多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析

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国际检验医学杂志２０１５年３月第３６卷第６期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｍａｒｃｈ ２０１５，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．６
·论 著·
多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析＊
许 艳 丽 ，王 顺 清 ，毛 平 ，杜 庆 华 （广州市第一人民医院血液科，广东广州 ５１０１８０）
原标记及胞浆 Ｋａｐｐａ和 Ｌａｍｂｄａ轻链鉴别异常骨髓瘤细胞。 结 果 ４４ 例 初 诊 病 例 中，ＣＤ１３８ 在 可 检 测 的 病 例 中 均 呈 阳 性 表 达， 同时 ＣＤ１９ 阴 性，４２ 例 病 例 （９５％）ＣＤ４５ 阴 性 或 弱 阳 性，其 他 表 面 抗 原 标 记 ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ２０、ＣＤ１１７ 的 检 测 率 分 别 为 ９８％、
其中２５例检测出异常的瘤细胞，５例病例未见显著的限制性轻链克隆型表达，Ｋａｐｐａ与 Ｌａｍｂｄａ比值在０．５～２，认 定 ＭＲＤ 阴 性。 结论 流式细胞术用于多发性骨髓瘤的诊断疗效及预后的判断具有重要 意 义，采 用 胞 浆 免 疫 球 蛋 轻 链 的 检 测 可 提 升 微 小 残 留 检
测的正确性。
荧光强度显著降低。ＣＤ４５、ＣＤ１９、胞浆免疫球蛋白轻链为最稳定的标记，未 见 显 著 抗 原 标 记 的 变 化 ，２ 例 ＣＤ３８（１４％）、７ 例 ＣＤ５６
（５０％）、４例 ＣＤ２０（２９％）及２例 ＣＤ１１７（１４％）病例呈现显著的 抗 原 密 度 的 变 化。３０ 例 已 治 疗 病 例 用 于 评 估 ＭＲＤ 的 免 疫 表 型，
ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ａｄｏｐｔｉｎｇ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎｓ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｉｎ
ＭＲＤ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ； ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ
关 键 词 ：多 发 性 骨 髓 瘤 ； 多 参 数 流 式 细 胞 术 ； 免 疫 表 型 ； 微 小 残 留 疾 病
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１５．０６．０１８
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７３－４１３０（２０１５）０６－０７６０－０３
Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ＊ Ｘｕ Ｙａｎｌｉ，Ｗａｎｇ Ｓｈｕｎｑｉｎｇ，Ｍａｏ Ｐｉｎｇ，Ｄｕ Ｑｉｎｇｈｕａ
＊ 基金项目：广东省中医药局基金资助项目（２０１２１０１０）。 作者简介：许艳丽，女，副主任技师，主要从事流式细胞术临床医学诊断研究。
国际检验医学杂志２０１５年３月第３６卷第６期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｍａｒｃｈ ２０１５，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．６
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诊断、ＭＲＤ 的检测及合理的设计抗体组合提供一些参考价值。 １ 资 料 与 方 法 １．１ 一 般 资 料 ７４ 例 样 本 来 源 于 ２０１０ 年１ 月 至２０１２ 年６ 月 在广州市第一人民医院流式细胞仪室进行检测的骨髓标本。 男 ４３ 例 ，女 ３１ 例 ，平 均 ６０ 周 岁 ，中 位 年 龄 ６０ 周 岁 。 １．２ 仪器与试剂 ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ流式细 胞 仪 （美 国 ＢＤ 公 司）， 配 置４８８ｎｍ 及６３３ｎｍ 激光器。采用六色荧光标记技术，用异 硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）、藻 红 蛋 白 （ＰＥ）、草 履 虫 叶 绿 素 蛋 白－花 青甙５．５（ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５）、ＰＥ－Ｃｙ７、别 藻 蓝 蛋 白 （ＡＰＣ）及 ＡＰＣ－ Ｃｙ７ 荧 光 染 料 分 别 标 记 ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ４５、ＣＤ５６、 ＣＤ１１７等抗体。以上试剂及 溶 血 素、穿 透 液 分 别 购 自 美 国 ＢＤ 公司、法 国 Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ 公 司。ｋａｐｐａ ＦＩＴＣ／Ｌａｍｂｄａ ＰＥ 购 自 丹麦 ＤＡＫＯ 公司，ＣＤ１３８ＡＰＣ 购自德国 Ｍｉｌｔｅｎｙｉ公司。 １．３ 方 法 １．３．１ 样品 制 备 每 样 品 管 加 肝 素 抗 凝 的 骨 髓 １００μＬ（相 当 于５×１０５ 个细 胞）及 ２０μＬ 荧 光 标 记 抗 体 ，室 温 避 光 孵 育 ２０ ｍｉｎ；表面抗原染色：溶血素 ２ ｍＬ，室 温 避 光 孵 育 １０ ｍｉｎ，离 心 ３００×ｇ ５ ｍｉｎ，弃 上 清 ，ＰＢＳ 洗 涤 ３００×ｇ ５ ｍｉｎ，弃 上 清 ，５００μＬ ＰＢＳ悬浮沉淀，４ ℃ 待 检；胞 浆 抗 原 染 色：固 定 液 １００μＬ，室 温 避光孵育１５ｍｉｎ，离心３００×ｇ ５ｍｉｎ，弃 上 清，穿 透 液 １００μＬ， 室温 避 光 孵 育 ５ ｍｉｎ，加 Ｋａｐｐａ／Ｌａｍｂｄａ抗 体，室 温 避 光 孵 育 １５ ｍｉｎ，离心３００×ｇ ５ｍｉｎ，弃上清，ＰＢＳ洗涤３００×ｇ ５ｍｉｎ，弃 上清，５００μＬＰＢＳ悬浮沉淀，４ ℃待检。 １．３．２ 流 式 细 胞 术 分 析 ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ流 式 细 胞 仪 ，配 置 氩 离 子激光器及氦－氖激 光 器，激 发 波 长 分 别 为 ４８８ｎｍ 和 ６３３ｎｍ。 采用 ＣＤ３８／ＳＳＣ 及 ＳＳＣ／ＣＤ１３８设 门 方 法，Ｄｉｖａ软 件 分 析 鉴 定 浆细 胞，收 集 测 定 细 胞 ３０ ０００ 个。 骨 髓 瘤 细 胞 表 型 认 定 基 于 异于良性浆细胞的表达 模 式，主 要 包 括 抗 原 的 缺 失 表 达，不 存 在于良性细胞的异常抗原表达，髓系标记的跨系表达等。考 虑 到 随 着 时 间 的 推 移 ，仪 器 状 态 或 试 剂 批 号 的 改 变 会 干 扰 抗 原 荧 光强度变化的鉴别，以良性粒细胞 群 体 的 ＣＤ４５ 荧 光 强 度 作 为 内参，以高于或低于初诊骨髓瘤细胞 荧 光 强 度ｌｏｇ对 数 值 的 一 半认定荧光强度的升高或降低。
９３％、４５％、４１％，胞浆 Ｋａｐｐａ和 Ｌａｍｂｄａ轻链均呈限制性克 隆 型 表 达。１４ 例 病 例 用 于 评 估 初 诊 及 治 疗 过 程 中 免 疫 表 型 的 变 化 ， 其中１１例病例（７９％）出现至少１个及以上异常表型的变化，４例（２９％）病例化疗后抗原标记荧光强度显著增加，７ 例（５０％）病 例
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ′ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１０１８０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＭＦＣ）ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｖｉｓｉｔｉｎｇ ａｎｄ ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ（ＭＲＤ）ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＭＦＣ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ１３８ｏｒ ＣＤ３８ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ７４ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｙ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｌｉｋｅ ＣＤ４５，ＣＤ５６， ＣＤ１９，ＣＤ２０，ＣＤ１１７ａｎｄ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ Ｋａｐｐａ ａｎｄ Ｌａｍｂｄａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ，ｔｈｅ ａｂｅｒｒａｎｔ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｔｈｅ ４４ｆｉｒｓｔ ｖｉｓｉｔｉｎｇ ｃａｓｅｓ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ１３８ｃａｎ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｃａｓｅｓ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ－ ｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ１９ ｗａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ａｎｄ ４２ｃａｓｅｓ （９５％ ）ｗｅｒｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｏｒ ｗｅａｋ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｒ ＣＤ４５．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ＣＤ３８， ＣＤ５６，ＣＤ２０ａｎｄ ＣＤ１１７ｗｅｒｅ ９８％，９３％，４５％ ａｎｄ ４１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ Ｋａｐｐａ ａｎｄ Ｌａｍｂｄａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＭＭ，１４ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｔ ｆｉｒｓｔ ｖｉｓｉｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓ，ａｍｏｎｇ ｔｈｅｍ，１１ｃａｓｅｓ（７９％ ）ａｐｐｅａｒｅｄ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｏｆ ａｂｅｒｒａｎｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．４ｃａｓｅｓ （２９％）ｈａｄ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｍａｒｋｅｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ａｆｔｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ７ｃａｓｅｓ （５０％）ｈａｄ ｓｉｇ－ ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｍａｒｋｅｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ａｆｔｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．ＣＤ４５，ＣＤ１９ａｎｄ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｔａｂｌｅ ｍａｒｋｅｒ，ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｍａｒｋｅｒ ｃｈａｎｇｅｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉ－ ｃａｎｔ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｎｓｉｔｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ２ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＤ３８ （１４％），７ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＤ５６ （５０％），４ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＤ２０ （２９％）ａｎｄ ２ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＤ１１７ （１４％ ）．Ｏｆ ｔｈｅ ３０ｃａｓｅｓ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ＭＲＤ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ，ｔｈｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ２５ｃａｓｅｓ．Ｉｎ ５ｃａｓｅｓ，ｎｏ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｉｍｉｔｅｄ Ｋａｐｐａ ａｎｄ Ｌａｍｂｄａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎｓ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｋａｐｐａ ａｎｄ Ｌａｍｂｄａ ｗａｓ ０．５－２，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉ－ ｆｉｅｄ ａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｆｏｒ ＭＲＤ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｈａｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，