：DB/TB测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：DB/TB在酸性溶液中及表面活性剂条件下，与重氮盐反应，形成偶氮胆红素，在570nm处比色，其值与样本中的DB/TB含量成正比。
操作方法：1、DB/TB测定各取3支试管，按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.05 －标准0.05 －－蒸馏水－－0.05工作液 1.0 1.0 1.0混匀,37℃温育5分钟，以空白管调零。
570nm，0.5cm比色杯，测定各管的A实验现象与数据：记录各管的A结果分析与结论：DB/TB浓度＝A样/A标×C标参考值：DB<6.0μmol/l, TB<20.0μmol/l（C标DB ＝43μmol/l，C标TB＝120μmol/l）临床意义：实验十三实验名称：血清中乳酸脱氢酶的测定实验目的与要求：掌握连续监测法测定血清乳酸脱氢酶总活性的基本原理。
实验仪器、试剂：乳酸脱氢酶测定试剂盒，半自动生化分析仪实验原理：以辅酶Ⅰ为受氢体，LD催化L－乳酸脱氢生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。
NADH在340nm处有吸收峰，因此反应引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比关系操作方法：1、将R1 4ml与R2 1ml混匀，即为工作液。
2、取试管1支，加入样本0.025ml，工作液1ml，充分混匀37℃水浴90秒，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度变化（ΔA/分）实验现象与数据：记录ΔA/分结果分析与结论：LDH（U/L）＝ΔA/分×F F=Vt/Vs/消光系数×1000=6592，Vt：反应总体积Vs：样品体积消光系数=6.22 参考范围：135-225 U/L（男）135-215 U/L （女）临床意义：。
三种黄疸实验室检查鉴别要点
三种黄疸实验室检查鉴别要点一、血清胆红素测定血清胆红素是一种重要的生化指标，可以帮助医生鉴别黄疸的病因。
血液中的胆红素主要是由红细胞在脾脏和肝脏内分解产生的，正常情况下，血清胆红素的含量很低。
当肝脏出现问题，导致胆红素无法正常排泄时，血清胆红素的含量就会升高，从而导致黄疸的出现。
对于血清胆红素测定的鉴别要点包括：1. 总胆红素和直接胆红素的含量：总胆红素是指血液中的胆红素总量，包括游离的（非结合的）和结合的，而直接胆红素仅指结合的胆红素。
通过测定总胆红素和直接胆红素的含量，可以帮助医生判断黄疸是由肝脏疾病还是胆道疾病导致的。
如果直接胆红素升高，则提示胆道疾病可能性大；而如果总胆红素和直接胆红素均升高，则更可能是肝脏疾病引起的黄疸。
2. 非结合胆红素的含量：非结合胆红素是指血液中的游离胆红素，通常由于溶血性贫血或肝脏疾病引起。
如果非结合胆红素升高，则提示可能是由溶血性贫血导致的黄疸。
3. 肝脏功能检查：在进行血清胆红素测定时，医生通常还会检查肝功能相关指标，如丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）等。
通过分析这些指标的含量，可以帮助医生判断黄疸是否是由于肝脏疾病引起的。
二、尿胆红素测定尿胆红素是一种常用的黄疸鉴别检查指标，通过检测尿液中的胆红素含量，可以帮助医生鉴别黄疸的病因。
尿液中的胆红素通常是由于血液中的胆红素无法被肝脏正常排泄而导致的。
对于尿胆红素测定的鉴别要点包括：1. 尿胆红素的含量：正常情况下，尿液中是不应该含有胆红素的，因此如果尿液中检测到胆红素，则提示有肝脏疾病或胆道疾病导致的黄疸可能性大。
2. 尿胆红素/尿胆原比值：尿胆红素/尿胆原比值的测定可以帮助医生鉴别肝内和肝外黄疸。
肝脏疾病所致的黄疸通常引起尿胆红素/尿胆原比值的升高，而胆道梗阻引起的黄疸则通常不会引起这个比值升高。
3. 尿液颜色：通过观察患者的尿液颜色，也可以初步判断黄疸的病因。
如果患者的尿液呈现深色，可能由于尿液中含有大量的胆红素，提示可能是肝脏疾病所致的黄疸。
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生化测试胆红素的原理是啥
生化测试胆红素的原理主要是通过测定血液中的胆红素含量来评估肝脏功能以及溶血反应程度。
胆红素是红细胞代谢产物，正常情况下大部分由肝脏处理和排泄。
然而，在某些情况下，胆红素的代谢和排泄过程会受到干扰，导致血液中胆红素含量升高。
胆红素的生物合成发生在肝脏中。
当红细胞老化或遭受损伤时，血红蛋白会被分解为血红素。
然后血红素经过一系列化学反应被转化为间接胆红素（非结合胆红素）。
间接胆红素无法溶于水，通过结合血浆蛋白转运至肝脏，进入肝细胞内。
在肝细胞内，间接胆红素通过肝细胞内的细胞器质网经过一系列化学反应被转化为直接胆红素（结合胆红素）。
然后直接胆红素进一步结合胆酸形成胆汁，经过肝管系进入小肠，最终通过粪便排出体外。
生化测试胆红素的原理基于胆红素对特定化学试剂的反应。
一种常用的测定方法是通过使用van den Bergh试剂（苏丹三杂质试剂）。
这种试剂含有一些化学物质，能够与胆红素发生特定的化学反应。
当这种试剂与血液中的间接胆红素反应时，生成一种蓝色或紫色的产物。
这个反应称为间接胆红素试验。
这是因为间接胆红素无法溶于水，在体内主要结合血浆蛋白。
所以测定血液中的间接胆红素可以评估红细胞破坏或溶血反应的程度。
直接胆红素则是溶于水的，可以通过肝细胞转化形成胆汁排出体外。
当van den Bergh试剂与血液中的胆红素结合时，产生一种红色的产物，这个反应称为直接胆红素试验。
通过测定血液中的直接胆红素，可以评估肝脏功能和胆汁排泄情况。
生化测试还可以分别测量血液中的总胆红素、游离胆红素和结合胆红素的含量。
总胆红素是间接胆红素和直接胆红素的总和，可以评估红细胞破坏和肝脏功能。
游离胆红素是血液中的非结合胆红素，可以反映红细胞破坏程度。
结合胆红素是血液中的直接胆红素，可以评估肝脏功能和胆汁的产生和排泄。
在实际生化测试中，血样通常通过离心分离血浆或血清，然后与相应的化学试剂反应。
反应产物可以通过光密度的测定，使用分光光度计或其他光谱仪器来测量。
根据反应的颜色、光密度和测定标准，可以计算出胆红素的浓度。
总结起来，生化测试胆红素的原理是通过测定血液中的胆红素含量，使用特定化学试剂与胆红素发生特定反应，通过测量产生的反应产物或光密度，来评估红细胞破坏程度、肝脏功能以及胆汁排泄情况。
这种测试方法在临床实践中广泛应用，对于诊断和监测与胆红素代谢相关的疾病具有重要意义。