逆流色谱法 - 360文档中心

高速逆流色谱法纯化制备辛弗林

［］０ｄＴｃｎｌｇ，９９４（）０ —１Ｊ’ ０ｅｈｏｏｙ１９，４３：１０１７Ｆ
［］ＤＤＭ，５ＯＤＨＨＡＯＺＩｐｏｅｅｉｍｒａｔｔｐｏｏｃｓｄ．ｍｒｖｄｍｄｕｆｃｉｓｅｔｃｃｕｏｌｃｒｎａ
ｍａｏｒｐｙａｄｈｇ — ｐｅｏｎｅｃｒｅｔｈｏｔｇａｈ（ＣＣ）ＴｅＨＳＣｅａａｉｎｕｅｔｙａ－ｔｇａｈｎｉｈｓｅｄｃｕｔｒｕｒｎｒｍａｏｒｐｙＨＳＣ．ｈＣＣｓｐｒｔｓｄｅｈｌｃｃｏ
２通过单因素试验，）确定了最适碳源、氮源、金属离子及其浓度或配比，分别为：．２５％葡萄糖、％酵母１膏＋％蛋白胨＋％牛肉膏、．４ｌ。３１００／Ｍ０ｍｏＬ通过单因素试验也确定了装液量、接种量、起始ｐＨ和培养温度的最适参数指标：液量２０、装５接种量５％、ｍＬ起始ｐＨ
７０培养温度３．、７℃。
［］张刚．酸细菌— —基础、３乳技术和应用［．Ｍ］北京：化学工业出版
社，０６３５３０２０：１— ２［］ＤＬＳＢＯＵＨＯＮＪＮｉｎａｄｉｓｓｓｏｒｓｒａｖ４ＥＶＥＲＧＴ．ｓｔｕｅｆｄｐｅｅｖｔｅｉｎｓａａｏｉ
ＡｂｔａｔＡｅｍｅｈｄｆｒｐｅａａｉｅｐｒｆｃｔｎｏｙｅｒｎｓｅｔｂｉｈｄｂｓｎｏｘｈｎｅｃｒ－ｓｒｃ：ｎｗｔｏｏｒｐｒｔｖｕｉａｉｆｓｎｐｈｉｅｗａｓａｌｓｅｙｕｉｇｉｎｅｃａｇｈｏｉｏ

水溶性天然产物的提取分离技术

水溶性天然产物的提取分离技术制药工程专业王俊20085257指导教师赵莉摘要：水溶性天然产物是药物研发中极具潜力的原料资源，分离纯化水溶性天然产物中具有独特生物活性的物质是中药研究的重要基础工作。

水溶性天然产物有效成分复杂，含量低，难于富集用传统的分离方法不仅步骤繁琐，能源及材料消耗大，而且产率及纯度不高，尤其难以分离结构和性质相似的组分。

随着中药现代化的发展高新技术不断在水溶性天然药物中推广应用。

现将近年水溶性天然产物提取分离纯化新技术的进展作一综述。

关键词：水溶性提取技术天然产物1、传统的提取分离方法1.1 热水浸提法热水浸提法即是煎煮法，是中药有效成分提取最早、最常用的方法之一。

中国药典1990年版一部和卫生部《药品标准》中药成方制剂1～9 册，共收载中成药1945种，其中采用热水浸提工艺的多达826 种。

但是热水浸提法基本上仍停留在经验水平上，热水浸提法的工艺参数，如浸泡时间、煎煮时间、煎出量(药液得量) 等均无最佳量控标准，往往导致产品质量和疗效的显著性差异。

一定程度上，应当组织力量从多层次、全方位进行系统研究，选择出适合于各种成药品种的热水浸提工艺的最佳条件和质量控制标准。

1.2 乙醇提取法乙醇浸提法原理与热水浸提法基本相同，不同之处是用乙醇作溶剂浸出中药有效成分，该法可以有效减少药材中水溶性杂质的浸出，对于这类杂质较多的药材尤为适宜。

乙醇浸提法分为冷浸法(渗漏法) 和热提法(回流法) 两种。

由于采用乙醇作为溶剂进行提取，某些溶解于乙醇的杂质(如树脂、油脂、色素等) 也会被提取出来。

对于这些杂质，可从醇提取液中回收乙醇，加水搅拌，冷藏一段时间，待完全沉淀后过滤除去。

冷浸法一般用于提取热敏性成分，但乙醇用量多，回收溶剂量大，生产周期长。

热提生产周期短，但杂质含量相对较高，给后继的分离工序增加了成本2综合提取分离技术。

2.1膜分离技术膜分离技术以选择性透过膜为分离递质，当膜两侧存在某种推动力（如压力差、浓度差、电位差等）时，原料侧组分选择性的透过膜，以达到分离，提纯目的。

麦角硫因的提取及纯化方法

麦角硫因的提取及纯化方法麦角硫因，又称麦角胺，是一种乙醇胺类化合物。

由于其具有很强的致幻作用和毒性，被禁止用于医学和化妆品领域。

但是，麦角硫因也具有广泛的研究价值和药用价值，因此其提取和纯化方法十分重要。

一、麦角硫因的提取方法1.传统方法传统的麦角硫因提取方法主要是采用麦角提取物作为原料，经过浸提、提纯和过滤等步骤，得到麦角硫因。

麦角提取物通常以苯为溶剂，将其与麦角粉末进行浸泡，然后进行过滤、还原、提纯等步骤，得到纯净的麦角硫因。

2.微生物发酵法近年来，微生物发酵法备受关注。

这种方法是采用麦角提取物为原料进行发酵，先采用放线菌和拟青霉菌等微生物进行转化，酵母菌和嗜热菌等微生物再将其转化为麦角硫因。

这种方法效率高，可同时得到多种相关产物。

二、麦角硫因的纯化方法1.柱层析法柱层析法是将提取出的物质在固定的柱子内进行波动，去除次要成分，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括硅胶、脱硅的硅胶、聚酰胺胶、氧化铝，可根据需要选择不同的固定相。

2.薄层色谱法薄层色谱法是将提取出的物质点滴在含有固定相的光滑玻片上，然后在温和的温度下进行传递，去除其他化合物，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括硅胶、脱硅硅胶和铝箔等。

3.逆流色谱法逆流色谱法是提取物在悬浮液的基础上进行，可以在室温下进行操作。

提取物在悬浮液中传递并在固定相上沉淀，去除其他杂质，留下纯净的麦角硫因。

常用的固定相包括活性炭、硅胶、脱硅硅胶或海藻糖。

4.凝胶过滤法凝胶过滤法是将提取物置于凝胶层中，随着发生的扩散，染料将在凝胶层中根据其分子量的不同而发生分化。

可以针对形态或生化制品进行高分辨率分析。

常用的固定相包括葡聚糖真菌和DEAE纤维素膜。

结论：总之，麦角硫因的分离和提纯方法在实际研究和应用中具有广泛的应用价值。

根据其实际需求，可以选择不同的提取和分离纯化方法来得到纯净的麦角硫因。

高速逆流色谱法分离纯化长春花中长春新碱

ｆｏＣｔａａｔｕｏｅｓ。ａｄｔｓａｌｈｒｌｖｎｒｃｓｎｏｄｔｏｓｔｒｖｄａａｆｒｉｄｓｒａｒｄｃｉｎＭｅｈｄＨｉｈｒｍａｈｒｎｈｓｒｓｕｎＯｅｔｂｉｅｅａｔｐｏｅｓａｄｃｎｉｉｎｏｐｏｉｅｄｔｏｕｔｉｌｏｕｔｏ．ｔｏｇ — ｓｎｐ
采用高速逆流色谱仪，氯仿一醇一．ｏ・ＨＣ（３：）甲０３ｍｌＬ１４：２溶剂体系，上相为固定相，相为流动相，下流动相流速为２０ｍ．Ｌ・ｎ，ｍｉ～紫外检测波长为２０ｎ主机转速为８０ｒ８ｍ，０・ｍｉ＿，温循环温度为２ｎ。恒８℃ 。结果业生产高纯度产品。关键词：高速逆流色谱；春花；长长春新碱
ｓｅｄｃｕｔｒｕｒｎｈｏｔｇａｈｓｕｅｉｈｏｏｏｍｍｅｈｎｌ．ｏ．ＨＣ４：３：）ａｈｏｖｎｙｔｍ．ｐｅｏｎｅ－ｒｅｔｒｍａｏｒｐｙｗａｓｄｗｔｃｌｒｆｒ — ｔａｏ－３ｍ１Ｌｃｃｈ０ｌ（２ｓｔｅｓｌｅｔｓｅｓ
西北药学杂志
２１０１年１第２２月６卷
第６期
３５９
高速逆流色谱法分离纯化长春花中长春新碱
韩艳，张琰，新友，刘覃华，小燕（杜第四军医大学唐都医院药剂科，陕西西安７０３）１０８

高速逆流色谱法分离纯化丁公藤中东莨菪内酯

·药品检验·2012年9月第9卷第26期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD丁公藤，是旋花科植物丁公藤（Erycibe obtusifolia Benth.）或光叶丁公藤（Erycibe schmidtii Craib ）的干燥藤茎，全年均可采收，切段或片，晒干[1]，制成中药饮片，具有解表发汗、抗炎、疏风祛湿、舒筋活络、消肿止痛等功效。

丁公藤的化学成分主要有东莨菪内酯、东莨菪苷、咖啡酸和氯原酸等[2-3]，其中东茛菪内酯具有祛风、抗炎、止痛、抗真菌和抗肿瘤作用[4]，因此建立东莨菪内酯的分离提纯方法具有重要意义。

高速逆流色谱（high-speed counter-current chromatogra -phy ，HSCCC ）是近年来发展起来的新型、不使用固态支撑体或载体的连续液-液分配色谱技术，具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好等优点[5-6]，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。

东莨菪内酯为香豆素类化合物，目前香豆素的传统分离多采用柱色谱和薄层色谱法，操作繁琐，本实验采用半制备型高速逆流色谱仪从丁公藤粗提物中成功分离纯化出东莨菪内酯，经高效液相色谱峰面积归一化法分析，纯度达到98.04%，为香豆素类化合物的高效、方便和快速分离提供了有效借鉴。

1仪器与试剂1.1仪器TBE 300B 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司），AKTA prime 泵及检测系统（美国通用电器医疗集团），LC-20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），HH-1型数显恒温水浴锅（江苏省荣华仪器制造有限公司），9312A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），DFT-100J 型手提式高速中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），C3860型超声波清洗器（河南省巩义市英峪予华公司），Milli-Q Academic 超纯水器（法国密理博有限公司）。

1.2试剂东莨菪内酯标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110768-200504），粗提物的制备及高速逆流所用的有机溶剂正己烷、乙酸乙酯和甲醇均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），HPLC 分析用甲醇为色谱纯（美国Fisher 公司），实验室用水是自制的超纯水。

利用高速逆流色谱分离制备达托霉素

相。使用前上、下相超声３ｍｉ。将粗品溶于１ｍＬ０ｎ０上相和１ｍＬ０下相的混合溶液中，制备样品溶液。
２４高速逆流分离过程．
ＨＳＣＣＣ系统以头到尾方式进行，上相为固定相，分离温度为２￣多层柱首先用上相充满。然０Ｃ。
上相和下相，然后通过ＨＰＣ分析。分配系数（为Ｌ上相与下相达托霉素峰面积的比值ｆ】１。０
ＸａｎｌＧｅｉＬｏＭｉ一ａｄＲａｉｕｉｇ１ｕｎｎｕｎ￣ｎＸｉ，Ｍｅ，Ｌ
（ＳｈｏｏＰａｍａｙＳａｇａＪｏＴｎｉｅｓｙＳａｇａ２０４；１ｃｏｌｆｈｒｃ，ｈｎｈｉｉｏｇａＵｎｖｒｉ，ｈｎｈｉ０２０ｔ２ＳａｇａＨａｔｒａｏｅｔｆｉｐａｍａｅｔａＲｈｈｉｅｌＣｅｔｎＣｎｅｏｏｈｒｃｕｉｌ＆Ｄ，ｈｇａ２０４）ｎｈｉｒＢｃＳａｈｉ０２０ｎ
发酵产物众多，整个工艺路线较长，期间会使用大量的有机溶￣［】达托霉素结构稳定性较差【，Ｊ６ｌ－。而４，】分离过程中容易发生水解等变化，获得高纯度样品的难度比较高。高速逆流色谱是一种液液分配色谱方法，由Ｉｔｏ发明。该技术已被广泛用于制备少量的天然产物，
Ｉｉｐｐｒｈｇｐｅｏｎｅ－ｕｒｎｈｏｔｇａｈＨＳＣ）ｓａｐｉｄｔｒｐｒｔｎｏａｔｍｙｉ．ｎｔｓａｅ，ｉｈｓｅｄｃｕｔｃｒｅｔｒｍａｏｒｐｙ（ＣＣｗａｐｌｐｅａａｉｆｐｏｃｎＡｈｒｃｅｏｏｄｂｐａｉｓｌｅｔｙｔｃｍｐｓｄｏｈｌｃｔｅｎｂｔｏ一ｍｍｏ／ｉｕｒａｅｉａｉ４１５ｖｌｍｅｒｔ）ｓｉｈｓｏｖｎｓｍｏｏｅｆｔｙｅａ ——ｕａｌｃｓｅｅａｔｎ２ｌｔｆｏｏｃｔｃＬｒｌｃｄ（：：，ｏｕｉｗａａｏ

近十年高速逆流色谱在中药化学成分分离中的应用概况

一
王风美等Ｉ利用ＨＳＣＣＣ法分离纯化丹参水溶性成分丹酚酸类物质，制备出丹酚酸Ｂ，纯度用ＨＰＬＣ测定，可达到９８．６％，可作为高纯度丹酚酸Ｂ化学对照品的制备分离方法。
２．展望
１．１生物碱类
金艳等 … 采用氯仿一无水乙醇一０．２ａｎｒ１／Ｌ盐酸ｆ４：３：２）系统，从浙贝母中分离得到贝母素甲、贝母素乙，经ＨＰＬＣ分析纯度，分别可达９７．５％、９４．５％，并采用ＭＳ、Ｈ— ＮＭＲ鉴定其结构。洪波等利用氯仿一甲醇一盐酸（０．３ｍｏｌ／Ｌ）（４：３：２）溶剂系统从附子【｝］分离得到了１５一Ａ一羟基新乌碱单体。１．２黄酮类张友胜等选用溶剂系统石油醚一醋酸乙酯一甲醇一水（１：３：２：２），从蛇葡萄植物中（ＡｍｐｅｌＩｌＩ１ｓｉｓＭｉｘｃｈｘ）将含有很高含量的二氢杨梅素从８０％左右的粗品提纯到９０％以上。潘霞等以芦荟全叶为原料，采用氯仿一甲醇一水（体积比为４：３：２）混合溶液和二氯｝｛｜烷一甲醇一水（５：４：２）混合溶液作为溶剂分离系统，ＨＳＣＣＣ经过两步分离纯化出色谱纯度在９５％以上的芦荟色酮单体。１．３鞣质类化合物采用正己烷一醋酸乙酯一乙醇一水（３：５：６：４）和正己烷一乙醚一乙醇一水（５：３：３：７）溶剂系统，李静等以莪术粗捉物为原料，应用ＨＳＣＣＣ技术，分离得到姜黄素。１．４苷类化合物窦得强一等采醋酸乙酯一正丁醇一水（４：ｌ：５）溶剂系统，从人参莘叶总皂苷ｑ１分离出人参皂苷Ｒｅ和Ｒｇ，经薄层鉴别人参皂苷Ｒｅ和Ｒｇ分别与对应的标准品有相同的Ｒｆ值１．５香豆素类王巧娥等采用溶剂系统为正己烷一氯仿一甲醇一水ｆ５：６：３：２）分离得到什草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为９５．Ｏ％和９８．８％。ＷｅｉＹ等从ｃｎｊ（１ｉｕｍｍ０ｎｎｉｅｒｉ（Ｉ．＿）ｃｕｓｓ０ｎ（ｃｆ１ｍｍ０ｎｃｎｕｍＦｒｕｉｔ）分离得到香豆精类化合物的实验ｌｌ１，即利用分析型ＨＳＣＣＣ测得正己烷一乙酸乙酯一甲醇一水（１：１：１：１）和（５：５：６：４）为最适合溶剂体系，然后应用制备型ＨＳＣＣＣ进行分离，效果较好。１．６其他（上接第１２０页）（Ｏ．０８９８，０．７１２７），全局最小值厂＝一１．０３１６．．

高速逆流色谱法及其在中药分离中的应用

天津药学ＴａｊＰａｃ２０ｉｎｎｈｒｙ０８年２月ｉｍａ
第２０卷第１期
高速逆流色谱法及其在中药分离中的应用
陈苏伟，勇琴，纪青潘蔡
（浙江省丽水市中医院，丽水摘要３３０）２００
药分离方面的应用做一综述。１高速逆流色谱法简述
化碳部分代替氯仿，乙酸代替甲醇使分配系数接近用
１。如果采用该系统得不到满意的结果，以考虑采用可正己烷一乙酸乙酯一正丁醇一甲醇一水体系，系统该
ＨＣＣ是应用特殊的流体动力学原理，用螺旋能够较均匀地覆盖更宽的极性范围，通过调节该系ＳＣ利并
综述高速逆流色谱（ＳＣ）ＨＣＣ的原理、溶剂体系的选择、特点及其在中药有效成分分离中的应用进展。
文献标识码：Ａ文章编号：０６５８（０８０－０４０１０ —６７２０）１７－３０
关键词高速逆流色谱，中药分离
０将）．ＹｏｈｒＩ博士发明了不同于传统液相色谱法的新总体积的５％以上，分配系数（调整在０５～２ｉｉｔｃｏｏＫ＝Ｃ／ＣＣ，为上相中溶质浓度，，ｃ为下相中溶质的型液一液色谱分离方法——高速逆流色谱法（ｉ（ｈｈｇ
颜继忠等综述了文献中所使用的溶剂体系，从
以往文献相反的角度概括出一些规律。将高速逆流色