培养基配制2016010概要
培养基的配制
实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。
它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。
所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。
培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。
培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。
从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。
固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。
半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。
微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。
琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。
是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
一、目的要求l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。
2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。
培养基的配方
营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
1罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
培养基配制记录范文
培养基配制记录范文实验目的：配制适合细菌生长的培养基，用于细菌的培养和研究。
实验材料和仪器：1.水槽2.称量器3.锅4.毛细管/试管5.营养物质：葡萄糖、纯化可溶淀粉、氨溶液、酵母粉、碱式天然脲酶6.培养物：细菌培养物实验步骤：1.准备工作：a.清洗水槽和锅，并用去离子水冲洗干净。
b.准备所需的营养物质和培养物。
2.配制培养基：a.取一定量的葡萄糖放入试管中，加入适量的去离子水，摇匀使其溶解。
b.同样地，取一定量的可溶淀粉放入试管中，并加入适量的去离子水，摇匀溶解。
c.分别取适量的氨溶液、酵母粉和碱式天然脲酶，溶解在试管中的去离子水中，摇匀使其溶解。
d.将以上配制好的试管溶液分别倒入锅中。
e.将锅放入水槽，加入一定量的去离子水，使其浸没在水中。
f.开始加热水槽中的水，将锅中的试管溶液均匀加热至沸腾。
g.注意观察配制过程中的变化，避免煮沸过程中的溢出。
3.加热溶液至沸腾：a.将锅中的试管溶液均匀加热，直到出现沸腾的现象。
b.保持锅中试管溶液的沸腾状态，以消除残余的微生物。
4.煮沸持续时间：a.将试管溶液沸腾持续一段时间，通常为15-20分钟，以确保杀灭所有的微生物。
b.煮沸时间结束后，关闭加热源。
5.微生物的过滤和倒装：a.倒一小部分培养基液体入孔口的培养皿。
b.使用过滤纸将剩余的培养基液体过滤，以除去杂质和微生物。
c.将过滤后的培养基液体倒入清洁的培养皿中。
6.存储：a.将制备好的培养基密封保存在冰箱中，可长期保存。
实验注意事项：1.在配制和操作过程中要注意无菌操作，避免细菌的污染。
2.配制培养基时要确保所有的配制物质溶解充分均匀。
3.在煮沸和过滤过程中要注意安全操作，避免烫伤和溅射。
4.实验结束后，要清洗实验仪器和设备，保持实验室的整洁。
总结：通过以上步骤，我们成功配制了适合细菌生长的培养基，并将其保存在冰箱中，以备之后的实验使用。
配制培养基是细菌研究的基础工作，对于细菌的培养和研究具有重要的意义。
培养基的配制过程及注意事项
培养基的配制过程及注意事项
培养基是一种用于培养微生物和其他生物体的溶液，通常包含营养物质、溶剂和添加剂等成分。
配制培养基的过程需要遵循一定的步骤和技巧，以确保培养基的质量和稳定性。
以下是培养基的配制过程简述:
1. 收集和准备成分：培养基的主要成分包括营养物质、溶剂和添加剂等。
营养物质通常包括葡萄糖、氨基酸、维生素、矿物质等，溶剂通常是水，而添加剂可以是抗生素、激素、缓冲剂等。
这些成分的质量和配比对培养基的质量至关重要。
2. 计量和称量：准备好所需成分后，需要按照一定比例进行计量和称量。
计量和称量的准确性对于培养基的质量和稳定性非常重要，因此需要使用精确的计量和称量工具。
3. 溶解和混合：将称量好的营养物质、溶剂和添加剂等成分倒入容器中，然后进行充分溶解和混合。
在溶解和混合过程中，需要注意不要混入气泡和沉淀物，以免影响培养基的质量和稳定性。
4. 调整 pH 值：培养基的 pH 值对微生物的生长和代谢有重要影响，因此需要对培养基进行适当调整。
通常可以使用氢氧化钠或氢氧化钾等化学试剂进行调整，但要注意控制 pH 值的范围，避免过高或过低的 pH 值对微生物的影响。
5. 冷却和储存：将配制好的培养基冷却至适当的温度，通常是室温或稍低，然后密封储存在冰箱里。
储存的温度和时间是培养基制备过程中非常重要的因素，过长的储存时间和温度过高都会影响培养基的质量和稳定性。
培养基的配制过程需要认真、细心的工作态度，以确保培养基的质量和稳定性。
同时，不同种类的培养基还需要根据不同的微生物和实验需要进行专门的配
制和调整。
培养基的配制
一、配制用水培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。
按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。
二、培养基培养基有天然、人工两种。
一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。
NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。
RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
三、血清培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。
血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。
配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。
由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。
四、抗菌素为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。
五、植物血凝素（PHA）非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。
经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。
PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。
粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。
PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。
培养过程应当注意以下几点培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。
防止污染应该注意以下事项：确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。
实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。
培养基的配制
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺，服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃，加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时，100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则，在灭菌过程中，培养基的煮沸极易污染棉塞，造成细菌污染;如果进行瓶培养，15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml，约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml，约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后，塞好棉塞，用牛皮纸包好棉塞，防止灭菌时湿气进入，弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高，营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后，需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置，使其固化成一个斜坡，约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好，置于2-8℃冰箱中保存。
实验五 培养基的配制
实验五培养基的配制（基础实验，4学时）一、实验目的和要求学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。
琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。
配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～2.0g，pH 7.2～7.6三、实验用具高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl四、实验步骤1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。
2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。
3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。
4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。
5、加塞用棉花制作塞6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。
标明组别、培养基名称、日期。
7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。
8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。
9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。
六、注意事项1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
简述配制培养基的基本步骤及注意事项
简述配制培养基的基本步骤及注意事项以简述配制培养基的基本步骤及注意事项为标题，写一篇文章。
配制培养基是细胞生物学和微生物学研究中的重要步骤之一。
培养基是供给细胞或微生物生长和繁殖所需的营养物质的溶液，通过合适的配制可以提供细胞或微生物生长所需的营养物质、调节pH值和温度等环境因素，促进其生长和繁殖。
下面将简要介绍配制培养基的基本步骤及注意事项。
一、基本步骤：1. 确定培养基配方：根据研究目的和被培养的细胞或微生物的需求，选择合适的培养基配方。
常见的培养基包括无机盐、有机营养物、维生素和生长因子等。
根据具体需求，可以在基础培养基中添加不同的添加剂，如血清、抗生素等。
2. 计算配方中的成分：根据所选培养基配方，按比例计算各个成分的用量。
注意根据实验需求调整各个成分的浓度，确保培养基中的营养物质满足细胞或微生物的需求。
3. 配制溶液：将所需的固体成分称取并溶解于适量的溶剂中，通常是蒸馏水。
溶解固体成分时，可以先将其加热至溶解温度，然后搅拌均匀。
4. 调节pH值：使用酸或碱溶液调节培养基的pH值至所需范围。
pH值的调节对于细胞或微生物的生长和繁殖至关重要，一般培养基的pH值在7.0左右。
5. 滤过消毒：将配制好的培养基溶液通过0.22微米的滤器进行滤过消毒，以防止细菌和其他微生物的污染。
滤过消毒后的培养基应保存在无菌条件下，避免细菌再次污染。
二、注意事项：1. 严格按照配方计算成分的用量，避免过量或不足，以免影响细胞或微生物的生长和繁殖。
2. 使用高纯度的试剂和溶剂，以确保培养基的质量和纯度。
3. 注意培养基的pH值调节，过高或过低的pH值都会影响细胞或微生物的生长。
4. 注意培养基的温度调节，一般情况下，培养基的温度应与被培养的细胞或微生物的生长温度相匹配。
5. 避免细菌和其他微生物的污染，应在无菌条件下操作，使用无菌器材和耗材。
6. 培养基的保存应在低温和无菌条件下进行，以防止营养物质降解和细菌污染。
培养基的配制 (2)
培养基的配制简介培养基是在实验室中广泛使用的一种生物学培养材料，它提供了生长微生物和其他细胞的所需营养物质和理想的环境条件。
培养基的配制是制备培养基的过程，通过合理的配比和操作，可以获得高质量的培养基。
培养基的组成培养基的组成是根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求来确定的。
一般来说，培养基由以下几个组分组成：1.碳源：提供微生物或细胞生长所需的碳质物质，常见的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞生长所需的氮质物质，常见的氮源有氨基酸、尿素、氯化铵等。
3.磷源：提供微生物或细胞生长所需的磷质物质，常见的磷源有磷酸二氢盐、磷酸氢二钠等。
4.硫源：提供微生物或细胞生长所需的硫质物质，常见的硫源有硫酸铵、硫酸钠等。
5.微量元素：为微生物或细胞提供必需的微量元素，如铁、锰、锌等。
6.维生素：提供微生物或细胞生长所需的维生素，如维生素B群。
7.pH调节剂：维持培养基的理想pH值，如磷酸盐缓冲液。
8.凝胶剂：使液态培养基凝固成凝胶状，常用的凝胶剂有琼脂和洋菜。
培养基的配制步骤1. 准备所需实验器材和试剂在开始培养基的配制之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。
常见的实验器材包括量筒、烧杯、移液管、培养皿等；试剂包括碳源、氮源、磷源、硫源、微量元素、维生素等。
2. 确定培养基组成根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求，确定培养基的组成，并计算各组分的配比。
3. 配制培养基按照确定的配比，依次称取所需试剂并溶解于适量的去离子水中，然后使用量筒或烧杯调整总体积。
4. 调节pH值使用pH计测量培养基的pH值，并根据需要使用适当的酸碱溶液进行调节，直到达到理想的pH值。
5. 凝胶化培养基（可选）如果需要制备凝胶状的培养基，可以在配制好的液态培养基中加入适量的凝胶剂，并在加热过程中充分混合，待其冷却凝固。
6. 灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，常见的方法有高温灭菌和滤过灭菌。
高温灭菌通常使用高压高温的压力罐进行，滤过灭菌则需要使用0.22微米的滤膜进行过滤。
培养基的配制过程
培养基的配制过程计算用量:200ml固体培养基10g/L 蛋白胨. 3g/L 牛肉膏.5g/L NaCl .2% 琼脂粉 称量：托盘天平溶解：自来水调pH：自然pH灭菌：一般培养基，121 0C, 15-30min：20min；含糖培养基：112 0C, 15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合倒平板灭菌待灭菌物品的包装锅、加加盖（对角线均匀拧旋升温、排气（放大气5min横温121℃、20min切断电源、冷开锅取倒平板◆融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)平板划线的基本程序灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标）沾取菌接灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境）平板涂布的基本程灭菌过的移液吸取菌液0.1ml滴在培养皿中用灭菌的涂布棒均匀涂布：将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。
三角铁扒具体操作步骤：⏹（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。
⏹（2）放入需要灭菌的东西。
注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。
⏹（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）⏹（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121℃），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。
注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。
（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。
注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。
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实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤等1、培养基母液的配制2、培养基的配制（包括灭菌、包裹）3、外植体灭菌及接种4、实验结果观察与分析5、继代培养基配制6、继代培养7、诱导发芽8、诱导生根9、驯化移栽10、收获及鉴定培养基母液配置（9-25）1.清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。
2.配置N6培养基等母液（每种母液体积100ml）3.培养皿（每人至少一个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干4.蒸馏水灭菌天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。
药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。
定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。
值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位；不迟到早退，需要的克数=（0.166g/147g）*165g （含结晶水多少）摩尔浓度=0.166/147=x/165N6培养基母液1）大量营养元素（本次配制10X，母液I，每组都做，每个培养皿可盛放培养基30毫升（25-35ml），一个100毫升三角瓶可用于3个培养皿）：本次实验做100ml 10x （稀释后可制成1升培养基，可用于33个培养皿）KNO3 2.830gCaCl2·2H2O 0.166gMgSO4·7H2O 0.135gKH2PO40.400g(NH4)2SO40.463g注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。
1） B5微量母液：(母液II，第一组)1000ml (100X倍)含KI 0.0750gH3BO30.3000gMnSO4·H2O 1.0000gZnSO4·7H2O 0. 2000gNa2MoO4·2H2O 0.0250gCuSO4·5H2O 0.0025gCoCl2·6H2O 0.0025g注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班做100ml。
天平用万分之一天平（十教649）。
稀释后可供100升培养基配制2）B5有机母液（每种试剂，单独一个试管盛放，）：(母液III浓度，第二组，用于30个培养基的制作）烟酸（VB3，Nicotinic acid，单独试管盛放）0.001g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升，）盐酸吡哆醇(VB6，单独试管盛放)0.001g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升）盐酸硫胺素(VB1，单独试管盛放)0.010 g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基）（100毫升培养基需要0.1毫升）肌醇(myo-Inositol，，单独试管盛放) 0.010 g/ml（每班称取0.2g，加入20ml蒸馏水, 可制作60个培养基）4)铁盐：(母液IV，第三组)本次实验做：100ml (100X倍)FeSO4·7H2O 0.278gNa2EDTA·2H2O 0.373g注：配制顺序如下1.称取0.278g FeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（A）。
2.称取0.373g Na2-EDTA·2H2O溶解于20 ml去离子水中（B）。
3.将A置于70℃水浴锅中直至溶质完全溶解（C）。
4.将A倒入C中混合，置于70℃水浴锅中保温2h（小时）。
5.定容至100ml。
5）激素（第四组）激素溶解方法母液浓度6-BA 加稀碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容1 mg/mlNAA 加碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容1 mg/ml2，4-D 加少量酒精溶解，再用蒸馏0.00025mg/ml 水定容（每班称取0.0050g，加入 20毫升蒸馏水，可配置60个培养皿）培养基配置及灭菌（10-13）移液器的使用实验步骤：1．灭菌，晾凉：培养皿、蒸馏水（开、关盖子）后，培养皿烘干。
2．（2-3小时）培养基配制：母液称量、添加琼脂、调节pH、导入三角瓶（100ml培养基），灭菌，凉到50-60度左右，摇匀，分别注入培养皿（培养皿的一半，要厚，提供营养，一半3个培养皿需要100ml）3．超净台风干后，保鲜膜包装，放入4度冰箱，可挑选一培养皿（包好）放于28度，进行污染观察。
准备的药品（）（第一组）2，4-D 加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容0.25 mg/ml 10ml（第三组）1N NaOH（1~4N 4g溶于100 ml水中）（第三组）1N HCl（1~4N 8.3 ml溶于91.7 ml水中）（第一组）70%酒精（70 ml酒精溶于30 ml水）（一）培养基配方每3个培养基配100毫升培养液，分别放到三角瓶里，灭菌后，报纸封口，每100毫升含有：（二）培养基配置（1）在配置培养基时取适量(配置培养基总量的2/3左右)的蒸馏水放入容器内。
（2）把容器放在电磁炉或者水浴锅上加热，同时加入剪断的琼脂条。
（3）不停搅拌，防止粘锅，同时加速溶解。
（4）按量称取蔗糖并加入，同时搅拌。
（5）待琼脂条、蔗糖完全溶解后加入母液Ⅰ（N6大量元素）、母液Ⅱ（B5微量元素）（80℃左右），然后搅拌均匀。
（6）加入铁盐母液IV。
（7）待培养基冷却至50-60℃时加入有机成分，到培养基达到40℃时加入激素(2,4-D)。
（8）加入蒸馏水定容到量(按照10个培养基计算，300 ml)，测定pH值，用0.1mol/L NaOH 或HCL 将培养基的pH调至所需数值（PH=6.0左右）。
（9）清洗培养瓶、培养盖，沥干水份。
（10）用分装器将培养基分装到三角瓶(1L 不用分装)中，趁热分装。
分装时注意不要将培养基溅到容器壁口，以免引起污染。
分装量根据培养材料不同而异，每瓶装入100ml（250ml三角瓶）。
11）选用合适的封口材料包扎好瓶口或盖上瓶盖。
12）在培养基瓶上贴上标签或用记号笔在瓶壁上注明培养基的代号、配制时间等，以免混淆。
然后用塑料周转筐运至灭菌室准备灭菌。
13）同时对实验时所需要的解剖刀、解剖针、纱布、镊子、无菌水灯放入高压灭菌锅内灭菌。
（灭菌步骤附后）14）超净台酒精擦拭，开uv，风，放入灭好菌的三角瓶和培养皿，将培养基倒入培养皿中。
15）培养基冷却、风干后，包好放入4度冰箱备用。
（三）高压灭菌操作步骤1）首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
2）放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤,以免蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3）加盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。
4）加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间（121摄氏度/15-20分钟）。
5）灭菌所需时间到后,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。
如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染注意：1、锅内加的水一定要为去离子水，以避免锅底水垢产生。
2、锅内的水一定要没过底部平板，以防甘烧。
3、每次灭菌之前都要检查灭菌的时间温度设置。
4灭菌完毕压力未降至0时，千万不要随意打开顶盖。
（四）超净工作台1.实验前将紫外灯开启20min以上。
2.用棉球蘸取70%酒精将超净工作台整个空间擦拭一遍。
3.进行无菌操作时，动作尽量轻柔，时刻保持无菌意识。
4.冷却至50-60度的培养基导入预先准备好的培养皿（20-30ml）中。
5.培养基过夜风干后，保鲜膜包裹，4度冰箱备用（五）无菌室无菌室应定期（每星期）用70％酒精或84消毒液消毒，配合紫外线灭菌灯每次开启20分钟以上，以使无菌室经常保持高度的无菌状态。
外植体灭菌与接种（10-13）准备物品：酒精灯，1．（3小时）提前灭菌：50ml离心管、蒸馏水(500ml 广口瓶放入800ml水)、滤纸(锡箔纸包裹)等2．提前准备：种子去壳、70%酒精，次氯酸钠，锡箔纸，酒精灯、镊子、支架等3．（3小时）种子消毒：70%酒精，次氯酸钠，灭菌水清洗、种子放于滤纸上晾干。
4．（1小时）接种：用镊子（每次夹取种子前火焰灼烧）溶液配制30%次氯酸钠溶液：V NaClO：VH2O=1：270%酒精：稀释100%或95%的乙醇至70%水稻（日本晴）愈伤组织的诱导（以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织）1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）蒸馏水清洗2）将种子放入30ml无菌50ml离心管中，倒入70%酒精消毒1分钟；2）倒去酒精，加入30ml 30%次氯酸钠（NaClO）溶液（5.2%次氯酸钠），浸泡30分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍（每次10分钟），最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置成熟胚于诱导培养基中，每皿12额外10－14颗；3）操作完毕用封口膜（Micropore TM Surgical Tape）封好培养皿，在30℃光照培养箱，4）培养4周；5）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然散落的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），在30℃光照培养箱，继代培养1-2周。
(没有脱落的可在原培养基上继续培养7天，次数多了效果会减弱)实验四：愈伤组织继代培养每0.1升可以配制3-4个培养皿的培养基：N6大量元素（10X）：10mlB5微量（100X）：1ml铁盐（100x）：1ml烟酸：0.1 ml 盐酸吡哆醇：0.1 ml盐酸硫胺素：0.1 ml肌醇：1ml L-GluL-Glu tamine：0.05 g L-pro: 0.28gCH : 0.03g2,4-D 0.8ml蔗糖3gPhytage l: 0.40g（琼脂条1g）PH值：5．8粳稻成熟胚愈伤组织继代培养基（每升含量）：N6大量元素（20x）：50mlB5微量(100x)：10ml铁盐(100x)：10ml烟酸： 1 ml 盐酸吡哆醇：1 ml盐酸硫胺素：1 ml肌醇：10ml L-GluL-Glu tamine：0.5 g L-pro: 2.8gCH : 0.3g2,4-D 8ml蔗糖30g Phytagel:4.0g PH值：5．8实验六：诱导长芽（14）挑取颜色鲜黄的抗性愈伤移入装有分化培养基的培养皿或分化罐中，用封口膜封好，放入恒温培养室中，等待分化成苗（30-60天）。